stringtranslate.com

Визуализация живых клеток

Микроскоп живых клеток. Микроскопы для живых клеток обычно перевернуты . Чтобы сохранить клетки живыми во время наблюдения, микроскопы обычно помещают в инкубатор для микроклеток (прозрачный ящик).

Визуализация живых клеток — это исследование живых клеток с помощью покадровой микроскопии . Он используется учеными для лучшего понимания биологических функций посредством изучения клеточной динамики. [1] Визуализация живых клеток была впервые применена в первом десятилетии 21 века. Один из первых покадровых микрокинофильмов о клетках был снят Джулиусом Райсом и показывает оплодотворение и развитие яиц морского ежа. [2] С тех пор было разработано несколько методов микроскопии для более детального изучения живых клеток с меньшими усилиями. Был использован новый тип визуализации с использованием квантовых точек , поскольку они оказались более стабильными. [3] Развитие голотомографической микроскопии игнорировало фототоксичность и другие недостатки окрашивания, применяя цифровое окрашивание на основе показателя преломления клеток. [4] [5]

Обзор

Биологические системы существуют как сложное взаимодействие бесчисленных клеточных компонентов , взаимодействующих в четырех измерениях, создавая явление, называемое жизнью. Хотя обычно живые организмы превращают в неживые образцы, чтобы использовать традиционные инструменты статической визуализации, чем дальше образец отклоняется от естественных условий, тем больше вероятность того, что рассматриваемые деликатные процессы будут демонстрировать возмущения. [6] Таким образом , обременительная задача по выявлению истинной физиологической идентичности живой ткани требует визуализации с высоким разрешением как в пространстве, так и во времени внутри родительского организма. [7] Технологические достижения в области визуализации живых клеток, предназначенные для получения пространственно-временных изображений внутриклеточных событий в реальном времени, играют важную роль в подтверждении биологической значимости физиологических изменений, наблюдаемых во время экспериментов. Из-за их тесной связи с физиологическими состояниями анализы живых клеток считаются стандартом для исследования сложных и динамических клеточных событий. [8] Поскольку динамические процессы, такие как миграция , развитие клеток и внутриклеточный трафик , все чаще становятся в центре внимания биологических исследований, методы, способные собирать трехмерные данные в реальном времени для клеточных сетей ( in situ ) и целых организмов ( in vivo ), будут становятся незаменимыми инструментами в понимании биологических систем. Общее признание методов визуализации живых клеток привело к быстрому увеличению числа специалистов-практиков и выявило необходимость увеличения пространственного и временного разрешения без ущерба для здоровья клетки. [9]

Используемые виды микроскопии

Фазовый контраст

Фазово-контрастная микроскопия : замедленное видео деления сперматоцитов погремушки кузнечика . Этот исторический фильм, популяризировавший фазово-контрастную микроскопию, был снят в начале 1940-х годов Куртом Мишелем из компании Carl Zeiss . [10]

До появления фазово-контрастного микроскопа наблюдать живые клетки было сложно. Поскольку живые клетки полупрозрачны, их необходимо окрасить , чтобы их можно было увидеть в традиционный световой микроскоп . К сожалению, процесс окрашивания клеток обычно убивает их. С изобретением фазово-контрастной микроскопии стало возможным детально наблюдать неокрашенные живые клетки. После своего появления в 1940-х годах визуализация живых клеток с использованием фазово-контрастной микроскопии быстро стала популярной. [11] Фазово-контрастный микроскоп был популяризирован благодаря серии замедленных видеороликов (см. видео), снятых с помощью фотопленочной камеры. [12] Его изобретатель, Фриц Цернике , был удостоен Нобелевской премии в 1953 году. [13] Другие более поздние методы фазового контраста, используемые для наблюдения неокрашенных клеток, - это модуляция Хоффмана и дифференциально-интерференционная контрастная микроскопия.

