Полиовирус , возбудитель полиомиелита (также известного как полиомиелит), является серотипом вида Enterovirus C семейства Picornaviridae . [1] Существует три серотипа полиовируса, пронумерованные 1, 2 и 3.
Полиовирус состоит из генома РНК и белкового капсида . Геном представляет собой одноцепочечный геном РНК с положительным смыслом (+ssRNA), длина которого составляет около 7500 нуклеотидов . [2] Вирусная частица имеет диаметр около 30 нм и икосаэдрическую симметрию . Из-за своего короткого генома и простого состава — только нить РНК и безоболочечная икосаэдрическая белковая оболочка, инкапсулирующая ее, — полиовирус широко рассматривается как простейший значимый вирус. [3]
Полиовирус является одним из наиболее хорошо изученных вирусов и стал полезной модельной системой для понимания биологии РНК-вирусов .
Полиовирус заражает клетки человека, связываясь с иммуноглобулин -подобным рецептором CD155 (также известным как рецептор полиовируса или PVR) [5] [6] на поверхности клетки. [7] Взаимодействие полиовируса и CD155 способствует необратимому конформационному изменению вирусной частицы, необходимому для проникновения вируса. [8] [9] После прикрепления к мембране клетки- хозяина считалось, что проникновение вирусной нуклеиновой кислоты происходит одним из двух способов: через образование поры в плазматической мембране, через которую РНК затем «впрыскивается» в цитоплазму клетки-хозяина , или через поглощение вируса посредством опосредованного рецептором эндоцитоза . [10] Недавние экспериментальные данные подтверждают последнюю гипотезу и предполагают, что полиовирус связывается с CD155 и поглощается посредством эндоцитоза. Сразу после интернализации частицы вирусная РНК высвобождается. [11]
Полиовирус — это вирус РНК с положительной цепью . Таким образом, геном, заключенный в вирусной частице, может использоваться в качестве информационной РНК и немедленно транслироваться клеткой-хозяином. При проникновении вирус захватывает трансляционный аппарат клетки, вызывая ингибирование синтеза клеточного белка в пользу производства вирусспецифического белка. [12] В отличие от мРНК клетки-хозяина, 5'-конец РНК полиовируса чрезвычайно длинный — более 700 нуклеотидов — и высокоструктурированный. Этот регион вирусного генома называется внутренним сайтом входа рибосомы (IRES). Этот регион состоит из множества вторичных структур и 3 или 4 доменов. Домен 3 — это самосворачивающийся элемент РНК, который содержит консервативные структурные мотивы в различных стабильных петлях стебля, связанных двумя четырехсторонними соединениями. Поскольку IRES состоит из множества доменов, эти домены сами состоят из множества петель, которые способствуют модифицированной трансляции без 5'-концевой крышки путем захвата рибосом. Взаимодействующая петля домена 3 известна как тетрапетля GNRA. Остатки аденозинов A180 и A181 в тетрапетле GUAA образуют водородные связи посредством неканонических взаимодействий пар оснований с парами оснований рецепторов C230/G242 и G231/C241 соответственно. [13] Генетические мутации в этой области предотвращают продукцию вирусного белка. [14] [15] [16] Первый обнаруженный IRES был обнаружен в РНК полиовируса. [17]
Полиовирусная мРНК транслируется как один длинный полипептид . Затем этот полипептид авторасщепляется внутренними протеазами примерно на 10 отдельных вирусных белков. Не все расщепления происходят с одинаковой эффективностью. Поэтому количество белков, продуцируемых расщеплением полипептида, варьируется: например, 3D pol продуцируется в меньших количествах, чем количество капсидных белков, VP1–4. [18] : 165 [19] Эти отдельные вирусные белки: [3] [20]
