stringtranslate.com

Clostridioides difficile токсин B

Токсин B Clostridioides difficile ( TcdB ) — это цитотоксин , вырабатываемый бактериями Clostridioides difficile . Это один из двух основных видов токсинов , вырабатываемых C. difficile , другой — родственный энтеротоксин ( токсин A ). Оба очень мощные и смертельные. [2] [3]

Структура

Токсин B (TcdB) — это цитотоксин с молекулярной массой 270 кДа и изоэлектрической точкой , pl, 4,1. [4] Токсин B имеет четыре различных структурных домена: каталитический , цистеинпротеазный , транслокационный и связывающий рецептор . [5] N -концевой каталитический домен глюкозилтрансферазы включает аминокислотные остатки 1–544, тогда как домен цистеинпротеазы включает остатки 545–801. Кроме того, область транслокации включает аминокислотные остатки от 802 до 1664, тогда как область связывания рецептора является частью C-концевой области и включает аминокислотные остатки от 1665 до 2366. [5]

Схематическое изображение последовательности белка TcdB. Каталитическая область, показанная синим цветом, содержит остатки 1–543, область цистеиновой протеазы, показанная черным цветом, содержит остатки 544–801, область транслокации, показанная красным цветом, содержит остатки 802–1664, а область связывания рецептора, показанная зеленым цветом, содержит остатки 1665–2366.

Активность гликозилирования токсина B происходит в N-концевой каталитической области (остатки 1–544). Эта область гликозилирует субстраты независимо от какой-либо цитотоксической активности. [6] Однако небольшая делеция области связывания рецептора вызывает ослабление активности токсина B. [6] Область транслокации содержит гидрофобную стеблеобразную структуру, которая может помогать остаткам 958–1130 в формировании мембранных пор . [5] Область связывания рецептора, которая включает повторяющуюся область C-конца (CRR), увеличивает взаимодействие TcdB с мембраной, но не участвует в образовании пор. [7] Кроме того, цистеиновая протеаза и области транслокации имеют сложные структуры, которые играют важную функциональную роль в транслокации и связывании рецептора. [8] Однако удаление области транслокации аминокислот снижает цитотоксическую активность в 4 раза. Как цистеиновые протеазы , так и большинство транслокационных областей содержат гидрофобные белки, которые обеспечивают доступ к TcdB и другим токсинам, пересекающим клеточные мембраны . [8]

Домен связывания рецептора

C -конец TcdB (зеленая область на рис. 2) содержит область, известную как комбинированные повторяющиеся олигопептиды (CROP), которые содержат аминокислотные остатки 1831–2366. [9] Эти CROP составляют 19–24 коротких повторов (SR) аминокислот, примерно 31 длинный повтор (LR) аминокислот, токсина A и токсина B. [9] [10] Область CROP TcdB состоит из 19 SR и 4 LR. Эта область SR и LR позволяет формировать мотивы связывания клеточной стенки, которые помогают связывать сахарные фрагменты клеточных поверхностей. [9]

Очищение

Для очистки токсина B из культур клеток C. difficile используется бульон с сердечно-мозговым настоем , поскольку он способствует синтезу токсина B. [11] Метод фильтрации облегчает очистку токсина B из супернатанта C. difficile . Концентрация токсина в супернатанте пропорциональна количеству клеток организма. Во многих исследованиях предполагалось, что большинство токсинов высвобождается либо в поздней логарифмической фазе , либо в ранних стационарных фазах , следовательно, токсин B непрерывно секретируется клетками. [2] Хотя существует много методов, используемых в различных исследованиях для очистки токсина B, большинство исследований используют методы, включающие концентрации ультрафильтрованного сульфата аммония или осаждения , вместо гель-фильтрации или ионообменной хроматографии . Кроме того, эффективность метода ионообменной хроматографии помогает различать TcdA и TcdB. [ необходима цитата ]

Функция

Когда каталитический остаток треонина глюкозилтрансферазы дезактивирует семейство малых ГТФаз , например семейство Rho , Rac и Cdc42 внутри клеток -мишеней нарушают механизмы передачи сигнала , что приводит к дисфункции актинового цитоскелета , межклеточного соединения и апоптозу (рис. 5). [12] [13] [ 14] Rho индуцирует активность актиновых стрессовых волокон . Белки Rac контролируют активность мембранной ряби и НАДФН- оксидазы нейтрофилов . Cdc42 регулирует образование филаментов F-актина в филоподиях . [ требуется ссылка ]

Цитотоксичность

Рисунок 3: Токсин B изменяет динамику структуры клеток. Изображения SEM: a) контрольные клетки и b) клетки, обработанные TcdB в течение 18 часов. Черная стрелка указывает на место блеббинга поверхности клеток.

