AAA ( A TPases A ssociated with various cell A activities ) белки (говорят: triple-A ATPases) представляют собой большую группу семейства белков, разделяющих общий консервативный модуль из приблизительно 230 аминокислотных остатков. Это большое, функционально разнообразное семейство белков, принадлежащее к суперсемейству белков AAA+ кольцевых P-петлевых NTPases , которые проявляют свою активность посредством энергозависимого ремоделирования или транслокации макромолекул. [2] [3]
Белки ААА связывают химическую энергию, получаемую в результате гидролиза АТФ, с конформационными изменениями, которые преобразуются в механическую силу, оказываемую на макромолекулярный субстрат. [4]
Белки AAA функционально и организационно разнообразны и различаются по активности, стабильности и механизму. [4] Члены семейства AAA встречаются во всех организмах [5] и необходимы для многих клеточных функций. Они участвуют в таких процессах, как репликация ДНК , деградация белков , слияние мембран , разрыв микротрубочек , биогенез пероксисом , передача сигнала и регуляция экспрессии генов .
Белки AAA содержат два домена: N-концевой альфа/бета-домен, который связывает и гидролизует нуклеотиды ( складка Россмана ), и C-концевой альфа-спиральный домен. [5] N-концевой домен имеет длину 200-250 аминокислот и содержит мотивы Walker A и Walker B , [5] и является общим с другими P-петлевыми NTPases, суперсемейством , которое включает семейство AAA. [6] Большинство белков AAA имеют дополнительные домены, которые используются для олигомеризации , связывания субстрата и/или регуляции. Эти домены могут располагаться на N- или C-конце модуля AAA.
Некоторые классы белков AAA имеют N-концевой не-АТФазный домен, за которым следуют один или два домена AAA (D1 и D2). В некоторых белках с двумя доменами AAA оба эволюционно хорошо сохранились (например, в Cdc48/p97 ). В других лучше сохранились в эволюции либо домен D2 (например, в Pex1p и Pex6p), либо домен D1 (в Sec18p/NSF).
В то время как классическое семейство AAA было основано на мотивах, семейство было расширено с использованием структурной информации и теперь называется семейством AAA. [5]
Белки AAA делятся на семь основных кладов , основанных на элементах вторичной структуры, включенных в ядро AAA-складки или рядом с ним: загрузчик зажима, инициатор, классический, суперсемейство III геликазы, HCLR, H2-вставка и PS-II-вставка. [4]
AAA ATPases собираются в олигомерные сборки (часто гомо-гексамеры), которые формируют кольцевую структуру с центральной порой. Эти белки производят молекулярный двигатель, который соединяет связывание АТФ и гидролиз с изменениями в конформационных состояниях, которые могут распространяться через сборку, чтобы воздействовать на целевой субстрат, либо перемещая, либо ремоделируя субстрат. [7]
Центральная пора может быть вовлечена в процессинг субстрата. В гексамерной конфигурации сайт связывания АТФ расположен на интерфейсе между субъединицами. При связывании АТФ и гидролизе ферменты AAA претерпевают конформационные изменения в AAA-доменах, а также в N-доменах. Эти движения могут передаваться субстратному белку.
Предполагается, что гидролиз АТФ АТФазами ААА включает нуклеофильную атаку на гамма-фосфат АТФ активированной молекулой воды, что приводит к перемещению N-концевых и C-концевых субдоменов ААА относительно друг друга. Это перемещение позволяет прикладывать механическую силу, усиленную другими доменами АТФазы в пределах той же олигомерной структуры. Дополнительные домены в белке позволяют регулировать или направлять силу к различным целям. [6]
Белки AAA не ограничиваются эукариотами . У прокариот есть AAA, которые объединяют шаперон с протеолитической активностью, например, в комплексе ClpAPS, который опосредует деградацию и распознавание белков в E. coli . Считается, что основное распознавание белков AAA происходит через развернутые домены белка в субстратном белке. В HslU, бактериальном гомологе ClpX/ClpY семейства белков HSP100 AAA, N- и C-концевые субдомены движутся навстречу друг другу, когда нуклеотиды связаны и гидролизуются. Концевые домены наиболее удалены в состоянии без нуклеотидов и наиболее близки в состоянии, связанном с АДФ. Тем самым затрагивается открытие центральной полости.
Белки AAA участвуют в деградации белков , слиянии мембран , репликации ДНК , динамике микротрубочек , внутриклеточном транспорте, транскрипционной активации, рефолдинге белков, разборке белковых комплексов и белковых агрегатов . [5] [8]
Динеины , один из трех основных классов моторных белков , представляют собой белки ААА, которые связывают свою активность АТФазы с молекулярным движением вдоль микротрубочек . [9]
ATPase Cdc48p/p97 типа AAA, возможно, является наиболее изученным белком AAA. Неправильно свернутые секреторные белки экспортируются из эндоплазматического ретикулума (ЭР) и деградируют по пути деградации, связанному с ЭР ( ERAD ). Нефункциональные мембранные и люминальные белки извлекаются из ЭР и деградируют в цитозоле протеасомами. Ретротранслокация и экстракция субстрата осуществляется с помощью комплекса Cdc48p(Ufd1p/Npl4p) на цитозольной стороне мембраны. На цитозольной стороне субстрат убиквитинируется ферментами E2 и E3 на основе ЭР перед деградацией протеасомой 26S.
Мультивезикулярные тельца — это эндосомальные компартменты, которые сортируют убиквитинированные мембранные белки, встраивая их в везикулы. Этот процесс включает последовательное действие трех мультипротеиновых комплексов, ESCRT I–III ( ESCRT означает «эндосомальные сортировочные комплексы, необходимые для транспорта»). Vps4p — это АТФаза типа AAA, участвующая в этом пути сортировки MVB. Первоначально он был идентифицирован как мутант vps «класса E» (вакуолярная сортировка белков), а впоследствии было показано, что он катализирует диссоциацию комплексов ESCRT. Vps4p закреплен через Vps46p на эндосомальной мембране. Сборке Vps4p помогает консервативный белок Vta1p, который регулирует его статус олигомеризации и активность АТФазы.
Протеазы ААА используют энергию гидролиза АТФ для перемещения белка внутрь протеасомы для деградации.
АФГ3L2 ; АТАД1; АТАД2; АТАД2Б; АТАД3А; АТАД3Б; ATAD3C; АТАД5; БКС1Л ; ЧТФ18 ; КЛБП; КЛПП ; CLPX; ФИГН; ФИГНЛ1; ФИГНЛ2; IQCA1; КАТНА1 ; КАТНАЛ1; КАТНАЛ2; ЛОНП1 ; ЛОНП2; МДН1 ; НФС ; НВЛ ; ОРЦ1 ; ОРК4 ; ПЕКС1 ; ПЕК6 ; ПСМК1 ; PSMC2 (Nbla10058); ПСМК3 ; ПСМК4 ; ПСМК5 ; ПСМК6 ; RFC1 ; RFC2 ; RFC3 ; RFC4 ; RFC5 ; РУВБЛ1 ; РУВБЛ2 ; СПАСТ ; СПАТА5 (СПАФ); SPATA5L1; SPG7 ; TRIP13 ; VCP ; VPS4A ; VPS4B ; WRNIP1 ; YME1L1 (FTSH); [10]
ТОР1А ; ТОР1Б; ТОР2А ; ТОР3А ; ТОР4А; [11]
AK6 (CINAP); [12] CDC6 ;
АФГ3Л1П; [13]