флуоресцентный

Покадровая видеофлуоресцентная микроскопия делящегося эмбриона фиолетового морского ежа . [14]

Фазово-контрастная микроскопия не позволяет наблюдать специфические белки или другие органические химические соединения, которые образуют сложный механизм клетки. Поэтому для маркировки таких соединений были разработаны синтетические и органические флуоресцентные красители , что позволяет наблюдать их с помощью флуоресцентной микроскопии (см. видео). [15] Однако флуоресцентные пятна фототоксичны , инвазивны и отбеливают при наблюдении. Это ограничивает их использование при наблюдении живых клеток в течение длительных периодов времени. Поэтому неинвазивные методы фазового контраста часто используются в качестве жизненно важного дополнения к флуоресцентной микроскопии при визуализации живых клеток. [16] [17] Однако методы флуоресцентной микроскопии с глубоким обучением помогают снизить световую нагрузку и фототоксичность и позволяют даже повторять живые изображения с высоким разрешением. [18]

Количественный фазовый контраст

Видео количественной фазово-контрастной микроскопии делящихся клеток рака молочной железы. [19]

В результате быстрого увеличения плотности пикселей цифровых датчиков изображения количественная фазово-контрастная микроскопия стала альтернативным методом микроскопии для визуализации живых клеток. [20] [21] Количественная фазово-контрастная микроскопия имеет преимущество перед флуоресцентной и фазово-контрастной микроскопией в том, что она является одновременно неинвазивной и количественной по своей природе.

Из-за узкой глубины фокуса традиционной микроскопии визуализация живых клеток в настоящее время в значительной степени ограничивается наблюдением клеток в одной плоскости. Большинство реализаций количественной фазово-контрастной микроскопии позволяют создавать и фокусировать изображения в разных фокальных плоскостях за одну экспозицию. Это открывает будущие возможности трехмерной визуализации живых клеток с помощью методов флуоресценции. [22] Количественная фазово-контрастная микроскопия с вращательным сканированием позволяет получать замедленные трехмерные изображения живых клеток с высоким разрешением. [23] [24] [4]

Голотомография

Голотомография (ГТ) — это лазерный метод измерения трехмерной томограммы показателя преломления (RI) микроскопического образца, такого как биологические клетки и ткани. Поскольку RI может служить внутренним контрастом изображения для прозрачных или фазовых объектов, измерения томограмм RI могут обеспечить количественное изображение микроскопических фазовых объектов без меток. Для измерения 3D-томограммы образцов HT использует принцип голографического изображения и обратного рассеяния . Обычно несколько двумерных голографических изображений образца измеряются под разными углами освещения, используя принцип интерферометрического изображения. Затем трехмерная RI-томограмма образца восстанавливается из этих нескольких двумерных голографических изображений путем обратного решения рассеяния света в образце.

Принцип ГТ очень похож на рентгеновскую компьютерную томографию (КТ) или компьютерную томографию . КТ измеряет несколько двумерных рентгеновских изображений человеческого тела под различными углами освещения, а затем получает трехмерную томограмму (поглощение рентгеновских лучей) с использованием теории обратного рассеяния. И рентгеновская КТ, и лазерная ВТ имеют одно и то же основное уравнение – уравнение Гельмгольца , волновое уравнение для монохроматической длины волны. HT также известна как оптическая дифракционная томография.

Сочетание голографии и вращательного сканирования позволяет осуществлять долговременную запись живых клеток без меток.

Неинвазивная оптическая наноскопия может достичь такого латерального разрешения, используя схему квази- 2π -голографического обнаружения и сложную деконволюцию. Пространственные частоты отображаемой клетки не имеют никакого смысла для человеческого глаза. Но эти рассеянные частоты преобразуются в голограмму и синтезируют полосу пропускания, разрешение которой вдвое превышает обычно доступное. Голограммы записываются с разных направлений освещения на плоскости образца и позволяют наблюдать субволновые томографические изменения образца. Наноразмерные апертуры служат для калибровки томографической реконструкции и характеристики системы визуализации с помощью когерентной передаточной функции. Это приводит к реалистичной обратной фильтрации и гарантирует настоящую сложную реконструкцию поля. [24]

В заключение, для трехмерной голотомографической микроскопии разделены две терминологии: (i) оптическое разрешение (реальное) и (ii) разрешение выборки (то, что на экране).

