Нильский синий (или нильский синий А ) — краситель, используемый в биологии и гистологии . Его можно использовать с живыми или фиксированными клетками, и он придает синий цвет ядрам клеток .
Его также можно использовать в сочетании с флуоресцентной микроскопией для окрашивания на наличие гранул полигидроксибутирата в прокариотических или эукариотических клетках. Кипячение раствора нильского синего с серной кислотой дает нильский красный (оксазон нильского синего).
Нильский синий — флуоресцентный краситель . Флуоресценция особенно ярко проявляется в неполярных растворителях с высоким квантовым выходом . [1]
Максимумы поглощения и испускания нильского синего сильно зависят от pH и используемых растворителей: [1]
Длительность флуоресценции нильского синего в этаноле была измерена как 1,42 нс. Это короче соответствующего значения нильского красного с 3,65 нс. Длительность флуоресценции не зависит от разбавления в диапазоне от 10−3 до 10−8 моль /л. [1]
Нильский синий используется для гистологического окрашивания биологических препаратов. Он подчеркивает различие между нейтральными липидами ( триглицеридами , эфирами холестерина , стероидами ), которые окрашиваются в розовый цвет, и кислотами ( жирными кислотами , хромолипидами, фосфолипидами ), которые окрашиваются в синий цвет. [2]
По словам Клееберга, для окрашивания нильской синью используются следующие химические вещества:
Образец или замороженные срезы фиксируются в формальдегиде , затем погружаются на 20 минут в раствор нильского синего или на 30 секунд в нильский синий А (1% в/о в дистиллированной воде) и промываются водой. Для лучшей дифференциации его погружают в 1% уксусную кислоту на 10–20 минут или 30 секунд, пока цвета не станут чистыми. Это может занять всего 1–2 минуты. Затем образец тщательно промывают в воде (в течение одного-двух часов). После этого окрашенный образец помещают на предметное стекло микроскопа и удаляют излишки воды. Образец можно залить глицерином или глицерин- желатином .
Ненасыщенные глицериды розовые, ядра и эластины темные, жирные кислоты и различные жирные вещества и жировые смеси фиолетово-синие. [3]
Гранулы PHB в клетках Pseudomonas solanacearum можно визуализировать с помощью окрашивания нильским синим А. Гранулы PHB в окрашенных мазках наблюдаются с помощью эпифлуоресцентного микроскопа с масляной иммерсией при увеличении в 1000 раз; при длине волны возбуждения 450 нм они показывают сильную оранжевую флуоресценцию. [4]
Нильский синий также используется в различных коммерческих составах для окрашивания ДНК, используемых для электрофореза ДНК . [5] Поскольку для его визуализации в агарозном геле не требуется УФ-трансиллюминация, как в случае с бромистым этидием , его можно использовать для наблюдения за ДНК по мере ее разделения, а также в качестве красителя для облегчения гель-экстракции фрагментов ДНК без повреждения УФ-излучением.
Производные нильского синего являются потенциальными фотосенсибилизаторами в фотодинамической терапии злокачественных опухолей . Эти красители агрегируют в опухолевых клетках, особенно в липидных мембранах , и/или секвестрируются и концентрируются в субклеточных органеллах . [6]
С производным N -этил-нильского синего (EtNBA) нормальные и предраковые ткани в экспериментах на животных можно различать с помощью флуоресцентной спектроскопии при флуоресцентной визуализации. EtNBA не проявляет фототоксических эффектов. [7]
Нильский синий и родственные нафтоксазиновые красители могут быть получены путем кислотно-катализируемой конденсации либо 5-(диалкиламино)-2-нитрозофенолов с 1-нафтиламином , 3-(диалкиламино)фенолов с N -алкилированными 4-нитрозо-1-нафтиламинами, либо N , N -диалкил-1,4-фенилендиаминов с 4-(диалкиламино)-1,2-нафтохинонами. Альтернативно, продукт кислотно-катализируемой конденсации 4-нитрозо- N , N -диалкиланилина с 2-нафтолом (соль 9-(диалкиламино)бензо[ a ]феноксазин-7-ия) может быть окислен в присутствии амина, устанавливая второй аминозаместитель в 5-положении бензо[ a ]феноксазиновой системы. [8] Следующая схема иллюстрирует первый из этих четырех подходов, приводящий к перхлорату нильского голубого:
