stringtranslate.com

Рекомбинантная ДНК

Конструкция рекомбинантной ДНК, в которой чужеродный фрагмент ДНК вставляется в плазмидный вектор. В этом примере ген, обозначенный белым цветом, инактивируется при вставке чужеродного фрагмента ДНК.

Молекулы рекомбинантной ДНК ( рДНК ) — это молекулы ДНК , образованные лабораторными методами генетической рекомбинации (такими как молекулярное клонирование ), которые объединяют генетический материал из нескольких источников, создавая последовательности , которые в противном случае не были бы обнаружены в геноме .

Рекомбинантная ДНК — это общее название фрагмента ДНК, созданного путем объединения двух или более фрагментов из разных источников. Рекомбинантная ДНК возможна, поскольку молекулы ДНК всех организмов имеют одинаковую химическую структуру, отличающуюся только последовательностью нуклеотидов . Рекомбинантные молекулы ДНК иногда называют химерной ДНК , поскольку они могут быть изготовлены из материала двух разных видов, например мифической химеры . Технология рДНК использует палиндромные последовательности и приводит к образованию липких и тупых концов .

Последовательности ДНК, используемые при построении рекомбинантных молекул ДНК, могут происходить из любого вида . Например, ДНК растений может быть соединена с ДНК бактерий, а ДНК человека может быть соединена с ДНК грибов. Кроме того, последовательности ДНК, которые не встречаются нигде в природе, могут быть созданы путем химического синтеза ДНК и включены в молекулы рекомбинантной ДНК. Используя технологию рекомбинантной ДНК и синтетическую ДНК, можно создать любую последовательность ДНК и ввести ее в живые организмы.

Белки, которые могут быть результатом экспрессии рекомбинантной ДНК в живых клетках, называются рекомбинантными белками . Когда рекомбинантная ДНК, кодирующая белок, вводится в организм-хозяин, рекомбинантный белок не обязательно производится. [1] Экспрессия чужеродных белков требует использования специализированных векторов экспрессии и часто требует значительной реструктуризации чужеродными кодирующими последовательностями. [2]

Рекомбинантная ДНК отличается от генетической рекомбинации тем, что первая является результатом искусственных методов, тогда как вторая представляет собой нормальный биологический процесс, который приводит к ремиксу существующих последовательностей ДНК практически во всех организмах.

Производство

Молекулярное клонирование — это лабораторный процесс, используемый для получения рекомбинантной ДНК. [3] [4] [5] [6] Это один из двух наиболее широко используемых методов, наряду с полимеразной цепной реакцией (ПЦР), используемый для управления репликацией любой конкретной последовательности ДНК, выбранной экспериментатором. Между методами есть два фундаментальных различия. Одно из них заключается в том, что молекулярное клонирование включает репликацию ДНК внутри живой клетки, в то время как ПЦР реплицирует ДНК в пробирке, свободной от живых клеток. Другое различие заключается в том, что клонирование включает вырезание и вставку последовательностей ДНК, в то время как ПЦР амплифицирует путем копирования существующей последовательности.

Для формирования рекомбинантной ДНК требуется вектор клонирования , молекула ДНК, которая реплицируется внутри живой клетки. Векторы обычно получаются из плазмид или вирусов и представляют собой относительно небольшие сегменты ДНК, которые содержат необходимые генетические сигналы для репликации, а также дополнительные элементы для удобства вставки чужеродной ДНК, идентификации клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, и, при необходимости, экспрессии чужеродной ДНК. Выбор вектора для молекулярного клонирования зависит от выбора организма-хозяина, размера клонируемой ДНК, а также от того, будет ли и как будет экспрессироваться чужеродная ДНК. [7] Сегменты ДНК можно объединять с помощью различных методов, таких как клонирование с помощью фермента рестрикции/лигазы или сборка Гибсона . [ требуется цитата ]

В стандартных протоколах клонирования клонирование любого фрагмента ДНК по сути включает семь этапов: (1) выбор организма-хозяина и вектора клонирования, (2) подготовка векторной ДНК, (3) подготовка ДНК для клонирования, (4) создание рекомбинантной ДНК, (5) введение рекомбинантной ДНК в организм-хозяин, (6) отбор организмов, содержащих рекомбинантную ДНК, и (7) скрининг клонов с желаемыми вставками ДНК и биологическими свойствами. [6] Эти этапы подробно описаны в соответствующей статье ( молекулярное клонирование ).

