stringtranslate.com

Эффекторная нуклеаза, подобная активатору транскрипции

Рисунок с заполнением пространства димерного слияния TALE-FokI (синий: TALE; зеленый: FokI), связанного с ДНК ( PDB : 1FOK, 3UGM ), Дэвид Гудселл

Эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции ( TALEN ), представляют собой рестрикционные ферменты , которые могут быть сконструированы для разрезания определенных последовательностей ДНК. Они производятся путем слияния ДНК-связывающего домена эффектора TAL с доменом расщепления ДНК ( нуклеазой , которая разрезает цепи ДНК). Эффекторы, подобные активаторам транскрипции (TALE), могут быть сконструированы для связывания практически с любой желаемой последовательностью ДНК, поэтому при сочетании с нуклеазой ДНК может быть разрезана в определенных местах. [1] Рестрикционные ферменты могут быть введены в клетки для использования при редактировании генов или для редактирования генома in situ , метод, известный как редактирование генома с помощью сконструированных нуклеаз . Наряду с нуклеазами с цинковыми пальцами и CRISPR/Cas9 , TALEN является выдающимся инструментом в области редактирования генома .

ДНК-связывающий домен TALE

Эффекторы TAL — это белки, которые секретируются бактериями Xanthomonas через их систему секреции типа III , когда они заражают растения . [2] Домен связывания ДНК содержит повторяющуюся высококонсервативную последовательность из 33–34 аминокислот с расходящимися 12-й и 13-й аминокислотами. Эти две позиции, называемые повторяющимися вариабельными остатками (RVD), являются высоковариабельными и показывают сильную корреляцию со специфическим распознаванием нуклеотидов . [3] [4] Эта прямая связь между аминокислотной последовательностью и распознаванием ДНК позволила разработать специфические домены связывания ДНК путем выбора комбинации повторяющихся сегментов, содержащих соответствующие RVD. [1] Примечательно, что небольшие изменения в RVD и включение «нетрадиционных» последовательностей RVD могут улучшить специфичность нацеливания. [5]

Домен расщепления ДНК

Неспецифический домен расщепления ДНК с конца эндонуклеазы FokI может быть использован для построения гибридных нуклеаз , которые активны в дрожжевом анализе. [6] [7] Эти реагенты также активны в растительных клетках [8] [9] и в клетках животных. [9] [10] [11] [12] Первоначальные исследования TALEN использовали домен расщепления FokI дикого типа, но некоторые последующие исследования TALEN [11] [13] [14] также использовали варианты домена расщепления FokI с мутациями, предназначенными для улучшения специфичности расщепления [15] [16] и активности расщепления. [17] Домен FokI функционирует как димер, требуя двух конструкций с уникальными доменами связывания ДНК для участков в целевом геноме с правильной ориентацией и расстоянием. Как число аминокислотных остатков между доменом связывания ДНК TALE и доменом расщепления FokI, так и число оснований между двумя отдельными сайтами связывания TALEN, по-видимому, являются важными параметрами для достижения высоких уровней активности. [10] [18]

Инженерные конструкции TALEN

Простая связь между аминокислотной последовательностью и распознаванием ДНК связывающего домена TALE позволяет эффективно конструировать белки. В этом случае искусственный синтез генов проблематичен из-за неправильного отжига повторяющейся последовательности, обнаруженной в связывающем домене TALE. [19] Одним из решений этой проблемы является использование общедоступной программы (DNAWorks [20] ) для расчета олигонуклеотидов, подходящих для сборки в двухэтапной сборке олигонуклеотидов ПЦР с последующей амплификацией всего гена. Также сообщалось о ряде модульных схем сборки для создания сконструированных конструкций TALE. [9] [19] [21] [22] [23] [24] Оба метода предлагают систематический подход к конструированию связывающих доменов ДНК, который концептуально похож на метод модульной сборки для создания доменов распознавания ДНК цинковых пальцев .

