Фермент фосфолипаза А 2 (EC 3.1.1.4, PLA 2 , систематическое название фосфатидилхолин-2-ацилгидролаза ) катализирует расщепление жирных кислот в положении 2 фосфолипидов , гидролизуя связь между вторым «хвостом» жирной кислоты и молекулой глицерина :
Эта конкретная фосфолипаза специфически распознает sn 2 ацильную связь фосфолипидов и каталитически гидролизует связь, высвобождая арахидоновую кислоту и лизофосфатидилхолин , предшественник лизофосфатидной кислоты . При последующей модификации циклооксигеназами или липоксигеназами арахидоновая кислота преобразуется в активные соединения, называемые эйкозаноидами . Эйкозаноиды включают простагландины и лейкотриены , которые классифицируются как противовоспалительные и воспалительные медиаторы. [1]
Ферменты PLA 2 обычно встречаются в тканях млекопитающих, а также в яде паукообразных, насекомых и змей. [2] Яд пчел в основном состоит из мелиттина , который является стимулятором PLA 2. Из-за повышенного присутствия и активности PLA 2 в результате укуса змеи или насекомого, арахидоновая кислота высвобождается из фосфолипидной мембраны непропорционально. В результате в месте укуса возникают воспаление и боль. [3] Существуют также прокариотические фосфолипазы A 2 .
Дополнительные типы фосфолипаз включают фосфолипазу A 1 , фосфолипазу B , фосфолипазу C и фосфолипазу D . [4]
Фосфолипазы A 2 включают несколько неродственных семейств белков с общей ферментативной активностью. Два наиболее примечательных семейства — секретируемые и цитозольные фосфолипазы A 2 . Другие семейства включают Ca 2+ независимую PLA 2 (iPLA 2 ) и липопротеин-ассоциированную PLA 2 (Lp-PLA 2 ), также известную как ацетилгидролаза фактора активации тромбоцитов (PAF-AH).
Внеклеточные формы фосфолипаз A 2 были выделены из различных ядов ( змеи , [5] пчелы и осы ), и практически из каждой изученной ткани млекопитающих (включая поджелудочную железу и почки ), а также из бактерий . Для активности им требуется Ca 2+ .
Панкреатические sPLA 2 служат для начального переваривания фосфолипидных соединений в жире пищи . Фосфолипазы яда помогают обездвижить добычу, способствуя лизису клеток . [ требуется цитата ]
У мышей группа III sPLA 2 участвует в созревании сперматозоидов [6], а группа X, как полагают, участвует в капацитации сперматозоидов [7] .
Было показано, что sPLA 2 способствует воспалению у млекопитающих, катализируя первый этап пути арахидоновой кислоты путем расщепления фосфолипидов , что приводит к образованию жирных кислот, включая арахидоновую кислоту . Эта арахидоновая кислота затем метаболизируется с образованием нескольких воспалительных и тромбогенных молекул. Считается, что избыточные уровни sPLA 2 способствуют возникновению нескольких воспалительных заболеваний , и было показано, что они способствуют воспалению сосудов, коррелирующему с коронарными событиями при ишемической болезни сердца и остром коронарном синдроме , [8] и, возможно, приводящему к острому респираторному дистресс-синдрому [9] и прогрессированию тонзиллита . [10]
У детей избыточный уровень sPLA 2 связан с воспалением, которое, как полагают, усугубляет астму [11] и воспалением поверхности глаза ( сухость глаз ). [12]
Повышенная активность sPLA 2 наблюдается в спинномозговой жидкости людей с болезнью Альцгеймера и рассеянным склерозом и может служить маркером повышения проницаемости гемато -цереброспинального барьера . [13]
Существуют нетипичные члены семейства фосфолипазы A 2 , такие как PLA2G12B , которые не обладают фосфолипазной активностью с типичным субстратом фосфолипазы. [14] Отсутствие ферментативной активности PLA2G12B указывает на то, что он может иметь уникальную функцию, отличную от других sPLA 2 . Было показано, что у мышей с нулевым PLA2G12B уровни ЛПОНП были значительно снижены, что позволяет предположить, что он может оказывать влияние на секрецию липопротеинов. [15] [16]
Внутриклеточные PLA 2 группы IV также зависят от Ca, но имеют другую трехмерную структуру и значительно больше, чем секретируемые PLA 2 ( более 700 остатков). Они включают домен C2 и большой каталитический домен.
Эти фосфолипазы участвуют в процессах передачи сигналов в клетках , таких как воспалительная реакция . Они высвобождают арахидоновую кислоту из мембранных фосфолипидов. Арахидоновая кислота является как сигнальной молекулой , так и предшественником синтеза других сигнальных молекул, называемых эйкозаноидами . К ним относятся лейкотриены и простагландины . Некоторые эйкозаноиды синтезируются из диацилглицерина , высвобождаемого из липидного бислоя фосфолипазой С (см. ниже).