экспрессия ДНК

Экспрессия ДНК требует трансфекции подходящих клеток-хозяев. Обычно в качестве клеток-хозяев используются либо бактериальные, либо дрожжевые, либо клетки насекомых, либо млекопитающих (например, клетки эмбриональных почек человека или клетки CHO ). [8]

После трансплантации в организм хозяина чужеродная ДНК, содержащаяся в конструкции рекомбинантной ДНК, может быть или не быть экспрессирована . То есть ДНК может быть просто реплицирована без экспрессии, или она может быть транскрибирована и транслирована , и продуцируется рекомбинантный белок. Вообще говоря, экспрессия чужеродного гена требует реструктуризации гена для включения последовательностей, которые требуются для производства молекулы мРНК , которая может использоваться трансляционным аппаратом хозяина (например, промоутер , сигнал инициации трансляции и терминатор транскрипции ). [9] Для улучшения экспрессии эктопического гена могут быть внесены определенные изменения в организм хозяина. Кроме того, могут потребоваться изменения и в кодирующих последовательностях, чтобы оптимизировать трансляцию, сделать белок растворимым, направить рекомбинантный белок в надлежащее клеточное или внеклеточное местоположение и стабилизировать белок от деградации. [10] [11] [12]

Свойства организмов, содержащих рекомбинантную ДНК

В большинстве случаев организмы, содержащие рекомбинантную ДНК, имеют, по-видимому, нормальные фенотипы . То есть, их внешний вид, поведение и метаболизм обычно не изменяются, и единственный способ продемонстрировать наличие рекомбинантных последовательностей — это исследовать саму ДНК, как правило, с помощью теста полимеразной цепной реакции (ПЦР). [13] Существуют существенные исключения, которые обсуждаются ниже.

Если последовательности рДНК кодируют ген, который экспрессируется, то можно обнаружить присутствие РНК и/или белковых продуктов рекомбинантного гена, обычно с использованием методов ОТ-ПЦР или вестерн-гибридизации . [13] Грубые фенотипические изменения не являются нормой, если только рекомбинантный ген не был выбран и модифицирован таким образом, чтобы генерировать биологическую активность в организме хозяина. [14] Дополнительные фенотипы, которые встречаются, включают токсичность для организма хозяина, вызванную продуктом рекомбинантного гена, особенно если он сверхэкспрессирован или экспрессируется в неподходящих клетках или тканях. [ необходима цитата ]

В некоторых случаях рекомбинантная ДНК может иметь пагубные эффекты, даже если она не экспрессируется. Одним из механизмов, посредством которого это происходит, является инсерционная инактивация , при которой рДНК встраивается в ген клетки-хозяина. В некоторых случаях исследователи используют это явление для « выключения » генов с целью определения их биологической функции и важности. [15] Другим механизмом, посредством которого вставка рДНК в хромосомную ДНК может влиять на экспрессию генов, является ненадлежащая активация ранее неэкспрессированных генов клетки-хозяина. Это может произойти, например, когда фрагмент рекомбинантной ДНК, содержащий активный промотор, оказывается рядом с ранее молчащим геном клетки-хозяина или когда ген клетки-хозяина, который функционирует для ограничения экспрессии гена, подвергается инсерционной инактивации рекомбинантной ДНК. [ необходима цитата ]

Применение рекомбинантной ДНК

Рекомбинантная ДНК широко используется в биотехнологии , медицине и исследованиях . Сегодня рекомбинантные белки и другие продукты, полученные в результате использования ДНК-технологии, можно найти практически в каждой западной аптеке, кабинете врача или ветеринара, медицинской испытательной лаборатории и биологической исследовательской лаборатории. Кроме того, организмы, которые были изменены с использованием технологии рекомбинантной ДНК, а также продукты, полученные из этих организмов, нашли свой путь во многие фермы, супермаркеты , домашние аптечки и даже зоомагазины, например, те, где продают GloFish и других генетически модифицированных животных .