Несколько исследований продемонстрировали, что присутствие TcdB в клетках млекопитающих приводит к быстрым изменениям в морфологии клеток и клеточной сигнализации . В течение короткого периода времени клетки приобретают вид бляшек с небольшими дозами TcdB и TcdA. Кроме того, смерть клеток является основным воздействием этих токсинов после интоксикации клеток . Исследование Донты и соавторов показало, что TcdB оказывает серьезное воздействие на другие клетки млекопитающих, такие как клетки яичников китайского хомячка , эпителиальные клетки шейки матки человека , клетки надпочечников мыши, гепатоциты крысы и астроциты крысы (рис. 3). [15] [16]

Цитотоксическая активность зависит от типов клеток, которые могут варьироваться от 4-кратной до 200-кратной. Как правило, когда клетки инфицированы TcdB, они не только теряют свою структурную целостность, но и уменьшаются филаменты F-актина . [17] Округление клеток TcdB занимает не более 2 часов (рис. 4), но что касается гибели клеток , это может занять около 24 часов. [15] Что касается диареи, связанной с C. difficile (CDAD), эффекты цитопатии более критичны, чем фактическая гибель клеток, потому что как только клетки теряют целостность филаментов актина цитоскелета , они также теряют свою нормальную функцию. [ необходима цитата ]

Рисунок 4: Воздействие токсина B на астроциты крысы. Это вероятная иллюстрация астроцитов крысы , инкубированных с 100 нг/мл токсина B в течение 2 часов при 37 °C.

Воздействие на малые ГТФазы

Причина цитотоксической активности TcdB в клетке-хозяине в основном опосредована эндоцитозом рецепторов [ требуется цитата ] . Кислые эндосомы позволяют токсину B проникать в цитозоль . Это явление происходит благодаря связывающей рецепторной области, которая позволяет токсину проникать в клетки-хозяева [ требуется цитата ] . Благодаря доступности цитозоля клеток-хозяев TcdB дезактивирует малые ГТФазы (рис. 5), например, членов семейства Rho Rac и Cdc42 путем гликозилирования треонина 35 в Cdc42 и Rac и треонина 37 в Rho. [18] [19] Эти Rho ГТФазы повсеместно встречаются в цитозоле эукариотических клеток , которые отвечают за организацию актинового цитоскелета , поскольку токсины в цитозоле вызывают конденсацию актиновых филаментов в результате округления клеток и мембранного блеббинга (рис. 3), что в конечном итоге приводит к апоптозу . [20] [21] TcdB вызывает критические изменения в динамике и морфологии клеток . На рисунке 3 показано вероятное воздействие токсина B на поверхность клетки; мембранный блеббинг (черные стрелки). [22] Кроме того, TcdB инактивирует Rho ГТФазы. В результате нарушаются межклеточные соединения, что усиливает эпителиальную проницаемость токсина B и накопление жидкости в просвете. Это один из основных возбудителей диареи, связанной с C. difficile (CDAD) (рис. 5). [23] [24]

Рисунок 5: Внутриклеточные модификации TcdB. Во-первых, токсин B связывается с поверхностью клетки и интернализуется посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Во-вторых, закисление эндосомы запускает образование поры, через которую транслоцируется GTD. В-третьих, поглощение UDP-глюкозой помогает связываться с GTPases и высвобождаться в цитозоль. Наконец, GTD глюкозилирует Rho-семейство GTPases на клеточной мембране и контролирует регуляцию транскрипции и, в конечном итоге, апоптоз клетки.

Кроме того, скорость гидролиза TcdB UDP-глюкозы примерно в пять раз выше, чем TcdA. [25] Несколько исследований показали, что Rho демонстрирует посттрансляционную модификацию посредством пренилирования и карбоксиметилирования, что происходит на цитоплазматической стороне плазматической мембраны , следовательно, обмен GTP на GDP . [26] Когда TcdB связывается с Rho и другими малыми GTPases , GTP гидролизуется до GDP , что приводит к GTP-связанному (активному) в GDP-связанному (неактивному) (рис. 5). Кроме того, эта активность обмена регулируется гуаниновыми факторами в цитозоле клетки. [27]

Нарушение сигнальных путей

Клеточная регуляция Rho, Rac и Cdc42 оказывает влияние за пределами актиновых филаментов цитоскелета (рис. 4), [17] Эти небольшие ГТФазы включены в клеточный цикл , который регулирует сигналы через митоген-активируемые протеинкиназы киназы (МАРКК). [28] Некоторые физиологические части клеток, которые не участвуют в актиновых филаментах , могут не вызывать округление клеток или гибель клеток сразу, но в нисходящей активности пути могут привести к ухудшению актиновых филаментов и, в конечном итоге, гибели клеток . [17]

