stringtranslate.com

Метод Гольджи

Пирамидальный нейрон неокортекса человека , окрашенный по методу Гольджи. Обратите внимание на апикальный дендрит, простирающийся вертикально над сомой, и многочисленные базальные дендриты, расходящиеся латерально от основания тела клетки. Фото Боба Джейкобса, Колледж Колорадо.
Рисунок Камилло Гольджи гиппокампа, окрашенного методом нитрата серебра.
Рисунок клетки Пуркинье в коре мозжечка , сделанный Сантьяго Рамон-и-Кахалем, наглядно демонстрирует возможности метода окрашивания Гольджи для выявления мелких деталей.

Метод Гольджи — это метод окрашивания серебром , который используется для визуализации нервной ткани под световым микроскопом. Метод был открыт Камилло Гольджи , итальянским врачом и ученым , который опубликовал первую фотографию, сделанную с помощью этого метода, в 1873 году. [1] Первоначально он был назван черной реакцией ( la reazione nera ) Гольджи, но стал более известен как окрашивание по Гольджи или позже, метод Гольджи.

Окрашивание по Гольджи использовал испанский нейроанатом Сантьяго Рамон-и-Кахаль (1852–1934), чтобы открыть ряд новых фактов об организации нервной системы, что вдохновило на рождение нейронной доктрины . В конечном итоге Рамон-и-Кахаль усовершенствовал технику, используя метод, который он назвал «двойной импрегнацией». Техника окрашивания Рамона-и-Кахаля, которая используется до сих пор, называется «окрашивание по Кахалю». [ необходима цитата ]

Механизм

Клетки в нервной ткани плотно упакованы, и мало информации об их структурах и взаимосвязях можно получить, если окрашивать все клетки. Кроме того, тонкие нитевидные расширения нервных клеток, включая аксон и дендриты нейронов , слишком тонкие и прозрачные, чтобы их можно было увидеть с помощью обычных методов окрашивания. Метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом в целом. Механизм, с помощью которого это происходит, до сих пор в значительной степени неизвестен. [2] Дендриты, а также сома клетки, четко окрашены в коричневый и черный цвета и могут быть прослежены по всей их длине, что позволило нейроанатомам отслеживать связи между нейронами и сделать видимой сложную сетевую структуру многих частей головного и спинного мозга .

Окрашивание по Гольджи достигается путем пропитки нервной ткани, фиксированной альдегидом, дихроматом калия и нитратом серебра . Окрашенные таким образом клетки заполняются микрокристаллизацией хромата серебра .

Техника

Согласно SynapseWeb, [3] это рецепт окрашивания по методу Гольджи:

  1. Погрузите блок (приблизительно 10x5 мм) зафиксированной формальдегидом (или пропитанной параформальдегидом и глутаральдегидом ) мозговой ткани в 2% водный раствор дихромата калия на 2 дня.
  2. Быстро высушите блок фильтровальной бумагой .
  3. Погрузите блок в 2%-ный водный раствор нитрата серебра еще на 2 дня.
  4. Срезы толщиной примерно 20–100  мкм .
  5. Быстро обезвоживают в этаноле , очищают и заключают (например, в Depex или Enthalan).

С тех пор эта техника была усовершенствована, чтобы заменить серебряный осадок золотом, погружая образец в хлорид золота , а затем в щавелевую кислоту , с последующим удалением серебра тиосульфатом натрия . Это сохраняет большую степень тонкой структуры с ультраструктурными деталями, отмеченными мелкими частицами золота. [4]

Цитировать

Рамон-и-Кахаль сказал о методе Гольджи:

Я выразил удивление, которое я испытал, увидев собственными глазами замечательные разоблачительные возможности реакции хрома с серебром и отсутствие какого-либо волнения в научном мире, вызванного ее открытием.
Recuerdos de mi vida, Vol. 2, «История моего научного труда» . Мадрид: Моя, 1917, с. 76.

Ссылки

  1. ^ Фингер, Стэнли (1994). Истоки нейронауки: история исследований функций мозга . Oxford University Press. стр. 45. ISBN 9780195146943OCLC  27151391. В 1873 году Гольджи опубликовал первую краткую, но «адекватную» картину la reazione nera (черной реакции), на которой была показана вся нервная клетка, включая ее тело, аксон и разветвляющиеся дендриты.
  2. ^ Николс, Дж. Г. (2001). От нейрона к мозгу . Sinauer Associates. С. 5. ISBN 0878934391.
  3. ^ Spacek, J., Fiala, J. (2002-06-28). "Визуализация дендритных шипиков". SynapseWeb. Архивировано из оригинала 2010-06-26 . Получено 2010-06-17 .{{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  4. ^ «Главная – Springer».[ мертвая ссылка ]

Внешние ссылки