Приборы и оптика

Визуализация живых клеток представляет собой осторожный компромисс между получением изображения с самым высоким разрешением и сохранением жизни клеток как можно дольше. [25] В результате специалисты по микроскопии живых клеток сталкиваются с уникальным набором проблем, которые часто упускаются из виду при работе с фиксированными образцами. Более того, для визуализации живых клеток часто используются специальные оптические системы и детекторы. Например, в идеале микроскопы, используемые для визуализации живых клеток, должны иметь высокое соотношение сигнал/шум , высокую скорость получения изображений для захвата покадровой видео внеклеточных событий и поддерживать долгосрочную жизнеспособность клеток. [26] Однако оптимизация даже одного аспекта получения изображений может оказаться ресурсоемкой и ее следует рассматривать в каждом конкретном случае.

Конструкции линз

А) Вертикальная конфигурация линз. Б) Конфигурация перевернутой линзы.

Малое увеличение «сухой»

В тех случаях, когда для работы с образцом между объективом и образцом требуется дополнительное пространство, можно использовать сухую линзу, что потенциально требует дополнительной регулировки корректирующего воротника, который изменяет положение линзы в объективе для учета различий. в камерах визуализации. Специальные объективы имеют корректирующие кольца, которые корректируют сферические аберрации с учетом толщины покровного стекла. В сухих объективах с высокой числовой апертурой (NA) регулировочное кольцо корректирующего кольца изменяет положение подвижной группы линз, чтобы учесть различия в том, как внешняя часть линзы фокусирует свет относительно центра. Хотя аберрации свойственны всем конструкциям линз, они становятся более проблематичными для сухих линз, где сохранение разрешения является ключевым моментом. [27]

Маслоиммерсионный с высокой числовой апертурой

Масляная иммерсия — это метод, позволяющий повысить разрешение изображения путем погружения линзы и образца в масло с высоким показателем преломления . Поскольку свет преломляется, когда он проходит между средами с разными показателями преломления, помещая масло с тем же показателем преломления, что и стекло, между линзой и предметным стеклом, можно избежать двух переходов между показателями преломления. [28] Однако для большинства применений рекомендуется использовать масляную иммерсию с фиксированными (мертвыми) образцами, поскольку живым клеткам требуется водная среда, а смешивание масла и воды может вызвать серьезные сферические аберрации. В некоторых случаях для более точной реконструкции изображения можно использовать силиконовое масло . Силиконовое масло является привлекательной средой, поскольку оно имеет показатель преломления, близкий к показателю живых клеток, что позволяет создавать изображения с высоким разрешением при минимизации сферических аберраций. [27]

Погружение в воду

Для визуализации живых клеток требуется образец в водной среде, который часто находится на расстоянии от 50 до 200 микрометров от покровного стекла. Следовательно, водно-иммерсионные линзы могут помочь достичь более высокой разрешающей способности за счет того, что и окружающая среда, и сами клетки будут близки по показателю преломления воды. Водоиммерсионные линзы разработаны с учетом показателя преломления воды и обычно имеют корректирующий воротник, позволяющий регулировать объектив. Кроме того, из-за более высокого показателя преломления воды водоиммерсионные линзы имеют высокую числовую апертуру и могут создавать изображения, превосходящие масляно-иммерсионные линзы, при разрешении плоскостей глубиной более 0 мкм. [27]