В 1993 году исследование, проведенное Шошан и др., показало, что клетки с TcdB изменили активность фосфолипазы A2 . Это было независимым событием от нарушения актинового цитоскелета . [29] Шошан и др. также показали, что TcdB ингибирует активность рецепторного сигнала, дезактивируя белки Rho через фосфолипазу D. [ 29]

Образование пор

TcdB проникает внутрь клетки через эндоцитоз, опосредованный клатрином , [30] Когда токсин B является частью цитозоля , глюкозилтрансфераза проходит через эндосомальную мембрану , что снижает pH, вызывает транслокацию и в конечном итоге приводит к морфологическим изменениям остатков области транслокации (958–1130). [31] Гидрофобные области встроены в мембрану хозяина, образуя поры, которые позволяют доменам глюкозилтрансферазы проходить через них. [31] Когда клетки инфицированы TcdB в кислой среде, он ослабляет токсины и вызывает перестройки формы (рис. 6). [ 31] Вследствие кислого pH TcdB демонстрирует четкие различия в исходной флуоресценции триптофана , восприимчивости протеаз и гидрофобных поверхностях. [31] Другая группа показала, что закисление приводит к конформационным изменениям токсина и, что более важно, способствует образованию пор. [7] Предполагаемая область транслокации (рис. 2) составляет приблизительно 801–1400 аминокислот, из которых остатки 958–1130 являются гидрофобными и отвечают за образование трансмембранных пор. [20] Большинство исследований использовали штамм TcdB 630, чтобы показать активность токсинов C. difficile по образованию пор . [31]

Индуцированный pH

Чтобы увидеть, происходит ли эффект протеолитического расщепления TcdB на поверхности клетки или в кислых эндосомах , исследования использовали бафиломицин А1 , который, как известно, блокирует H + -АТФазы v-типа эндосом. Это снижает кислотность в эндосомах. [31] Физиологический путь поглощения TcdB предотвращает цитопатическую активность TcdB. [31] Когда клетки находились в кислых условиях (pH 4,0) в течение 5 минут после связывания TcdB с поверхностью клетки при 37 градусах Цельсия, наблюдались перестройки формы и округление. Однако, когда округлые клетки инкубировали в течение дополнительного часа при нейтральном pH (7,0) с аналогичными параметрами, округления клеток не наблюдалось. [15] [31] Оба исследования показали, что токсин B обладает свойством протеолитического расщепления , что имеет решающее значение для доступа к цитозолю . [7] [15] [31] Наличие кислого pH эндосомы приводит к топологическим изменениям TcdB (рисунок 6). [7]

Рисунок 6: Домен организации TcdB. Демонстрация разницы между нейтральным и кислым pH (4).

Генетика

Ген, кодирующий белок TcdB, tcdB , расположен в хромосомной области размером 19,6 кб . Это известно как локус патогенности или PaLoc (рисунок 2). [32] [ 33] Открытая рамка считывания (ORF) для tcdB имеет длину 7098 нуклеотидов . [17] Важно отметить, что помимо основных генов токсинов в области PaLoc, есть еще три дополнительных гена , которые кодируют в области PaLoc: tcdR (L), tcdC (R) и tcdE в середине. Эти гены помогают регулировать экспрессию TcdA и TcdB. Они также помогают секретировать или высвобождать токсины из клетки. [17] Кодирующий ген tcdE , расположенный между tcdB и tcdA, аналогичен белкам холина , поэтому предполагается, что tcdE работает как ген- посредник , который усиливает высвобождение или секрецию TcdA и TcdB, следовательно, увеличивая проницаемость мембраны клетки- хозяина . [17]

Рисунок 2: Архетипический локус патогенности (PaLoc), кодирующий крупные клостридиальные токсины (LCT), участвующие в ИКД-инфекциях, вызванных C. difficile.

Обнаружение токсинов

Существуют различные размеры плазмид C. difficile . Обнаруженные молекулярные массы варьируются от 2,7x10 6 до 100x10 6 , но размеры плазмид не показывают корреляции с токсичностью . Для того чтобы определить уровень токсина B в C. difficile , клиницисты широко используют анализы клеточной культуры , полученные из образцов кала пациентов с ПМК . [2] [3] Анализ клеточной культуры считается «золотым стандартом» для определения токсичности в C. difficile , поскольку небольшое количество токсина B способно вызвать округление клеток (рис. 4), таким образом, это является большим преимуществом клинических лабораторий, чтобы установить корреляции с CDAD, вызванным TcdB. [2] [3] Хотя цитотоксическая активность крупных клостридиальных токсинов (LCT) была обнаружена в образцах кала пациентов с PMC, активность токсина B имела более пагубные цитотоксические эффекты по сравнению с токсином A. [2] Таким образом, активность токсина A ослабляется, когда он не изолирован от токсина B. [2] [3] Выявление токсичности C. difficile является чрезвычайно чувствительным, однако использование анализа клеточной культуры позволяет клиническим лабораториям преодолеть эту проблему; использование доз всего лишь 1 пг/мл токсина B достаточно, чтобы вызвать округление клеток. [2] [3] Это главное преимущество использования анализа культуры ткани для выявления токсичности у пациентов с PMC . [2] Несмотря на то, что клинические лаборатории пытались использовать иммуноферментный анализ (ИФА) на микротитровальных планшетах и ​​другие методы для обнаружения цитотоксической активности токсина B в кале пациентов с ПМК , результаты не столь точны, как при использовании анализа клеточной культуры . [2] [3] [34]

