Ядерная организация относится к пространственному распределению хроматина в ядре клетки . Существует много различных уровней и масштабов ядерной организации. Хроматин — это структура ДНК более высокого порядка.
В наименьшем масштабе ДНК упакована в единицы, называемые нуклеосомами . Количество и организация этих нуклеосом может влиять на доступность локального хроматина. Это оказывает опосредованное воздействие на экспрессию близлежащих генов , дополнительно определяя, могут ли они регулироваться факторами транскрипции .
В немного больших масштабах петлеобразование ДНК может физически объединять элементы ДНК, которые в противном случае были бы разделены большими расстояниями. Эти взаимодействия позволяют регуляторным сигналам пересекать большие геномные расстояния — например, от энхансеров к промоторам .
Напротив, в больших масштабах расположение хромосом может определять их свойства. Хромосомы организованы в два отсека, обозначенные как A («активный») и B («неактивный»), каждый из которых имеет свои собственные свойства. Более того, целые хромосомы разделяются на отдельные регионы, называемые территориями хромосом .
Каждая клетка человека содержит около двух метров ДНК , которая должна быть плотно свернута, чтобы поместиться внутри ядра клетки . Однако для того, чтобы клетка могла функционировать, белки должны иметь возможность доступа к информации о последовательности, содержащейся в ДНК, несмотря на ее плотно упакованную природу. Следовательно, клетка имеет ряд механизмов для контроля организации ДНК. [1]
Более того, ядерная организация может играть роль в установлении идентичности клеток. Клетки внутри организма имеют почти идентичные последовательности нуклеиновых кислот , но часто демонстрируют разные фенотипы . Один из способов, которым эта индивидуальность проявляется, — это изменения в архитектуре генома , которые могут изменить экспрессию различных наборов генов . [2] Эти изменения могут иметь нисходящий эффект на клеточные функции, такие как облегчение клеточного цикла , репликация ДНК , ядерный транспорт и изменение ядерной структуры. Контролируемые изменения в ядерной организации необходимы для правильного функционирования клеток.
Организация хромосом в отдельные регионы внутри ядра была впервые предложена в 1885 году Карлом Раблом . Позднее, в 1909 году, с помощью микроскопической технологии того времени, Теодор Бовери ввел термин «хромосомные территории», заметив, что хромосомы занимают индивидуально различные ядерные регионы. [3] С тех пор картирование архитектуры генома стало одной из основных тем, вызывающих интерес.
За последние десять лет быстрые методологические разработки значительно продвинули понимание в этой области. [1] Крупномасштабную организацию ДНК можно оценить с помощью ДНК-визуализации с использованием флуоресцентных меток, таких как ДНК-флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), и специализированных микроскопов. [4] Кроме того, технологии высокопроизводительного секвенирования, такие как методы, основанные на захвате конформации хромосом, могут измерять, как часто регионы ДНК находятся в непосредственной близости. [5] В то же время прогресс в методах редактирования генома (таких как CRISPR/Cas9 , ZFN и TALEN ) облегчил проверку организационной функции определенных регионов ДНК и белков. [6] Также растет интерес к реологическим свойствам межхромосомного пространства, изучаемым с помощью флуоресцентной корреляционной спектроскопии и ее вариантов. [7] [8]
Архитектурные белки регулируют структуру хроматина, устанавливая физические взаимодействия между элементами ДНК. [9] Эти белки, как правило, высококонсервативны у большинства видов эукариот. [10] [11]
У млекопитающих к ключевым архитектурным белкам относятся:
Первый уровень организации генома касается того, как ДНК организована линейно и как она упакована в хромосомы . ДНК состоит из двух антипараллельных нитей нуклеиновых кислот, с двумя связанными и противоположными нуклеиновыми кислотами, называемыми парами оснований ДНК. Для того чтобы ДНК упаковалась внутри крошечного клеточного ядра, каждая нить оборачивается вокруг гистонов , образуя нуклеосомные структуры. Эти нуклеосомы упаковываются вместе, образуя хромосомы . В зависимости от эукариота, в каждом ядре есть несколько независимых хромосом разных размеров — например, у людей их 46, а у жирафов — 30. [21]
В пределах областей хромосомы порядок пар оснований ДНК составляет определенные элементы для экспрессии генов и репликации ДНК. Некоторые из наиболее распространенных элементов включают гены, кодирующие белок (содержащие экзоны и интроны), некодирующую ДНК, энхансеры, промоторы, операторы, точки начала репликации, теломеры и центромеры. На данный момент нет достаточных доказательств важности определенного порядка этих элементов вдоль или между отдельными хромосомами. Например, расстояние между энхансером и промотором, взаимодействующими элементами, которые формируют основу экспрессии генов, может варьироваться от нескольких сотен пар оснований до сотен кб. [22] Кроме того, отдельные энхансеры могут взаимодействовать с несколькими различными промоторами, и то же самое верно для одного промотора, взаимодействующего с несколькими различными энхансерами.