окунание

Еще одним решением для визуализации живых клеток является погружная линза. Эти линзы представляют собой разновидность водоиммерсионных линз, которые не требуют покровного стекла и могут быть погружены непосредственно в водную среду образца. Одним из основных преимуществ погружной линзы является то, что она имеет большое эффективное рабочее расстояние. [29] Поскольку покровное стекло не требуется, этот тип линзы может приближаться к поверхности образца, и в результате разрешение ограничивается ограничениями, налагаемыми сферической аберрацией, а не физическими ограничениями покровного стекла. Хотя погружаемые линзы могут быть очень полезны, они не идеальны для всех экспериментов, поскольку «погружение» линзы может нарушить работу клеток в образце. Кроме того, поскольку инкубационная камера должна быть открыта для линзы, необходимо внимательно следить за изменениями в среде образца, вызванными испарением. [27]

Фототоксичность и фотообесцвечивание

Сегодня большинство методов визуализации в реальном времени основаны либо на режимах высокой освещенности, либо на флуоресцентном мечении, что одновременно вызывает фототоксичность и ставит под угрозу способность сохранять клетки нетронутыми и живыми в течение долгого времени. Поскольку наши знания в области биологии основаны на наблюдениях, важно минимизировать возмущения, вызванные техникой визуализации.

Развитие конфокальной микроскопии тесно коррелирует с доступностью мощных лазеров, способных достигать высоких интенсивностей светового возбуждения. Однако высокая выходная мощность может повредить чувствительные флуорофоры , поэтому лазеры обычно работают значительно ниже своей полной выходной мощности. [30] Чрезмерное воздействие света может привести к фотоповреждениям из-за фотообесцвечивания или фототоксичности . Эффекты фотообесцвечивания могут значительно снизить качество флуоресцентных изображений, и в последние годы существует значительный спрос на коммерческие флуорофоры с более длительным сроком службы. Одно из решений, серия Alexa Fluor , практически не демонстрирует выцветания даже при высокой интенсивности лазера. [31]

В физиологических условиях многие клетки и типы тканей подвергаются воздействию лишь низкого уровня света. [32] В результате важно свести к минимуму воздействие на живые клетки высоких доз ультрафиолетового (УФ), инфракрасного (ИК) или флуоресцентного возбуждающего света, который может повредить ДНК , повысить клеточную температуру и вызвать фотообесцвечивание. соответственно. [33] Фотоны высокой энергии, поглощаемые флуорофорами и образцом, испускаются на более длинных волнах, пропорциональных стоксову сдвигу . [34] Однако клеточные органеллы могут быть повреждены, когда энергия фотонов вызывает химические и молекулярные изменения, а не повторно излучается. [35] Считается, что основным виновником светоиндуцированной токсичности, испытываемой живыми клетками, являются свободные радикалы, образующиеся в результате возбуждения флуоресцентных молекул. [32] Эти свободные радикалы обладают высокой реакционной способностью и вызывают разрушение клеточных компонентов, что может привести к нефизиологическому поведению.