После трансляции, транскрипции и репликации генома, которые включают один процесс, реализуется синтез (+)РНК. Для репликации инфицирующей (+)РНК необходимо транскрибировать несколько копий (−)РНК, которые затем используются в качестве шаблонов для синтеза (+)РНК. Репликативные промежуточные продукты (RI), которые представляют собой ассоциацию молекул РНК, состоящую из шаблонной РНК и нескольких растущих РНК различной длины, наблюдаются как в репликационных комплексах для (−)РНК, так и в (+)РНК. Для синтеза каждой отрицательной и положительной цепи РНК белок VPg в полиовирусе работает как праймер. РНК-зависимая РНК-полимераза полиовируса добавляет два нуклеотида урацила (UU) к белку VPg, используя поли(A)-хвост на 3′-конце генома +ssRNA в качестве шаблона для синтеза отрицательной цепи антигеномной РНК. Для инициирования этого синтеза −ssRNA необходим тирозиновый гидроксил VPg. Но для инициирования синтеза положительной цепи РНК необходимо CRE-зависимое уридилирование VPg. Это означает, что VPg снова используется в качестве праймера, однако на этот раз он добавляет два уридинтрифосфата, используя цис-действующий репликационный элемент (CRE) в качестве шаблона. [22] [23]
CRE полиовируса идентифицируется как недостигнутый спаренный стебель и конечная петля, состоящая из 61 нт. CRE обнаружен у энтеровирусов. Это высокосохраняемый вторичный структурный элемент РНК, залегающий в области генома, кодирующей полипротеин. Комплекс может быть перемещен в 5'-область генома, которая не имеет кодирующей активности, на расстоянии не менее 3,7 кб от исходного местоположения. Этот процесс может происходить без отрицательного влияния на активность. Копии CRE не оказывают отрицательного влияния на репликацию. Процесс уридилирования VPg, который происходит в CRE, требует присутствия 3CD pro , который является РНК-связывающим белком. Он напрямую и специфически присоединяется к CRE. Благодаря его присутствию VPg может правильно связывать CRE, и первичное производство протекает без проблем. [24]
Некоторые из молекул (+) РНК используются в качестве матриц для дальнейшего синтеза (−) РНК, некоторые функционируют как мРНК, а некоторые предназначены стать геномами потомственных вирионов. [18]
В сборке новых вирусных частиц (т.е. упаковке генома потомства в прокапсид, который может выживать вне клетки-хозяина), включая, соответственно: [18] : 161, 165
Полностью собранный полиовирус покидает пределы своей клетки-хозяина путем лизиса [25] через 4–6 часов после начала инфекции в культивируемых клетках млекопитающих. [26] Механизм высвобождения вируса из клетки неясен, [2] но каждая умирающая клетка может высвобождать до 10 000 полиовирионов . [ 26]
Дрейк продемонстрировал, что полиовирус способен подвергаться множественной реактивации. [27] То есть, когда полиовирусы были облучены УФ-светом и подверглись множественным заражениям клеток-хозяев, жизнеспособное потомство могло быть сформировано даже при дозах УФ-излучения, которые инактивировали вирус при единичных заражениях. Полиовирус может подвергаться генетической рекомбинации , когда в одной и той же клетке-хозяине присутствуют по крайней мере два вирусных генома . Киркегор и Балтимор [28] представили доказательства того, что РНК-зависимая РНК-полимераза (RdRP) катализирует рекомбинацию с помощью механизма выбора копии, в котором RdRP переключается между шаблонами (+)ssRNA во время синтеза отрицательной цепи. Рекомбинация в РНК-вирусах, по-видимому, является адаптивным механизмом для восстановления повреждений генома. [29] [30]
Полиовирус структурно похож на другие энтеровирусы человека ( вирусы Коксаки , эховирусы и риновирусы ), которые также используют иммуноглобулинподобные молекулы для распознавания и проникновения в клетки хозяина. [6] Филогенетический анализ последовательностей РНК и белков полиовируса предполагает, что он мог эволюционировать от предка вируса Коксаки А C-кластера через мутацию в капсиде. [31] Отличительное видообразование полиовируса, вероятно, произошло в результате изменения специфичности клеточного рецептора с межклеточной адгезионной молекулы-1 (ICAM-1) (используемой вирусами Коксаки А C-кластера) на CD155 , что привело к изменению патогенности и позволило вирусу инфицировать нервную ткань.