Фактор производства

При добавлении антимикробных препаратов , например клиндамицина , в питательную среду для культивирования, исследования показали, что цитотоксическая активность в культурах C. difficile увеличивается в 4–8 раз. [35] [36] Более того, зная роль антибиотиков в причинах ПМК, многие более ранние исследования были сосредоточены на эффектах продукции токсинов антимикробными препаратами . В результате исследования смогли сделать вывод, что субингибиторная природа уровней ванкомицина и пенициллина увеличивала продукцию токсинов в культурах C. difficile . [37] Количество продукции токсинов коррелировало с использованием питательной среды для организмов. Другое исследование проиллюстрировало, что высокие уровни продукции токсинов TcdB наблюдались в сложных средах, таких как бульон с мозговым и сердечным настоем . [38] [39] Высокие уровни токсинов были получены при выделении высоковирулентных . Наоборот, низкие уровни токсинов были получены при выделении слабовирулентных . Таким образом, это показывает, что продукция токсинов была совместно регулируемой. Хотя механизм, лежащий в основе участия окружающей среды в модуляции сигналов, экспрессирующих токсины, не понят, исследования in vitro показали, что экспрессия токсина усиливается катаболитной репрессией и стрессом, например, антибиотиками . [40] [41] [42] Другое исследование показало, что ограничение биотина в хорошо охарактеризованной среде увеличивает продукцию TcdB в 64 раза и TcdA в 35 раз. Это было сделано с C. difficile и дозами биотина всего 0,05 нМ. [41] Несколько других ранних исследований выступили против теории о том, что продукция токсина как-то связана со стрессом или катаболитной репрессией либо токсина TcdA, либо TcdB. [42] Кроме того, многие исследования говорят, что основная причина различий между другими исследованиями заключается в том, что продукция токсина происходит не со всеми изолятами C. difficile . [ необходима ссылка ]

Клиническое значение

Многие ранние исследования предполагали, что токсин A (также известный как TcdA) является основным токсиновым белком, вызывающим диарею, связанную с антибиотиками (AAD); однако, исследователи в течение последнего десятилетия или около того показали, что токсин B (или TcdB) играет более важную роль в заболевании, чем кто-либо прогнозировал. С этими знаниями токсин B был идентифицирован как основной фактор вирулентности , который вызывает открытие плотных соединений эпителиальных клеток кишечника , что позволяет токсину увеличивать проницаемость сосудов и вызывать кровотечение . Следовательно, это приводит к тому, что фактор некроза опухоли α (TNF α) и провоспалительные интерлейкины устанавливаются как основные возбудители псевдомембранозного колита (PMC) и диареи, связанной с антибиотиками (AAD). [2] [3] [43]

Участие токсина А и, что наиболее важно, токсина В является ключевым элементом, определяющим заболевание, вызываемое C. difficile . Клинические лаборатории идентифицировали эти токсины в стуле пациентов на основе анализов антител и цитотоксичности . [44] Было показано, что эти бактериальные токсины связаны с геморрагическим токсином Clostridium sordellii (TcsH), летальным токсином (TcsL) и альфа-токсином Clostridium novyi (Tcn α), таким образом, делая эту когорту большим семейством клостридиальных токсинов. [17] Из-за сходства этих токсинов с другими, исследователи классифицировали их как семейство больших клостридиальных токсинов (LCTs). [9]

Механизм действия безлотоксумаба с TcdB

Безлотоксумаб — это человеческое моноклональное антитело, разработанное для профилактики рецидивов инфекций Clostridium difficile. С помощью рентгеновской кристаллизации структуры N-конца TcdB установлено, что токсин состоит из трех доменов: домена глюкозилтрансферазы (GTD), цистеиновой протеазы и домена комбинированного повторяющегося олигопептида (CROP). Безлотоксумаб специфически связывается с двумя гомологичными сайтами в пределах домена CROP TcdB. Структурный анализ с помощью рентгеновской кристаллографии показывает, что связывание антитела частично закрывает предполагаемые карманы связывания углеводов. В соответствии с этой идеей, Безлотоксумаб блокирует связывание TcdB с клетками млекопитающих. [45]