Рабочий процесс редактирования генома вашего любимого гена (YFG) с использованием TALEN. Целевая последовательность идентифицируется, соответствующая последовательность TALEN конструируется и вставляется в плазмиду. Плазмида вставляется в целевую клетку, где она транслируется для получения функционального TALEN, который проникает в ядро, связывается и расщепляет целевую последовательность. В зависимости от приложения это может использоваться для внесения ошибки (для нокаута целевого гена) или для введения новой последовательности ДНК в целевой ген.

Трансфекция

После сборки конструкций TALEN они вставляются в плазмиды ; затем клетки-мишени трансфицируются плазмидами, а продукты генов экспрессируются и попадают в ядро ​​для доступа к геному. В качестве альтернативы конструкции TALEN могут быть доставлены в клетки в виде мРНК, что исключает возможность геномной интеграции белка, экспрессирующего TALEN. Использование вектора мРНК также может значительно повысить уровень гомологически направленной репарации (HDR) и успешность интрогрессии во время редактирования генов.

Редактирование генома

Механизмы

TALEN можно использовать для редактирования геномов путем индукции двухцепочечных разрывов (DSB), на которые клетки реагируют механизмами репарации.

Негомологичное соединение концов (NHEJ) напрямую лигирует ДНК с любой стороны двухцепочечного разрыва, где перекрытие последовательностей для отжига очень мало или отсутствует. Этот механизм репарации вызывает ошибки в геноме через индели (вставки или делеции) или хромосомную перестройку; любые такие ошибки могут сделать генные продукты, закодированные в этом месте, нефункциональными. [10] Поскольку эта активность может варьироваться в зависимости от вида, типа клетки, целевого гена и используемой нуклеазы, ее следует контролировать при разработке новых систем. Можно запустить простой анализ гетеродуплексного расщепления, который обнаруживает любые различия между двумя аллелями, амплифицированными с помощью ПЦР. Продукты расщепления можно визуализировать на простых агарозных гелях или системах гелевых пластин.

В качестве альтернативы ДНК может быть введена в геном посредством NHEJ в присутствии экзогенных двухцепочечных фрагментов ДНК. [10]

Репарация, направленная на гомологию, также может вводить чужеродную ДНК в DSB, поскольку трансфицированные двухцепочечные последовательности используются в качестве матриц для ферментов репарации. [10]

Приложения

TALEN использовался для эффективной модификации геномов растений, [25] создавая экономически важные продовольственные культуры с благоприятными питательными качествами. [26] Они также были использованы для разработки инструментов для производства биотоплива . [27] Кроме того, он использовался для разработки стабильно модифицированных человеческих эмбриональных стволовых клеток и клонов индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) и линий человеческих эритроидных клеток, [11] [28] для создания нокаутированных C. elegans , [12] нокаутированных крыс , [13] нокаутированных мышей, [29] и нокаутированных данио-рерио . [14] [30] Более того, этот метод можно использовать для создания нокаутированных организмов. Ву и др. получили нокаутированный крупный рогатый скот Sp110 с помощью никаз Тален для индукции повышенной устойчивости к туберкулезу. [31] Этот подход также использовался для создания нокаутированных крыс с помощью микроинъекции мРНК TALEN в одноклеточные эмбрионы. [32]

TALEN также использовался экспериментально для исправления генетических ошибок, лежащих в основе заболеваний. [33] Например, он использовался in vitro для исправления генетических дефектов, вызывающих такие заболевания, как серповидноклеточная анемия , [28] [34] пигментная ксеродерма , [35] и буллезный эпидермолиз . [36] Недавно было показано, что TALEN можно использовать в качестве инструмента для задействования иммунной системы в борьбе с раком; опосредованное TALEN нацеливание может генерировать Т-клетки, устойчивые к химиотерапевтическим препаратам и демонстрирующие противоопухолевую активность. [37] [38]

