Фосфорилирование белков — это обратимая посттрансляционная модификация белков , при которой остаток аминокислоты фосфорилируется протеинкиназой путем добавления ковалентно связанной фосфатной группы. Фосфорилирование изменяет структурную конформацию белка , заставляя его активироваться, дезактивироваться или иным образом изменять его функцию. [1] Примерно 13 000 человеческих белков имеют фосфорилированные участки. [2]
Обратная реакция фосфорилирования называется дефосфорилированием и катализируется протеинфосфатазами . Протеинкиназы и фосфатазы работают независимо и в равновесии, регулируя функцию белков. [3]
Наиболее часто фосфорилируемыми аминокислотами являются серин , треонин , тирозин и гистидин . [4] [5] Эти фосфорилирования играют важную и хорошо охарактеризованную роль в сигнальных путях и метаболизме. Однако другие аминокислоты также могут фосфорилироваться посттрансляционно, включая аргинин , лизин , аспарагиновую кислоту , глутаминовую кислоту и цистеин , и эти фосфорилированные аминокислоты были идентифицированы как присутствующие в экстрактах клеток человека и фиксированных клетках человека с использованием комбинации анализа на основе антител (для pHis) и масс-спектрометрии (для всех других аминокислот). [5] [6] [7] [8]
Фосфорилирование белков впервые было описано в 1906 году Фебусом Левеном в Рокфеллеровском институте медицинских исследований, когда он открыл фосфорилированный вителлин . [9] Однако прошло почти 50 лет, прежде чем было обнаружено ферментативное фосфорилирование белков протеинкиназами. [10]
В 1906 году Фебус Левин из Рокфеллеровского института медицинских исследований идентифицировал фосфат в белке вителлине (фосвитине) [9] , а к 1933 году совместно с Фрицем Липманном обнаружил фосфосерин в казеине . [11] Однако прошло еще 20 лет, прежде чем Юджин П. Кеннеди описал первое «ферментативное фосфорилирование белков». [10] Первый фермент фосфорилаза был открыт Карлом и Герти Кори в конце 1930-х годов. Карл и Герти Кори обнаружили две формы гликогенфосфорилазы , которые они назвали A и B, но не правильно поняли механизм преобразования формы B в форму A. Взаимное превращение фосфорилазы b в фосфорилазу a было позже описано Эдмундом Фишером и Эдвином Кребсом , а также Восилайтом и Сазерлендом , включающее механизм фосфорилирования/дефосфорилирования. [12] Было обнаружено, что фермент, названный фосфорилаза киназа и Mg-АТФ были необходимы для фосфорилирования гликогенфосфорилазы, помогая в переносе γ-фосфорильной группы АТФ на остаток серина на фосфорилазе b. Протеинфосфатаза 1 способна катализировать дефосфорилирование фосфорилированных ферментов, удаляя фосфатную группу. Эрл Сазерленд объяснил в 1950 году, что активность фосфорилазы увеличивалась и, таким образом, стимулировался гликогенолиз, когда ломтики печени инкубировались с адреналином и глюкагоном. Фосфорилирование считалось специфическим механизмом контроля для одного метаболического пути до 1970-х годов, когда Лестер Рид обнаружил, что митохондриальный пируватдегидрогеназный комплекс инактивируется фосфорилированием. Также в 1970-х годах был придуман термин многосайтовое фосфорилирование в ответ на открытие белков, которые фосфорилируются по двум или более остаткам двумя или более киназами. В 1975 году было показано, что цАМФ-зависимые протеинкиназы фосфорилируют остатки серина на определенных мотивах аминокислотной последовательности. Рэй Эриксон обнаружил, что v-Src является киназой, а Тони Хантер обнаружил, что v-Src фосфорилирует остатки тирозина на белках в 1970-х годах. [13] В начале 1980-х годов была определена аминокислотная последовательность первой протеинкиназы, что помогло генетикам понять функции регуляторных генов. В конце 1980-х и начале 1990-х годов была очищена первая протеинтирозинфосфатаза (PTP1B) и было завершено открытие, а также клонирование киназ JAK , что привело к тому, что многие в научном сообществе назвали 1990-е годы десятилетием каскадов протеинкиназы. [14][15] Эдмонд Фишер и Эдвин Кребс были удостоены Нобелевской премии в 1992 году «за открытия, касающиеся обратимого фосфорилирования белков как биологического регуляторного механизма». [16]
Обратимое фосфорилирование белков широко распространено как в прокариотических , так и в еще большей степени в эукариотических организмах. [17] [18] [19] [20] Например, у бактерий 5-10% всех белков считаются фосфорилированными. [21] [22] Напротив, по оценкам, треть всех человеческих белков фосфорилируется в любой момент времени, при этом у человека, мыши и дрожжей существует 230 000, 156 000 и 40 000 уникальных участков фосфорилирования соответственно. [2] У дрожжей около 120 киназ (из ~6000 белков в целом) вызывают 8814 известных регулируемых событий фосфорилирования, генерируя около 3600 фосфопротеинов (около 60% всех белков дрожжей). [23] [24] Таким образом, фосфорилирование является универсальным регуляторным механизмом, который влияет на большую часть белков. Даже если белок сам по себе не фосфорилирован, его взаимодействие с другими белками может регулироваться фосфорилированием этих взаимодействующих белков.
