Полный анализ крови ( CBC ), также известный как общий анализ крови ( FBC ), представляет собой набор медицинских лабораторных тестов, которые предоставляют информацию о клетках в крови человека . CBC показывает количество лейкоцитов , эритроцитов и тромбоцитов , концентрацию гемоглобина и гематокрит (объемный процент эритроцитов). Также сообщаются индексы эритроцитов , которые указывают средний размер и содержание гемоглобина в эритроцитах, и может быть включена дифференциация лейкоцитов , которая подсчитывает различные типы лейкоцитов.
ОАК часто проводится как часть медицинской оценки и может использоваться для мониторинга здоровья или диагностики заболеваний. Результаты интерпретируются путем сравнения их с референтными диапазонами , которые различаются в зависимости от пола и возраста. Такие состояния, как анемия и тромбоцитопения, определяются по аномальным результатам общего анализа крови. Индексы эритроцитов могут предоставить информацию о причине анемии человека, такой как дефицит железа и дефицит витамина B12 , а результаты дифференциального анализа лейкоцитов могут помочь диагностировать вирусные , бактериальные и паразитарные инфекции и заболевания крови , такие как лейкемия . Не все результаты, выходящие за пределы референтного диапазона, требуют медицинского вмешательства.
ОАК обычно выполняется с помощью автоматизированного гематологического анализатора , который подсчитывает клетки и собирает информацию об их размере и структуре. Измеряется концентрация гемоглобина, а индексы эритроцитов рассчитываются на основе измерений эритроцитов и гемоглобина. Ручные тесты могут использоваться для независимого подтверждения аномальных результатов. Примерно 10–25% образцов требуют ручного анализа мазка крови [5] , при котором кровь окрашивается и просматривается под микроскопом, чтобы убедиться, что результаты анализатора соответствуют внешнему виду клеток, и выявить аномалии. Гематокрит можно определить вручную, центрифугируя образец и измеряя долю эритроцитов, а в лабораториях, не имеющих доступа к автоматизированным приборам, клетки крови подсчитываются под микроскопом с помощью гемоцитометра .
В 1852 году Карл Виерордт опубликовал первую процедуру для выполнения анализа крови, которая включала распределение известного объема крови на предметном стекле микроскопа и подсчет каждой клетки. Изобретение гемоцитометра в 1874 году Луи-Шарлем Малассе упростило микроскопический анализ клеток крови, а в конце 19 века Пауль Эрлих и Дмитрий Леонидович Романовский разработали методы окрашивания белых и красных кровяных клеток, которые до сих пор используются для исследования мазков крови. Автоматизированные методы измерения гемоглобина были разработаны в 1920-х годах, а Максвелл Винтроуб представил метод гематокрита Винтроуба в 1929 году, который, в свою очередь, позволил ему определить индексы красных кровяных клеток. Вехой в автоматизации подсчета клеток крови стал принцип Коултера , который был запатентован Уоллесом Х. Коултером в 1953 году. Принцип Коултера использует измерения электрического импеданса для подсчета клеток крови и определения их размеров; это технология, которая до сих пор используется во многих автоматизированных анализаторах. Дальнейшие исследования в 1970-х годах включали использование оптических измерений для подсчета и идентификации клеток, что позволило автоматизировать дифференциальный анализ лейкоцитов.
Кровь состоит из жидкой части, называемой плазмой , и клеточной части, которая содержит эритроциты , лейкоциты и тромбоциты . [примечание 1] [7] Полный анализ крови оценивает три клеточных компонента крови. Некоторые медицинские состояния, такие как анемия или тромбоцитопения , определяются выраженным увеличением или уменьшением количества клеток крови. [8] Изменения во многих системах органов могут влиять на кровь, поэтому результаты ОАК полезны для исследования широкого спектра состояний. Из-за объема информации, которую он предоставляет, полный анализ крови является одним из наиболее часто выполняемых медицинских лабораторных тестов. [9] [10] [11]
Общий анализ крови часто используется для скрининга заболеваний в рамках медицинского обследования. [12] Его также назначают, когда поставщик медицинских услуг подозревает, что у человека есть заболевание, которое влияет на клетки крови, например, инфекция , нарушение свертываемости крови или некоторые виды рака . Люди, у которых диагностированы заболевания, которые могут вызывать аномальные результаты общего анализа крови, или которые получают лечение, которое может повлиять на количество клеток крови, могут регулярно проходить общий анализ крови для контроля за своим здоровьем, [4] [12] , и тест часто проводится каждый день у людей, которые находятся в больнице. [13] Результаты могут указывать на необходимость переливания крови или тромбоцитов . [14]
Полный анализ крови имеет конкретные применения во многих медицинских специальностях . Его часто выполняют перед операцией , чтобы обнаружить анемию, убедиться, что уровень тромбоцитов достаточен, и провести скрининг на наличие инфекции, [15] [16] , а также после операции, чтобы можно было контролировать потерю крови . [12] [17] В неотложной медицине общий анализ крови используется для исследования многочисленных симптомов, таких как лихорадка , боль в животе и одышка , [18] [19] [20] а также для оценки кровотечения и травмы . [21] [22] Анализы крови тщательно контролируются у людей, проходящих химиотерапию или лучевую терапию по поводу рака, поскольку эти методы лечения подавляют выработку клеток крови в костном мозге и могут приводить к значительному снижению уровня лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина . [23] Регулярный общий анализ крови необходим людям, принимающим некоторые психиатрические препараты , такие как клозапин и карбамазепин , которые в редких случаях могут вызывать опасное для жизни снижение количества белых кровяных телец ( агранулоцитоз ). [24] [25] Поскольку анемия во время беременности может привести к ухудшению исходов для матери и ее ребенка, общий анализ крови является обычной частью дородового наблюдения ; [26] а у новорожденных общий анализ крови может потребоваться для исследования желтухи или для подсчета количества незрелых клеток в дифференциале белых кровяных телец , что может быть индикатором сепсиса . [27] [28]
Общий анализ крови является важным инструментом гематологии , которая изучает причины, прогноз, лечение и профилактику заболеваний, связанных с кровью. [29] Результаты общего анализа крови и мазка отражают функционирование кроветворной системы — органов и тканей, участвующих в производстве и развитии клеток крови, в частности костного мозга . [9] [30] Например, низкое количество всех трех типов клеток ( панцитопения ) может указывать на то, что производство клеток крови нарушается заболеванием костного мозга, а исследование костного мозга может дополнительно исследовать причину. [31] Аномальные клетки в мазке крови могут указывать на острый лейкоз или лимфому , [30] в то время как аномально высокое количество нейтрофилов или лимфоцитов в сочетании с показательными симптомами и результатами мазка крови может вызвать подозрение на миелопролиферативное заболевание или лимфопролиферативное заболевание . Исследование результатов общего анализа крови и мазка крови может помочь различить причины анемии, такие как дефицит питательных веществ , заболевания костного мозга , приобретенные гемолитические анемии и наследственные заболевания, такие как серповидноклеточная анемия и талассемия . [32] [33]