Роль в псевдомембранозном колите

На ранних стадиях заболевания PMC многие исследования предполагали, что TcdA более эффективен, чем TcdB. Это было выведено из экспериментов in vivo, где продукция токсина TcdA была более серьезной, чем TcdB с антибиотиками cecitis. [38] [46] Позже несколько исследований показали, что TcdB играет важную роль в заболевании PMC и ADD. Исследование показало, что даже несмотря на то, что C. difficile не продуцирует TcdA, она все равно проявляет симптомы заболевания. [47] Кроме того, более поздние исследования показали, что очищенная форма TcdB является более летальным энтеротоксином по сравнению с TcdA, а также, что кишечный эпителий серьезно поврежден и вызывает острую воспалительную реакцию. [48] Благодаря лучшему пониманию токсина исследователи смогли заявить, что TcdB является основным фактором вирулентности , который вызывает CDI по сравнению с TcdA. Однако, когда TcdA присутствует в кишечнике, это помогает облегчить активность TcdB, чтобы иметь более широкие воздействия, следовательно, затрагивая множественные системы органов. [49] Кроме того, когда хомяков вакцинировали против TcdA, это показало, что хомяки не были полностью защищены от заболевания C. difficile , и это привело исследования к выводу, что TcdB очень летален и силен. [50] Более того, инъекция небольшой дозы TcdA с летальной дозой TcdB внутривенно или внутрибрюшинно оказалась достаточной для того, чтобы вызвать смерть животного. Таким образом, TcdA работает как посредник выхода TcdB из кишечника. [50]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Reinert DJ, Jank T, Aktories K, Schulz GE (сентябрь 2005 г.). «Структурная основа функции токсина B Clostridium difficile ». Журнал молекулярной биологии . 351 (5): 973–81. doi :10.1016/j.jmb.2005.06.071. PMID  16054646.
  2. ^ abcdefghij Lyerly DM, Krivan HC, Wilkins TD (январь 1988 г.). «Clostridium difficile: его болезнь и токсины». Clinical Microbiology Reviews . 1 (1): 1–18. doi :10.1128/cmr.1.1.1. PMC 358025. PMID 3144429  . 
  3. ^ abcdefg Bartlett JG (1990). " Clostridium difficile : клинические аспекты ". Обзоры инфекционных заболеваний . 12 (Suppl 2): ​​S243–51. doi :10.1093/clinids/12.Supplment_2.S243. PMID  2406876.
  4. ^ фон Эйхель-Штрайбер С (1997). "Энтеротоксин А и цитотоксин В ( Clostridium difficile )". В Монтекукко С, Раппуоли Р (ред.). Руководство по белковым токсинам и их использованию в клеточной биологии . Оксфорд [Оксфордшир]: Oxford University Press. стр. 72. ISBN 978-0-19-859954-8.
  5. ^ abc Albesa-Jové D, Bertrand T, Carpenter EP, Swain GV, Lim J, Zhang J, Haire LF, Vasisht N, Braun V, Lange A, von Eichel-Streiber C, Svergun DI, Fairweather NF, Brown KA (март 2010 г.). «Четыре отдельных структурных домена в токсине B Clostridium difficile , визуализированные с помощью SAXS». Журнал молекулярной биологии . 396 (5): 1260–70. doi :10.1016/j.jmb.2010.01.012. PMID  20070948.
  6. ^ ab Hofmann F, Busch C, Prepens U, Just I, Aktories K (апрель 1997 г.). «Локализация активности глюкозилтрансферазы токсина B Clostridium difficile в N-концевой части голотоксина». Журнал биологической химии . 272 ​​(17): 11074–8. doi : 10.1074/jbc.272.17.11074 . PMID  9111001.
  7. ^ abcd Barth H, Pfeifer G, Hofmann F, Maier E, Benz R, Aktories K (апрель 2001 г.). «Образование ионных каналов токсином B Clostridium difficile в клетках-мишенях, вызванное низким pH». Журнал биологической химии . 276 (14): 10670–6. doi : 10.1074/jbc.M009445200 . PMID  11152463.
  8. ^ ab Jank T, Aktories K (май 2008). «Структура и способ действия клостридиальных гликозилирующих токсинов: модель ABCD». Trends in Microbiology . 16 (5): 222–9. doi :10.1016/j.tim.2008.01.011. PMID  18394902.