Теоретически, специфичность генома сконструированных слияний TALEN позволяет исправлять ошибки в отдельных генетических локусах посредством гомологически-направленного восстановления с правильного экзогенного шаблона. [33] Однако в реальности применение TALEN in situ в настоящее время ограничено отсутствием эффективного механизма доставки, неизвестными иммуногенными факторами и неопределенностью в специфичности связывания TALEN. [33]

Другим новым применением TALEN является его способность сочетаться с другими инструментами генной инженерии, такими как мегануклеазы . Область связывания ДНК эффектора TAL может быть объединена с доменом расщепления мегануклеазы для создания гибридной архитектуры, сочетающей простоту проектирования и высокоспецифичную активность связывания ДНК эффектора TAL с низкой частотой сайтов и специфичностью мегануклеазы. [39]

По сравнению с другими методами редактирования генома, TALEN находится посередине с точки зрения сложности и стоимости. В отличие от ZFN , TALEN распознает отдельные нуклеотиды. Гораздо проще спроектировать взаимодействия между доменами связывания ДНК TALEN и их целевыми нуклеотидами, чем создавать взаимодействия с ZFN и их целевыми триплетами нуклеотидов. [40] С другой стороны, CRISPR полагается на образование рибонуклеотидного комплекса вместо распознавания белка/ДНК. gRNAs [ необходимо определение ] иногда имеют ограничения относительно осуществимости из-за отсутствия участков PAM [ необходимо определение ] в целевой последовательности, и хотя их можно дешево производить, текущая разработка привела к значительному снижению стоимости TALEN, так что они находятся в аналогичном ценовом и временном диапазоне, как и редактирование генома на основе CRISPR [ необходимо разъяснение ] .