Референтные диапазоны для общего анализа крови представляют собой диапазон результатов, обнаруженных у 95% внешне здоровых людей. [примечание 2] [35] По определению, 5% результатов всегда будут выходить за пределы этого диапазона, поэтому некоторые аномальные результаты могут отражать естественные вариации, а не указывать на медицинскую проблему. [36] Это особенно вероятно, если такие результаты лишь немного выходят за пределы референтного диапазона, если они согласуются с предыдущими результатами или если нет других связанных аномалий, показанных в общем анализе крови. [37] Когда тест проводится на относительно здоровой популяции, количество клинически незначимых аномалий может превышать количество результатов, которые представляют собой заболевание. [38] По этой причине профессиональные организации в Соединенных Штатах, Великобритании и Канаде не рекомендуют проводить предоперационный общий анализ крови для операций с низким риском у лиц без соответствующих медицинских показаний. [15] [39] [40] Повторные заборы крови для гематологических исследований у госпитализированных пациентов могут способствовать развитию анемии, приобретенной в больнице , и могут привести к ненужным переливаниям. [38]
Образец собирается путем забора крови в пробирку, содержащую антикоагулянт — обычно ЭДТА — для остановки ее естественного свертывания . [41] Кровь обычно берут из вены , но когда это затруднительно, ее можно собрать из капилляров путем прокола пальца или у младенцев — путем прокола пятки . [42] [43] Тестирование обычно проводится на автоматическом анализаторе, но для исследования аномальных результатов можно использовать ручные методы, такие как исследование мазка крови или ручной тест на гематокрит. [44] Подсчет клеток и измерение гемоглобина выполняются вручную в лабораториях, не имеющих доступа к автоматизированным приборам. [45]
На борту анализатора образец перемешивается для равномерного распределения клеток, затем разбавляется и разделяется по крайней мере на два канала, один из которых используется для подсчета эритроцитов и тромбоцитов, другой для подсчета лейкоцитов и определения концентрации гемоглобина. Некоторые приборы измеряют гемоглобин в отдельном канале, а дополнительные каналы могут использоваться для дифференциального подсчета лейкоцитов, подсчета ретикулоцитов и специализированных измерений тромбоцитов. [46] [47] [48] Клетки суспендируются в потоке жидкости, и их свойства измеряются по мере их прохождения мимо датчиков с помощью метода, известного как проточная цитометрия . [примечание 3] [49] [52] Гидродинамическая фокусировка может использоваться для изоляции отдельных клеток, чтобы можно было получить более точные результаты: разбавленный образец вводится в поток жидкости под низким давлением, что заставляет клетки в образце выстраиваться в одну шеренгу посредством ламинарного потока . [53] [54]
Для измерения концентрации гемоглобина к образцу добавляется реагент-химический реагент для разрушения ( лиза ) эритроцитов в канале, отдельном от того, который используется для подсчета эритроцитов. На анализаторах, которые выполняют подсчет лейкоцитов в том же канале, что и измерение гемоглобина, это позволяет легче подсчитывать лейкоциты. [55] Гематологические анализаторы измеряют гемоглобин с помощью спектрофотометрии и основаны на линейной зависимости между поглощением света и количеством присутствующего гемоглобина. Химические вещества используются для преобразования различных форм гемоглобина, таких как оксигемоглобин и карбоксигемоглобин , в одну стабильную форму, обычно цианметгемоглобин , и для создания постоянного изменения цвета. Поглощение полученного цвета при измерении на определенной длине волны — обычно 540 нанометров — соответствует концентрации гемоглобина. [56] [57]
Датчики подсчитывают и идентифицируют клетки в образце, используя два основных принципа: электрический импеданс и светорассеяние . [58] Подсчет клеток на основе импеданса работает по принципу Коултера : клетки взвешены в жидкости, переносящей электрический ток , и, проходя через небольшое отверстие (апертуру), они вызывают уменьшение тока из-за своей плохой электропроводности . Амплитуда импульса напряжения, генерируемого при пересечении клеткой апертуры, коррелирует с количеством жидкости, вытесненной клеткой, и, следовательно, с объемом клетки, [59] [60] , в то время как общее количество импульсов коррелирует с количеством клеток в образце. Распределение объемов клеток отображается на гистограмме , и, устанавливая пороговые значения объема на основе типичных размеров каждого типа клеток, можно идентифицировать и подсчитывать различные популяции клеток. [61]
В методах рассеяния света свет от лазера или вольфрамово-галогеновой лампы направляется на поток клеток для сбора информации об их размере и структуре. Клетки рассеивают свет под разными углами, проходя через луч, что обнаруживается с помощью фотометров . [62] Прямое рассеяние, которое относится к количеству света, рассеянного вдоль оси луча, в основном вызвано дифракцией света и коррелирует с размером клетки, в то время как боковое рассеяние (свет, рассеянный под углом 90 градусов) вызвано отражением и преломлением и дает информацию о сложности клетки. [62] [63]
Методы на основе радиочастот можно использовать в сочетании с импедансом. Эти методы работают по тому же принципу измерения прерывания тока, когда клетки проходят через отверстие, но поскольку высокочастотный радиочастотный ток проникает в клетки, амплитуда результирующего импульса связана с такими факторами, как относительный размер ядра , структура ядра и количество гранул в цитоплазме . [64] [65] Маленькие эритроциты и клеточный дебрис, которые по размеру похожи на тромбоциты, могут мешать подсчету тромбоцитов, а крупные тромбоциты могут быть подсчитаны неточно, поэтому некоторые анализаторы используют дополнительные методы для измерения тромбоцитов, такие как флуоресцентное окрашивание, многоугловое рассеяние света и маркировка моноклональными антителами . [48]
Большинство анализаторов напрямую измеряют средний размер эритроцитов, который называется средним объемом клетки (MCV), и вычисляют гематокрит, умножая количество эритроцитов на MCV. Некоторые измеряют гематокрит, сравнивая общий объем эритроцитов с объемом взятой крови, и выводят MCV из гематокрита и количества эритроцитов. [66] Концентрация гемоглобина, количество эритроцитов и гематокрит используются для расчета среднего количества гемоглобина в каждом эритроците, среднего корпускулярного гемоглобина (MCH); и его концентрации, средней концентрации корпускулярного гемоглобина (MCHC). [67] Другой расчет, ширина распределения эритроцитов (RDW), выводится из стандартного отклонения среднего объема клетки и отражает изменение размера клеток. [68]
