Биолюминесцентный ответ на локальный Ca2+ после внутрибрюшинной инъекции рекомбинантного tdTA анестезированной мыши. Наложение изображения отражения мыши (в оттенках серого) и Ca2+ Показана индуцированная биолюминесценция (красный псевдоцвет).
Красный флуоресцентный белок ( RFP ) — это белок , который действует как флуорофор , флуоресцируя красно-оранжевым цветом при возбуждении. Первоначальный вариант встречается в природе в кораллах рода Discosoma и называется DsRed . Несколько новых вариантов были разработаны с использованием направленного мутагенеза [1], которые флуоресцируют оранжевым, красным и дальним красным цветом. [2]
Характеристики и свойства
Подобно GFP и другим флуоресцентным белкам, RFP представляет собой белок в форме бочки, состоящий в основном из мотивов β-листов ; этот тип белковой укладки обычно называют β-бочкой .
Масса RFP составляет приблизительно 25,9 кДа. Максимум его возбуждения составляет 558 нм, а максимум его испускания — 583 нм. [3]
Приложения
RFP часто используется в молекулярно-биологических исследованиях в качестве флуоресцентного маркера для различных целей. Было показано, что DsRed более подходит для оптических методов визуализации, чем EGFP . [4]
Проблемы с флуоресцентными белками включают длительность периода между синтезом белка и проявлением флуоресценции. DsRed имеет время созревания около 24 часов, [1] что делает его непригодным для экспериментов, которые проводятся в течение более короткого периода времени. Кроме того, DsRed существует в тетрамерной форме, что может влиять на функцию белков, к которым он присоединен. Генная инженерия улучшила полезность RFP, увеличив скорость развития флуоресценции и создав мономерные варианты. [3] [5] Улучшенные варианты RFP включают варианты mFruits ( mCherry , mOrange, mRaspberry), mKO, TagRFP, mKate, mRuby, FusionRed, mScarlet и DsRed-Express. [5] [6]
^ ab Bevis, Brooke J.; Glick, Benjamin S. (2002). «Быстро созревающие варианты красного флуоресцентного белка Discosoma (DsRed)». Nature Biotechnology . 20 (1): 83–87. doi :10.1038/nbt0102-83. ISSN 1546-1696. PMID 11753367. S2CID 20320166.
^ Мияваки, Ацуши; Щербакова, Дарья М; Верхуша, Владислав В (октябрь 2012 г.). «Красные флуоресцентные белки: формирование хромофора и клеточные применения». Current Opinion in Structural Biology . 22 (5): 679–688. doi :10.1016/j.sbi.2012.09.002. ISSN 0959-440X. PMC 3737244. PMID 23000031 .
^ ab Remington, S. James (1 января 2002 г.). «Преодоление препятствий на пути к флуоресценции». Nature Biotechnology . 20 (1): 28–29. doi :10.1038/nbt0102-28. PMID 11753356. S2CID 37021603.
^ Бём И., Герке С., Клеб Б., Хунгербюлер М., Мюллер Р., Клозе К. Дж., Альфке Х. (2019). «Мониторинг опухолевой нагрузки in vivo с помощью оптической визуализации в мышиной модели ксенотрансплантата SCID: оценка двух флуоресцентных белков суперсемейства GFP». Acta Radiol . 60 (3): 315–326. doi :10.1177/0284185118780896. PMID 29890843. S2CID 48353442.
^ abc Piatkevich, Kiryl D.; Verkhusha, Vladislav V. (2011). "Руководство по красным флуоресцентным белкам и биосенсорам для проточной цитометрии". Методы в клеточной биологии . 102 : 431–461. doi :10.1016/B978-0-12-374912-3.00017-1. ISBN9780123749123. ISSN 0091-679X. PMC 3987785 . PMID 21704849.
^ Bindels, Daphne S; Haarbosch, Lindsay (2017). "mScarlet: яркий мономерный красный флуоресцентный белок для клеточной визуализации". Nature Methods . 14 (1): 53–56. doi :10.1038/nmeth.4074. ISSN 1548-7105. PMID 27869816. S2CID 3539874.
