В молекулярной биологии miR-203 — это короткая некодирующая молекула РНК. МикроРНК функционируют для регулирования уровней экспрессии других генов с помощью нескольких механизмов, таких как трансляционная репрессия и катализируемое Argonaute расщепление матричной РНК . [1] [2] miR-203 была идентифицирована как специфичная для кожи микроРНК, и она формирует градиент экспрессии, который определяет границу между пролиферативными эпидермальными базальными предшественниками и терминально дифференцирующимися супрабазальными клетками. [3] Также было обнаружено, что она активируется при псориазе [4] и дифференциально экспрессируется при некоторых типах рака . [5] [6]
МикроРНК — это короткие (20–22 нуклеотида) некодирующие молекулы РНК, которые участвуют в регуляции матричных РНК (мРНК) путем связывания с их 3'- НТО и влияния на их стабильность [4] или управления их подавлением или деградацией. [1] МикроРНК, вероятно, играют роль в большинстве клеточных процессов, включая пролиферацию, развитие , дифференциацию и апоптоз . [5] Они расположены в межгенных и внутригенных областях и транскрибируются как pri-miRNA РНК-полимеразой II или РНК-полимеразой III . [4] Затем они подвергаются обширным посттранскрипционным модификациям, начиная с обработки pri-miRNA в ядре для генерации pre-miRNA длиной 70–100 нуклеотидов рибонуклеазами Drosha и DGCR8 . Затем эта пре-миРНК транспортируется из ядра с помощью Exportin-5 , а затем далее обрабатывается Dicer в зрелую двухцепочечную микроРНК длиной 18-25 нт. [7] Затем направляющая цепь микроРНК загружается в комплекс РНК-индуцированного сайленсинга (RISC) [7] и затем может спариваться со своей целью. Пассажирская цепь, обозначенная звездочкой, обычно деградирует, хотя это не всегда так. [8]
MiR-203 — это микроРНК, которая специфически экспрессируется в кератиноцитах (наиболее распространенный тип клеток в эпидермисе) и в нормальных условиях способствует эпидермальной дифференцировке, ограничивая пролиферативный потенциал и вызывая выход из клеточного цикла . [3] Это происходит за счет подавления p63 , важного регулятора поддержания стволовых клеток в эпителиальных стратифицированных тканях. [3] Другими предлагаемыми мишенями являются супрессор цитокиновой сигнализации 3 (SOCS3) и ABL1 .
Как и в случае со многими другими микроРНК, экспрессия miR-203 была обнаружена нарушенной при нескольких злокачественных новообразованиях, включая псориаз , ревматоидный артрит и канцерогенез . [5] [9] [10] [11] [12]
У мышей miR-203 находится в хромосоме 12, в хрупкой области размером 7 Мб, которая теряется при некоторых злокачественных новообразованиях кроветворной системы. Эта область кодирует 52 зрелые miRNA, ~12% генома miRNA млекопитающих. У людей эта область сохраняется и располагается межгенно в 14q32. [11]
Sonkoly et al. обнаружили, что miR-203 демонстрирует высокую органо- и тканеспецифическую экспрессию в 21 проанализированных органах и тканях человека. [13] miR-203 была экспрессирована на самом высоком уровне в коже и в пищеводе, органе, имеющем анатомическое сходство с кожей. Yi et al. провели гибридизацию in situ целых эмбрионов мышей, обнаружив сигнал, специфичный для miR-203, от эпидермиса и языка. [3] Специфическая для кожи экспрессия miR-203 наблюдалась у данио-рерио, что указывает на то, что не только последовательность, но и тканевая специфичность miR-203 сохраняются в ходе эволюции. После этих результатов ряд исследований выявил снижение экспрессии miR-203 при различных злокачественных новообразованиях, в основном эпителиального происхождения.