После обработки реагентами белые кровяные клетки образуют три отдельных пика, когда их объемы нанесены на гистограмму. Эти пики примерно соответствуют популяциям гранулоцитов , лимфоцитов и других мононуклеарных клеток , что позволяет проводить трехчастную дифференциальную оценку только на основе объема клеток. [69] [70] Более продвинутые анализаторы используют дополнительные методы для обеспечения пяти-семичастной дифференциальной оценки, такие как светорассеивание или радиочастотный анализ, [70] или используют красители для окрашивания определенных химических веществ внутри клеток, например, нуклеиновых кислот , которые находятся в более высоких концентрациях в незрелых клетках [71] или миелопероксидазы , фермента, обнаруженного в клетках миелоидной линии . [72] [73] Базофилы можно подсчитывать в отдельном канале, где реагент разрушает другие белые клетки и оставляет базофилы нетронутыми. Данные, собранные в результате этих измерений, анализируются и наносятся на диаграмму рассеивания , где они образуют кластеры, которые коррелируют с каждым типом белых кровяных клеток. [70] [72] Другой подход к автоматизации дифференциального подсчета — использование программного обеспечения для цифровой микроскопии, [74] которое использует искусственный интеллект для классификации лейкоцитов из микрофотографий мазка крови. Изображения клеток отображаются оператору-человеку, который может вручную повторно классифицировать клетки, если это необходимо. [75]
Большинству анализаторов требуется менее минуты, чтобы провести все тесты в полном анализе крови. [58] Поскольку анализаторы берут образцы и подсчитывают множество отдельных клеток, результаты очень точны. [76] Однако некоторые аномальные клетки могут быть идентифицированы неправильно, что требует ручного просмотра результатов прибора и идентификации другими способами аномальных клеток, которые прибор не смог классифицировать. [5] [77]
Тестирование в месте оказания помощи относится к тестам, проводимым вне лабораторных условий, например, у постели больного или в клинике. [78] [79] Этот метод тестирования быстрее и использует меньше крови, чем обычные методы, и не требует специально обученного персонала, поэтому он полезен в чрезвычайных ситуациях и в районах с ограниченным доступом к ресурсам. Обычно используемые устройства для гематологического тестирования в месте оказания помощи включают HemoCue , портативный анализатор, который использует спектрофотометрию для измерения концентрации гемоглобина в образце, и i-STAT , который выводит показания гемоглобина, оценивая концентрацию эритроцитов по проводимости крови. [79] Гемоглобин и гематокрит можно измерить на устройствах в месте оказания помощи, предназначенных для тестирования газов крови , но эти измерения иногда плохо коррелируют с измерениями, полученными с помощью стандартных методов. [78] Существуют упрощенные версии гематологических анализаторов, предназначенных для использования в клиниках, которые могут обеспечить полный анализ крови и дифференциальный анализ. [80]
Тесты можно выполнять вручную, когда автоматизированное оборудование недоступно или когда результаты анализатора указывают на необходимость дальнейшего исследования. [45] Автоматизированные результаты помечаются для ручного просмотра мазка крови в 10–25% случаев, что может быть связано с аномальными популяциями клеток, которые анализатор не может правильно подсчитать, [5] внутренними флагами, генерируемыми анализатором, которые предполагают, что результаты могут быть неточными, [81] или числовыми результатами, которые выходят за пределы установленных пороговых значений. [77] Для исследования этих проблем кровь распределяется по предметному стеклу микроскопа, окрашивается красителем Романовского и исследуется под микроскопом . [82] Оценивается внешний вид красных и белых кровяных клеток и тромбоцитов, и при наличии сообщаются качественные отклонения. [83] Изменения внешнего вида эритроцитов могут иметь существенное диагностическое значение — например, наличие серповидных клеток указывает на серповидноклеточную анемию , а большое количество фрагментированных эритроцитов ( шистоцитов ) требует срочного исследования, поскольку может указывать на микроангиопатическую гемолитическую анемию . [84] При некоторых воспалительных состояниях и парапротеиновых расстройствах, таких как множественная миелома , высокий уровень белка в крови может привести к тому, что эритроциты будут выглядеть сложенными вместе на мазке, что называется «монетными столбиками» . [85] Некоторые паразитарные заболевания , такие как малярия и бабезиоз , можно обнаружить, обнаружив возбудителей в мазке крови, [86] а количество тромбоцитов можно оценить по мазку крови, что полезно, если автоматизированный подсчет тромбоцитов неточен. [77]
Чтобы выполнить ручную дифференциальную лейкоцитную пробу, микроскопист подсчитывает 100 клеток в мазке крови и классифицирует их на основе их внешнего вида; иногда подсчитывают 200 клеток. [87] Это дает процентное содержание каждого типа лейкоцитов, и путем умножения этих процентов на общее количество лейкоцитов можно получить абсолютное количество каждого типа лейкоцитов. [88] Ручной подсчет подвержен ошибке выборки , поскольку подсчитывается так мало клеток по сравнению с автоматизированным анализом, [76] но он может идентифицировать аномальные клетки, которые анализаторы не могут, [72] [77] такие как бластные клетки, наблюдаемые при остром лейкозе. [ 89] Клинически значимые признаки, такие как токсическая грануляция и вакуолизация, также могут быть установлены при микроскопическом исследовании лейкоцитов. [90]
Гематокрит можно измерить вручную, заполнив капиллярную трубку кровью, центрифугировав ее и измерив процентное содержание в крови эритроцитов. [66] Это полезно в некоторых состояниях, которые могут привести к неверным результатам автоматизированного гематокрита, например, при полицитемии (сильно повышенном количестве эритроцитов) [66] или тяжелом лейкоцитозе (сильно повышенном количестве лейкоцитов, что мешает измерениям эритроцитов, заставляя лейкоциты считаться эритроцитами). [91]