  9. ^ abcd von Eichel-Streiber C, Boquet P, Sauerborn M, Thelestam M (октябрь 1996 г.). "Крупные клостридиальные цитотоксины — семейство гликозилтрансфераз, модифицирующих малые ГТФ-связывающие белки". Trends in Microbiology . 4 (10): 375–82. doi :10.1016/0966-842X(96)10061-5. PMID  8899962.
  10. ^ Jank T, Giesemann T, Aktories K (апрель 2007 г.). «Rho-глюкозилирующие токсины Clostridium difficile A и B: новые сведения о структуре и функции». Glycobiology . 17 (4): 15R–22R. doi : 10.1093/glycob/cwm004 . PMID  17237138.
  11. ^ Meador J, Tweten RK (июль 1988 г.). «Очистка и характеристика токсина B из Clostridium difficile». Инфекция и иммунитет . 56 (7): 1708–14. doi :10.1128/iai.56.7.1708-1714.1988. PMC 259466. PMID  3384474. 
  12. ^ Aktories K, Just I (декабрь 1995 г.). «Моноглюкозилирование низкомолекулярных GTP-связывающих Rho-белков клостридиальными цитотоксинами». Trends in Cell Biology . 5 (12): 441–3. doi :10.1016/S0962-8924(00)89107-2. PMID  14732022.
  13. ^ Диллон СТ, Рубин Э.Дж., Якубович М., Потулакис К., Ламонт Дж.Т., Фейг ЛА, Гилберт Р.Дж. (апрель 1995 г.). «Участие белков Rho, связанных с Ras, в механизмах действия токсина А и токсина В Clostridium difficile». Инфекция и иммунитет . 63 (4): 1421–6. doi :10.1128/iai.63.4.1421-1426.1995. PMC 173169. PMID  7890404 . 
  14. ^ Wilkins TD, Lyerly DM (февраль 1996 г.). " Токсины Clostridium difficile атакуют Rho". Trends in Microbiology . 4 (2): 49–51. doi :10.1016/0966-842X(96)81508-3. PMID  8820565.
  15. ^ abcd Pfeifer G, Schirmer J, Leemhuis J, Busch C, Meyer DK, Aktories K, Barth H (ноябрь 2003 г.). «Клеточное поглощение токсина Clostridium difficile B. Транслокация N-концевого каталитического домена в цитозоль эукариотических клеток». Журнал биологической химии . 278 (45): 44535–41. doi : 10.1074/jbc.M307540200 . PMID  12941936.
  16. ^ Donta ST, Sullivan N, Wilkins TD (июнь 1982 г.). «Дифференциальное воздействие токсинов Clostridium difficile на клетки, культивируемые в тканях». Журнал клинической микробиологии . 15 (6): 1157–8. doi : 10.1128/jcm.15.6.1157-1158.1982. PMC 272271. PMID  7107845. 
  17. ^ abcdefg Voth DE, Ballard JD (апрель 2005 г.). "Токсины Clostridium difficile: механизм действия и роль в заболевании". Clinical Microbiology Reviews . 18 (2): 247–63. doi :10.1128/CMR.18.2.247-263.2005. PMC 1082799. PMID  15831824 . 
  18. ^ Just I, Selzer J, Wilm M, von Eichel-Streiber C, Mann M, Aktories K (июнь 1995 г.). «Глюкозилирование белков Rho токсином B Clostridium difficile ». Nature . 375 (6531): 500–3. Bibcode :1995Natur.375..500J. doi :10.1038/375500a0. PMID  7777059. S2CID  4334048.
  19. ^ Just I, Wilm M, Selzer J, Rex G, von Eichel-Streiber C, Mann M, Aktories K (июнь 1995 г.). «Энтеротоксин Clostridium difficile (ToxA) моноглюкозилирует белки Rho». Журнал биологической химии . 270 (23): 13932–6. doi : 10.1074/jbc.270.23.13932 . PMID  7775453.
  20. ^ ab von Eichel-Streiber C, Warfolomeow I, Knautz D, Sauerborn M, Hadding U (ноябрь 1991 г.). "Морфологические изменения в адгезивных клетках, вызванные токсинами Clostridium difficile" (PDF) . Biochemical Society Transactions . 19 (4): 1154–60. doi :10.1042/bst0191154. PMID  1794484.
  21. ^ Thelestam M, Chaves-Olarte E (2000). "Цитотоксические эффекты токсинов Clostridium difficile". Clostridium difficile . Текущие темы микробиологии и иммунологии. Том 250. С. 85–96. doi :10.1007/978-3-662-06272-2_4. ISBN 978-3-642-08668-7. PMID  10981358.
  22. ^ Фиорентини С, Фаббри А, Фальцано Л, Фатторосси А, Матаррезе П, Ривабене Р, Донелли Г (июнь 1998 г.). «Токсин B Clostridium difficile индуцирует апоптоз в культивируемых клетках кишечника». Инфекция и иммунитет . 66 (6): 2660–5. дои : 10.1128/IAI.66.6.2660-2665.1998. ПМЦ 108253 . ПМИД  9596731. 