Sonkoly et al. продемонстрировали, что экспрессия эндогенной экспрессии miR-203 находится под контролем пути протеинкиназы C в эпителиальных клетках. [14] Они продемонстрировали, что c-jun подавляет, в то время как другой член комплекса факторов транскрипции AP-1 , JUNB, увеличивает экспрессию miR-203. Факторы роста, такие как эпидермальный фактор роста, также могут подавлять miR-203 в эпителиальных клетках... [14]
Множественные механизмы могут подавлять экспрессию miR-203 в злокачественных новообразованиях: Уэллнер и др. показывают, что ZEB1 подавляет экспрессию miR-203 вместе с семейством miR-200, члены которого являются сильными индукторами эпителиальной дифференциации. Они предполагают, что ZEB1 связывает активацию ЭПТ и поддержание стволовости путем подавления ингибирующих стволовость микроРНК (miRNA) и, таким образом, является промоутером мобильных, мигрирующих раковых стволовых клеток. [15]
Sonkoly et al. продемонстрировали, что активация сигнального пути Hedgehog может привести к снижению экспрессии miR-203 в мышиной модели базальноклеточной карциномы. Они демонстрируют, что сверхэкспрессия c-jun , мощного протоонкогена, который обычно дерегулируется в широком диапазоне видов рака, подавляет экспрессию miR-203. Сверхэкспрессия c-JUN была описана в базальноклеточной карциноме , в которой miR-203 является одной из наиболее подавленных микроРНК. [16]
Маккенна и др. продемонстрировали, что экспрессия miR-203 в кератиноцитах зависит от регуляции уровней p53 E6, что может объяснить, как экспрессия HPV16 E6 может нарушить баланс между пролиферацией и дифференцировкой, а также ответ на повреждение ДНК в кератиноцитах. [17]
Эта микроРНК была предсказана с использованием вычислительных инструментов путем сравнения с последовательностями мыши и тигровой рыбы-иглы. [18] Она была подтверждена у данио-рерио, а ее экспрессия подтверждена у людей путем клонирования и секвенирования, где она была обнаружена во внешнем слое эпидермиса. [19]
miR-203 имеет несколько проверенных целей. p63 , сохраняющийся в линиях позвоночных. p63 является важным регулятором поддержания стволовых клеток в стратифицированных эпителиальных тканях. Yi et al . [3] подтвердили, что p63 является целью miR-203. Они показали, что экспрессия miR-203 заметна в терминально дифференцирующихся эпителиальных клетках, но не присутствует в их пролиферативных компартментах-предшественниках и демонстрирует взаимоисключающий паттерн экспрессии с p63. Они также сообщают о снижении регуляции белков ниже по течению от p63, что предполагает механистический метод ингибирования пролиферативного потенциала эпидермальных стволовых клеток.
Существуют некоторые разногласия относительно того, является ли подавитель цитокиновой сигнализации 3 (SOCS3) также мишенью miR-203. В своем исследовании Lena et al . (2008) [12] показали, что, несмотря на биоинформатическое выравнивание miR-203 с 3'UTR SOCS3, уровни транскриптов SOCS3 увеличились в кератиноцитах, стимулированных к дифференцировке in vitro, параллельно с miR-203. Затем они экзогенно экспрессировали miR-203 в кератиноцитах мышей и показали, что SOCS3 не подавляется miR-203.
Напротив, Вэй и др . (2010) [20] подтвердили SOCS3 как цель для miR-203. В своем исследовании они ввели фрагмент SOCS3 3'UTR, охватывающий предполагаемый целевой сайт, в репортерный вектор люциферазы и наблюдали значительное снижение активности люциферазы при введении miR-203 по сравнению с контрольной группой. Они также сгенерировали мутацию в сайте связывания и сообщили о восстановлении активности люциферазы, а также о взаимоисключающей локализации с miR-203. Они пришли к выводу, что SOCS3 нацелен на miR-203, и выдвинули гипотезу, что регуляция miR-203 SOCS3 и, таким образом, STAT3 может иметь последствия для функций кератиноцитов.
Другой подтвержденной целью miR-203 является c-jun ( AP-1 ), мощный протоонкоген, который обычно дерегулируется в широком спектре видов рака, включая опухоли кожи. Подавление miR-203 в опухолях BCC было связано с заметным увеличением экспрессии c-JUN, о чем свидетельствует интенсивное и равномерное распределение в гнездах опухолей BCC. Подобно другим ранее идентифицированным целям miR-203, таким как p63, c-JUN преимущественно экспрессировался в базальном, пролиферативном слое здорового человеческого эпидермиса. [16]
Другой предполагаемой целью является ABL1 , который активируется при злокачественных новообразованиях кроветворной системы, где miR-203 эпигенетически подавляется гиперметилированием . [11]
В линиях клеток рака легких miR-203, как было показано, нацелен на DKK1 , [21] секретируемый белок, который действует как фактор выживания в определенных условиях. Его активность выживания является лишь условной, поскольку для этого требуется присутствие его трансмембранного рецепторного белка KRM1 . KRM1 является рецептором зависимости и подает сигналы о гибели клеток до тех пор, пока такой сигнал не будет заблокирован связыванием его лиганда фактора выживания DKK1 . [22] Опосредованное miR-203 снижение регуляции DKK1, по-видимому, облегчает уничтожение клеток рака легких, что предполагает, что раковые клетки повышают регуляцию DKK1 для собственного выживания, и этот белок был бы хорошей мишенью для снижения регуляции при лечении таких видов рака. [21] DKK1 также является хорошо известным ингибитором сигнализации Wnt и требуется для формирования структур головы во время эмбрионального развития большинства животных. [23]
Йи и др . показали, что у мышей экспрессия miR-203 значительно повышается между E13.5 и E15.5, что позволяет предположить, что она может отсутствовать у мультипотентных предшественников однослойного эпидермиса, но индуцируется при стратификации и дифференциации. [3] Она также была экспрессирована на высоком уровне в дифференцирующихся клетках, таких как волосяные фолликулы, эпидермис и сальные железы.