Красные и белые кровяные клетки и тромбоциты можно подсчитать с помощью гемоцитометра , предметного стекла микроскопа, содержащего камеру, которая содержит определенный объем разбавленной крови. Камера гемоцитометра протравлена калиброванной сеткой для облегчения подсчета клеток. Клетки, видимые в сетке, подсчитываются и делятся на объем исследованной крови, который определяется по количеству подсчитанных на сетке квадратов, чтобы получить концентрацию клеток в образце. [45] [92] Ручной подсчет клеток является трудоемким и неточным по сравнению с автоматизированными методами, поэтому он редко используется, за исключением лабораторий, у которых нет доступа к автоматическим анализаторам. [45] [92] Для подсчета белых кровяных клеток образец разбавляют с помощью жидкости, содержащей соединение, которое лизирует красные кровяные клетки, например, оксалат аммония , уксусную кислоту или соляную кислоту . [93] Иногда в разбавитель добавляют краситель, который выделяет ядра белых кровяных клеток, что облегчает их идентификацию. Ручной подсчет тромбоцитов выполняется аналогичным образом, хотя некоторые методы оставляют эритроциты нетронутыми. Использование фазово-контрастного микроскопа вместо светового микроскопа может облегчить идентификацию тромбоцитов. [94] Ручной подсчет эритроцитов проводится редко, так как он неточен, и для оценки эритроцитов доступны другие методы, такие как гемоглобинометрия и ручной гематокрит; но если это необходимо, эритроциты можно подсчитать в крови, разбавленной физиологическим раствором. [95]
Гемоглобин можно измерить вручную с помощью спектрофотометра или колориметра . Для измерения гемоглобина вручную образец разбавляют реагентами, которые разрушают эритроциты, чтобы высвободить гемоглобин. Другие химикаты используются для преобразования различных типов гемоглобина в одну форму, что позволяет легко измерить его. Затем раствор помещают в измерительную кювету , и измеряют поглощение на определенной длине волны, которая зависит от типа используемого реагента. Эталонный стандарт, содержащий известное количество гемоглобина, используется для определения связи между поглощением и концентрацией гемоглобина, что позволяет измерить уровень гемоглобина в образце. [96]
В сельских и экономически неблагополучных районах доступное тестирование ограничено доступом к оборудованию и персоналу. В учреждениях первичной медико-санитарной помощи в этих регионах тестирование может быть ограничено исследованием морфологии эритроцитов и ручным измерением гемоглобина, в то время как более сложные методы, такие как ручной подсчет клеток и дифференциалы, а иногда и автоматизированный подсчет клеток, выполняются в районных лабораториях. Региональные и провинциальные больницы и академические центры обычно имеют доступ к автоматизированным анализаторам. Там, где лабораторные возможности недоступны, оценку концентрации гемоглобина можно получить, поместив каплю крови на стандартизированный тип абсорбирующей бумаги и сравнив ее с цветовой шкалой. [97]
Автоматические анализаторы должны регулярно калиброваться . Большинство производителей предоставляют консервированную кровь с определенными параметрами, и анализаторы корректируются, если результаты выходят за пределы определенных пороговых значений. [98] Чтобы гарантировать, что результаты продолжают быть точными, образцы контроля качества, которые обычно предоставляются производителем прибора, тестируются не реже одного раза в день. Образцы формулируются для получения определенных результатов, и лаборатории сравнивают их результаты с известными значениями, чтобы убедиться, что прибор функционирует должным образом. [99] [100] Для лабораторий, не имеющих доступа к коммерческому материалу для контроля качества, индийская регулирующая организация рекомендует проводить анализ образцов пациентов в двух экземплярах и сравнивать результаты. [101] Измерение скользящего среднего , при котором средние результаты для образцов пациентов измеряются через установленные интервалы, может использоваться в качестве дополнительного метода контроля качества. Предполагая, что характеристики популяции пациентов остаются примерно одинаковыми с течением времени, среднее значение должно оставаться постоянным; большие сдвиги в среднем значении могут указывать на проблемы с прибором. [99] [100] Значения MCHC особенно полезны в этом отношении. [102]
В дополнение к анализу образцов внутреннего контроля качества с известными результатами лаборатории могут получать образцы внешней оценки качества от регулирующих организаций. В то время как цель внутреннего контроля качества заключается в обеспечении воспроизводимости результатов анализатора в пределах данной лаборатории, внешняя оценка качества проверяет, что результаты из разных лабораторий согласуются друг с другом и с целевыми значениями. [103] Ожидаемые результаты для образцов внешней оценки качества не раскрываются лаборатории. [104] Программы внешней оценки качества широко приняты в Северной Америке и Западной Европе, [99] и лаборатории часто обязаны участвовать в этих программах для поддержания аккредитации . [105] Логистические проблемы могут затруднить для лабораторий в регионах с ограниченными ресурсами реализацию схем внешней оценки качества. [106]
CBC измеряет количество тромбоцитов, красных и белых кровяных телец, а также гемоглобин и гематокрит. Индексы красных кровяных телец — MCV, MCH и MCHC — которые описывают размер красных кровяных телец и содержание в них гемоглобина, сообщаются вместе с шириной распределения красных кровяных телец (RDW), которая измеряет величину вариации размеров красных кровяных телец. Может быть выполнена дифференциация белых кровяных телец, которая подсчитывает различные типы белых кровяных телец, и иногда включается подсчет незрелых красных кровяных телец (ретикулоцитов). [4] [107]
Эритроциты доставляют кислород из легких в ткани и по возвращении переносят углекислый газ обратно в легкие, где он выдыхается. Эти функции опосредованы гемоглобином клеток. [109] Анализатор подсчитывает эритроциты, сообщая результат в единицах 10 6 клеток на микролитр крови (× 10 6 /мкл) или 10 12 клеток на литр (× 10 12 /л), и измеряет их средний размер, который называется средним объемом клетки и выражается в фемтолитрах или кубических микрометрах. [4] Умножая средний объем клетки на количество эритроцитов, можно получить гематокрит (HCT) или объем упакованных клеток (PCV), измерение процента крови, состоящей из эритроцитов; [66] а когда гематокрит вычисляется напрямую, средний объем клетки можно рассчитать из гематокрита и количества эритроцитов. [110] [111] Гемоглобин, измеряемый после лизиса эритроцитов, обычно указывается в единицах граммов на литр (г/л) или граммов на децилитр (г/дл). [112] Если предположить, что эритроциты в норме, то между гемоглобином и гематокритом существует постоянная связь: процент гематокрита примерно в три раза больше, чем значение гемоглобина в г/дл, плюс-минус три. Это соотношение, называемое правилом трех , можно использовать для подтверждения правильности результатов ОАК. [113]
Два других измерения рассчитываются на основе количества эритроцитов, концентрации гемоглобина и гематокрита: средний корпускулярный гемоглобин и средняя корпускулярная концентрация гемоглобина . [114] [115] Эти параметры описывают содержание гемоглобина в каждом эритроците. MCH и MCHC могут сбивать с толку; по сути, MCH является мерой среднего количества гемоглобина на эритроцит. MCHC дает среднюю долю клетки, которая является гемоглобином. MCH не учитывает размер эритроцитов, тогда как MCHC учитывает. [116] В совокупности MCV, MCH и MCHC называются индексами эритроцитов . [114] [115] Изменения этих индексов видны на мазке крови: эритроциты, которые ненормально большие или маленькие, можно идентифицировать, сравнивая их с размерами лейкоцитов, а клетки с низкой концентрацией гемоглобина выглядят бледными. [117] Другой параметр рассчитывается на основе первоначальных измерений эритроцитов: ширина распределения эритроцитов или RDW, которая отражает степень вариации размера клеток. [118]