Одним из методов минимизации фотоповреждения является снижение концентрации кислорода в образце, чтобы избежать образования активных форм кислорода . [36] Однако этот метод не всегда возможен при визуализации живых клеток и может потребовать дополнительного вмешательства. Еще одним методом снижения воздействия свободных радикалов в образце является использование реагентов, препятствующих выцветанию. К сожалению, большинство коммерческих реагентов, препятствующих выцветанию, нельзя использовать для визуализации живых клеток из-за их токсичности. [37] Вместо этого можно использовать естественные поглотители свободных радикалов, такие как витамин С или витамин Е, без существенного изменения физиологического поведения в более коротких временных масштабах. [38] Недавно была разработана и коммерциализирована технология визуализации живых клеток без фототоксичности. Голотомографическая микроскопия позволяет избежать фототоксичности благодаря лазеру малой мощности (класс лазера 1: 0,2 мВт/мм 2 ). [4] [5] [39]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Бейкер М. (август 2010 г.). «Клеточная визуализация: долгий и внимательный взгляд». Природа . 466 (7310): 1137–1140. Бибкод : 2010Natur.466.1137B. дои : 10.1038/4661137а . PMID  20740018. S2CID  205056946.
  2. ^ Ландекер Х (октябрь 2009 г.). «Видеть вещи: от микрокинематографии до визуализации живых клеток». Природные методы . 6 (10): 707–709. дои : 10.1038/nmeth1009-707. PMID  19953685. S2CID  6521488.
  3. ^ Джайсвал Дж.К., Голдман Э.Р., Маттусси Х., Саймон С.М. (октябрь 2004 г.). «Использование квантовых точек для визуализации живых клеток». Природные методы . 1 (1): 73–78. дои : 10.1038/nmeth1004-73. PMID  16138413. S2CID  13339279.
  4. ^ abc Полларо, Л.; Эквис, С.; Далла Пьяцца, Б.; Котт, Ю. (2016). «3D-наноскопия живых клеток без пятен». Оптик и Фотоник . 11 : 38–42. дои : 10.1002/opph.201600008.
  5. ^ аб Полларо, Л.; Далла Пьяцца, Б.; Котт, Ю. (2015). «Цифровое окрашивание: микроскопия живых клеток без инвазивных химикатов» (PDF) . Микроскопия сегодня . 23 (4): 12–17. дои : 10.1017/S1551929515000590. S2CID  135982205.
  6. ^ Петролл, WM; Шут, СП; Кавана, HD (май 1994 г.). «Конфокальная визуализация in vivo: общие принципы и применение». Сканирование . 16 (3): 131–149. ISSN  0161-0457. ПМИД  8038913.
  7. ^ Мейеринг, Эрик; Дзюбачик Олег; Смаль, Игорь (1 января 2012 г.). «Методы отслеживания клеток и частиц». Визуализация и спектроскопический анализ живых клеток - оптические и спектроскопические методы. Методы энзимологии. Том. 504. стр. 183–200. дои : 10.1016/B978-0-12-391857-4.00009-4. ISBN 9780123918574. ISSN  0076-6879. PMID  22264535. Архивировано из оригинала 5 мая 2022 г. Проверено 2 декабря 2019 г.
  8. ^ Аллан, Виктория Дж.; Стивенс, Дэвид Дж. (4 апреля 2003 г.). «Методы световой микроскопии для визуализации живых клеток». Наука . 300 (5616): 82–86. Бибкод : 2003Sci...300...82S. CiteSeerX 10.1.1.702.4732 . дои : 10.1126/science.1082160. ISSN  1095-9203. PMID  12677057. S2CID  33199613. 
  9. ↑ Танец, Эмбер (27 марта 2018 г.). «Визуализация живых клеток: глубже, быстрее, шире». Наука . АААС . Проверено 17 декабря 2018 г.
  10. ^ Мишель К. «Исторический замедленный фильм доктора Курта Мишеля, Carl Zeiss Jena (ок. 1943)» . Библиотека микроскопии Цейсса.