Скорость мутации в вирусе относительно высока даже для РНК-вируса, с синонимической скоростью замены 1,0 × 10−2 замен /сайт/год и несинонимической скоростью замены 3,0 × 10−4 замен /сайт/год. [32] Распределение оснований в геноме не является случайным; аденозин встречается реже, чем ожидалось, на 5'-конце и чаще на 3'-конце. [33] Использование кодонов не является случайным; кодоны, заканчивающиеся на аденозин, предпочтительны, а те, которые заканчиваются на цитозин или гуанин , избегаются. Использование кодонов различается между тремя генотипами и, по-видимому, обусловлено мутацией, а не отбором. [34]
Три серотипа полиовируса, PV-1, PV-2 и PV-3, имеют немного отличающийся капсидный белок. Капсидные белки определяют клеточную рецепторную специфичность и антигенность вируса. PV-1 является наиболее распространенной формой, встречающейся в природе, но все три формы чрезвычайно заразны . [35] По состоянию на март 2020 года дикий PV-1 в значительной степени локализован в регионах Пакистана и Афганистана. Сертификация искоренения местной передачи дикого PV-2 произошла в сентябре 2015 года после последнего обнаружения в 1999 году, [36] и в октябре 2019 года для дикого PV-3 после последнего обнаружения в 2012 году. [37] Однако циркулирующий полиовирус вакцинного происхождения (вариантный полиовирус, cVDPV) всех трех серотипов продолжает циркулировать и вызывать паралич, будучи обнаруженным в 32 странах в 2023 году. [38]
Для приготовления вакцин против полиомиелита используются определенные штаммы каждого серотипа . Неактивная вакцина против полиомиелита готовится путем инактивации формалином трех диких вирулентных эталонных штаммов: Mahoney или Brunenders (PV-1), MEF-1/Lansing (PV-2) и Saukett/Leon (PV-3). Оральная вакцина против полиомиелита содержит живые аттенуированные (ослабленные) штаммы трех серотипов полиовируса. Пассирование штаммов вируса в эпителиальных клетках почек обезьяны вносит мутации в вирусный IRES и препятствует (или ослабляет) способность вируса инфицировать нервную ткань. [26]
Полиовирусы ранее классифицировались как отдельный вид, принадлежащий к роду Enterovirus в семействе Picornaviridae . В 2008 году полиовирус перестал быть признан видом, и три серотипа были отнесены к виду Human enterovirus C (позже переименованному в Enterovirus C ) в роде Enterovirus в семействе Picornaviridae . Типовой вид рода Enterovirus был изменен с Poliovirus на (Human) Enterovirus C. [ 39]
Основным фактором, определяющим инфицирование любого вируса, является его способность проникать в клетку и производить дополнительные инфекционные частицы. Считается, что наличие CD155 определяет животных и ткани, которые могут быть инфицированы полиовирусом. CD155 обнаруживается (вне лабораторий) только на клетках людей, высших приматов и обезьян Старого Света . Однако полиовирус является строго человеческим патогеном и естественным образом не заражает никакие другие виды (хотя шимпанзе и обезьяны Старого Света могут быть экспериментально инфицированы). [40]
Ген CD155 , по-видимому, подвергся положительному отбору . [41] Белок имеет несколько доменов, из которых домен D1 содержит сайт связывания полиовируса. В этом домене 37 аминокислот отвечают за связывание вируса.
