Факторы-пионеры — это факторы транскрипции , которые могут напрямую связывать конденсированный хроматин . Они могут оказывать положительное и отрицательное влияние на транскрипцию и важны для привлечения других факторов транскрипции и ферментов модификации гистонов , а также для контроля метилирования ДНК . Впервые они были обнаружены в 2002 году как факторы, способные связываться с целевыми участками на нуклеосомной ДНК в уплотненном хроматине и обеспечивать компетентность для активности генов во время гепатогенеза. [1] Факторы-пионеры участвуют в инициировании клеточной дифференциации и активации генов , специфичных для клеток . Это свойство наблюдается в факторах транскрипции, содержащих домен гистоновой складки (fork head box (FOX) [2] и NF-Y [3] ), и других факторах транскрипции, которые используют цинковые пальцы для связывания ДНК (Groucho TLE, Gal4 и GATA). [2] [4]
Эукариотическая клетка уплотняет свой геном в плотно упакованный хроматин и нуклеосомы . Эта способность экономит место в ядре только для активно транскрибируемых генов и скрывает ненужные или вредные гены от транскрибации. Доступ к этим конденсированным областям осуществляется путем ремоделирования хроматина либо путем балансировки модификаций гистонов, либо напрямую с помощью пионерских факторов, которые могут ослаблять хроматин сами по себе, либо в качестве флага, привлекающего другие факторы. Пионерские факторы не обязательно требуются для сборки транскрипционного аппарата и могут диссоциировать после замены другими факторами.
Факторы-пионеры также могут активно влиять на транскрипцию, напрямую открывая конденсированный хроматин в процессе, независимом от АТФ. [2] [3] Это общая черта факторов типа fork head box (которые содержат домен связывания ДНК в виде крылатой спирали, который имитирует домен связывания ДНК линкера гистона H1 [5] ) и NF-Y (чьи субъединицы NF-YB и NF-YC содержат домены гистоновой складки, аналогичные доменам основных гистонов H2A/H2B [6] ).
Сходство с гистоном H1 объясняет, как факторы головки вилки способны связывать хроматин, взаимодействуя с большой бороздкой только одной доступной стороны ДНК, обернутой вокруг нуклеосомы. [5] [7] Домены головки вилки также имеют спираль, которая придает специфичность последовательности в отличие от линкерного гистона. [5] [8] Конец C связан с более высокой подвижностью вокруг нуклеосомы, чем линкерный гистон, вытесняя ее и эффективно перестраивая нуклеосомные ландшафты. [7] Эта активная перестройка нуклеосом позволяет другим факторам транскрипции связывать доступную ДНК. При дифференцировке клеток щитовидной железы FoxE связывается с уплотненным хроматином промотора тиреоидной пероксидазы и открывает его для связывания NF1 . [9]
NF-Y представляет собой гетеротримерный комплекс, состоящий из субъединиц NF-YA , NF-YB и NF-YC . Ключевой структурной особенностью комплекса NF-Y/ДНК является взаимодействие малой бороздки его ДНК-связывающей доменной субъединицы NF-YA , которая вызывает изгиб ДНК на ~80°. NF-YB и NF-YC взаимодействуют с ДНК через неспецифические контакты гистонового домена-ДНК. [6] Уникальный режим связывания ДНК NF-YA и нуклеосомоподобные свойства неспецифического связывания ДНК NF-YB/NF-YC накладывают достаточные пространственные ограничения, чтобы заставить фланкирующие нуклеосомы скользить наружу, делая близлежащие сайты распознавания для других факторов транскрипции доступными. [3]
Факторы-пионеры могут функционировать пассивно, выступая в качестве закладки для клетки, чтобы рекрутировать другие факторы транскрипции к определенным генам в конденсированном хроматине. Это может быть важно для подготовки клетки к быстрому ответу, поскольку энхансер уже связан с фактором транскрипции-пионера, давая ему фору для сборки комплекса преинициации транскрипции . Гормональные ответы часто быстро индуцируются в клетке с использованием этого метода праймирования, например, с рецептором эстрогена . [10] Другая форма праймирования — это когда энхансер одновременно связывается активирующими и репрессирующими факторами-пионерами. Этот баланс может быть нарушен путем диссоциации одного из факторов. При дифференциации печеночных клеток активирующий фактор-пионер FOXA1 рекрутирует репрессор , grg3, который предотвращает транскрипцию до тех пор, пока репрессор не будет подавлен позже в процессе дифференциации. [11]
В прямой роли факторы-пионеры могут связывать энхансер и рекрутировать комплекс активации, который будет напрямую модифицировать хроматин. Изменение хроматина изменяет сродство, уменьшая сродство пионерского фактора, так что он заменяется фактором транскрипции, имеющим более высокое сродство. Это механизм, с помощью которого клетка включает ген, наблюдался с факторами модификации, рекрутирующими глюкокортикоидные рецепторы , которые затем модифицируют сайт для связывания активированного эстрогенового рецептора, что было придумано как механизм «приманки и переключения». [12]
Факторы-пионеры могут проявлять наибольший спектр эффектов на транскрипцию посредством модуляции эпигенетических факторов путем привлечения активирующих или репрессирующих ферментов модификации гистонов и контроля метилирования CpG путем защиты определенных остатков цистеина . Это влияет на контроль времени транскрипции во время процессов дифференциации клеток.