  11. ^ Берджесс М (15 октября 2003 г.). «Празднование 50-летия создания изображений живых клеток» (PDF) . Carl Zeiss UK и Королевское микроскопическое общество . Лондон: Биохимическое общество.
  12. ^ Гундлах Х. «50 лет назад: Фриц Цернике (1888-1966) получил Нобелевскую премию по физике за разработку метода фазового контраста» (PDF) (пресс-релиз). Карл Цейсс АГ. Архивировано из оригинала (PDF) 22 марта 2014 г.
  13. ^ «Нобелевская премия по физике 1953 года». Нобель Медиа АБ.
  14. ^ фон Дассов Г., Вербрюгге К.Дж., Миллер А.Л., Сидер-младший, Бемент В.М. «Деление клеток эмбриона пурпурного ежа». The Cell — библиотека изображений.
  15. ^ Стокерт Дж. К., Бласкес-Кастро А (2017). Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни. Издательство Bentham Science. ISBN 978-1-68108-519-7. Проверено 24 декабря 2017 г.
  16. ^ Стивенс DJ, Аллан VJ (апрель 2003 г.). «Методы световой микроскопии для визуализации живых клеток». Наука . 300 (5616): 82–86. Бибкод : 2003Sci...300...82S. CiteSeerX 10.1.1.702.4732 . дои : 10.1126/science.1082160. PMID  12677057. S2CID  33199613. 
  17. ^ Ге Дж., Вуд Д.К., Вайнгейст Д.М., Прасонгтанакидж С., Навасумрит П., Ручирават М., Энгельвард Б.П. (июнь 2013 г.). «Стандартная флуоресцентная визуализация живых клеток очень генотоксична». Цитометрия. Часть А. 83 (6): 552–560. doi : 10.1002/cyto.a.22291. ПМЦ 3677558 . ПМИД  23650257. 
  18. ^ Велицкий П., Мигель Э., Михальска Дж.М., Людчик Дж., Вэй Д., Лин З., Уотсон Дж.Ф., Троидл Дж., Бейер Дж., Бен-Саймон Ю., Соммер С., Яр В., Ченамери А., Бройххаген Дж., Грант С., Йонас П. , Новарино Г., Пфистер Х., Бикель Б., Данцл Дж.Г. (июль 2023 г.). «Плотная 4D-наномасштабная реконструкция живой ткани мозга». Природные методы . 20 (8): 1256–1265. дои : 10.1038/s41592-023-01936-6 . ПМЦ 10406607 . ПМИД  37429995. 
  19. ^ Янике Б. «Видео цифровой голографической микроскопии, показывающее деление немеченых клеток рака молочной железы JIMT-1». The Cell — библиотека изображений.
  20. ^ Парк Ю, Деперсинж С, Попеску, Г (2018). «Количественная фазовая визуализация в биомедицине». Природная фотоника . 12 (10): 578–589. Бибкод : 2018NaPho..12..578P. дои : 10.1038/s41566-018-0253-x. PMID  26648557. S2CID  126144855.
  21. ^ Куш Э, Бевилаква Ф, Деперсинж С (1999). «Цифровая голография для количественной фазово-контрастной визуализации». Оптические письма . 24 (5): 291–293. Бибкод : 1999OptL...24..291C. дои : 10.1364/OL.24.000291. PMID  18071483. S2CID  38085266.
  22. ^ Розен Дж., Брукер Дж. (2008). «Несканирующая неподвижная флуоресцентная трехмерная голографическая микроскопия». Природная фотоника . 2 (3): 190–195. Бибкод : 2008NaPho...2..190R. дои : 10.1038/nphoton.2007.300. S2CID  17818065.
  23. ^ Воншик С. , Фанг-Йен С., Бадизадеган К., О С., Лю Н., Дасари Р., Фельд М. (2007). «Томографическая фазовая микроскопия». Природные методы . 4 (9): 717–719. дои : 10.1038/nmeth1078. PMID  17694065. S2CID  205418034.
  24. ^ ab Котт Ю, Той Ф, Журден П, Павильон Н, Босс Д, Маджистретти П, Марке П, Деперсинж С (2013). «Безмаркерная фазовая наноскопия». Природная фотоника . 7 (2): 113–117. Бибкод : 2013NaPho...7..113C. дои : 10.1038/nphoton.2012.329. S2CID  16407188.
  25. ^ Дженсен EC (январь 2013 г.). «Обзор визуализации живых клеток: требования и используемые методы». Анатомическая запись . 296 (1): 1–8. дои : 10.1002/ar.22554 . PMID  22907880. S2CID  35790454.