Аномально низкий уровень гемоглобина, гематокрита или количества эритроцитов указывает на анемию. [119] Анемия сама по себе не является диагнозом, но она указывает на основное состояние, влияющее на эритроциты человека. [88] Общие причины анемии включают потерю крови, производство дефектных эритроцитов (неэффективный эритропоэз ), снижение производства эритроцитов (недостаточный эритропоэз) и повышенное разрушение эритроцитов ( гемолитическая анемия ). [120] Анемия снижает способность крови переносить кислород, вызывая такие симптомы, как усталость и одышка. [121] Если уровень гемоглобина падает ниже пороговых значений, основанных на клиническом состоянии человека, может потребоваться переливание крови. [122]
Увеличение количества эритроцитов, приводящее к увеличению гемоглобина и гематокрита, [примечание 4] называется полицитемией . [126] Обезвоживание или использование диуретиков может вызвать «относительную» полицитемию, уменьшая количество плазмы по сравнению с эритроцитами. Истинное увеличение количества эритроцитов, называемое абсолютной полицитемией, может произойти, когда организм вырабатывает больше эритроцитов, чтобы компенсировать хронически низкий уровень кислорода при таких состояниях, как заболевания легких или сердца , или когда у человека аномально высокий уровень эритропоэтина , гормона, который стимулирует выработку эритроцитов. При истинной полицитемии костный мозг вырабатывает эритроциты и другие клетки крови с чрезмерно высокой скоростью. [127]
Оценка индексов эритроцитов полезна для определения причины анемии. Если MCV низкий, анемия называется микроцитарной , в то время как анемия с высоким MCV называется макроцитарной . Анемия с низким MCHC называется гипохромной анемией . Если анемия присутствует, но индексы эритроцитов в норме, анемия считается нормохромной и нормоцитарной . [117] Термин гиперхромия , относящийся к высокому MCHC, обычно не используется. Повышение MCHC выше верхнего контрольного значения встречается редко, в основном при таких состояниях, как сфероцитоз , серповидноклеточная анемия и болезнь гемоглобина С. [115] [128] Повышенный MCHC также может быть ложным результатом из-за таких состояний, как агглютинация эритроцитов (которая вызывает ложное снижение количества эритроцитов, повышая MCHC) [129] [130] или сильно повышенное количество липидов в крови (что вызывает ложное увеличение результата гемоглобина). [128] [131]
Микроцитарная анемия обычно связана с дефицитом железа, талассемией и анемией хронических заболеваний , тогда как макроцитарная анемия связана с алкоголизмом , дефицитом фолиевой кислоты и B12 , использованием некоторых лекарств и некоторыми заболеваниями костного мозга. Острая кровопотеря, гемолитическая анемия, заболевания костного мозга и различные хронические заболевания могут привести к анемии с нормоцитарной картиной крови. [115] [132] MCV служит дополнительной цели в контроле качества лаборатории. Он относительно стабилен с течением времени по сравнению с другими параметрами CBC, поэтому большое изменение MCV может указывать на то, что образец был взят у не того пациента. [133]
Низкий RDW не имеет клинического значения, но повышенный RDW отражает повышенную вариабельность размера эритроцитов, состояние, известное как анизоцитоз . [118] Анизоцитоз распространен при алиментарных анемиях, таких как железодефицитная анемия и анемия, вызванная дефицитом витамина B12 или фолиевой кислоты, в то время как у людей с талассемией RDW может быть нормальным. [118] На основании результатов ОАК можно предпринять дальнейшие шаги для исследования анемии, такие как тест на ферритин для подтверждения наличия дефицита железа или электрофорез гемоглобина для диагностики гемоглобинопатии, такой как талассемия или серповидноклеточная анемия. [134]
Белые кровяные клетки защищают от инфекций и участвуют в воспалительной реакции . [136] Высокий уровень белых кровяных клеток, который называется лейкоцитозом, часто возникает при инфекциях, воспалениях и состояниях физиологического стресса . Он также может быть вызван заболеваниями, которые связаны с аномальной выработкой клеток крови, такими как миелопролиферативные и лимфопролиферативные расстройства . [137] Снижение уровня белых кровяных клеток, называемое лейкопенией , может привести к повышенному риску заражения инфекциями, [138] и возникает при таких методах лечения, как химиотерапия и лучевая терапия, а также при многих состояниях, которые подавляют выработку клеток крови. [139] Сепсис связан как с лейкоцитозом, так и с лейкопенией. [140] Общее количество белых кровяных клеток обычно указывается в клетках на микролитр крови (/мкл) или 10 9 клеток на литр (× 10 9 /л). [4]
В дифференциале лейкоцитов определяются и подсчитываются различные типы лейкоцитов. Результаты сообщаются в процентах и в виде абсолютного числа на единицу объема. Обычно измеряются пять типов лейкоцитов — нейтрофилы , лимфоциты , моноциты , эозинофилы и базофилы . [141] Некоторые приборы сообщают количество незрелых гранулоцитов, что представляет собой классификацию, состоящую из предшественников нейтрофилов; в частности, промиелоцитов , миелоцитов и метамиелоцитов . [примечание 5] [144] Другие типы клеток сообщаются, если они идентифицированы в ручном дифференциале. [145]
Дифференциальные результаты полезны при диагностике и мониторинге многих медицинских состояний. Например, повышенное количество нейтрофилов ( нейтрофилия ) связано с бактериальной инфекцией, воспалением и миелопролиферативными расстройствами, [146] [147] в то время как пониженное количество ( нейтропения ) может наблюдаться у людей, проходящих химиотерапию или принимающих определенные препараты, или у которых есть заболевания, поражающие костный мозг. [148] [149] Нейтропения также может быть вызвана некоторыми врожденными нарушениями и может возникать временно после вирусных или бактериальных инфекций у детей. [150] Людей с тяжелой нейтропенией и клиническими признаками инфекции лечат антибиотиками для предотвращения потенциально опасных для жизни заболеваний. [151]
Повышенное количество палочкоядерных нейтрофилов — молодых нейтрофилов, не имеющих сегментированных ядер, — или незрелых гранулоцитов называется сдвигом влево и встречается при сепсисе и некоторых заболеваниях крови, но является нормой при беременности. [152] [153] Повышенное количество лимфоцитов ( лимфоцитоз ) связано с вирусной инфекцией [6] и лимфопролиферативными заболеваниями, такими как хронический лимфолейкоз ; [154] повышенное количество моноцитов ( моноцитоз ) связано с хроническими воспалительными состояниями; [155] а количество эозинофилов часто увеличивается ( эозинофилия ) при паразитарных инфекциях и аллергических состояниях. [156] Повышенное количество базофилов, называемое базофилией , может возникать при миелопролиферативных заболеваниях, таких как хронический миелоидный лейкоз и истинная полицитемия. [147] Наличие некоторых типов аномальных клеток, таких как бластные клетки или лимфоциты с неопластическими признаками, указывает на гематологическую злокачественность . [89] [157]
