Лейциновая молния (или лейциновые ножницы [1] ) является распространенным трехмерным структурным мотивом в белках. Впервые они были описаны Ландшульцем и его коллегами в 1988 году [2] , когда они обнаружили, что белок, связывающий энхансер, имеет очень характерный сегмент из 30 аминокислот, и отображение этих аминокислотных последовательностей на идеализированной альфа-спирали выявило периодическое повторение остатков лейцина в каждой седьмой позиции на расстоянии, охватывающем восемь спиральных витков. Было высказано предположение, что полипептидные сегменты, содержащие эти периодические массивы остатков лейцина, существуют в альфа-спиральной конформации, а боковые цепи лейцина из одной альфа-спирали переплетаются с боковыми цепями из альфа-спирали второго полипептида, облегчая димеризацию.
Лейциновые молнии являются мотивом димеризации класса bZIP (базовая область лейциновой молнии) эукариотических факторов транскрипции . [3] Домен bZIP имеет длину от 60 до 80 аминокислот с высококонсервативной основной областью связывания ДНК и более диверсифицированной областью димеризации лейциновой молнии. [4] Локализация лейцинов имеет решающее значение для связывания ДНК с белками. Лейциновые молнии присутствуют как в эукариотических, так и в прокариотических регуляторных белках, но в основном являются особенностью эукариот. Их также можно просто аннотировать как ZIP, и мотивы, подобные ZIP, были обнаружены в белках, отличных от факторов транскрипции, и считаются одним из общих белковых модулей для белок-белковых взаимодействий . [5]
Лейциновая молния создается путем димеризации двух специфических мономеров альфа-спирали , связанных с ДНК. Лейциновая молния образуется путем амфипатического взаимодействия между двумя доменами ZIP. Домен ZIP находится в альфа-спирали каждого мономера и содержит лейцины или лейциноподобные аминокислоты. Эти аминокислоты разнесены в полипептидной последовательности каждого региона таким образом, что когда последовательность свернута в трехмерную альфа-спираль, остатки лейцина выстраиваются на одной стороне спирали. Этот регион альфа-спирали, содержащий выстроенные в линию лейцины, называется доменом ZIP, и лейцины из каждого домена ZIP могут слабо взаимодействовать с лейцинами из других доменов ZIP, обратимо удерживая их альфа-спирали вместе (димеризация). Когда эти альфа-спирали димеризуются, образуется молния. Гидрофобная сторона спирали образует димер с собой или другой подобной спиралью, скрывая неполярные аминокислоты от растворителя . Гидрофильная сторона спирали взаимодействует с водой в растворителе .
Мотивы лейциновой молнии считаются подтипом спиральных спиралей , которые построены двумя или более альфа-спиралями, которые намотаны друг на друга, образуя суперспираль . Спиральные спирали содержат 3- и 4-остаточные повторы, чей рисунок гидрофобности и состав остатков совместимы со структурой амфипатических альфа-спиралей. Чередующиеся элементы последовательности из трех и четырех остатков составляют гептадные повторы , в которых аминокислоты обозначены от a' до g'. [6] В то время как остатки в положениях a и d, как правило, гидрофобны и образуют зигзагообразный рисунок из выступов и отверстий, которые сцепляются с аналогичным рисунком на другой нити, образуя плотно прилегающее гидрофобное ядро, [7] остатки в положениях e и g являются заряженными остатками, способствующими электростатическому взаимодействию. [8]
В случае лейциновых молний лейцины преобладают в позиции d гептадного повтора. Эти остатки упаковываются друг против друга каждый второй оборот альфа-спиралей, а гидрофобная область между двумя спиралями дополняется остатками в позициях a, которые также часто являются гидрофобными. Их называют спиральными спиралями, если только не доказано, что они важны для функции белка. Если это так, то они аннотируются в подразделе «домен», который будет доменом bZIP. [9]
Два различных типа таких a-спиралей могут объединяться в пары, образуя гетеродимерную лейциновую молнию. С неполярными аминокислотными остатками в положении e или g гетеротетрамер, состоящий из 2 различных лейциновых молний, может быть получен in vitro, что подразумевает, что общая гидрофобность поверхности взаимодействия и взаимодействие Ван-дер-Ваальса могут изменять организацию спиральных спиралей и играть роль в формировании гетеродимера лейциновой молнии. [10]