Точность эффекторной нуклеазы TAL

Нецелевая активность активной нуклеазы может привести к нежелательным разрывам двухцепочечных молекул и, следовательно, к хромосомным перестройкам и/или гибели клеток. Были проведены исследования для сравнения относительной токсичности, связанной с нуклеазой, доступных технологий. На основании этих исследований [18] и максимального теоретического расстояния между связыванием ДНК и активностью нуклеазы, конструкции TALEN считаются наиболее точными из имеющихся в настоящее время технологий. [41]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ ab Boch J (февраль 2011 г.). «TALEs of genome targeting». Nature Biotechnology . 29 (2): 135–6. doi :10.1038/nbt.1767. PMID  21301438. S2CID  304571.
  2. ^ Boch J, Bonas U (сентябрь 2010 г.). «Эффекторы семейства Xanthomonas AvrBs3 III типа: открытие и функция». Annual Review of Phytopathology . 48 : 419–36. doi :10.1146/annurev-phyto-080508-081936. PMID  19400638.
  3. ^ Boch J, Scholze H, Schornack S, Landgraf A, Hahn S, Kay S, Lahaye T, Nickstadt A, Bonas U (декабрь 2009 г.). «Нарушение кода специфичности связывания ДНК эффекторов TAL-типа III». Science . 326 (5959): 1509–12. Bibcode :2009Sci...326.1509B. doi :10.1126/science.1178811. PMID  19933107. S2CID  206522347.
  4. ^ Moscou MJ, Bogdanove AJ (декабрь 2009 г.). «Простой шифр управляет распознаванием ДНК эффекторами TAL». Science . 326 (5959): 1501. Bibcode :2009Sci...326.1501M. doi :10.1126/science.1178817. PMID  19933106. S2CID  6648530.
  5. ^ Жюйера А, Пессеро С, Дюбуа Г, Гюйо В, Марешаль А, Валтон Дж, Дабусси Ф, Пуаро Л, Дюклер А, Дюшато П (январь 2015 г.). «Оптимизированная настройка специфичности TALEN с использованием нетрадиционных РВД». Научные отчеты . 5 : 8150. Бибкод : 2015NatSR...5.8150J. дои : 10.1038/srep08150. ПМЦ 4311247 . ПМИД  25632877. 
  6. ^ Christian M, Cermak T, Doyle EL, Schmidt C, Zhang F, Hummel A, Bogdanove AJ, Voytas DF (октябрь 2010 г.). «Нацеливание на двухцепочечные разрывы ДНК с помощью эффекторных нуклеаз TAL». Genetics . 186 (2): 757–61. doi :10.1534/genetics.110.120717. PMC 2942870 . PMID  20660643. 
  7. ^ Li T, Huang S, Jiang WZ, Wright D, Spalding MH, Weeks DP, Yang B (январь 2011 г.). "TAL нуклеазы (TALN): гибридные белки, состоящие из эффекторов TAL и домена расщепления ДНК FokI". Nucleic Acids Research . 39 (1): 359–72. doi :10.1093/nar/gkq704. PMC 3017587 . PMID  20699274. 
  8. ^ Mahfouz MM, Li L, Shamimuzzaman M, Wibowo A, Fang X, Zhu JK (февраль 2011 г.). «De novo-engineered transcription activator-like effector (TALE) hybrid nuclease with novel DNA binding specity makes double-strand breaks». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 108 (6): 2623–8. Bibcode : 2011PNAS..108.2623M. doi : 10.1073/pnas.1019533108 . PMC 3038751. PMID  21262818 . 
  9. ^ abc Cermak T, Doyle EL, Christian M, Wang L, Zhang Y, Schmidt C, Baller JA, Somia NV, Bogdanove AJ, Voytas DF (июль 2011 г.). "Эффективное проектирование и сборка пользовательских конструкций TALEN и других эффекторных конструкций TAL для нацеливания ДНК". Nucleic Acids Research . 39 (12): e82. doi :10.1093/nar/gkr218. PMC 3130291. PMID 21493687  . 