Полиовирус — это энтеровирус . Заражение происходит фекально-оральным путем , то есть человек проглатывает вирус, а репликация вируса происходит в желудочно-кишечном тракте . [42] Вирус выделяется с фекалиями инфицированных людей. В 95% случаев наблюдается только первичное, временное присутствие виремии (вирус в кровотоке), а инфекция полиовируса протекает бессимптомно . Примерно в 5% случаев вирус распространяется и размножается в других местах, таких как бурый жир , ретикулоэндотелиальная ткань и мышцы . Устойчивая репликация вируса вызывает вторичную виремию и приводит к развитию незначительных симптомов, таких как лихорадка, головная боль и боль в горле. [43] Паралитический полиомиелит встречается менее чем в 1% случаев заражения полиовирусом. Паралитическое заболевание возникает, когда вирус проникает в центральную нервную систему (ЦНС) и размножается в двигательных нейронах спинного мозга , ствола мозга или двигательной коры , что приводит к избирательному разрушению двигательных нейронов, что приводит к временному или постоянному параличу . Это очень редкое явление у младенцев, у которых все еще есть антитела к полиовирусу, полученные от их матерей. [44] В редких случаях паралитический полиомиелит приводит к остановке дыхания и смерти. В случаях паралитического заболевания мышечные боли и спазмы часто наблюдаются до наступления слабости и паралича. Паралич обычно сохраняется от нескольких дней до нескольких недель до выздоровления. [45]
Во многих отношениях неврологическая фаза инфекции считается случайным отклонением от нормальной желудочно-кишечной инфекции. [10] Механизмы, посредством которых полиовирус проникает в ЦНС, плохо изучены. Для объяснения его проникновения были предложены три не взаимоисключающие гипотезы. Все теории требуют первичной виремии. Первая гипотеза предсказывает, что вирионы попадают непосредственно из крови в центральную нервную систему, пересекая гематоэнцефалический барьер независимо от CD155. [46] Вторая гипотеза предполагает, что вирионы транспортируются из периферических тканей, которые были омыты виремической кровью, например, мышечной ткани, в спинной мозг по нервным путям посредством ретроградного аксонального транспорта . [47] [48] [49] Третья гипотеза заключается в том, что вирус импортируется в ЦНС через инфицированные моноциты или макрофаги . [4]
Полиомиелит — это заболевание центральной нервной системы. Однако считается, что CD155 присутствует на поверхности большинства или всех клеток человека. Поэтому экспрессия рецептора не объясняет, почему полиовирус преимущественно заражает определенные ткани. Это предполагает, что тропизм тканей определяется после клеточной инфекции. Недавние исследования показали, что реакция интерферона I типа (в частности, интерферона альфа и бета) является важным фактором, определяющим, какие типы клеток поддерживают репликацию полиовируса. [50] У мышей, экспрессирующих CD155 (с помощью генной инженерии), но лишенных рецептора интерферона I типа, полиовирус не только реплицируется в расширенном репертуаре типов тканей, но эти мыши также могут быть инфицированы вирусом перорально. [51]
Полиовирус имеет два ключевых механизма, позволяющих ему ускользать от иммунной системы . Во-первых, он может выживать в условиях высокой кислотности желудка, что позволяет проглоченным вирусам заражать хозяина и распространяться по всему организму через лимфатическую систему . [3] Во-вторых, поскольку он может очень быстро размножаться, вирус подавляет органы хозяина до того, как успеет сформироваться иммунный ответ. [52] Если давать подробности на этапе прикрепления, то полиовирус с каньонами на поверхности вириона имеет места прикрепления вируса, расположенные в карманах у оснований каньонов. Каньоны слишком узкие для доступа антител , поэтому места прикрепления вируса защищены от иммунного надзора хозяина, в то время как остальная часть поверхности вириона может мутировать, чтобы избежать иммунного ответа хозяина. [53]
У лиц, подвергшихся воздействию полиовируса, либо через инфекцию, либо через иммунизацию вакциной против полиомиелита , вырабатывается иммунитет . У иммунных лиц антитела против полиовируса присутствуют в миндаликах и желудочно-кишечном тракте (в частности, антитела IgA ) и способны блокировать репликацию полиовируса; антитела IgG и IgM против полиовируса могут предотвратить распространение вируса на двигательные нейроны центральной нервной системы. [26] Инфекция одним серотипом полиовируса не обеспечивает иммунитета против других серотипов; однако повторные атаки у одного и того же человека крайне редки. [54]