Тромбоциты играют важную роль в свертывании крови. Когда стенка кровеносного сосуда повреждена, тромбоциты прилипают к открытой поверхности в месте повреждения и закупоривают щель. Одновременная активация каскада коагуляции приводит к образованию фибрина , который укрепляет тромбоцитарную пробку, создавая стабильный сгусток . [158] Низкое количество тромбоцитов, известное как тромбоцитопения, может вызвать кровотечение, если оно серьезное. [159] Это может произойти у людей, которые проходят лечение, подавляющее костный мозг, такое как химиотерапия или лучевая терапия, или принимают определенные препараты, такие как гепарин, которые могут заставить иммунную систему разрушать тромбоциты. Тромбоцитопения является признаком многих заболеваний крови, таких как острый лейкоз и апластическая анемия , а также некоторых аутоиммунных заболеваний . [160] [161] Если количество тромбоцитов чрезвычайно низкое, может быть выполнено переливание тромбоцитов. [162] Тромбоцитоз , то есть высокое количество тромбоцитов, может возникнуть в состояниях воспаления или травмы, [163] а также при дефиците железа, [164] и количество тромбоцитов может достигать исключительно высоких уровней у людей с эссенциальной тромбоцитемией , редким заболеванием крови. [163] Количество тромбоцитов может быть выражено в единицах клеток на микролитр крови (/мкл), [165] 10 3 клеток на микролитр (× 10 3 /мкл) или 10 9 клеток на литр (× 10 9 /л). [4]
Средний объем тромбоцитов (MPV) измеряет средний размер тромбоцитов в фемтолитрах. Он может помочь в определении причины тромбоцитопении; повышенный MPV может возникнуть, когда молодые тромбоциты высвобождаются в кровоток, чтобы компенсировать повышенное разрушение тромбоцитов, в то время как сниженная продукция тромбоцитов из-за дисфункции костного мозга может привести к низкому MPV. MPV также полезен для дифференциации врожденных заболеваний, вызывающих тромбоцитопению. [118] [166] Фракция незрелых тромбоцитов (IPF) или количество ретикулированных тромбоцитов сообщается некоторыми анализаторами и дает информацию о скорости продукции тромбоцитов путем измерения количества незрелых тромбоцитов в крови. [167]
Ретикулоциты — это незрелые эритроциты, которые, в отличие от зрелых клеток, содержат РНК . Подсчет ретикулоцитов иногда выполняется как часть общего анализа крови, обычно для исследования причины анемии человека или оценки его реакции на лечение. Анемия с высоким количеством ретикулоцитов может указывать на то, что костный мозг производит эритроциты с большей скоростью, чтобы компенсировать потерю крови или гемолиз, [74] в то время как анемия с низким количеством ретикулоцитов может указывать на то, что у человека есть состояние, которое снижает способность организма производить эритроциты. [168] Когда людям с алиментарной анемией дают питательные добавки, увеличение количества ретикулоцитов указывает на то, что их организм реагирует на лечение, производя больше эритроцитов. [169] Гематологические анализаторы выполняют подсчет ретикулоцитов, окрашивая эритроциты красителем, который связывается с РНК, и измеряя количество ретикулоцитов с помощью анализа рассеяния света или флуоресценции. Тест можно выполнить вручную, окрасив кровь новым метиленовым синим и подсчитав процент эритроцитов, содержащих РНК, под микроскопом. Количество ретикулоцитов выражается как абсолютное число [168] или как процент эритроцитов. [170]
Некоторые приборы измеряют среднее количество гемоглобина в каждом ретикулоците; параметр, который изучался как индикатор дефицита железа у людей, имеющих состояния, мешающие стандартным тестам. [171] Фракция незрелых ретикулоцитов (IRF) — это еще одно измерение, производимое некоторыми анализаторами, которое количественно определяет зрелость ретикулоцитов: клетки, которые менее зрелые, содержат больше РНК и, таким образом, производят более сильный флуоресцентный сигнал. Эта информация может быть полезна при диагностике анемий и оценке продукции эритроцитов после лечения анемии или трансплантации костного мозга . [172]
Во время своего формирования в костном мозге, а также в печени и селезенке у плодов [173] эритроциты содержат клеточное ядро, которое обычно отсутствует в зрелых клетках, циркулирующих в кровотоке. Ядросодержащие эритроциты являются нормальными для новорожденных младенцев, [174] но при обнаружении у детей и взрослых они указывают на повышенную потребность в эритроцитах, что может быть вызвано кровотечением, некоторыми видами рака и анемией. [118] Большинство анализаторов могут обнаруживать эти клетки как часть дифференциального подсчета клеток. Большое количество ядросодержащих эритроцитов может привести к ложно высокому количеству лейкоцитов, что потребует корректировки. [175]
Современные гематологические анализаторы генерируют новые измерения клеток крови, которые показали диагностическую значимость в научных исследованиях, но пока не нашли широкого клинического применения. [171] Например, некоторые типы анализаторов производят координатные показания, указывающие размер и положение каждого кластера белых кровяных телец. Эти параметры (называемые данными о популяции клеток) [176] изучались как потенциальные маркеры заболеваний крови, бактериальных инфекций и малярии. Анализаторы, которые используют окрашивание миелопероксидазой для получения дифференциальных подсчетов, могут измерять экспрессию фермента белыми кровяными клетками, которая изменяется при различных расстройствах. [75] Некоторые приборы могут сообщать процент эритроцитов, которые являются гипохромными, в дополнение к сообщению среднего значения MCHC или обеспечивать подсчет фрагментированных эритроцитов ( шистоцитов ), [171] которые возникают при некоторых типах гемолитической анемии. [177] Поскольку эти параметры часто специфичны для определенных марок анализаторов, лабораториям сложно интерпретировать и сравнивать результаты. [171]
Результаты общего анализа крови интерпретируются путем сравнения выходных данных с контрольными диапазонами, которые представляют результаты, обнаруженные у 95% внешне здоровых людей. [35] На основе статистического нормального распределения диапазоны тестируемых образцов различаются в зависимости от пола и возраста. [179]