  23. ^ Feltis BA, Wiesner SM, Kim AS, Erlandsen SL, Lyerly DL, Wilkins TD, Wells CL (декабрь 2000 г.). «Токсины Clostridium difficile A и B могут изменять проницаемость эпителия и способствовать парацеллюлярной миграции бактерий через энтероциты HT-29». Shock . 14 (6): 629–34. doi : 10.1097/00024382-200014060-00010 . PMID  11131913.
  24. ^ Johal SS, Solomon K, Dodson S, Borriello SP, Mahida YR (июнь 2004 г.). «Дифференциальное воздействие различных концентраций токсина А Clostridium difficile на функцию эпителиального барьера и экспрессию цитокинов». Журнал инфекционных заболеваний . 189 (11): 2110–9. doi : 10.1086/386287 . PMID  15143480.
  25. ^ Ciesla WP, Bobak DA (июнь 1998 г.). «Токсины Clostridium difficile A и B являются катионозависимыми гидролазами UDP-глюкозы с различной каталитической активностью». Журнал биологической химии . 273 (26): 16021–6. doi : 10.1074/jbc.273.26.16021 . PMID  9632652.
  26. ^ Адамсон П., Маршалл К.Дж., Холл А., Тилбрук ПА. (октябрь 1992 г.). «Посттрансляционные модификации белков p21rho». Журнал биологической химии . 267 (28): 20033–8. doi : 10.1016/S0021-9258(19)88661-1 . PMID  1400319.
  27. ^ Zhou K, Wang Y, Gorski JL, Nomura N, Collard J, Bokoch GM (июль 1998). «Факторы обмена гуаниновых нуклеотидов регулируют специфичность нисходящей сигнализации от Rac и Cdc42». Журнал биологической химии . 273 (27): 16782–6. doi : 10.1074/jbc.273.27.16782 . PMID  9642235.
  28. ^ Zhang Y, Dong C (ноябрь 2007 г.). «Регуляторные механизмы сигнализации митоген-активируемой киназы». Cellular and Molecular Life Sciences . 64 (21): 2771–89. doi :10.1007/s00018-007-7012-3. PMC 11136274 . PMID  17726577. S2CID  21440134. 
  29. ^ ab Shoshan MC, Florin I, Thelestam M (май 1993). «Активация клеточной фосфолипазы A2 токсином B Clostridium difficile ». Журнал клеточной биохимии . 52 (1): 116–24. doi :10.1002/jcb.240520115. PMID  8320270. S2CID  2724637.
  30. ^ Papatheodorou P, Zamboglou C, Genisyuerek S, Guttenberg G, Aktories K (май 2010 г.). «Клостридиальные гликозилирующие токсины проникают в клетки посредством клатрин-опосредованного эндоцитоза». PLOS ONE . ​​5 (5): e10673. Bibcode :2010PLoSO...510673P. doi : 10.1371/journal.pone.0010673 . PMC 2871790 . PMID  20498856. 
  31. ^ abcdefghi Qa'Dan M, Spyres LM, Ballard JD (май 2000 г.). "pH-индуцированные конформационные изменения токсина B Clostridium difficile". Инфекция и иммунитет . 68 (5): 2470–4. doi :10.1128/IAI.68.5.2470-2474.2000. PMC 97448. PMID  10768933 . 
  32. ^ Carter GP, Rood JI, Lyras D (январь 2012 г.). «Роль токсина А и токсина В в вирулентности Clostridium difficile ». Trends in Microbiology . 20 (1): 21–9. doi :10.1016/j.tim.2011.11.003. PMID  22154163.
  33. ^ Braun V, Hundsberger T, Leukel P, Sauerborn M, von Eichel-Streiber C (ноябрь 1996 г.). «Определение единого сайта интеграции локуса патогенности в Clostridium difficile ». Gene . 181 (1–2): 29–38. doi :10.1016/S0378-1119(96)00398-8. PMID  8973304.
  34. ^ Musher DM, Manhas A, Jain P, Nuila F, Waqar A, Logan N, Marino B, Graviss EA (август 2007 г.). «Обнаружение токсина Clostridium difficile: сравнение результатов иммуноферментного анализа с результатами, полученными с помощью анализа цитотоксичности». Журнал клинической микробиологии . 45 (8): 2737–9. doi :10.1128/JCM.00686-07. PMC 1951241. PMID  17567791 . 
  35. ^ Накамура С., Микава М., Танабэ Н., Ямакава К., Нисида С. (1982). «Влияние клиндамицина на продукцию цитотоксина Clostridium difficile». Микробиология и иммунология . 26 (11): 985–92. doi : 10.1111/j.1348-0421.1982.tb00248.x . PMID  7167065.
  36. ^ Джордж Р. Х., Джонсон М., Янгс Д., Бердон Д. В. (1980). «Индукция токсина Clostridium difficile антибиотиками». Текущая химиотерапия и инфекционные заболевания . 2 (1): 955–56.