Однако в более крупном масштабе хромосомы неоднородны в контексте состава эухроматина и гетерохроматина. Также имеются данные о богатых и бедных генами регионах и различных доменах, связанных с клеточной дифференциацией, активной или подавленной экспрессией генов, репликацией ДНК, рекомбинацией и репарацией ДНК. [23] Все это помогает определить хромосомные территории.
Образование петель ДНК является первым уровнем ядерной организации, который включает в себя хромосомную укладку. В событии образования петель ДНК хроматин образует физические петли, приводя регионы ДНК в тесный контакт. Таким образом, даже регионы, которые находятся далеко друг от друга вдоль линейной хромосомы, могут быть объединены в трехмерном пространстве. Процесс облегчается рядом факторов, включая архитектурные белки (в первую очередь CTCF и когезин), факторы транскрипции, коактиваторы и некодируемые РНК. Важно, что образование петель ДНК может использоваться для регулирования экспрессии генов — события образования петель могут подавлять или активировать гены, в зависимости от вовлеченных элементов. Считается, что около 50% человеческих генов участвуют в дальнодействующих взаимодействиях хроматина через процесс образования петель ДНК. [24]
Образование петель впервые наблюдал Вальтер Флемминг в 1878 году, когда он изучал ооциты амфибий. Только в конце 20-го века образование петель ДНК было связано с экспрессией генов. [1] Например, в 1990 году Мандал и его коллеги показали важность образования петель ДНК в подавлении оперонов галактозы и лактозы в E. coli . В присутствии галактозы или лактозы белки-репрессоры образуют взаимодействия белок-белок и белок-ДНК для образования петель ДНК. Это, в свою очередь, связывает промоторы генов с вышестоящими и нижестоящими операторами, эффективно подавляя экспрессию генов, блокируя сборку комплекса преинициации транскрипции (PIC) на промоторе и, следовательно, предотвращая инициацию транскрипции. [25]
При активации гена петля ДНК обычно объединяет дистальные промоторы генов и энхансеры. Энхансеры могут привлекать большой комплекс белков, таких как медиаторный комплекс , PIC и другие специфические для клеток факторы транскрипции, участвующие в инициации транскрипции гена. [26]
Самовзаимодействующие (или самоассоциирующиеся) домены обнаружены во многих организмах — у бактерий они называются хромосомно-взаимодействующими доменами (CID), тогда как в клетках млекопитающих они называются топологически ассоциированными доменами (TAD). Самовзаимодействующие домены могут варьироваться от 1–2 Мб в более крупных организмах [27] до десятков кб в одноклеточных организмах. [28] То, что характеризует самовзаимодействующий домен, — это набор общих черт. Во-первых, самовзаимодействующие домены имеют более высокое соотношение хромосомных контактов внутри домена, чем за его пределами. Они формируются с помощью архитектурных белков и содержат внутри себя множество хроматиновых петель. Эта характеристика была обнаружена с помощью методов Hi-C . [24] Во-вторых, самовзаимодействующие домены коррелируют с регуляцией экспрессии генов. Существуют определенные домены, которые связаны с активной транскрипцией, и другие домены, которые подавляют транскрипцию. То, что отличает, принимает ли домен определенную форму, зависит от того, какие ассоциированные гены должны быть активными/неактивными во время определенной фазы роста, стадии клеточного цикла или в пределах определенного типа клеток. Клеточная дифференциация определяется определенными наборами генов, включенными или выключенными, что соответствует уникальному составу самовзаимодействующих доменов отдельной клетки. [29] Наконец, внешние границы этих доменов содержат более высокую частоту архитектурных сайтов связывания белков, областей и эпигенетических меток, коррелирующих с активной транскрипцией, генами домашнего хозяйства и короткими вкрапленными ядерными элементами (SINE). [24]
Примером подмножества самовзаимодействующих доменов являются активные хроматиновые концентраторы (ACH). Эти концентраторы были обнаружены во время наблюдения за активированными локусами альфа- и бета-глобина. [30] ACH формируются посредством обширного петлеобразования ДНК для формирования «концентратора» регуляторных элементов с целью координации экспрессии подмножества генов. [31]
Домены, ассоциированные с пластинкой (LAD), и домены, ассоциированные с ядрышком (NAD), представляют собой области хромосомы, которые взаимодействуют с ядерной пластинкой и ядрышком соответственно.