В среднем у взрослых женщин показатели гемоглобина, гематокрита и количества эритроцитов ниже, чем у мужчин; разница уменьшается, но все еще присутствует после менопаузы . [180] Результаты ОАК у детей и новорожденных отличаются от результатов взрослых. Гемоглобин, гематокрит и количество эритроцитов у новорожденных чрезвычайно высоки, чтобы компенсировать низкий уровень кислорода в утробе матери и высокую долю фетального гемоглобина , который менее эффективен в доставке кислорода к тканям, чем зрелые формы гемоглобина, внутри их эритроцитов. [181] [182] MCV также увеличивается, а количество лейкоцитов повышается с преобладанием нейтрофилов. [181] [183] Количество эритроцитов и связанные с ними значения начинают снижаться вскоре после рождения, достигая самой низкой точки примерно в возрасте двух месяцев и увеличиваясь впоследствии. [184] [185] Эритроциты у младенцев и детей постарше меньше и имеют более низкий MCH, чем у взрослых. В детской лейкоцитарной формуле лимфоциты часто превосходят по численности нейтрофилы, тогда как у взрослых преобладают нейтрофилы. [181]
Другие различия между популяциями могут влиять на референтные диапазоны: например, люди, живущие на больших высотах, имеют более высокие показатели гемоглобина, гематокрита и эритроцитов, а люди африканского происхождения имеют в среднем более низкие показатели лейкоцитов. [186] Тип анализатора, используемого для проведения ОАК, также влияет на референтные диапазоны. Поэтому референтные диапазоны устанавливаются отдельными лабораториями на основе их собственных популяций пациентов и оборудования. [187] [188]
Некоторые медицинские состояния или проблемы с образцом крови могут привести к неточным результатам. Если образец визуально свернулся, что может быть вызвано плохой техникой флеботомии , он непригоден для тестирования, поскольку количество тромбоцитов будет ложно занижено, а другие результаты могут быть ненормальными. [189] [190] Образцы, хранящиеся при комнатной температуре в течение нескольких часов, могут давать ложно высокие показания для MCV ( среднего корпускулярного объема ), [191] поскольку эритроциты набухают, поглощая воду из плазмы; а результаты дифференциального анализа тромбоцитов и лейкоцитов могут быть неточными в старых образцах, поскольку клетки со временем деградируют. [91]
Образцы, взятые у людей с очень высоким уровнем билирубина или липидов в плазме (называемые желтушными образцами или липемическими образцами соответственно) [192], могут показывать ложно высокие показания гемоглобина, поскольку эти вещества изменяют цвет и непрозрачность образца, что мешает измерению гемоглобина. [193] Этот эффект можно смягчить, заменив плазму физиологическим раствором. [91]
У некоторых людей вырабатывается антитело , которое заставляет их тромбоциты образовывать сгустки, когда их кровь всасывается в пробирки, содержащие ЭДТА, антикоагулянт, обычно используемый для сбора образцов ОАК. Сгустки тромбоцитов могут быть подсчитаны как отдельные тромбоциты автоматическими анализаторами, что приводит к ложному занижению количества тромбоцитов. Этого можно избежать, используя альтернативный антикоагулянт, такой как цитрат натрия или гепарин . [194] [195]
Другим обусловленным антителами состоянием, которое может повлиять на результаты общего анализа крови, является агглютинация эритроцитов . Это явление заставляет эритроциты слипаться из-за антител, связанных с поверхностью клеток. [196] Агрегаты эритроцитов подсчитываются анализатором как отдельные клетки, что приводит к заметному снижению количества эритроцитов и гематокрита, а также к заметному повышению MCV и MCHC ( средняя концентрация корпускулярного гемоглобина ). [53] Часто эти антитела активны только при комнатной температуре (в этом случае их называют холодными агглютининами ), и агглютинацию можно обратить вспять, нагрев образец до 37 °C (99 °F). Образцы от людей с тепловой аутоиммунной гемолитической анемией могут демонстрировать агглютинацию эритроцитов, которая не разрешается при нагревании. [130]
В то время как бластные клетки и клетки лимфомы могут быть идентифицированы при ручном дифференциальном анализе, микроскопическое исследование не может надежно определить гемопоэтическую линию клеток . Эта информация часто необходима для диагностики рака крови. После того, как аномальные клетки идентифицированы, можно использовать дополнительные методы, такие как иммунофенотипирование с помощью проточной цитометрии, для идентификации маркеров , которые предоставляют дополнительную информацию о клетках. [197] [198]
До того, как были введены автоматизированные счетчики клеток , полные анализы крови проводились вручную: белые и красные кровяные клетки и тромбоциты подсчитывались с помощью микроскопов. [200] Первым человеком, опубликовавшим микроскопические наблюдения клеток крови, был Антони ван Левенгук , [201] который сообщил о появлении красных кровяных клеток в письме 1674 года в Труды Королевского общества Лондона . [202] Ян Сваммердам описал красные кровяные клетки несколькими годами ранее, но не опубликовал свои выводы в то время. На протяжении 18-го и 19-го веков усовершенствования в технологии микроскопов, такие как ахроматические линзы, позволили подсчитывать белые кровяные клетки и тромбоциты в неокрашенных образцах. [203]
Физиологу Карлу Виерордту приписывают выполнение первого подсчета крови. [8] [204] [205] Его метод, опубликованный в 1852 году, включал аспирацию тщательно измеренного объема крови в капиллярную трубку и распределение ее на предметном стекле микроскопа, покрытом яичным белком . После того, как кровь высыхала, он подсчитывал каждую клетку на предметном стекле; этот процесс мог занять более трех часов. [206] Гемоцитометр, представленный в 1874 году Луи-Шарлем Малассе , упростил микроскопический подсчет клеток крови. [207] Гемоцитометр Малассе состоял из предметного стекла микроскопа, содержащего сплющенную капиллярную трубку. Разбавленная кровь вводилась в капиллярную камеру с помощью резиновой трубки, прикрепленной к одному концу, а окуляр с масштабной сеткой был прикреплен к микроскопу, что позволяло микроскописту подсчитывать количество клеток на объем крови. В 1877 году Уильям Гауэрс изобрел гемоцитометр со встроенной счетной сеткой, что исключило необходимость изготовления специально калиброванных окуляров для каждого микроскопа. [208]
В 1870-х годах Пауль Эрлих разработал метод окрашивания, используя комбинацию кислотного и основного красителя, который мог различать различные типы белых кровяных клеток и позволял исследовать морфологию красных кровяных клеток. [203] Дмитрий Леонидович Романовский усовершенствовал этот метод в 1890-х годах, используя смесь эозина и выдержанного метиленового синего для получения широкого спектра оттенков, отсутствующих при использовании любого из этих красителей по отдельности. Это стало основой для окрашивания по Романовскому, метода, который до сих пор используется для окрашивания мазков крови для ручного просмотра. [209]