  37. ^ Onderdonk AB, Lowe BR, Bartlett JG (октябрь 1979 г.). «Влияние экологического стресса на уровни токсинов Clostridium difficile при непрерывном культивировании». Applied and Environmental Microbiology . 38 (4): 637–41. Bibcode : 1979ApEnM..38..637O. doi : 10.1128/aem.38.4.637-641.1979. PMC 243552. PMID  44176 . 
  38. ^ ab Lyerly DM, Sullivan NM, Wilkins TD (январь 1983 г.). "Иммуноферментный анализ на токсин A Clostridium difficile". Журнал клинической микробиологии . 17 (1): 72–8. doi :10.1128/jcm.17.1.72-78.1983. PMC 272577. PMID  6338036 . 
  39. ^ Салливан Н. М., Пеллетт С., Уилкинс Т. Д. (март 1982 г.). «Очистка и характеристика токсинов А и В Clostridium difficile». Инфекция и иммунитет . 35 (3): 1032–40. doi :10.1128/iai.35.3.1032-1040.1982. PMC 351151. PMID  7068210 . 
  40. ^ Dupuy B, Sonenshein AL (январь 1998). «Регулируемая транскрипция генов токсинов Clostridium difficile». Молекулярная микробиология . 27 (1): 107–20. doi : 10.1046/j.1365-2958.1998.00663.x . PMID  9466260.
  41. ^ ab Yamakawa K, Karasawa T, Ikoma S, Nakamura S (февраль 1996 г.). «Усиление продукции токсина Clostridium difficile в условиях ограниченного содержания биотина». Журнал медицинской микробиологии . 44 (2): 111–4. CiteSeerX 10.1.1.623.71 . doi :10.1099/00222615-44-2-111. PMID  8642571. 
  42. ^ ab Mani N, Dupuy B (май 2001 г.). «Регуляция синтеза токсинов в Clostridium difficile с помощью альтернативного фактора РНК-полимеразы сигма». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 98 (10): 5844–9. Bibcode : 2001PNAS...98.5844M. doi : 10.1073/pnas.101126598 . PMC 33301. PMID  11320220. 
  43. ^ Bartlett JG (май 1994). " Clostridium difficile : история его роли как кишечного патогена и современное состояние знаний об этом организме ". Клинические инфекционные заболевания . 18 (Suppl 4): S265–72. doi :10.1093/clinids/18.Supplment_4.S265. PMID  8086574.
  44. ^ Carter GP, Rood JI, Lyras D (январь 2012 г.). «Роль токсина А и токсина В в вирулентности Clostridium difficile ». Trends in Microbiology . 20 (1): 21–9. doi :10.1016/j.tim.2011.11.003. PMID  22154163.
  45. ^ Orth P, Xiao L, Hernandez LD, Reichert P, Sheth PR, Beaumont M и др. (июнь 2014 г.). «Механизм действия и эпитопы нейтрализующего антитела Clostridium difficile toxin B безлотоксумаба, выявленные с помощью рентгеновской кристаллографии». Журнал биологической химии . 289 (26): 18008–21. doi : 10.1074/jbc.m114.560748 . PMC 4140266. PMID  24821719 . 
  46. ^ Arnon SS, Mills DC, Day PA, Henrickson RV, Sullivan NM, Wilkins TD (январь 1984). «Быстрая смерть детенышей макак-резусов, которым вводили токсины Clostridium difficile A и B: физиологическая и патологическая основа». Journal of Pediatrics . 104 (1): 34–40. doi :10.1016/S0022-3476(84)80585-5. PMID  6690674.
  47. ^ Drudy D, Fanning S, Kyne L (январь 2007 г.). «Токсин А-отрицательный, токсин В-положительный Clostridium difficile». Журнал инфекционных заболеваний . 11 (1): 5–10. doi : 10.1016/j.ijid.2006.04.003 . PMID  16857405.
  48. ^ Savidge TC, Pan WH, Newman P, O'Brien M, Anton PM, Pothoulakis C (август 2003 г.). « Токсин B Clostridium difficile является воспалительным энтеротоксином в кишечнике человека». Гастроэнтерология . 125 (2): 413–20. doi :10.1016/S0016-5085(03)00902-8. PMID  12891543.
  49. ^ Добсон Г., Хики К., Триндер Дж. (июнь 2003 г.). « Колит, вызванный Clostridium difficile, вызывающий токсический мегаколон, тяжелый сепсис и синдром полиорганной дисфункции». Intensive Care Medicine . 29 (6): 1030. doi :10.1007/s00134-003-1754-7. PMID  12734650. S2CID  33185625.
  50. ^ ab Lyerly, DM; Roberts, MD; Phelps, CJ; Wilkins, TD (январь 1986 г.). «Очистка и свойства токсинов A и B Clostridium difficile». FEMS Microbiology Letters . 33 (1): 31–35. doi : 10.1111/j.1574-6968.1986.tb01206.x .