Модификация гистонов — хорошо изученный механизм временной регулировки плотности хроматина. Факторы-пионеры могут играть в этом роль, связывая определенные энхансеры и сигнализируя ферментам модификации гистонов о данном гене. Репрессивные факторы-пионеры могут ингибировать транскрипцию, привлекая факторы, которые модифицируют гистоны, что еще больше уплотняет хроматин. Это важно для ограничения экспрессии генов определенными типами клеток и должно быть удалено только тогда, когда начинается дифференциация клеток. FoxD3 был связан как репрессор путей дифференциации как B-клеток , так и меланоцитарных клеток , поддерживая репрессивные модификации гистонов там, где они связаны, которые необходимо преодолеть для начала дифференциации. [13] [14] Факторы-пионеры также могут быть связаны с привлечением модификаций гистонов, активирующих транскрипцию. Ферменты, которые модифицируют H3K4 с помощью моно- и диметилирования, связаны с увеличением транскрипции и, как было показано, связывают факторы-пионеры. [10] При дифференцировке В-клеток PU.1 необходим для передачи сигнала специфическим гистонам для активации модификаций H3K4me1, которые дифференцируют гемопоэтические стволовые клетки либо в линию В-клеток, либо в линию макрофагов. [15] Связывание FoxA1 индуцирует HSK4me2 во время нейрональной дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток [16] , а также потерю метилирования ДНК. [17] SOX9 привлекает ферменты модификации гистонов MLL3 и MLL4 для депонирования H3K4me1 до открытия энхансеров в развивающихся волосяных фолликулах и базальноклеточной карциноме. [18]
Факторы-пионеры также могут влиять на транскрипцию и дифференциацию посредством контроля метилирования ДНК. Факторы-пионеры, которые связываются с CpG-островками и остатками цитозина, блокируют доступ к метилтрансферазам. Многие эукариотические клетки имеют CpG-островки в своих промоторах, которые могут быть модифицированы метилированием, что оказывает неблагоприятное воздействие на их способность контролировать транскрипцию. [19] Это явление также присутствует в промоторах без CpG-островков, где отдельные остатки цитозина защищены от метилирования до дальнейшей дифференциации клеток. Примером является FoxD3, предотвращающий метилирование остатка цитозина в энхансере Alb1 , выступая в качестве заполнителя для FoxA1 позже в гепатоцитах [20] , а также в CpG-островках генов при хроническом лимфоцитарном лейкозе . [21] Для стабильного контроля состояния метилирования остатки цитозина покрываются во время митоза , в отличие от большинства других факторов транскрипции, чтобы предотвратить метилирование. Исследования показали, что во время митоза 15% всех интерфазных участков связывания FoxA1 были связаны. [22] Защита метилирования цитозина может быть быстро снята, что позволяет осуществить быструю индукцию при наличии сигнала.
Хорошо изученное семейство факторов-пионеров — это факторы транскрипции, связанные с Граучо (Gro/TLE/Grg), которые часто оказывают отрицательное влияние на транскрипцию. Эти домены связывания хроматина могут охватывать до 3-4 нуклеосом. Эти большие домены являются каркасами для дальнейших взаимодействий белков, а также модифицируют хроматин для других факторов-пионеров, таких как FoxA1, который, как было показано, связывается с Grg3. [23] Факторы транскрипции с доменами связывания ДНК с цинковыми пальцами , такие как семейство GATA и рецептор глюкокортикоидов. [10] Домены цинковых пальцев, по-видимому, не связывают нуклеосомы хорошо и могут быть вытеснены факторами FOX. [22]
В эпидермисе кожи фактор транскрипции семейства SOX, SOX9 , также ведет себя как пионерский фактор, который управляет судьбой клеток волосяного фолликула и может перепрограммировать эпидермальные стволовые клетки на судьбу волосяного фолликула. [24]
Способность пионерских факторов реагировать на внеклеточные сигналы для дифференциации типа клеток изучалась как потенциальный компонент гормонально-зависимых видов рака. Показано, что такие гормоны, как эстроген и IGFI, увеличивают концентрацию пионерских факторов, что приводит к изменению транскрипции. [25] Известные пионерские факторы, такие как FoxA1, PBX1 , TLE, AP2 ɣ , факторы GATA 2 / 3 / 4 и PU.1, связаны с гормонально-зависимым раком. FoxA1 необходим для эстроген- и андроген-опосредованного гепатоканцерогенеза и является определяющим геном для ER + люминального рака молочной железы, как и другой пионерский фактор GATA3. [10] [25] FOXA1, в частности, экспрессируется в 90% метастазов рака молочной железы и 89% метастатических видов рака предстательной железы. [25] [26] В линии клеток рака молочной железы MCF-7 было обнаружено, что FoxA1 был связан с 50% участков связывания рецепторов эстрогена независимо от присутствия эстрогена. Высокая экспрессия пионерских факторов связана с плохим прогнозом, за исключением рака молочной железы, где FoxA1 связан с более сильным исходом. [25]
Корреляция между пионерскими факторами и раком привела к перспективному терапевтическому нацеливанию. В исследованиях по снижению активности пионерских факторов FoxA1 и AP2 ɣ снижало сигнализацию ER. [4] [25] Другие белки с вилкообразной головкой были связаны с раком, включая FoxO3 и FoxM, которые подавляют пути выживания клеток Ras и PPI3K/AKT/IKK. [27] Используются такие препараты, как паклитаксел , иматиниб и доксорубицин , которые активируют FoxO3a или его мишени. Модификация для модуляции связанных факторов с пионерской активностью является темой интереса на ранних стадиях, поскольку подавление пионерских факторов может иметь токсические эффекты из-за изменения путей дифференцировки здоровых клеток. [25]