Наиболее распространенное применение рекомбинантной ДНК — это фундаментальные исследования, в которых эта технология важна для большинства современных работ в области биологических и биомедицинских наук. [13] Рекомбинантная ДНК используется для идентификации, картирования и секвенирования генов, а также для определения их функции. Зонды рДНК используются для анализа экспрессии генов в отдельных клетках и во всех тканях целых организмов. Рекомбинантные белки широко используются в качестве реагентов в лабораторных экспериментах и ​​для создания зондов антител для изучения синтеза белков в клетках и организмах. [4]

Множество дополнительных практических применений рекомбинантной ДНК можно найти в промышленности, производстве продуктов питания, медицине и ветеринарии, сельском хозяйстве и биоинженерии. [4] Некоторые конкретные примеры приведены ниже.

Рекомбинантный химозин

Химозин , обнаруженный в сычужном ферменте , является ферментом, ответственным за гидролиз κ - казеина для получения пара- κ -казеина и гликомакропептида , что является первым шагом в образовании сыра , а затем творога и сыворотки . [16] Это была первая генетически модифицированная пищевая добавка, используемая в коммерческих целях. Традиционно переработчики получали химозин из сычужного фермента, препарата, полученного из четвертого желудка телят, вскармливаемых молоком. Ученые спроектировали непатогенный штамм (K-12) бактерий E. coli для крупномасштабного лабораторного производства фермента. Этот микробиологически полученный рекомбинантный фермент, идентичный по структуре ферменту, полученному из телят, стоит дешевле и производится в больших количествах. Сегодня около 60% твердого сыра в США производится с использованием генетически модифицированного химозина. В 1990 году FDA предоставило химозину статус « общепризнанного как безопасный » (GRAS) на основании данных, показывающих, что фермент безопасен. [17]

Рекомбинантный человеческий инсулин

Рекомбинантный человеческий инсулин почти полностью заменил инсулин, полученный из животных источников (например, свиней и крупного рогатого скота) для лечения диабета 1 типа . Широко используются различные препараты рекомбинантного инсулина. [18] Рекомбинантный инсулин синтезируется путем вставки гена человеческого инсулина в E. coli или дрожжи (Saccharomyces cerevisiae) [19], которые затем производят инсулин для использования человеком. [20] Инсулин, вырабатываемый E. coli, требует дальнейших посттрансляционных модификаций (например, гликозилирования), тогда как дрожжи способны выполнять эти модификации сами в силу того, что являются более сложными организмами-хозяевами. Преимущество рекомбинантного человеческого инсулина заключается в том, что после хронического использования у пациентов не вырабатывается иммунная защита против него, как инсулин животного происхождения стимулирует иммунную систему человека. [21]

Рекомбинантный человеческийгормон роста(ГР, соматотропин)

Вводится пациентам, чьи гипофизы вырабатывают недостаточное количество гормона роста для поддержания нормального роста и развития. До того, как рекомбинантный ГР стал доступен, ГР для терапевтического использования получали из гипофизов трупов. Эта небезопасная практика привела к тому, что у некоторых пациентов развилась болезнь Крейтцфельдта-Якоба . Рекомбинантный ГР устранил эту проблему и теперь используется в терапевтических целях. [22] Он также использовался в качестве препарата для повышения производительности спортсменами и другими лицами. [23] [24]

Рекомбинантный фактор свертывания крови VIII

Это рекомбинантная форма фактора VIII , белка свертывания крови, который вводят пациентам с гемофилией , заболеванием, связанным с кровотечением , которые не способны вырабатывать фактор VIII в количествах, достаточных для поддержания нормального свертывания крови. [25] До разработки рекомбинантного фактора VIII белок получали путем обработки больших объемов человеческой крови от нескольких доноров, что несло очень высокий риск передачи инфекционных заболеваний, передающихся через кровь , например, ВИЧ и гепатита В.

