Эмбриональный фибробласт мыши

МЭФ (мышиные эмбриональные фибробласты) на чашке Петри для культивирования тканей.

Фотография человеческих эмбриональных стволовых клеток (колонии клеток в центре). Веретенообразные клетки, окружающие колонию стволовых клеток, — это МЭФ.

Эмбриональные фибробласты мыши (MEF) представляют собой тип фибробластов, полученных из эмбриона мыши. При культивировании in vitro MEF демонстрируют веретенообразную форму , что является типичной особенностью фибробластов. MEF — это ограниченная клеточная линия. После нескольких передач MEF стареют и в конечном итоге умирают. Тем не менее, исследователи могут использовать несколько стратегий, таких как заражение вирусом или повторная передача, чтобы увековечить клетки MEF, что позволяет MEF расти бесконечно, несмотря на некоторые изменения в характеристиках. ^{[1] [2]}

МЭФ широко используются в исследованиях в области естественных наук, особенно в биологии стволовых клеток .

Подготовка и культивирование

Для приготовления MEF необходимы беременные самки мышей. После умерщвления самки мыши исследователь должен надрезать ей желудок, а затем отделить эмбрион от плаценты в боксе биологической безопасности . Затем следует извлечь печень и голову. Наконец, переварить остатки ферментами, чтобы получить отдельные изолированные клетки, и культивировать клетки в чашках для культивирования тканей . Клетки MEF можно культивировать in vitro в среде DMEM с 10% FBS . Для передачи MEF исследователи должны использовать трипсин для переваривания клеток (заставляя их отсоединяться от поверхности) и перенести 1/5 переваренных клеток в новую чашку. ^{[3] [1]}

Применение в биологии

В 1962 году Джордж Тодаро и Говард Грин, два исследователя из Нью-Йоркского университета , увековечили MEF путем повторной передачи. Эти клетки развились в широко используемую клеточную линию NIH 3T3 . ^[4]

MEF, обработанные митомицином или гамма-лучами (такое лечение заставляет MEF останавливать митоз ), широко используются в качестве фидера в культуре эмбриональных стволовых клеток, поскольку они могут имитировать микросреду в эмбрионе. ^[5] В 2006 году Шинья Яманака перепрограммировал MEF в iPSC , введя 4 фактора, что является примечательным в развитии биологии стволовых клеток. ^[6]

Смотрите также

• Фибробласт
• Эмбриональная стволовая клетка

Ссылки

1. Jian-ming Xu (2005). «Подготовка, культивирование и иммортализация эмбриональных фибробластов мыши». Current Protocols in Molecular Biology . 28 (1): 1–8.
2. Мелисса М. Сент-Аманд; Джон А. Хановер2; Джозеф Шилоах1 (2016). «Сравнение стратегий иммортализации эмбриональных фибробластов мыши». J Biol Methods . 3 (2): e41. doi :10.14440/jbm.2016.110. PMC 6706133. PMID 31453208  . {{cite journal}}: CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка )
3. LANCTÔT. "ПОДГОТОВКА И ЗАМОРАЖИВАНИЕ МЫШИНЫХ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ" (PDF) . Лаборатория LANCTÔT, Массачусетский технологический институт.^{[ постоянная мертвая ссылка ]}
4. TODARO GJ, GREEN H (1963). «Количественные исследования роста клеток эмбриона мыши в культуре и их развития в установившиеся линии». J. Cell Biol . 17 (2): 299–313. doi :10.1083/jcb.17.2.299. PMC 2106200. PMID  13985244 . 
5. Регад Т., Сэйерс Т., Риз Р., ред. (2015). Принципы биологии стволовых клеток и рака: будущее применение и терапия . John Wiley & Sons. стр. 3–5. ISBN 978-1-118-67062-0.
6. Казутоши Такахаши, Шинья Яманака (2006-08-25). «Индукция плюрипотентных стволовых клеток из эмбриональных и взрослых культур фибробластов мыши определенными факторами». Cell . 126 (4): 663–676. doi :10.1016/j.cell.2006.07.024. hdl : 2433/159777 . PMID  16904174.