  10. ^ abcde Miller JC, Tan S, Qiao G, Barlow KA, Wang J, Xia DF, Meng X, Paschon DE, Leung E, Hinkley SJ, Dulay GP, Hua KL, Ankoudinova I, Cost GJ, Urnov FD, Zhang HS, Holmes MC, Zhang L, Gregory PD, Rebar EJ (февраль 2011 г.). "Архитектура нуклеазы TALE для эффективного редактирования генома". Nature Biotechnology . 29 (2): 143–8. doi :10.1038/nbt.1755. PMID  21179091. S2CID  53549397.
  11. ^ abc Hockemeyer D, Wang H, Kiani S, Lai CS, Gao Q, Cassady JP, Cost GJ, Zhang L, Santiago Y, Miller JC, Zeitler B, Cherone JM, Meng X, Hinkley SJ, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD, Jaenisch R (июль 2011 г.). "Генетическая инженерия человеческих плюрипотентных клеток с использованием нуклеаз TALE". Nature Biotechnology . 29 (8): 731–4. doi :10.1038/nbt.1927. PMC 3152587 . PMID  21738127. 
  12. ^ ab Wood AJ, Lo TW, Zeitler B, Pickle CS, Ralston EJ, Lee AH, Amora R, Miller JC, Leung E, Meng X, Zhang L, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD, Meyer BJ (июль 2011 г.). "Целевое редактирование генома у разных видов с использованием ZFN и TALEN". Science . 333 (6040): 307. Bibcode :2011Sci...333..307W. doi :10.1126/science.1207773. PMC 3489282 . PMID  21700836. 
  13. ^ ab Tesson L, Usal C, Ménoret S, Leung E, Niles BJ, Remy S, Santiago Y, Vincent AI, Meng X, Zhang L, Gregory PD, Anegon I, Cost GJ (август 2011 г.). «Крысы с нокаутом, полученные путем микроинъекции эмбрионов TALEN». Nature Biotechnology . 29 (8): 695–6. doi : 10.1038/nbt.1940 . PMID  21822240.
  14. ^ ab Huang P, Xiao A, Zhou M, Zhu Z, Lin S, Zhang B (август 2011 г.). «Нацеливание наследуемых генов у данио-рерио с использованием индивидуальных TALEN». Nature Biotechnology . 29 (8): 699–700. doi :10.1038/nbt.1939. PMID  21822242. S2CID  28802632.
  15. ^ Doyon Y, Vo TD, Mendel MC, Greenberg SG, Wang J, Xia DF, Miller JC, Urnov FD, Gregory PD, Holmes MC (январь 2011 г.). «Усиление активности цинковых пальцев нуклеазы с улучшенными облигатными гетеродимерными архитектурами». Nature Methods . 8 (1): 74–9. doi :10.1038/nmeth.1539. PMID  21131970. S2CID  14334237.
  16. ^ Szczepek M, Brondani V, Büchel J, Serrano L, Segal DJ, Cathomen T (июль 2007 г.). «Структурная перестройка интерфейса димеризации снижает токсичность нуклеаз с цинковыми пальцами» (PDF) . Nature Biotechnology . 25 (7): 786–93. doi :10.1038/nbt1317. PMID  17603476. S2CID  22079561.
  17. ^ Guo J, Gaj T, Barbas CF (июль 2010 г.). «Направленная эволюция улучшенного и высокоэффективного домена расщепления FokI для нуклеаз цинковых пальцев». Журнал молекулярной биологии . 400 (1): 96–107. doi : 10.1016/j.jmb.2010.04.060. PMC 2885538. PMID  20447404. 
  18. ^ ab Mussolino C, Morbitzer R, Lütge F, Dannemann N, Lahaye T, Cathomen T (ноябрь 2011 г.). «Новый каркас нуклеазы TALE обеспечивает высокую активность редактирования генома в сочетании с низкой токсичностью». Nucleic Acids Research . 39 (21): 9283–93. doi :10.1093/nar/gkr597. PMC 3241638 . PMID  21813459. 
  19. ^ ab Zhang F, Cong L, Lodato S, Kosuri S, Church GM, Arlotta P (февраль 2011 г.). «Эффективное построение специфичных для последовательности эффекторов TAL для модуляции транскрипции млекопитающих». Nature Biotechnology . 29 (2): 149–53. doi :10.1038/nbt.1775. PMC 3084533 . PMID  21248753. 
  20. ^ Hoover D (2012). «Использование DNAWorks в разработке олигонуклеотидов для синтеза генов на основе ПЦР». Синтез генов . Методы в молекулярной биологии. Т. 852. С. 215–23. doi :10.1007/978-1-61779-564-0_16. ISBN 978-1-61779-563-3. PMID  22328436.