Рекомбинантная вакцина против гепатита В

Инфекцию гепатита В можно успешно контролировать с помощью рекомбинантной субъединичной вакцины против гепатита В , которая содержит форму поверхностного антигена вируса гепатита В, который вырабатывается в дрожжевых клетках. Разработка рекомбинантной субъединичной вакцины была важной и необходимой разработкой, поскольку вирус гепатита В, в отличие от других распространенных вирусов, таких как вирус полиомиелита , не может быть выращен in vitro . [26]

Рекомбинантные антитела

Рекомбинантные антитела (rAbs) производятся in vitro с помощью систем экспрессии на основе клеток млекопитающих. Их моноспецифическое связывание с определенным эпитопом делает rAbs пригодными не только для исследовательских целей, но и в качестве вариантов терапии против определенных типов рака, инфекций и аутоиммунных заболеваний. [27]

Диагностика ВИЧ-инфекции

Каждый из трех широко используемых методов диагностики ВИЧ-инфекции был разработан с использованием рекомбинантной ДНК. Тест на антитела ( ELISA или вестерн-блот ) использует рекомбинантный белок ВИЧ для проверки наличия антител , которые организм вырабатывает в ответ на ВИЧ-инфекцию. Тест ДНК ищет наличие генетического материала ВИЧ с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Разработка теста ОТ-ПЦР стала возможной благодаря молекулярному клонированию и секвенированию геномов ВИЧ. Страница тестирования на ВИЧ от Центров по контролю и профилактике заболеваний США (CDC)

Золотой рис

Золотой рис — это рекомбинантный сорт риса, который был разработан для экспрессии ферментов, ответственных за биосинтез β-каротина . [14] Этот сорт риса имеет существенные перспективы для снижения частоты дефицита витамина А у населения мира. [28] Золотой рис в настоящее время не используется, ожидая решения вопросов регулирования и интеллектуальной собственности. [29]

Культуры, устойчивые к гербицидам

Были разработаны коммерческие сорта важных сельскохозяйственных культур (включая сою, кукурузу, сорго, рапс, люцерну и хлопок), которые включают рекомбинантный ген, который обеспечивает устойчивость к гербициду глифосату (торговое название Roundup ) и упрощает борьбу с сорняками путем применения глифосата. [30] Эти культуры широко используются в коммерческих целях в нескольких странах.

Культуры, устойчивые к насекомым

Bacillus thuringiensis — это бактерия, которая естественным образом производит белок ( токсин Bt ) с инсектицидными свойствами. [28] Бактерия применялась к сельскохозяйственным культурам в качестве стратегии борьбы с насекомыми в течение многих лет, и эта практика широко применялась в сельском хозяйстве и садоводстве. Недавно были разработаны растения, которые экспрессируют рекомбинантную форму бактериального белка, которая может эффективно контролировать некоторых насекомых-хищников. Экологические проблемы, связанные с использованием этих трансгенных культур, не были полностью решены. [31]

История

Идея рекомбинантной ДНК была впервые предложена Питером Лоббаном, аспирантом профессора Дейла Кайзера на кафедре биохимии Медицинской школы Стэнфордского университета. [32] Первые публикации, описывающие успешное производство и внутриклеточную репликацию рекомбинантной ДНК, появились в 1972 и 1973 годах в Стэнфорде и Калифорнийском университете в Сан-Франциско . [33] [34] [35] [36] В 1980 году Пол Берг , профессор кафедры биохимии Стэнфорда и автор одной из первых статей [33], был удостоен Нобелевской премии по химии за свою работу по нуклеиновым кислотам «с особым вниманием к рекомбинантной ДНК». Вернер Арбер , Гамильтон Смит и Дэниел Натанс разделили Нобелевскую премию по физиологии и медицине 1978 года за открытие эндонуклеаз рестрикции , которые улучшили методы технологии рДНК. [ необходима ссылка ]

Стэнфордский университет подал заявку на патент США на рекомбинантную ДНК 4 ноября 1974 года, указав в качестве изобретателей Герберта У. Бойера (профессора Калифорнийского университета в Сан-Франциско ) и Стэнли Н. Коэна (профессора Стэнфордского университета ); этот патент, US 4,237,224A, был выдан 2 декабря 1980 года. [37] [38] Первым лицензированным препаратом, полученным с использованием технологии рекомбинантной ДНК, был человеческий инсулин, разработанный Genentech и лицензированный Eli Lilly and Company . [39]