  26. ^ Уотерс Дж.К. (2013). «Флуоресцентная визуализация живых клеток». Цифровая микроскопия . Методы клеточной биологии. Том. 114. С. 125–150. дои : 10.1016/B978-0-12-407761-4.00006-3. ISBN 9780124077614. ПМИД  23931505.
  27. ^ abcd Хиббс AR (2004). Конфокальная микроскопия для биологов . Нью-Йорк: Издательство Kluwer Academic/Plenum. ISBN 978-0306484681. OCLC  54424872.
  28. ^ Мэнсфилд С.М., Кино GS (10 декабря 1990 г.). «Твердый иммерсионный микроскоп». Письма по прикладной физике . 57 (24): 2615–2616. Бибкод : 1990АпФЛ..57.2615М. дои : 10.1063/1.103828.
  29. ^ Келлер Х.Э. (2006), «Объективные линзы для конфокальной микроскопии», Справочник по биологической конфокальной микроскопии , Springer US, стр. 145–161, doi : 10.1007/978-0-387-45524-2_7, ISBN 9780387259215, S2CID  34412257
  30. ^ Амос, ВБ; Уайт, Дж. Г. (1 сентября 2003 г.). «Как конфокальный лазерный сканирующий микроскоп вошел в биологические исследования». Биология клетки . 95 (6): 335–342. дои : 10.1016/S0248-4900(03)00078-9 . PMID  14519550. S2CID  34919506.
  31. ^ Андерсон Г.П., Неруркар, Н.Л. (20 декабря 2002 г.). «Улучшенные флюороиммуноанализы с использованием красителя Alexa Fluor 647 и оптоволоконного биосенсора RAPTOR 7». Журнал иммунологических методов . 271 (1–2): 17–24. дои : 10.1016/S0022-1759(02)00327-7. ISSN  0022-1759. ПМИД  12445725.
  32. ^ ab Frigault MM, Lacoste J, Swift JL, Brown CM (март 2009 г.). «Микроскопия живых клеток - советы и инструменты». Журнал клеточной науки . 122 (Часть 6): 753–767. дои : 10.1242/jcs.033837 . ПМИД  19261845.
  33. ^ Магидсон В, Ходжаков А (2013). «Обход фотоповреждения в микроскопии живых клеток». Цифровая микроскопия . Методы клеточной биологии. Том. 114. С. 545–560. дои : 10.1016/B978-0-12-407761-4.00023-3. ISBN 9780124077614. ПМЦ  3843244 . ПМИД  23931522.
  34. ^ Рост Ф.В. (1992–1995). Флуоресцентная микроскопия . Кембридж: Издательство Кембриджского университета. ISBN 978-0521236416. ОСЛК  23766227.
  35. ^ Лайссу П.П., Альгамди Р.А., Томанчак П., Рейно Э.Г., Шрофф Х. (июнь 2017 г.). «Оценка фототоксичности с помощью живой флуоресцентной визуализации». Природные методы . 14 (7): 657–661. дои : 10.1038/nmeth.4344. hdl : 21.11116/0000-0002-8B80-0 . PMID  28661494. S2CID  6844352.
  36. ^ Эттингер А, Виттманн Т (2014). «Флуоресцентная визуализация живых клеток». Количественная визуализация в клеточной биологии . Методы клеточной биологии. Том. 123. стр. 77–94. дои : 10.1016/B978-0-12-420138-5.00005-7. ISBN 9780124201385. ПМЦ  4198327 . ПМИД  24974023.
  37. ^ Поли Дж.Б. (2006). Справочник по биологической конфокальной микроскопии (3-е изд.). Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Спрингер. ISBN 9780387455242. ОСЛК  663880901.
  38. ^ Вату А, Метуссин Н, Ясин Х.М., Усман А (2018). «Общая антиоксидантная способность и флуоресцентная визуализация листьев отдельных растений, обычно потребляемых в Брунее-Даруссаламе». Материалы конференции AIP . 1933 (1): 020001. Бибкод : 2018AIPC.1933b0001W. дои : 10.1063/1.5023935 .
  39. ^ Сандос, Патрик А.; Трамбле, Кристофер; Эквис, Себастьян; Поп, Сорин; Полларо, Лиза; Котте, Янн; ван дер Гут, Ф. Гису; Фрешен, Матье (4 сентября 2018 г.). «3D-анализ органелл в живых клетках без меток по показателю преломления показывает премитотическое вращение органелл в стволовых клетках млекопитающих». bioRxiv 10.1101/407239 . 

Внешние ссылки