Фосфолипазы А 2 можно классифицировать на основе гомологии последовательностей. [17]
Повышенные уровни Lp-PLA 2 связаны с сердечными заболеваниями и могут способствовать развитию атеросклероза . [18] Однако роль Lp-PLA 2 при атеросклерозе может зависеть от его носителя в плазме, и несколько линий доказательств предполагают, что связанный с ЛПВП Lp-PLA 2 может существенно способствовать антиатерогенной активности ЛПВП. [19]
Предполагаемый каталитический механизм панкреатического sPLA 2 инициируется комплексом His-48/Asp-99/кальций в активном центре. Ион кальция поляризует кислород карбонила sn-2, одновременно координируясь с каталитической молекулой воды, w5. His-48 улучшает нуклеофильность каталитической воды посредством мостиковой второй молекулы воды, w6. Было высказано предположение, что для преодоления расстояния между каталитическим гистидином и эфиром необходимы две молекулы воды . Считается , что основность His-48 усиливается за счет водородных связей с Asp-99. Замена His-48 аспарагином сохраняет активность дикого типа, поскольку амидная функциональная группа на аспарагине также может функционировать для снижения p K a , или константы диссоциации кислоты , мостиковой молекулы воды. Состояние ограничения скорости характеризуется как деградация тетраэдрического промежуточного продукта, состоящего из координированного кальцием оксианиона . Роль кальция может также дублироваться другими относительно небольшими катионами, такими как кобальт и никель. [20] Перед тем, как стать активным в пищеварении, проформа PLA 2 активируется трипсином.
PLA 2 также можно охарактеризовать как имеющий канал с гидрофобной стенкой, в которой гидрофобные аминокислотные остатки, такие как Phe , Leu и Tyr, служат для связывания субстрата. Другим компонентом PLA 2 являются семь дисульфидных мостиков , которые влияют на регуляцию и стабильную укладку белка. [20]
Действие PLA 2 может высвобождать гистамин из перитонеальных тучных клеток крысы. [22] Он также вызывает высвобождение гистамина в базофилах человека. [23]
Из-за важности PLA 2 в воспалительных реакциях , регуляция фермента имеет важное значение. cPLA 2 регулируется фосфорилированием и концентрацией кальция. cPLA 2 фосфорилируется MAPK на серине -505. Когда фосфорилирование сопряжено с притоком ионов кальция, cPLA 2 стимулируется и может перемещаться к мембране, чтобы начать катализ . [24]
Фосфорилирование cPLA 2 может быть результатом связывания лиганда с рецепторами, включая:
В случае воспаления применение глюкокортикоидов усиливает (на генном уровне) выработку белка липокортина , который может ингибировать cPLA 2 и снижать воспалительную реакцию.
В нормальных клетках мозга регуляция PLA 2 отвечает за баланс между преобразованием арахидоновой кислоты в провоспалительные медиаторы и ее повторным включением в мембрану. При отсутствии строгой регуляции активности PLA 2 вырабатывается непропорциональное количество провоспалительных медиаторов. Результирующий индуцированный окислительный стресс и нейровоспаление аналогичны неврологическим заболеваниям, таким как болезнь Альцгеймера , эпилепсия , рассеянный склероз , ишемия . Лизофосфолипиды — это еще один класс молекул, высвобождаемых из мембраны, которые являются предшественниками факторов активации тромбоцитов (PAF). Аномальные уровни сильного PAF также связаны с неврологическими повреждениями. Оптимальный ингибитор фермента будет специально нацеливать активность PLA 2 на мембраны нервных клеток, уже находящиеся под окислительным стрессом и сильным воспалением . Таким образом, специфические ингибиторы PLA 2 мозга могут быть фармацевтическим подходом к лечению нескольких расстройств, связанных с нервной травмой. [26]
Повышение активности фосфолипазы А2 является реакцией острой фазы , которая усиливается во время воспаления, которое также экспоненциально выше при грыжах межпозвоночных дисков в пояснице по сравнению с ревматоидным артритом . [ необходима цитата ] Это смесь воспаления и субстанции Р , которые отвечают за боль. [ необходима цитата ]
Повышенный уровень фосфолипазы А2 также связан с нейропсихиатрическими расстройствами, такими как шизофрения и распространенные нарушения развития (такие как аутизм ), хотя механизмы, задействованные в этом, неизвестны. [27] [28]
Изоферменты человеческой фосфолипазы А 2 включают:
Кроме того, следующие человеческие белки содержат домен фосфолипазы А2 :
См. стр. 2640