Противоречие

Ученые, связанные с первоначальной разработкой методов рекомбинантной ДНК, признали, что существует потенциальная возможность того, что организмы, содержащие рекомбинантную ДНК, будут иметь нежелательные или опасные свойства. На конференции по рекомбинантной ДНК в Асиломаре в 1975 году эти опасения обсуждались, и был инициирован добровольный мораторий на исследования рекомбинантной ДНК для экспериментов, которые считались особенно рискованными. Этот мораторий широко соблюдался до тех пор, пока Национальные институты здравоохранения (США) не разработали и не выпустили официальные руководящие принципы для работы с рДНК. Сегодня молекулы рекомбинантной ДНК и рекомбинантные белки обычно не считаются опасными. Однако сохраняются опасения относительно некоторых организмов, которые экспрессируют рекомбинантную ДНК, особенно когда они покидают лабораторию и попадают в окружающую среду или пищевую цепочку. Эти опасения обсуждаются в статьях о генетически модифицированных организмах и спорах о генетически модифицированных продуктах питания . Кроме того, существуют опасения относительно побочных продуктов в биофармацевтическом производстве, где рекомбинантная ДНК приводит к образованию определенных белковых продуктов. Основной побочный продукт, называемый белком клетки-хозяина , вырабатывается системой экспрессии хозяина и представляет угрозу для здоровья пациента и окружающей среды в целом. [40] [41]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Розано, Херман Л.; Чекарелли, Эдуардо А. (17 апреля 2014 г.). «Экспрессия рекомбинантного белка в Escherichia coli: достижения и проблемы». Границы микробиологии . 5 : 172. дои : 10.3389/fmicb.2014.00172 . ISSN  1664-302X. ПМК  4029002 . ПМИД  24860555.
  2. ^ "Промоторы, используемые для регулирования экспрессии генов". www.cambia.org . Архивировано из оригинала 24 сентября 2018 г. Получено 16 февраля 2018 г.
  3. ^ Кэмпбелл, Нил А. и Рис, Джейн Б. (2002). Биология (6-е изд.) . Сан-Франциско: Эддисон Уэсли. стр. 375–401. ISBN 978-0-201-75054-6.
  4. ^ abc Питер Уолтер; Альбертс, Брюс; Джонсон, Александр С.; Льюис, Джулиан; Рафф, Мартин К.; Робертс, Кейт (2008). Молекулярная биология клетки (5-е издание, расширенная версия) . Нью-Йорк: Garland Science. ISBN 978-0-8153-4111-6.. Четвертое издание доступно онлайн на книжной полке NCBI: ссылка
  5. ^ Берг, Джереми Марк; Тимочко, Джон Л.; Страйер, Луберт (2010). Биохимия, 7-е изд. (Биохимия (Берг)) . WH Freeman & Company. ISBN 978-1-4292-2936-4.Пятое издание доступно онлайн на книжной полке NCBI: ссылка
  6. ^ ab Watson, James D. (2007). Рекомбинантная ДНК: гены и геномы: краткий курс . Сан-Франциско: WH Freeman. ISBN 978-0-7167-2866-5.
  7. ^ Рассел, Дэвид В.; Сэмбрук, Джозеф (2001). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство . Колд Спринг Харбор, Нью-Йорк: Лаборатория Колд Спринг Харбор. ISBN 978-0-87969-576-7.
  8. ^ Эберле, Кристиан (декабрь 2022 г.). «Технология рекомбинантной ДНК – этапы, методы и примеры» . Получено 18 июля 2023 г.
  9. ^ Ханниг, Г.; Макридес, С. (1998). «Стратегии оптимизации экспрессии гетерологичных белков в Escherichia coli». Тенденции в биотехнологии . 16 (2): 54–60. doi :10.1016/S0167-7799(97)01155-4. PMID  9487731.