Составляя приблизительно 40% генома, LAD в основном состоят из бедных генами областей и охватывают от 40kb до 30Mb в размере. [16] Существует два известных типа LAD: конститутивные LAD (cLAD) и факультативные LAD (fLAD). cLAD представляют собой богатые AT гетерохроматиновые области, которые остаются на пластинке и наблюдаются во многих типах клеток и видов. Есть доказательства того, что эти области важны для структурного формирования интерфазной хромосомы. С другой стороны, fLAD имеют различные взаимодействия пластинки и содержат гены, которые либо активируются, либо репрессируются между отдельными клетками, что указывает на специфичность типа клетки. [32] Границы LAD, как и самовзаимодействующие домены, обогащены транскрипционными элементами и архитектурными сайтами связывания белков. [16]
NAD, составляющие 4% генома, имеют почти все те же физические характеристики, что и LAD. Фактически, анализ ДНК этих двух типов доменов показал, что многие последовательности перекрываются, что указывает на то, что определенные регионы могут переключаться между связыванием с пластинкой и связыванием с ядрышком. [33] NAD связаны с функцией ядрышка. Ядрышко является самой большой суборганеллой в ядре и является основным местом транскрипции рРНК. Оно также участвует в биосинтезе частиц распознавания сигнала, секвестрации белка и репликации вируса. [34] Ядрышко формируется вокруг генов рДНК из разных хромосом. Однако только подмножество генов рДНК транскрибируется за один раз и делает это путем зацикливания во внутреннюю часть ядрышка. Остальные гены лежат на периферии субъядерной органеллы в состоянии подавленного гетерохроматина. [33]
Компартменты A/B были впервые обнаружены в ранних исследованиях Hi-C . [35] [36] Исследователи заметили, что весь геном можно разделить на два пространственных компартмента, обозначенных как «A» и «B», где регионы в компартменте A имеют тенденцию взаимодействовать преимущественно с регионами, связанными с компартментом A, чем с регионами, связанными с компартментом B. Аналогично регионы в компартменте B имеют тенденцию взаимодействовать с другими регионами, связанными с компартментом B.
A/B-компартмент-ассоциированные регионы находятся на шкале мульти-Мб и коррелируют либо с открытым и экспрессионно-активным хроматином (компартменты «A»), либо с закрытым и экспрессионно-неактивным хроматином (компартменты «B»). [35] A-компартменты, как правило, богаты генами, имеют высокое содержание GC , содержат гистоновые маркеры для активной транскрипции и обычно вытесняют внутреннюю часть ядра. Кроме того, они, как правило, состоят из самовзаимодействующих доменов и содержат ранние точки начала репликации. B-компартменты, с другой стороны, как правило, бедны генами, компактны , содержат гистоновые маркеры для подавления генов и лежат на ядерной периферии. Они состоят в основном из LAD и содержат поздние точки начала репликации. [35] Кроме того, более высокое разрешение Hi-C в сочетании с методами машинного обучения показало, что A/B-компартменты могут быть уточнены до субкомпартментов. [37] [38]
Тот факт, что компартменты взаимодействуют сами с собой, согласуется с идеей о том, что ядро локализует белки и другие факторы, такие как длинные некодирующие РНК (lncRNA), в областях, подходящих для их индивидуальных ролей. [ требуется ссылка ] Примером этого является наличие нескольких транскрипционных фабрик по всей внутренней части ядра. [39] Эти фабрики связаны с повышенными уровнями транскрипции из-за высокой концентрации транскрипционных факторов (таких как аппарат транскрипционных белков, активные гены, регуляторные элементы и зарождающаяся РНК). Около 95% активных генов транскрибируются в транскрипционных фабриках. Каждая фабрика может транскрибировать несколько генов — эти гены не обязательно должны иметь схожие функции продукта, и им не обязательно находиться на одной хромосоме. Наконец, известно, что совместная локализация генов в транскрипционных фабриках зависит от типа клетки. [40]
Последний уровень организации касается особого расположения отдельных хромосом в ядре. Область, занимаемая хромосомой, называется хромосомной территорией (СТ). [41] Среди эукариот СТ имеют несколько общих свойств. Во-первых, хотя расположение хромосом не одинаково в разных клетках внутри популяции, существует некоторое предпочтение среди отдельных хромосом определенным областям. Например, большие, бедные генами хромосомы обычно располагаются на периферии около ядерной пластинки, в то время как более мелкие, богатые генами хромосомы группируются ближе к центру ядра. [42] Во-вторых, индивидуальное предпочтение хромосом варьируется среди разных типов клеток. Например, было показано, что Х-хромосома чаще локализуется на периферии в клетках печени, чем в клетках почек. [43] Другим сохраняющимся свойством хромосомных территорий является то, что гомологичные хромосомы, как правило, находятся далеко друг от друга во время клеточной интерфазы. Последняя характеристика заключается в том, что положение отдельных хромосом в течение каждого клеточного цикла остается относительно одинаковым до начала митоза. [44] Механизмы и причины, лежащие в основе характеристик хромосомной территории, до сих пор неизвестны, и необходимы дальнейшие эксперименты.