Rhabdoviridae — это семейство вирусов с отрицательной цепью РНК в порядке Mononegavirales . [1] Позвоночные (включая млекопитающих и людей), беспозвоночные , растения , грибы и простейшие служат естественными хозяевами. [2] [3] [4] Заболевания, связанные с вирусами-членами, включают бешеный энцефалит, вызываемый вирусом бешенства , и гриппоподобные симптомы у людей, вызываемые везикуловирусами . Название происходит от древнегреческого rhabdos , что означает стержень, что указывает на форму вирусных частиц. [5] Семейство насчитывает 40 родов, большинство из которых отнесены к трем подсемействам. [6]
Отдельные вирусные частицы (вирионы) рабдовирусов состоят из РНК, белка, углевода и липида. Они имеют сложную палочковидную или пулевидную форму. Все эти вирусы имеют структурное сходство и были классифицированы как одно семейство. [7]
Вирионы имеют ширину около 75 нм и длину 180 нм. [2] Рабдовирусы имеют оболочку и спиральные нуклеокапсиды , а их геномы линейные, длиной около 11–15 кб. [5] [2] Рабдовирусы несут свой генетический материал в форме одноцепочечной РНК с отрицательным зарядом . Обычно они несут гены пяти белков: большого белка (L), гликопротеина (G), нуклеопротеина (N), фосфопротеина (P) и матричного белка (M). [8] Последовательность этих белковых генов от 3'-конца до 5'-конца в геноме составляет N–P–M–G–L. [9] Каждый рабдовирус кодирует эти пять белков в своих геномах. В дополнение к этим белкам многие рабдовирусы кодируют один или несколько белков. [10] Первые четыре гена кодируют основные структурные белки, которые участвуют в структуре оболочки вириона. [9]
Матричный белок (M) образует слой между оболочкой вириона и ядром нуклеокапсида рабдовируса. [10] В дополнение к функциям сборки вируса, морфогенеза и отпочкования от плазматической мембраны хозяина, были обнаружены дополнительные функции, такие как регуляция синтеза РНК, влияющие на баланс продуктов репликации и транскрипции, что было обнаружено в ходе экспериментов по обратной генетике с вирусом бешенства, членом семейства Rhabdoviridae. [11] Большой белок (L) имеет несколько ферментативных функций в синтезе и обработке вирусной РНК. [8] Ген L кодирует этот белок L, который содержит несколько доменов. В дополнение к синтезу РНК, считается, что он участвует в метильной кэппинге и полиаденилировании. [9]
Белок P играет важную и множественную роль во время транскрипции и репликации генома РНК. Многофункциональный белок P кодируется геном P. Белок P действует как некаталитический кофактор большой белковой полимеразы. Он связывается с белком N и L. Белок P имеет две независимые области связывания. Образуя комплексы NP, он может сохранять белок N в форме, подходящей для специфической инкапсуляции. Белок P вмешивается в врожденную иммунную систему хозяина посредством ингибирования активности фактора регуляции интерферона 3 (IRF3) и сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 1 (STAT1), тем самым устраняя клеточный путь интерферона 1 типа. Кроме того, белок P действует как антагонист против противовирусной функции PML. [12] [13]
Рабдовирусы, поражающие позвоночных (особенно млекопитающих и рыб), растения и насекомых, обычно имеют форму пули. [14] Однако, в отличие от парамиксовирусов , рабдовирусы не обладают гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью. [14]
Транскриптаза рабдовируса состоит из 1 L и 3 P белков. Компоненты транскриптазы всегда присутствуют в полном вирионе, позволяя рабдовирусам начинать транскрипцию сразу после проникновения. [ необходима цитата ]
Транскриптаза рабдовируса движется в направлении от 3' к 5' по геному, и транскрипция заканчивается случайным образом в конце белковых последовательностей. Например, если транскрипция заканчивается в конце последовательности M, лидерная РНК и мРНК N, P и M образуются отдельно друг от друга. [ необходима цитата ]
Кроме того, мРНК накапливаются в соответствии с порядком белковых последовательностей в геноме, решая проблему логистики в клетке. Например, белок N необходим в больших количествах для вируса, так как он полностью покрывает внешнюю часть реплицированных геномов. Поскольку последовательность белка N расположена в начале генома (3'-конец) после лидерной последовательности РНК, мРНК для белка N всегда могут быть получены и накапливаться в больших количествах с каждым завершением транскрипции. После процессов транскрипции все мРНК кэпируются на 5'-конце и полиаденилируются на 3'-конце белком L.
