Цитохром P450 2E1 (сокращенно CYP2E1 , EC 1.14.13.n7) является членом системы оксидазы смешанной функции цитохрома P450 , которая участвует в метаболизме ксенобиотиков в организме. Этот класс ферментов делится на ряд подкатегорий, включая CYP1, CYP2 и CYP3, которые как группа в значительной степени отвечают за расщепление чужеродных соединений у млекопитающих. [5]
Хотя сам CYP2E1 осуществляет относительно небольшое количество этих реакций (~4% известных окислений лекарственных препаратов, опосредованных P450), он и связанные с ним ферменты CYP1A2 и CYP3A4 отвечают за расщепление многих токсичных химических веществ из окружающей среды и канцерогенов, попадающих в организм, в дополнение к основным метаболическим реакциям, таким как окисление жирных кислот. [6]
Белок CYP2E1 локализуется в эндоплазматическом ретикулуме и индуцируется этанолом, диабетическим состоянием и голоданием. Фермент метаболизирует как эндогенные субстраты, такие как этанол, ацетон и ацеталь, так и экзогенные субстраты, включая бензол, четыреххлористый углерод, этиленгликоль и нитрозамины, которые являются премутагенами, обнаруженными в сигаретном дыме. Благодаря множеству субстратов этот фермент может быть вовлечен в такие разнообразные процессы, как глюконеогенез, цирроз печени, диабет и рак. [7]
CYP2E1 — это мембранный белок, экспрессируемый в больших количествах в печени, где он составляет почти 50% от общей мРНК печеночного цитохрома P450 [8] и 7% от белка печеночного цитохрома P450. [9] Таким образом, печень — это место, где большинство лекарственных препаратов подвергаются дезактивации CYP2E1 либо напрямую, либо путем облегченного выведения из организма.
Фермент CYP2E1 метаболизирует в основном небольшие полярные молекулы, включая токсичные лабораторные химикаты, такие как диметилформамид , анилин и галогенированные углеводороды (см. таблицу ниже) . Хотя эти окисления часто приносят пользу организму, некоторые канцерогены и токсины биоактивируются CYP2E1, что указывает на участие фермента в возникновении гепатотоксичности, вызванной определенными классами лекарств (см . раздел о значимости заболеваний ниже).
CYP2E1 также играет роль в нескольких важных метаболических реакциях, включая преобразование этанола в ацетальдегид и ацетат у людей, [10] где он работает вместе с алкогольдегидрогеназой и альдегиддегидрогеназой . В последовательности преобразования ацетил-КоА в глюкозу CYP2E1 преобразует ацетон через гидроксиацетон (ацетол) в пропиленгликоль и метилглиоксаль , предшественники пирувата , ацетата и лактата . [11] [12] [13]
CYP2E1 также осуществляет метаболизм эндогенных жирных кислот, такой как ω-1 гидроксилирование жирных кислот, таких как арахидоновая кислота , вовлекая его в важные сигнальные пути, которые могут связывать его с диабетом и ожирением. [14] Таким образом, он действует как монооксигеназа, метаболизируя арахидоновую кислоту в 19-гидроксиэйкозатетраеновую кислоту (19-HETE) (см. 20-гидроксиэйкозатетраеновая кислота ). Однако он также действует как эпоксигеназная активность для метаболизма докозагексаеновой кислоты в эпоксиды , в первую очередь 19 R ,20 S -эпоксиэйкозапентаеновой кислоты и изомеров 19 S ,20 R -эпоксиэйкозапентаеновой кислоты (называемых 19,20-EDP) и эйкозапентаеновой кислоты в эпоксиды, в первую очередь 17 R ,18 S -эйкозатетраеновой кислоты и изомеров 17 S ,18 R -эйкозатетраеновой кислоты (называемых 17,18-EEQ). [15] 19-HETE является ингибитором 20-HETE, широко активной сигнальной молекулы, например, она сужает артериолы , повышает кровяное давление, способствует воспалительным реакциям и стимулирует рост различных типов опухолевых клеток; Однако способность и значение 19-HETE in vivo в ингибировании 20-HETE не были продемонстрированы. Метаболиты EDP ( эпоксидокозапентаеновая кислота ) и EEQ ( эпоксиэйкозатетраеновая кислота ) обладают широким спектром активности. В различных моделях животных и исследованиях in vitro на тканях животных и человека они снижают гипертонию и восприятие боли; подавляют воспаление; ингибируют ангиогенез , миграцию эндотелиальных клеток и пролиферацию эндотелиальных клеток; и ингибируют рост и метастазирование линий клеток рака молочной железы и простаты человека. [16] [17] [18] [19] Предполагается, что метаболиты EDP и EEQ функционируют в организме человека так же, как и в животных моделях, и что, как продукты жирных кислот омега-3 , докозагексаеновой кислоты и эйкозапентаеновой кислоты, метаболиты EDP и EEQ способствуют многим полезным эффектам, приписываемым диетическим жирным кислотам омега-3. [16] [19] [20] Метаболиты EDP и EEQ являются короткоживущими, инактивируются в течение секунд или минут после образования эпоксидгидролазами , в частности растворимой эпоксидгидролазой , и поэтому действуют локально. CYP2E1 не считается основным фактором, способствующим образованию указанных эпоксидов [19]но может действовать локально в определенных тканях, делая это.
Ниже приведена таблица выбранных субстратов CYP2E1. Там, где перечислены классы агентов, могут быть исключения внутри класса.