Вэй и др . [20] продемонстрировали, что у людей экспрессия miR-203 впервые обнаруживается на 17 неделе беременности в супрабазальных слоях эпидермиса, и эта локализация сохраняется во взрослой коже. Когда miR-203 экспрессируется преждевременно, базальные клетки снижают свой пролиферативный потенциал; а когда он отсутствует, пролиферация больше не ограничивается базальным слоем эпидермиса. [24]
miR-203 был обнаружен в повышенной экспрессии в аденокарциноме поджелудочной железы и показывает корреляцию с плохим прогнозом у пациентов, перенесших панкреатэктомию , и был предложен в качестве нового прогностического маркера для этого заболевания. [5] [9] Кроме того, miR-203 был идентифицирован как мишень для белка вируса папилломы человека (ВПЧ) E7, [6] что вызывает его подавление и, таким образом, дерепрессию p63 и его нижестоящих мишеней, обеспечивая пролиферативный потенциал на клетке-хозяине, необходимый для репликации вируса. Высокие уровни miR-203 ингибируют амплификацию ВПЧ. [6]
miR-203 также была предложена в качестве опухолесупрессирующей микроРНК при гепатоцеллюлярной карциноме (ГЦК) и гемопоэтических злокачественных новообразованиях. В своем исследовании Фурута и др . [10] обнаружили, что miR-203, наряду с miR-124, эпигенетически подавлены в первичных опухолях ГЦК по сравнению с неопухолевыми тканями печени. Кроме того, экспрессия miR-203 в клетках ГЦК, в которых отсутствует их экспрессия, подавляла рост клеток и подавляла ряд других возможных мишеней. Буэно и др . [11] также обнаружили подавление miR-203 при некоторых лейкозах, а также обратную корреляцию между уровнями miR-203 и ABL1 (иногда выражается как белок слияния BCR-ABL1). Подтверждая его роль в качестве супрессора опухолей, было также обнаружено, что он повышается при облучении УФ-С в линиях плоскоклеточной карциномы , что предполагает связь между miR-203 и активацией программы апоптоза. [12]
miR-203 действует как супрессор опухолей при базальноклеточной карциноме (BCC), в которой он образует двойную отрицательную обратную связь с его проверенной мишенью c-JUN(AP1). Эта регуляторная схема обеспечивает функциональный контроль над пролиферацией и дифференцировкой базальных клеток. Его экспрессия была подавлена у трансгенных мышей K5TreGli1 из-за активированной сигнализации Hedgehog. Дальнейшее подтверждение роли miR-203 как супрессора опухолей, доставка in vivo имитаторов miR-203 в мышиной модели BCC приводит к снижению роста опухоли. [16]
Sonkoly et al . [13] идентифицировали miR-203, наряду с miR-146a, miR-21 и miR-125b; как специфичную для псориаза микроРНК по сравнению со здоровой кожей человека или атопической экземой. Они также наблюдали снижение регуляции SOCS3 одновременно с повышением регуляции miR-203 в псориатических бляшках, что потенциально оказывает влияние на воспалительные реакции.
Stanczyk et al . [25] обнаружили повышенную экспрессию miR-203 в синовиальных фибробластах ревматоидного артрита (RASF) по сравнению со здоровыми образцами или образцами остеоартрита; и усиленная экспрессия miR-203 привела к более высоким уровням MMP-1 и IL-6 и, таким образом, способствовала активированному фенотипу RASF. Было обнаружено, что регуляция MiR-203 зависит от метилирования.