Таким образом, этот механизм транскрипции обеспечивает мРНК в соответствии с потребностями вирусов. [10] : 173–184
Вирусные белки транслируются на свободных рибосомах, но белок G транслируется шероховатым эндоплазматическим ретикулумом. Это означает, что белок G имеет сигнальный пептид на стартовых кодах его мРНК. Фосфопротеины (P) и гликопротеин (G) подвергаются посттрансляционной модификации. Тримеры белка P образуются после фосфорилирования киназной активностью белка L. Белок G гликозилируется в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме и комплексе Гольджи. [10] : 180
Репликация вируса цитоплазматическая. Цикл репликации одинаков для большинства рабдовирусов. Все компоненты, необходимые для ранней транскрипции, и нуклеокапсид высвобождаются в цитоплазму инфицированной клетки после того, как происходят первые шаги связывания, проникновения и снятия оболочки. [9] Проникновение в клетку-хозяина достигается путем прикрепления вирусных гликопротеинов G к рецепторам хозяина, что опосредует эндоцитоз, опосредованный клатрином. Репликация следует модели репликации вируса с отрицательной цепью РНК. Транскрипция вируса с отрицательной цепью РНК, использующая полимеразное заикание, является методом транскрипции. Вирус покидает клетку-хозяина путем почкования и вирусного движения, направляемого канальцами. Пути передачи - зооноз и укус. [5] [2]
Репликация многих рабдовирусов происходит в цитоплазме , хотя несколько вирусов, инфицирующих растения, реплицируются в ядре. [15] Белок матрицы рабдовируса (M) очень мал (~20–25 кДа), однако играет ряд важных ролей в цикле репликации вируса. Эти белки рабдовирусов составляют основные структурные компоненты вируса, и они являются многофункциональными белками и необходимы для созревания вируса и процесса вирусного почкования, которые также регулируют баланс синтеза вирусной РНК, сдвигая синтез с транскрипции на репликацию. [16] Для репликации должны быть экспрессированы как белок L, так и белок P для регулирования транскрипции . [17] Фосфопротеин (P) также играет решающую роль в репликации, поскольку для надлежащей и селективной инкапсуляции вирусной РНК необходимы комплексы NP, а не только N. Следовательно, репликация невозможна после заражения, пока первичная транскрипция и трансляция не произведут достаточное количество белка N. [18]
Белок L обладает большой ферментативной активностью, такой как репликация РНК, кэппинг мРНК фосфорилирования P. Белок L дает характеристику репликации в цитоплазме. [17] Транскрипция приводит к образованию пяти моноцистронных мРНК , поскольку межгенные последовательности действуют как терминирующие и промоутерные последовательности для соседних генов . Этот тип механизма транскрипции объясняется моделью остановки-старта (прерывистая транскрипция). Благодаря модели остановки-старта производится большое количество структурных белков. Согласно этой модели, связанная с вирусом РНК-полимераза сначала начинает синтез лидерной РНК, а затем пяти мРНК, которые будут производить белки N, P, M, G, L соответственно. После того, как лидерная РНК была произведена, фермент полимераза повторно инициирует транскрипцию вириона на гене N и продолжает ее синтез, пока он не закончится на 3'-конце цепи. Затем синтез мРНК P осуществляется тем же ферментом с новым стартером sinyal. Эти шаги продолжаются до тех пор, пока фермент не достигнет конца гена L. В процессе транскрипции фермент полимераза может покинуть шаблон в любой точке, а затем привязаться только к 3'-концу геномной РНК, чтобы снова начать синтез мРНК. Этот процесс приведет к градиенту концентрации количества мРНК на основе ее места и ее диапазона от 3'-конца. В этих обстоятельствах количество видов мРНК изменится, и будут произведены белки N>P>M>G>L. [19] Во время их синтеза мРНК обрабатываются, чтобы ввести 5'-кэп и 3'-полиаденилированный хвост в каждую из молекул. Эта структура гомологична клеточным мРНК и, таким образом, может транслироваться клеточными рибосомами для производства как структурных, так и неструктурных белков.
