При скрининге генома Bacillus subtilis на предмет генов, кодирующих некодируемые РНК , Сайто и др. сосредоточились на 123 межгенных областях (IGR) длиной более 500 пар оснований ; авторы проанализировали экспрессию из этих областей. Семь IGR, названных bsrC, bsrD, bsrE, bsrF, bsrG, bsrH и bsrI, экспрессировали РНК размером менее 380 нуклеотидов. Все малые РНК, за исключением РНК BsrD, экспрессировались в трансформированных клетках Escherichia coli , содержащих плазмиду с амплифицированными с помощью ПЦР IGR B. subtilis , что указывает на то, что их собственные промоторы независимо экспрессируют малые РНК. В условиях отсутствия стресса истощение генов малых РНК не влияло на рост. Хотя их функции неизвестны, профили экспрессии генов в нескольких временных точках показали, что большинство генов, за исключением bsrD, были экспрессированы во время вегетативной фазы (4–6 ч), но необнаружимы во время стационарной фазы (8 ч). Картирование 5'-концов 6 малых РНК показало, что генам РНК BsrE, BsrF, BsrG, BsrH и BsrI предшествует сайт распознавания для фактора сигма РНК-полимеразы σ A . [1]
Было показано, что bsrE , bsrG и bsrH образуют пары посредством межмолекулярных взаимодействий с недавно идентифицированными антисмысловыми sRNA. Было высказано предположение, что они образуют систему токсин/антитоксин типа I , которая включает мРНК, кодирующую короткий токсичный пептид ( bsrE , bsrG и bsrH ), и антитоксин, состоящий из антисмысловой РНК. [2]
Дальнейшие исследования установили, что 294-нуклеотидный bsrG кодирует токсин из 39 аминокислот, а 180-нуклеотидная антисмысловая sRNA, называемая SR4, действует как антитоксин (они перекрываются на 123 нуклеотида). Взаимодействие SR4 с 3'UTR РНК bsrG способствует деградации bsrG и ингибирует его трансляцию. [3] [4] BsrG препятствует биосинтезу клеточной оболочки, вызывает инвагинации мембраны и делокализации синтеза клеточной стенки и инициирует автолиз. [5]
256 нуклеотидов bsrE РНК кодирует 30 аминокислот токсинового пептида. Его антитоксиновый ген, SR5, перекрывает 112 нуклеотидов на 3' конце bsrE. Антитоксин SR5 способствует деградации bsrE, но в отличие от SR4 он не подавляет напрямую трансляцию токсиновой мРНК. [6] [7]