Первые методы измерения гемоглобина были разработаны в конце 19 века и включали визуальное сравнение цвета разбавленной крови с известным стандартом. [205] Попытки автоматизировать этот процесс с помощью спектрофотометрии и колориметрии были ограничены тем фактом, что гемоглобин присутствует в крови во многих различных формах, а это означает, что его нельзя было измерить на одной длине волны . В 1920 году был введен метод преобразования различных форм гемоглобина в одну стабильную форму (цианметгемоглобин или гемиглобинцианид), что позволило автоматически измерять уровни гемоглобина. Метод цианметгемоглобина остается эталонным методом измерения гемоглобина и до сих пор используется во многих автоматизированных гематологических анализаторах. [57] [210] [211]
Максвеллу Винтробу приписывают изобретение теста на гематокрит. [66] [212] В 1929 году он занялся докторской диссертацией в Университете Тулейна , чтобы определить нормальные диапазоны для параметров эритроцитов, и изобрел метод, известный как гематокрит Винтроба. Измерения гематокрита ранее были описаны в литературе, но метод Винтроба отличался тем, что он использовал большую трубку, которая могла производиться массово по точным спецификациям, со встроенной шкалой. Фракция эритроцитов в трубке измерялась после центрифугирования для определения гематокрита. Изобретение воспроизводимого метода определения значений гематокрита позволило Винтробу определить индексы эритроцитов. [205]
Исследования в области автоматизированного подсчета клеток начались в начале 20-го века. [211] Метод, разработанный в 1928 году, использовал количество света, прошедшего через разбавленный образец крови, измеренное с помощью фотометрии, для оценки количества эритроцитов, но это оказалось неточным для образцов с аномальными эритроцитами. [8] Другие неудачные попытки, в 1930-х и 1940-х годах, включали фотоэлектрические детекторы, прикрепленные к микроскопам, которые подсчитывали клетки по мере их сканирования. [211] В конце 1940-х годов Уоллес Х. Коултер , мотивированный необходимостью в лучших методах подсчета эритроцитов после бомбардировки Хиросимы и Нагасаки , [213] попытался улучшить методы фотоэлектрического подсчета клеток. [примечание 7] Его исследованиям помогал его брат Джозеф Р. Коултер в подвальной лаборатории в Чикаго. [60] Их результаты с использованием фотоэлектрических методов оказались разочаровывающими, и в 1948 году, прочитав статью, связывающую проводимость крови с концентрацией в ней эритроцитов, Уоллес разработал принцип Коултера — теорию о том, что клетка, взвешенная в проводящей среде, генерирует падение тока, пропорциональное ее размеру, при прохождении через отверстие. [213]
В октябре того же года Уоллес построил счетчик, чтобы продемонстрировать принцип. Из-за финансовых ограничений отверстие было сделано путем прожигания отверстия в куске целлофана из пачки сигарет. [60] [213] Уоллес подал патент на эту технику в 1949 году, а в 1951 году подал заявку в Управление военно-морских исследований для финансирования разработки счетчика Коултера . [213] Патентная заявка Уоллеса была удовлетворена в 1953 году, и после усовершенствования апертуры и введения ртутного манометра для обеспечения точного контроля над размером образца братья основали Coulter Electronics Inc. в 1958 году для продажи своих приборов. Счетчик Коултера изначально был разработан для подсчета эритроцитов, но с более поздними модификациями он оказался эффективным для подсчета лейкоцитов. [60] Счетчики Коултера получили широкое распространение в медицинских лабораториях. [211]
Первым анализатором, способным производить несколько подсчетов клеток одновременно, был Technicon SMA 4A−7A , выпущенный в 1965 году. Он достиг этого путем разделения образцов крови на два канала: один для подсчета эритроцитов и лейкоцитов и один для измерения гемоглобина. Однако прибор был ненадежен и сложен в обслуживании. В 1968 году был выпущен анализатор Coulter Model S, который получил широкое распространение. Подобно прибору Technicon, он использовал две разные реакционные камеры, одна из которых использовалась для подсчета эритроцитов, а другая — для подсчета лейкоцитов и определения гемоглобина. Модель S также определяла средний объем клеток с помощью измерений импеданса, что позволило получить индексы эритроцитов и гематокрит. Автоматизированный подсчет тромбоцитов был введен в 1970 году с прибором Hemalog-8 компании Technicon и был принят на анализаторы серии S Plus компании Coulter в 1980 году. [214]
После автоматизации базового подсчета клеток дифференциальный подсчет лейкоцитов оставался сложной задачей. В течение 1970-х годов исследователи исследовали два метода автоматизации дифференциального подсчета: цифровую обработку изображений и проточную цитометрию. Используя технологию, разработанную в 1950-х и 60-х годах для автоматизации чтения мазков Папаниколау , было создано несколько моделей анализаторов обработки изображений. [215] Эти приборы сканировали окрашенный мазок крови, чтобы найти ядра клеток, а затем делали снимок клетки с более высоким разрешением для его анализа с помощью денситометрии . [216] Они были дорогими, медленными и мало способствовали снижению рабочей нагрузки в лаборатории, поскольку им по-прежнему требовалось готовить и окрашивать мазки крови, поэтому системы на основе проточной цитометрии стали более популярными, [217] [218] и к 1990 году в Соединенных Штатах или Западной Европе не было коммерчески доступных цифровых анализаторов изображений. [219] Эти методы вновь стали популярны в 2000-х годах с появлением более совершенных платформ анализа изображений с использованием искусственных нейронных сетей . [220] [221] [222]
Ранние устройства проточной цитометрии направляли лучи света на клетки на определенных длинах волн и измеряли результирующее поглощение, флуоресценцию или рассеивание света, собирая информацию о свойствах клеток и позволяя количественно оценить клеточное содержимое, такое как ДНК . [223] Один из таких приборов — Rapid Cell Spectrophotometer, разработанный Луи Каменцки в 1965 году для автоматизации цитологии шейки матки — мог генерировать диаграммы рассеивания клеток крови с использованием методов цитохимического окрашивания. Леонард Орнштейн, который помог разработать систему окрашивания на Rapid Cell Spectrophotometer, и его коллеги позже создали первый коммерческий проточный цитометрический дифференциальный анализатор лейкоцитов, Hemalog D. [224] [225] Представленный в 1974 году, [226] [227] этот анализатор использовал рассеяние света, поглощение и окрашивание клеток для идентификации пяти нормальных типов лейкоцитов в дополнение к «большим неопознанным клеткам», классификация, которая обычно состояла из атипичных лимфоцитов или бластных клеток. Hemalog D мог подсчитать 10 000 клеток за один запуск, что было заметным улучшением по сравнению с ручным дифференциальным анализатором. [225] [228] В 1981 году компания Technicon объединила Hemalog D с анализатором Hemalog-8, чтобы создать Technicon H6000, первый комбинированный анализатор общего анализа крови и дифференциального анализа. Этот анализатор был непопулярен в гематологических лабораториях, поскольку его эксплуатация была трудоемкой, но в конце 1980-х — начале 1990-х годов аналогичные системы широко производились другими производителями, такими как Sysmex , Abbott , Roche и Beckman Coulter . [229]