Геномная репликация требует источника вновь синтезированного белка N для инкапсуляции РНК. Это происходит во время ее синтеза и приводит к производству полноразмерной антигеномной копии. Это, в свою очередь, используется для производства большего количества геномной РНК с отрицательной полярностью. Для этого процесса требуется вирусная полимераза, но то, как полимераза участвует как в синтезе мРНК, так и в геномной репликации, не совсем понятно.
Репликация обычно происходит в тельце включения внутри цитоплазмы, откуда они почковаются через различные цитоплазматические мембраны и внешнюю мембрану клетки. Этот процесс приводит к приобретению белков M + G, ответственных за характерную пулевидную морфологию вируса .
Эти вирусы делятся на четыре группы на основе гена РНК-полимеразы. [20] Базальная клада, по-видимому, состоит из novirhabdoviruses , которые заражают рыбу. Cytorhabdoviruses и nucleorhabdoviruses , которые заражают растения, являются сестринскими кладами. Lyssaviruses образуют свою собственную кладу, которая более тесно связана с кладами наземных позвоночных и насекомых, чем с растительными вирусами. Остальные вирусы образуют ряд сильно разветвленных клад и заражают членистоногих и наземных позвоночных.
Анализ 99 видов рабдовирусов животных, проведенный в 2015 году, показал, что они попадают в 17 таксономических групп, восемь из которых — Lyssavirus , Vesiculovirus , Perhabdovirus , Sigmavirus , Ephemerovirus , Tibrovirus , Tupavirus и Sprivivirus — были ранее признаны. [21] Авторы предложили семь новых таксонов на основе своих выводов: «Almendravirus», «Bahiavirus», «Curiovirus», «Hapavirus», «Ledantevirus», «Sawgravirus» и «Sripuvirus». Семь видов не сгруппировались с другими, что указывает на необходимость дополнительных таксонов.
Неофициальная супергруппа – «Dimarhabdovirus» – относится к родам Ephemerovirus и Vesiculovirus . [22] Ряд других вирусов, которые не были классифицированы в роды, также принадлежат к этому таксону. Эта супергруппа содержит роды с видами, которые реплицируются как в позвоночных, так и в беспозвоночных хозяевах и имеют биологические циклы, которые включают передачу гематофагическими двукрылыми (кровососущими мухами).
Прототипическим и наиболее изученным рабдовирусом является вирус везикулярного стоматита Индианы . Это предпочтительная модельная система для изучения биологии рабдовирусов и мононегавирусов в целом. Болезнь млекопитающих бешенство вызывается лиссавирусами, несколько из которых были идентифицированы.
Рабдовирусы являются важными патогенами животных и растений. Рабдовирусы передаются хозяевам членистоногими, такими как тли, цикадки, цикадки, черные мухи, москиты и комары.
В сентябре 2012 года исследователи, пишущие в журнале PLOS Pathogens, описали новый вид рабдовируса, названный вирусом Бас-Конго (BASV), который был обнаружен в образце крови пациента, пережившего болезнь, напоминающую геморрагическую лихорадку. [20] С момента его открытия не было зарегистрировано ни одного случая BASV, и неизвестно, был ли BASV фактической причиной заболевания пациента. [23]
В 2015 году два новых рабдовируса, вирус Экпома 1 и вирус Экпома 2, были обнаружены в образцах крови двух здоровых женщин на юго-западе Нигерии. Вирус Экпома 1 и вирус Экпома 2, по-видимому, хорошо реплицируются в организме человека (вирусная нагрузка варьировалась от ~45 000 до ~4,5 миллионов копий РНК/мл плазмы), но не вызывали никаких наблюдаемых симптомов заболевания. [24] Воздействие вируса Экпома 2, по-видимому, широко распространено в некоторых частях Нигерии, где показатели серопревалентности близки к 50%. [24]
В подсемействе Alpharhabdovirinae выделяют следующие роды: [6]
Роды других подсемейств следующие: [6]
Следующие роды не отнесены к подсемейству: [6]
В дополнение к вышеперечисленным, существует большое количество рабдоподобных вирусов, которые пока официально не классифицированы ICTV . [ 5]