  21. ^ Morbitzer R, Elsaesser J, Hausner J, Lahaye T (июль 2011 г.). «Сборка пользовательских доменов связывания ДНК типа TALE с помощью модульного клонирования». Nucleic Acids Research . 39 (13): 5790–9. doi :10.1093/nar/gkr151. PMC 3141260. PMID  21421566 . 
  22. ^ Li T, Huang S, Zhao X, Wright DA, Carpenter S, Spalding MH, Weeks DP, Yang B (август 2011 г.). «Модульно собранные дизайнерские TAL-эффекторные нуклеазы для целевого нокаута генов и замены генов у эукариот». Nucleic Acids Research . 39 (14): 6315–25. doi :10.1093/nar/gkr188. PMC 3152341. PMID  21459844. 
  23. ^ Geissler R, Scholze H, Hahn S, Streubel J, Bonas U, Behrens SE, Boch J (2011). Shiu SH (ред.). «Транскрипционные активаторы человеческих генов с программируемой ДНК-специфичностью». PLOS ONE . 6 (5): e19509. Bibcode : 2011PLoSO...619509G. doi : 10.1371/journal.pone.0019509 . PMC 3098229. PMID  21625585 . 
  24. ^ Вебер Э., Грюцнер Р., Вернер С., Энглер К., Мариллонне С. (2011). Бендахман М. (ред.). «Сборка дизайнерских эффекторов TAL с помощью клонирования Golden Gate». PLOS ONE . 6 (5): e19722. Bibcode : 2011PLoSO...619722W. doi : 10.1371/journal.pone.0019722 . PMC 3098256. PMID  21625552 . 
  25. ^ Zhang Y, Zhang F, Li X, Baller JA, Qi Y, Starker CG, Bogdanove AJ, Voytas DF (январь 2013 г.). «Эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции, обеспечивают эффективную инженерию генома растений». Физиология растений . 161 (1): 20–7. doi :10.1104/pp.112.205179. PMC 3532252. PMID  23124327 . 
  26. ^ Haun W, Coffman A, Clasen BM, Demorest ZL, Lowy A, Ray E, Retterath A, Stoddard T, Juillerat A, Cedrone F, Mathis L, Voytas DF, Zhang F (сентябрь 2014 г.). «Улучшение качества соевого масла путем направленного мутагенеза семейства генов десатуразы жирных кислот 2». Plant Biotechnology Journal . 12 (7): 934–40. doi : 10.1111/pbi.12201 . PMID  24851712.
  27. ^ Daboussi F, Leduc S, Maréchal A, Dubois G, Guyot V, Perez-Michaut C, Amato A, Falciatore A, Juillerat A, Beurdeley M, Voytas DF, Cavarec L, Duchateau P (май 2014 г.). «Геномная инженерия расширяет возможности диатомовых водорослей Phaeodactylum tricornutum для биотехнологий». Nature Communications . 5 : 3831. Bibcode :2014NatCo...5.3831D. doi : 10.1038/ncomms4831 . PMID  24871200.
  28. ^ ab Wienert B, Funnell AP, Norton LJ, Pearson RC, Wilkinson-White LE, Lester K, Vadolas J, Porteus MH, Matthews JM, Quinlan KG, Crossley M (2015). «Редактирование генома для введения полезной естественной мутации, связанной с повышенным уровнем фетального глобина». Nature Communications . 6 : 7085. Bibcode : 2015NatCo...6.7085W. doi : 10.1038/ncomms8085 . PMID  25971621.
  29. ^ Davies B, Davies G, Preece C, Puliyadi R, Szumska D, Bhattacharya S (2013). "Сайт-специфическая мутация локуса Zic2 с помощью микроинъекции мРНК TALEN в мышиные ооциты CD1, C3H и C57BL/6J". PLOS ONE . ​​8 (3): e60216. Bibcode :2013PLoSO...860216D. doi : 10.1371/journal.pone.0060216 . PMC 3610929 . PMID  23555929. 
  30. ^ Sander JD, Cade L, Khayter C, Reyon D, Peterson RT, Joung JK, Yeh JR (август 2011 г.). «Целевое нарушение генов в соматических клетках данио-рерио с использованием сконструированных TALEN». Nature Biotechnology . 29 (8): 697–8. doi :10.1038/nbt.1934. PMC 3154023. PMID  21822241 . 