Ликвидация полиомиелита , цель постоянного глобального прекращения циркуляции полиовируса и, следовательно, ликвидации полиомиелита ( полиомиелита), который он вызывает, является целью многонациональных усилий в области общественного здравоохранения , начатых в 1988 году под руководством Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), Детского фонда ООН (ЮНИСЕФ) и Фонда Ротари . [55] Эти организации, наряду с Центрами США по контролю и профилактике заболеваний (CDC) и Фондом Гейтса , возглавили кампанию через Глобальную инициативу по ликвидации полиомиелита (GPEI). Успешное искоренение инфекционных заболеваний было достигнуто дважды ранее: с оспой у людей [56] и чумой крупного рогатого скота у жвачных животных. [57]
Предотвращение распространения заболевания достигается путем вакцинации . Существует два вида вакцины против полиомиелита — оральная вакцина против полиомиелита (ОПВ), которая использует ослабленный полиовирус , и инактивированная вакцина против полиомиелита (ИПВ), которая вводится инъекционно. ОПВ менее дорогая и простая в применении, и может распространять иммунитет за пределы вакцинированного человека, создавая контактный иммунитет . Это была преобладающая используемая вакцина. Однако в условиях длительной циркуляции вакцинного вируса среди недостаточно вакцинированных групп населения мутации могут реактивировать вирус, чтобы произвести штамм, вызывающий полиомиелит, в то время как ОПВ также может, в редких случаях, вызывать полиомиелит или персистирующую бессимптомную инфекцию у вакцинированных лиц, особенно у тех, кто имеет иммунодефицит . ИПВ, будучи инактивированной, не несет этих рисков, но и не вызывает контактного иммунитета. ИПВ более дорогая, и логистика ее доставки более сложна.
Нигерия является последней страной, официально прекратившей эндемическую передачу дикого полиовируса, последний случай был зарегистрирован в 2016 году. [58] Из трех штаммов WPV последний зарегистрированный случай, вызванный диким вирусом типа 2 (WPV2), был в 1999 году, а WPV2 был объявлен искорененным в 2015 году. Тип 3 (WPV3) в последний раз вызывал полиомиелит в 2012 году и был объявлен искорененным в 2019 году. [59] Все случаи дикого вируса с этой даты были вызваны типом 1 (WPV1). [60]
По состоянию на август 2024 года [обновлять]Афганистан и Пакистан являются единственными двумя странами, где это заболевание все еще классифицируется как эндемичное. [61] [62] Недавние случаи полиомиелита возникают из двух источников: исходного « дикого » полиовируса (WPV) и гораздо более распространенных мутировавших штаммов пероральной вакцины, известных как циркулирующий вакцинно-производный полиовирус (cVDPV) или вариантный полиовирус. Вакцины против каждого из трех диких штаммов полиомиелита привели к появлению штаммов cVDPV, причем cVDPV2 является наиболее заметным. cVDPV вызвал 524 подтвержденных случая паралитического полиомиелита во всем мире в 2023 году и был обнаружен в 32 странах. [60]Хотя люди являются единственными известными естественными хозяевами полиовируса, обезьяны могут быть экспериментально инфицированы, и они долгое время использовались для изучения полиовируса. В 1990–91 годах две лаборатории разработали небольшую модель полиомиелита на животных. Мыши были сконструированы для экспрессии человеческого рецептора к полиовирусу (hPVR). [63] [64]
В отличие от обычных мышей, мыши с трансгенным рецептором полиовируса (TgPVR) восприимчивы к полиовирусу, вводимому внутривенно или внутримышечно , а также при инъекции непосредственно в спинной или головной мозг . [65] После заражения мыши TgPVR демонстрируют признаки паралича, которые напоминают признаки полиомиелита у людей и обезьян, а центральная нервная система парализованных мышей гистоцитохимически похожа на центральную нервную систему людей и обезьян. Эта мышиная модель заражения полиовирусом человека оказалась бесценным инструментом для понимания биологии и патогенности полиовируса. [66]
Хорошо изучены три различных типа мышей TgPVR: [67]
Разработка мыши TgPVR оказала глубокое влияние на производство оральной полиовирусной вакцины (ОПВ). Ранее мониторинг безопасности ОПВ приходилось проводить с использованием обезьян, поскольку только приматы восприимчивы к вирусу. В 1999 году Всемирная организация здравоохранения одобрила использование мыши TgPVR в качестве альтернативного метода оценки эффективности вакцины против полиовируса типа 3. В 2000 году модель на мышах была одобрена для испытаний вакцин против полиовируса типа 1 и типа 2. [69]
Модификация полиовируса, называемая PVSRIPO , была испытана в ранних клинических испытаниях в качестве возможного лечения рака. [70] По состоянию на сентябрь 2022 года [обновлять], ряд клинических испытаний продолжается. [71] [72]
Недостатком ослабленного вируса, используемого в оральной полиовакцине Sabin, является его потенциальная способность вызывать паралитический полиомиелит, связанный с вакциной (VAPP), примерно у одного человека на каждые 2,7 миллиона введенных доз. [73] Кроме того, живой вирус может также циркулировать среди недостаточно вакцинированных групп населения (циркулирующий полиовирус вакцинного происхождения, cVDPV) и со временем может вернуться в нейровирулентную форму, вызывающую паралитический полиомиелит. [73] Исследователи разработали штамм вакцины полиовируса типа 2, который генетически более стабилен и с меньшей вероятностью вновь обретает вирулентность, чем исходный штамм Sabin2, с тремя ключевыми генетическими модификациями. [74] Вакцина, полученная из этого штамма, нового орального полиовируса типа 2 (nOPV2), получила экстренную лицензию в 2021 году, а затем полную лицензию в декабре 2023 года. [75] Генетически стабилизированные вакцины, нацеленные на полиовирус типов 1 и 3, находятся в стадии разработки с намерением, что они в конечном итоге полностью заменят вакцины Сэбина. [76]
Полиовирус был впервые выделен в 1909 году Карлом Ландштейнером и Эрвином Поппером . [35] Структура вируса была впервые выяснена в 1958 году с помощью рентгеновской дифракции группой ученых из колледжа Биркбек под руководством Розалинд Франклин , [77] [78] показав, что вирус полиомиелита имеет икосаэдрическую симметрию. [79]
В 1981 году геном полиовируса был опубликован двумя разными группами исследователей: Винсентом Раканиелло и Дэвидом Балтимором из Массачусетского технологического института [80] и Наоми Китамурой и Эккардом Уиммером из Университета Стоуни-Брук . [81]
Трехмерная структура полиовируса была определена в 1985 году Джеймсом Хоглом в Исследовательском институте Скриппса с использованием рентгеновской кристаллографии. [82]
В 1981 году Раканиелло и Балтимор использовали технологию рекомбинантной ДНК для создания первого инфекционного клона животного РНК-вируса, полиовируса. ДНК, кодирующая РНК-геном полиовируса, была введена в культивируемые клетки млекопитающих, и был получен инфекционный полиовирус. [83] Создание инфекционного клона продвинуло понимание биологии полиовируса и стало стандартной технологией, используемой для изучения многих других вирусов.
В 2002 году группа Эккарда Виммера в Университете Стоуни-Брук преуспела в синтезе полиовируса из его химического кода, создав первый в мире синтетический вирус. [84] Сначала ученые преобразовали опубликованную последовательность РНК полиовируса длиной 7741 основание в последовательность ДНК, поскольку ДНК было легче синтезировать. Короткие фрагменты этой последовательности ДНК были получены по почте и собраны. Затем полный вирусный геном был собран компанией по синтезу генов . Девятнадцать маркеров были включены в синтезированную ДНК, чтобы ее можно было отличить от естественного полиовируса. Ферменты использовались для преобразования ДНК обратно в РНК, ее естественное состояние. Другие ферменты затем использовались для перевода РНК в полипептид, производя функциональную вирусную частицу. Весь этот кропотливый процесс занял два года. Недавно созданный синтетический вирус был введен трансгенным мышам PVR, чтобы определить, способна ли синтетическая версия вызывать заболевание. Синтетический вирус был способен реплицироваться, заражать и вызывать паралич или смерть у мышей. Однако синтетическая версия оказалась в 1000–10 000 раз слабее исходного вируса, вероятно, из-за одного из добавленных маркеров. [85]