BZIP взаимодействует с ДНК через основные, аминные остатки (см. основные аминокислоты в ( предоставленной таблице (сортировать по pH)) определенных аминокислот в «основном» домене, таких как лизины и аргинины . Эти основные остатки взаимодействуют в большой бороздке ДНК, образуя специфичные для последовательности взаимодействия. Механизм регуляции транскрипции белками bZIP был подробно изучен. Большинство белков bZIP демонстрируют высокую аффинность связывания с мотивами ACGT, которые включают CACGTG (G box), GACGTC (C box), TACGTA (A box), AACGTT (T box) и мотив GCN4, а именно TGA(G/C)TCA. [2] [4] [11] Гетеродимеры bZIP существуют у различных эукариот и чаще встречаются в организмах с более высокой сложностью эволюции. [12] Гетеродимерные белки bZIP отличаются от гомодимерных bZIP и друг от друга аффинностью белок-белкового взаимодействия. [13] Эти гетеродимеры демонстрируют сложную специфичность связывания ДНК . При объединении с другим партнером большинство пар bZIP связываются с последовательностями ДНК, которые предпочитает каждый отдельный партнер. В некоторых случаях димеризация разных партнеров bZIP может изменить последовательность ДНК, на которую нацелена пара, таким образом, который нельзя было бы предсказать на основе предпочтений каждого партнера в отдельности. Это говорит о том, что, будучи гетеродимерами, факторы транскрипции bZIP способны изменять свои предпочтения относительно того, на какое место в ДНК они нацелены. Способность домена bZIP образовывать димеры с разными партнерами значительно расширяет области генома, с которыми могут связываться факторы транскрипции bZIP и из которых они могут регулировать экспрессию генов. [13]
Небольшое количество факторов bZIP, таких как OsOBF1, также может распознавать палиндромные последовательности . [14] Однако другие, включая LIP19, OsZIP-2a и OsZIP-2b, не связываются с последовательностями ДНК. Вместо этого эти белки bZIP образуют гетеродимеры с другими bZIP для регулирования транскрипционной активности . [14] [15]
Регуляторные белки лейциновой молнии включают c-fos и c-jun (фактор транскрипции AP1), важные регуляторы нормального развития, [16] а также члены семейства myc, включая myc , max и mxd1 . Если они перепроизводятся или мутируют в жизненно важной области, они могут вызвать рак . [16]
Белок, регулируемый ядерным фактором интерлейкина 3, содержащий bZIP ( NFIL3 ), является репрессором транскрипции, который играет множественную роль в регуляции различных биологических процессов. Белок NFIL3 состоит из 462 аминокислот, включая домен b-ZIP. N-концевая часть домена содержит основной мотив, который напрямую связывается с ДНК. C-концевая часть домена b-ZIP содержит амфипатическую область лейциновой молнии, которая опосредует гомо- и гетеродимеризацию.
Экспрессия гена Nfil3 изменяется вместе с циркадным циклом , а NFIL3, как фактор репрессии, регулирует циркадный ритм. NFIL3 конкурирует с активатором транскрипции D-сайта альбуминового промотора связывающего белка ( DBP ) за связывание с элементами D-box в ДНК, что является одним из сайтов консенсуса циркадного фактора транскрипции. DBP — это еще один белок bZIP, который демонстрирует противоположный портфель уровней экспрессии по сравнению с NFIL3. Когда уровень NFIL3 высок, гены, находящиеся под контролем элементов D-box, будут репрессированы. Сверхэкспрессия Nfil3 укорачивает циркадный цикл.
NFIL3 влияет на выживаемость клеток и участвует в онкогенезе. Показано, что NFIL3 является фактором выживания, который препятствует апоптотической гибели клеток во многих типах клеток и приводит к онкогенезу. Показано, что высокий уровень экспрессии NFIL3 связан с раком молочной железы. В раковых клетках NFIL3 ассоциируется с гистондеацетилазой 2 ( HDAC2 ) и подавляет проапоптотические гены, такие как суперсемейство лигандов фактора некроза опухоли, член 10 ( TRAIL ) и суперсемейство рецепторов TNF, член 6 (FAS), для предотвращения апоптоза. NFIL3 также может препятствовать апоптозу в раковых клетках, связываясь с ДНК и блокируя доступ фактора транскрипции Forkhead box O1 ( FOXO1 ) к генам гибели клеток, что подрывает клеточный цикл и способствует онкогенезу. При раке толстой кишки NFIL3 также может блокировать набор другого типа факторов транскрипции, белков, богатых пролином (PAR).
NFIL3 функционирует как репрессор генов, связанных с регенерацией нейронов. Nfil3 экспрессируется в нейронных клетках с потенциалом регенерации, чтобы держать рост клеток под контролем. Экспрессия Nfil3 индуцируется фосфорилированным белком связывания элемента ответа цАМФ ( CREB ), а белок NFIL3, в свою очередь, конкурирует за сайты связывания, общие с CREB и CCAAT/Enhancer Binding Protein ( CEBP ), что подавляет целевые гены CREB и CEBP, чтобы противодействовать эффекту сигнализации цАМФ. Между тем, NFIL3 связывается со своим собственным промотором, чтобы подавить свою собственную экспрессию, создавая отрицательную обратную связь регуляции регенерации нейронов.
Также обнаружено, что NFIL3 важен в иммунологии. Он необходим для естественных клеток-киллеров и жизненно важен для развития и функционирования других иммунных клеток, включая, помимо прочего, противовоспалительный ответ в Т-хелперных клетках , продукцию IgE из В-клеток, созревание дендритных клеток CD8a и праймирование Т-клеток CD8+. [17]