stringtranslate.com

Изопропил β-D-1-тиогалактопиранозид

Изопропил β- d -1-тиогалактопиранозид ( IPTG ) — это молекулярный биологический реагент. Это соединение является молекулярным имитатором аллолактозы , метаболита лактозы , который запускает транскрипцию lac - оперона , и поэтому используется для индукции экспрессии белка, где ген находится под контролем lac- оператора .

Механизм действия

Подобно аллолактозе, IPTG связывается с lac-репрессором и высвобождает тетрамерный репрессор из lac-оператора аллостерическим образом , тем самым позволяя транскрипцию генов в lac-опероне, таких как ген, кодирующий бета-галактозидазу , фермент гидролазу, катализирующий гидролиз β-галактозидов в моносахариды. Но в отличие от аллолактозы, атом серы ( S ) создает химическую связь, которая не гидролизуется клеткой, не давая клетке метаболизировать или деградировать индуктор . Поэтому его концентрация остается постоянной в течение эксперимента.

Поглощение IPTG кишечной палочкой может происходить независимо от действия пермеазы лактозы , поскольку задействованы и другие пути транспорта. [1] При низкой концентрации IPTG проникает в клетки через пермеазу лактозы, но при высоких концентрациях (обычно используемых для индукции белка) IPTG может проникать в клетки независимо от пермеазы лактозы. [2]

Использование в лаборатории

При хранении в виде порошка при температуре 4 °C или ниже IPTG стабилен в течение 5 лет. Он значительно менее стабилен в растворе; Sigma рекомендует хранить не более месяца при комнатной температуре. [3] IPTG является эффективным индуктором экспрессии белка в диапазоне концентраций от 100 мкмоль/л до 3,0 ммоль/л. Обычно стерильный, отфильтрованный 1 моль/л раствор IPTG добавляется 1:1000 к экспоненциально растущей бактериальной культуре, чтобы получить конечную концентрацию 1 ммоль/л. Используемая концентрация зависит от требуемой силы индукции, а также от генотипа клеток или используемой плазмиды. Если присутствует lacI q , мутант, который сверхпродуцирует lac-репрессор, то может потребоваться более высокая концентрация IPTG. [4]

В сине-белом экране IPTG используется вместе с X-gal . Сине-белый экран позволяет идентифицировать колонии, которые были трансформированы рекомбинантной плазмидой, а не нерекомбинантной, в экспериментах по клонированию. [ необходима цитата ] [5]

Ссылки

  1. ^ Hansen LH, Knudsen S, Sørensen SJ (июнь 1998 г.). «Влияние гена lacY на индукцию индуцируемых промоторов IPTG, изученное на Escherichia coli и Pseudomonas fluorescens». Curr. Microbiol . 36 (6): 341–7. doi :10.1007/s002849900320. PMID  9608745. S2CID  22257399. Архивировано из оригинала 2000-10-18.
  2. ^ Марбах А., Беттенброк К. (2012). «индукция lac-оперонов в Escherichia coli: систематическое сравнение индукции IPTG и TMG и влияние трансацетилазы LacA». Журнал биотехнологии . 157 (1): 82–8. doi :10.1016/j.jbiotec.2011.10.009. PMID  22079752.
  3. ^ https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Product_Information_Sheet/i5502pis.pdf [ мертвая ссылка ]
  4. ^ BL21(DE3) Competent Cells, BL21 (DE3)pLysS Competent Cells и BL21 Competent Cells Instruction Manual (Редакция № 066004e, ред.). La Jolla, CA: Stratagene. 2006. стр. 7.
  5. ^ https://www.agilent.com/Library/usermanuals/Public/200521.pdf [ пустой URL-адрес PDF ]

Внешние ссылки