CYP2E1 демонстрирует структурные мотивы, общие для других человеческих мембраносвязанных ферментов цитохрома P450 , и состоит из 12 основных α-спиралей и 4 β-слоев с короткими промежуточными спиралями, вкрапленными между ними. [14] Как и другие ферменты этого класса, активный центр CYP2E1 содержит атом железа , связанный с гемовым центром, который опосредует этапы переноса электронов , необходимые для проведения окисления его субстратов. Активный центр CYP2E1 является наименьшим из наблюдаемых в человеческих ферментах P450, с его небольшой емкостью, отчасти приписываемой введению изолейцина в положение 115. Боковая цепь этого остатка выступает над гемовым центром, ограничивая объем активного центра по сравнению с родственными ферментами, которые имеют менее объемные остатки в этом положении. [14] T 303 , который также выступает в активный центр, особенно важен для позиционирования субстрата над реакционноспособным железным центром и, следовательно, высококонсервативен многими ферментами цитохрома P450. [14] Его гидроксильная группа хорошо расположена для передачи водородной связи потенциальным акцепторам на субстрате, а его метильная группа также участвует в позиционировании жирных кислот в активном центре. [25] [26] Ряд остатков, проксимальных к активному центру, включая L 368, помогают создать суженный гидрофобный канал доступа, который также может быть важен для определения специфичности фермента по отношению к малым молекулам и ω-1 гидроксилированию жирных кислот. [14]
У людей фермент CYP2E1 кодируется геном CYP2E1 . [27] Фермент был идентифицирован в печени плода, где он, как полагают, является преобладающим ферментом, метаболизирующим этанол, и может быть связан с тератогенезом , опосредованным этанолом . [28] У крыс в течение одного дня после рождения печеночный ген CYP2E1 активируется транскрипционно.
Экспрессия CYP2E1 легко индуцируется и может происходить в присутствии ряда его субстратов, включая этанол , [22] изониазид , [22] табак , [29] изопропанол , [6] бензол , [6] толуол , [6] и ацетон . [6] Для этанола в частности, по-видимому, существуют две стадии индукции: посттрансляционный механизм для повышения стабильности белка при низких уровнях этанола и дополнительная транскрипционная индукция при высоких уровнях этанола. [30]
CYP2E1 ингибируется различными малыми молекулами, многие из которых действуют конкурентно . Два таких ингибитора, индазол и 4-метилпиразол , координируются с атомом железа активного центра и были кристаллизованы с рекомбинантным человеческим CYP2E1 в 2008 году, что дало первые настоящие кристаллические структуры фермента. [14] Другие ингибиторы включают диэтилдитиокарбамат [21] (при раке ) и дисульфирам [22] (при алкоголизме ).
CYP2E1 экспрессируется в высоких концентрациях в печени, где он выводит токсины из организма. [8] [9] При этом CYP2E1 биоактивирует различные распространенные анестетики, включая парацетамол (ацетаминофен) , галотан , энфлуран и изофлуран. [6] Окисление этих молекул CYP2E1 может приводить к образованию вредных веществ, таких как хлорид трифторуксусной кислоты из галотана [31] или NAPQI из парацетамола (ацетаминофена), и является основной причиной их наблюдаемой гепатотоксичности у пациентов.
CYP2E1 и другие ферменты цитохрома P450 могут непреднамеренно производить активные формы кислорода (ROS) в своем активном центре, когда катализ не координируется правильно, что приводит к потенциальному перекисному окислению липидов , а также окислению белков и ДНК. [14] CYP2E1 особенно восприимчив к этому явлению по сравнению с другими ферментами P450, что позволяет предположить, что уровни его экспрессии могут быть важны для негативных физиологических эффектов, наблюдаемых при ряде болезненных состояний. [14]
Уровни экспрессии CYP2E1 коррелируют с различными диетическими и физиологическими факторами, такими как потребление этанола, [32] диабет, [33] голодание, [34] и ожирение. [35] Похоже, что клеточные уровни фермента могут контролироваться молекулярным шапероном HSP90 , который при ассоциации с CYP2E1 обеспечивает транспорт в протеасому и последующую деградацию. Этанол и другие субстраты могут нарушать эту связь, что приводит к более высоким уровням экспрессии, наблюдаемым в их присутствии. [36] Повышенная экспрессия CYP2E1, сопровождающая эти состояния здоровья, может, таким образом, способствовать их патогенезу за счет увеличения скорости выработки ROS в организме. [14]
Согласно публикации 1995 года Y Hu et al., исследование на крысах выявило 8-9-кратное повышение CYP2E1 при голодании в одиночку, по сравнению с 20-кратным увеличением уровня фермента, сопровождающимся 16-кратным увеличением общей каталитической способности у крыс, которые были голодны и получали большие количества этанола в течение 3 последовательных дней. Голодание, по-видимому, повышает регуляцию продукции мРНК CYP2E1 в клетках печени, в то время как алкоголь, по-видимому, стабилизирует сам фермент после трансляции и, таким образом, защищает его от деградации нормальными клеточными протеолитическими процессами, давая этим двум независимым синергетическим эффектам.
Деревья были генетически модифицированы для сверхэкспрессии фермента кролика CYP2E1. Эти трансгенные деревья использовались для удаления загрязняющих веществ из грунтовых вод, процесс, известный как фиторемедиация . [37]