Сезон 2000–01 был 86-м сезоном Истмийской лиги , английского футбольного соревнования, в котором участвовали полупрофессиональные и любительские клубы из Лондона, Восточной и Юго-Восточной Англии . Лига состояла из четырёх дивизионов.
В Премьер-дивизион вошло 22 клуба, включая 18 клубов предыдущего сезона и четыре новых клуба:
Farnborough Town выиграл дивизион и вернулся в Футбольную конференцию после двух сезонов, проведенных в Истмийской лиге. Slough Town, Carshalton Athletic и Dulwich Hamlet заняли последнее место в таблице и вылетели в Первый дивизион. Три матча не состоялись из-за плохих погодных условий.
В первый дивизион вошло 22 клуба, включая 17 клубов из предыдущего сезона и пять новых клубов: Три клуба вылетели из Премьер-дивизиона:
Два клуба вышли из второго дивизиона:
Первоначально чемпионы второго дивизиона Hemel Hempstead Town должны были перейти в первый дивизион, но позже им отказали из-за классификации поля. Leatherhead, закончивший в зоне вылета, получил отсрочку.
Boreham Wood выиграл дивизион и вернулся в Премьер-дивизион с первой попытки. Bedford Town и Braintree Town также получили повышение. Leatherhead финишировал в зоне вылета второй раз подряд и был понижен вместе с Romford и Barton Rovers.
Во Второй дивизион вошло 22 клуба, включая 17 клубов предыдущего сезона и пять новых команд:
Два клуба вылетели из первого дивизиона:
Три клуба вышли из Третьего дивизиона:
Первоначально чемпионы второго дивизиона прошлого сезона «Хемел Хемпстед Таун» должны были перейти в первый дивизион, но позже им отказали из-за классификации поля, и они остались в дивизионе.
Tooting & Mitcham United выиграли дивизион и были переведены в первый дивизион вместе с Windsor & Eton и Barking. Позже Barking прекратил свое существование, когда они объединились с East Ham United (11° Essex Senior League ), чтобы сформировать Barking & East Ham United , заняв место Barking в первом дивизионе.
Третий дивизион состоял из 22 клубов, включая 17 клубов предыдущего сезона и пять новых команд:
Arlesey Town и Ashford Town дебютировали в лиге и добились повышения вместе с Lewes. Два матча остались невыполненными из-за плохих погодных условий.