Реакция биолюминесценции на локальный Ca2+ после внутрибрюшинного введения рекомбинантного tdTA анестезированной мыши. Наложение изображения отражения мыши (в оттенках серого) и Ca2+ Показана -индуцированная биолюминесценция (красный псевдоцвет).
Красный флуоресцентный белок ( RFP ) представляет собой флуорофор , который при возбуждении флуоресцирует красно-оранжевым цветом. С помощью направленного мутагенеза было разработано несколько вариантов . [1] Оригинал был выделен из Discosoma и назван DsRed . Сейчас доступны другие, которые флуоресцируют оранжевым, красным и дальним красным светом. [2]
RFP составляет примерно 25,9 кДа. Максимум возбуждения составляет 558 нм, максимум излучения — 583 нм. [3]
Проблемы с флуоресцентными белками включают продолжительность времени между синтезом белка и проявлением флуоресценции. Время созревания DsRed составляет около 24 часов [1] , что может сделать его непригодным для многих экспериментов, проводимых в более короткие сроки. Кроме того, DsRed существует в тетрамерной форме, что может влиять на функцию белков, к которым он прикреплен. Генная инженерия повысила полезность RFP за счет увеличения скорости развития флуоресценции и создания мономерных вариантов. [3] [4] Улучшенные варианты RFP включают mFruits ( mCherry , mOrange, mRaspberry), mKO, TagRFP, mKate, mRuby, FusionRed, mScarlet и DsRed-Express. [4] [5]
Было показано, что DsRed более подходит для оптических методов визуализации, чем EGFP . [6]
Рекомендации
^ аб Бевис, Брук Дж.; Глик, Бенджамин С. (2002). «Быстро созревающие варианты красного флуоресцентного белка Discosoma (DsRed)». Природная биотехнология . 20 (1): 83–87. дои : 10.1038/nbt0102-83. ISSN 1546-1696. PMID 11753367. S2CID 20320166.
^ Мияваки, Ацуши; Щербакова Дарья М; Верхуша, Владислав В (октябрь 2012 г.). «Красные флуоресцентные белки: образование хромофора и клеточное применение». Современное мнение в области структурной биологии . 22 (5): 679–688. дои : 10.1016/j.sbi.2012.09.002. ISSN 0959-440X. ПМЦ 3737244 . ПМИД 23000031.
^ ab Remington, С. Джеймс (1 января 2002 г.). «Преодоление лежачих полицейских до флуоресценции». Природная биотехнология . 20 (1): 28–29. дои : 10.1038/nbt0102-28. PMID 11753356. S2CID 37021603.
^ abc Пяткевич, Кирилл Д.; Верхуша, Владислав В. (2011). «Руководство по красным флуоресцентным белкам и биосенсорам для проточной цитометрии». Методы клеточной биологии . 102 : 431–461. дои : 10.1016/B978-0-12-374912-3.00017-1. ISBN9780123749123. ISSN 0091-679X. ПМЦ 3987785 . ПМИД 21704849.
^ Бём И, Герке С, Клеб Б, Хунгербюлер М, Мюллер Р, Клозе К.Дж., Альфке Х (2019). «Мониторинг опухолевой нагрузки in vivo с помощью оптической визуализации на мышиной модели ксенотрансплантата SCID: оценка двух флуоресцентных белков суперсемейства GFP». Акта Радиол . 60 (3): 315–326. дои : 10.1177/0284185118780896. PMID 29890843. S2CID 48353442.