  10. ^ Махмуди Гомари, Мохаммад; Сарайгорд-Афшари, Неда; Фарсимадан, Марзие; Ростами, Неда; Агамири, Шахин; Фараджоллахия, Мохаммад М. (1 декабря 2020 г.). «Возможности и проблемы методов очистки белков с помощью тегов: применение в фармацевтической промышленности». Biotechnology Advances . 45 : 107653. doi : 10.1016/j.biotechadv.2020.107653. ISSN  0734-9750. PMID  33157154. S2CID  226276355.
  11. ^ Brondyk, WH (2009). "Глава 11 Выбор подходящего метода для экспрессии рекомбинантного белка". Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы в энзимологии. Том 463. стр. 131–147. doi :10.1016/S0076-6879(09)63011-1. ISBN 9780123745361. PMID  19892171.
  12. ^ Ортега, Клаудия; Прието, Даниэль; Абреу, Сесилия; Оппеццо, Пабло Хавьер; Корреа, Агустин (2018). «Набор векторов с несколькими отсеками и несколькими хозяевами для экспрессии и очистки рекомбинантных белков». Frontiers in Microbiology . 9 : 1384. doi : 10.3389/fmicb.2018.01384 . ISSN  1664-302X. PMC 6030378. PMID 29997597  . 
  13. ^ abc Браун, Терри (2006). Клонирование генов и анализ ДНК: введение . Кембридж, Массачусетс: Blackwell Pub. ISBN 978-1-4051-1121-8.
  14. ^ ab Ye, X.; Al-Babili, S.; Klöti, A.; Zhang, J.; Lucca, P.; Beyer, P.; Potrykus, I. (2000). «Инженерия биосинтетического пути провитамина А (бета-каротина) в эндосперме риса (без каротиноидов)». Science . 287 (5451): 303–305. Bibcode :2000Sci...287..303Y. doi :10.1126/science.287.5451.303. PMID  10634784. S2CID  40258379.
  15. ^ Коллер, Б. Х.; Смитис, О. (1992). «Изменение генов у животных путем нацеливания генов». Ежегодный обзор иммунологии . 10 : 705–730. doi :10.1146/annurev.iy.10.040192.003421. PMID  1591000.
  16. ^ "Химозин - обзор | Темы ScienceDirect". Архивировано из оригинала 2023-12-10 . Получено 2023-12-10 .Ссылка на оригинальную публикацию
  17. ^ Донна У. Фогт и Микки Пэриш. (1999) Пищевая биотехнология в Соединенных Штатах: наука, регулирование и проблемы.
  18. ^ Gualandi-Signorini, A.; Giorgi, G. (2001). «Формулы инсулина — обзор». European Review for Medical and Pharmacological Sciences . 5 (3): 73–83. PMID  12004916.
  19. ^ #Инсулин аспарт
  20. ^ "Инсулин человеческий". go.drugbank.com . Получено 2023-12-10 .
  21. ^ Миллс, Джошуа (2022-05-16). "HSC Biology Рекомбинантная технология: производство инсулина". Edzion . Получено 2022-12-26 .
  22. ^ Фон Фанге, Т.; МакДиармид, Т.; МакКлер, Л.; Золотор, А. (2008). «Клинические исследования: может ли рекомбинантный гормон роста эффективно лечить идиопатическую низкорослость?». Журнал семейной практики . 57 (9): 611–612. PMID  18786336.
  23. ^ Фернандес, М.; Хоси, Р. (2009). «Препараты, повышающие производительность, заманивают в ловушку и неспортсменов». Журнал семейной практики . 58 (1): 16–23. PMID  19141266.
  24. ^ "Соматотропин". go.drugbank.com . Получено 2023-12-10 .
  25. ^ Manco-Johnson, MJ (2010). «Достижения в уходе и лечении детей с гемофилией». Advances in Pediatrics . 57 (1): 287–294. doi :10.1016/j.yapd.2010.08.007. PMID  21056743.
  26. ^ "Информация о вакцине против гепатита В от Фонда по борьбе с гепатитом В". 2011-06-28. Архивировано из оригинала 2011-06-28 . Получено 2023-12-10 .
  27. ^ Наранг, Аарти (2022). «Рекомбинантные антитела: следующий уровень в технологии антител».
  28. ^ ab Paine, JA; Shipton, CA; Chaggar, S.; Howells, RM; Kennedy, MJ; Vernon, G.; Wright, SY; Hinchliffe, E.; Adams, JL; Silverstone, AL; Drake, R. (2005). «Улучшение пищевой ценности золотого риса за счет увеличения содержания провитамина А». Nature Biotechnology . 23 (4): 482–487. doi :10.1038/nbt1082. PMID  15793573. S2CID  632005.