  31. ^ Wu H, Wang Y, Zhang Y, Yang M, Lv J, Liu J, Zhang Y (март 2015 г.). "TALE nickase-mediated SP110 knockin наделяет крупный рогатый скот повышенной устойчивостью к туберкулезу". Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 112 (13): E1530-9. Bibcode : 2015PNAS..112E1530W. doi : 10.1073/pnas.1421587112 . PMC 4386332. PMID  25733846 . 
  32. ^ Понсе де Леон V, Мерийя AM, Тессон Л, Анегон I, Хаммлер Э (2014). «Поколение крыс с нокаутом GRdim, опосредованных TALEN, путем гомологичной рекомбинации». ПЛОС ОДИН . 9 (2): e88146. Бибкод : 2014PLoSO...988146P. дои : 10.1371/journal.pone.0088146 . ПМЦ 3921256 . ПМИД  24523878. 
  33. ^ abc Carlson DF, Fahrenkrug SC, Hackett PB (январь 2012 г.). «Нацеливание ДНК с помощью пальцев и TALEN». Молекулярная терапия: нуклеиновые кислоты . 1 (3): e3. doi :10.1038/mtna.2011.5. PMC 3381595. PMID  23344620 . 
  34. ^ Рамалингам С., Анналуру Н., Кандавелоу К., Чандрасегаран С. (2014). «TALEN-опосредованное образование и генетическая коррекция специфичных для заболевания человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток». Current Gene Therapy . 14 (6): 461–72. doi :10.2174/1566523214666140918101725. PMID  25245091.
  35. ^ Дюпюи А, Валтон Дж, Ледюк С, Армье Дж, Галетто Р, Губль А, Лебухотель С, Старый А, Пакес Ф, Дюшато П, Сарасин А, Дабусси Ф (2013). «Направленная генная терапия клеток пигментной ксеродермы с использованием мегануклеазы и TALEN™». ПЛОС ОДИН . 8 (11): е78678. Бибкод : 2013PLoSO...878678D. дои : 10.1371/journal.pone.0078678 . ПМЦ 3827243 . ПМИД  24236034. 
  36. ^ Осборн М.Дж., Старкер К.Г., МакЭлрой А.Н., Уэббер Б.Р., Риддл М.Дж., Ся Л., ДеФео А.П., Габриэль Р., Шмидт М., фон Калле С., Карлсон Д.Ф., Мэдер М.Л., Йонг Дж.К., Вагнер Дж.Э., Войтас Д.Ф., Блазар Б.Р., Толар Дж. (июнь 2013 г.). «Генная коррекция буллезного эпидермолиза на основе TALEN». Молекулярная терапия . 21 (6): 1151–9. дои : 10.1038/м.2013.56. ПМЦ 3677309 . ПМИД  23546300. 
  37. ^ Valton J, Guyot V, Marechal A, Filhol JM, Juillerat A, Duclert A, Duchateau P, Poirot L (сентябрь 2015 г.). «Многокомпонентная лекарственно-устойчивая сконструированная CAR T-клетка для аллогенной комбинированной иммунотерапии». Молекулярная терапия . 23 (9): 1507–18. doi :10.1038/mt.2015.104. PMC 4817890. PMID  26061646 . 
  38. ^ Poirot L, Philip B, Schiffer-Mannioui C, Le Clerre D, Chion-Sotinel I, Derniame S, Potrel P, Bas C, Lemaire L, Galetto R, Lebuhotel C, Eyquem J, Cheung GW, Duclert A, Gouble A, Arnould S, Peggs K, Pule M, Scharenberg AM, Smith J (сентябрь 2015 г.). «Платформа для производства мультиплексных геномно-редактированных Т-клеток для «готовых» адаптивных Т-клеточных иммунотерапий». Cancer Research . 75 (18): 3853–64. doi : 10.1158/0008-5472.CAN-14-3321 . PMID  26183927.
  39. ^ Boissel S, Jarjour J, Astrakhan A, Adey A, Gouble A, Duchateau P, Shendure J, Stoddard BL, Certo MT, Baker D, Scharenberg AM (февраль 2014 г.). "megaTALs: a rare-cleaving nuclease architecture for therapeutic genome engineering". Nucleic Acids Research . 42 (4): 2591–601. doi : 10.1093/nar/gkt1224. PMC 3936731. PMID  24285304. 
  40. ^ «Плюсы и минусы ZFNS, TALENS и CRISPR/CAS». Лаборатория Джексона . Март 2014 г.
  41. ^ Больоли, Элси; Ричард, Магали. «Boston Consulting Group — Отчет о точности редактирования генов» (PDF) .

Внешние ссылки