  29. ^ DHNS. «Иностранная группа болеет за «золотой рис» в Индии». Deccan Herald . Получено 10 декабря 2023 г.
  30. ^ Funke, T.; Han, H.; Healy-Fried, M.; Fischer, M.; Schönbrunn, E. (2006). «Молекулярная основа устойчивости к гербицидам культур Roundup Ready». Труды Национальной академии наук . 103 (35): 13010–13015. Bibcode : 2006PNAS..10313010F. doi : 10.1073/pnas.0603638103 . PMC 1559744. PMID  16916934 . 
  31. ^ Мендельсон, М.; Коу, Дж.; Вайтузис, З.; Мэтьюз, К. (2003). «Безопасны ли культуры Bt?». Nature Biotechnology . 21 (9): 1003–1009. doi :10.1038/nbt0903-1003. PMID  12949561. S2CID  16392889.
  32. ^ Лир, Дж. (1978). Рекомбинантная ДНК: нерассказанная история . Нью-Йорк: Crown Publishers. стр. 43.
  33. ^ ab Джексон, Д.; Саймонс, Р.; Берг, П. (1972). «Биохимический метод вставки новой генетической информации в ДНК вируса обезьян 40: кольцевые молекулы ДНК SV40, содержащие гены фага лямбда и оперон галактозы Escherichia coli». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 69 (10): 2904–2909. Bibcode : 1972PNAS...69.2904J. doi : 10.1073/pnas.69.10.2904 . PMC 389671. PMID  4342968 . 
  34. ^ Mertz, JE; Davis, RW (1972). «Расщепление ДНК эндонуклеазой рестрикции R 1 генерирует липкие концы». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 69 (11): 3370–4. Bibcode : 1972PNAS...69.3370M. doi : 10.1073/pnas.69.11.3370 . PMC 389773. PMID  4343968. 
  35. ^ Лоббан, П.; Кайзер, А. (1973). «Ферментативное соединение концов ДНК молекул». Журнал молекулярной биологии . 78 (3): 453–471. doi :10.1016/0022-2836(73)90468-3. PMID  4754844.
  36. ^ Коэн, С.; Чанг, А.; Бойер, Х.; Хеллинг, Р. (1973). «Конструирование биологически функциональных бактериальных плазмид in vitro». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 70 (11): 3240–3244. Bibcode : 1973PNAS ... 70.3240C. doi : 10.1073/pnas.70.11.3240 . PMC 427208. PMID  4594039. 
  37. ^ "Процесс получения биологически функциональных молекулярных химер", получено из Google Patent
  38. ^ Хьюз, С. (2001). «Делаем доллары из ДНК. Первый крупный патент в области биотехнологии и коммерциализация молекулярной биологии, 1974-1980». Isis; международный обзор, посвященный истории науки и ее культурным влияниям . 92 (3): 541–575. doi : 10.1086/385281. hdl : 10161/8125 . PMID  11810894. S2CID  22823711. Архивировано из оригинала (PDF) 14.02.2021 . Получено 05.09.2019 .
  39. ^ Джонсон, И.С. (1983). «Человеческий инсулин с использованием технологии рекомбинантной ДНК». Science . 219 (4585): 632–637. Bibcode :1983Sci...219..632J. doi :10.1126/science.6337396. PMID  6337396.
  40. ^ Ван, Син; Хантер, Алан К.; Мозье, Нед М. (2009-06-15). «Белки клеток-хозяев в разработке биологических препаратов: идентификация, количественная оценка и оценка риска». Биотехнология и биоинженерия . 103 (3): 446–458. doi : 10.1002/bit.22304 . ISSN  0006-3592. PMID  19388135. S2CID  22707536.
  41. ^ Брейсвелл, Дэниел Г.; Фрэнсис, Ричард; Смейлс, К. Марк (2015-07-14). «Будущее идентификации белков клеток-хозяев (HCP) во время разработки и производства процесса связано с управлением на основе рисков для их контроля». Биотехнология и биоинженерия . 112 (9): 1727–1737. doi :10.1002/bit.25628. ISSN  0006-3592. PMC 4973824. PMID 25998019  . 

Дальнейшее чтение

Внешние ссылки

Библиотечные ресурсы о
рекомбинантных белках
  • Ресурсы в вашей библиотеке
  • Ресурсы в других библиотеках