Фосфорилирование вводит заряженную и гидрофильную группу в боковую цепь аминокислот, возможно, изменяя структуру белка, изменяя взаимодействия с соседними аминокислотами. Некоторые белки, такие как p53, содержат несколько участков фосфорилирования, что облегчает сложную многоуровневую регуляцию. Из-за легкости, с которой белки могут фосфорилироваться и дефосфорилироваться, этот тип модификации является гибким механизмом для клеток, чтобы реагировать на внешние сигналы и условия окружающей среды. [25]
Киназы фосфорилируют белки, а фосфатазы дефосфорилируют белки. Многие ферменты и рецепторы «включаются» или «выключаются» посредством фосфорилирования и дефосфорилирования. Обратимое фосфорилирование приводит к конформационному изменению структуры многих ферментов и рецепторов , заставляя их активироваться или дезактивироваться. Фосфорилирование обычно происходит по остаткам серина , треонина , тирозина и гистидина в эукариотических белках. Фосфорилирование гистидина в эукариотических белках, по-видимому, встречается гораздо чаще, чем фосфорилирование тирозина. [26] В прокариотических белках фосфорилирование происходит по остаткам серина, треонина, тирозина, гистидина, аргинина или лизина. [17] [18] [26] [27] Добавление молекулы фосфата (PO 4 3- ) к неполярной группе R аминокислотного остатка может превратить гидрофобную часть белка в полярную и чрезвычайно гидрофильную часть молекулы. Таким образом, динамика белка может вызвать конформационное изменение в структуре белка посредством аллостерии на больших расстояниях с другими гидрофобными и гидрофильными остатками в белке.
Одним из примеров регуляторной роли фосфорилирования является белок-супрессор опухолей p53 . Белок p53 строго регулируется [28] и содержит более 18 различных участков фосфорилирования. Активация p53 может привести к остановке клеточного цикла, которая может быть отменена при некоторых обстоятельствах, или к апоптотической гибели клетки. [29] Эта активность происходит только в ситуациях, когда клетка повреждена или физиология нарушена у нормальных здоровых людей.
После дезактивирующего сигнала белок снова дефосфорилируется и прекращает работу. [30] [ необходима цитата ] Это механизм многих форм передачи сигнала , например, способ, которым входящий свет обрабатывается в светочувствительных клетках сетчатки .
Регуляторные роли фосфорилирования включают:
Выяснение событий фосфорилирования сложных сигнальных путей может быть сложным. В клеточных сигнальных путях белок A фосфорилирует белок B, а B фосфорилирует C. Однако в другом сигнальном пути белок D фосфорилирует A или фосфорилирует белок C. Глобальные подходы, такие как фосфопротеомика , изучение фосфорилированных белков, которое является подветвью протеомики , в сочетании с протеомикой на основе масс-спектрометрии , использовались для выявления и количественной оценки динамических изменений фосфорилированных белков с течением времени. Эти методы становятся все более важными для систематического анализа сложных сетей фосфорилирования. [39] Они успешно использовались для выявления динамических изменений в статусе фосфорилирования более 6000 участков после стимуляции эпидермальным фактором роста . [40] Другой подход к пониманию сети фосфорилирования заключается в измерении генетических взаимодействий между несколькими фосфорилирующими белками и их мишенями. Это выявляет интересные повторяющиеся закономерности взаимодействий — сетевые мотивы. [41] Были разработаны вычислительные методы для моделирования сетей фосфорилирования [42] [43] и прогнозирования их реакций при различных возмущениях. [44]
Эукариотическая ДНК организована с гистоновыми белками в специфические комплексы, называемые хроматином. Структура хроматина функционирует и облегчает упаковку, организацию и распределение эукариотической ДНК. Однако она оказывает негативное влияние на несколько фундаментальных биологических процессов, таких как транскрипция, репликация и репарация ДНК, ограничивая доступность определенных ферментов и белков. Было показано, что посттрансляционная модификация гистонов, такая как фосфорилирование гистонов, изменяет структуру хроматина, изменяя взаимодействия белок:ДНК или белок:белок. [45] Посттрансляционные модификации гистонов изменяют структуру хроматина. Наиболее часто ассоциированное фосфорилирование гистонов происходит во время клеточных ответов на повреждение ДНК, когда фосфорилированный гистон H2A разделяет большие домены хроматина вокруг места разрыва ДНК. [46] Исследователи исследовали, влияют ли модификации гистонов напрямую на транскрипцию, направленную РНК-полимеразой II. Исследователи выбрали белки, которые, как известно, модифицируют гистоны, чтобы проверить их влияние на транскрипцию, и обнаружили, что стресс-индуцированная киназа MSK1 ингибирует синтез РНК. Ингибирование транскрипции MSK1 было наиболее чувствительным, когда матрица находилась в хроматине, поскольку матрицы ДНК, не находящиеся в хроматине, были устойчивы к воздействию MSK1. Было показано, что MSK1 фосфорилировал гистон H2A на серине 1, а мутация серина 1 в аланин блокировала ингибирование транскрипции MSK1. Таким образом, результаты предполагали, что ацетилирование гистонов может стимулировать транскрипцию, подавляя ингибирующее фосфорилирование киназой MSK1. [47]
В пределах белка фосфорилирование может происходить по нескольким аминокислотам . Считается, что фосфорилирование по серину является наиболее распространенным, за ним следует треонин. Фосфорилирование тирозина встречается относительно редко, но лежит в основе многих сигнальных путей фосфорилирования белков (например, в рецепторах, связанных с тирозинкиназой) у большинства эукариот. Фосфорилирование по аминокислотам, таким как серин, треонин и тирозин, приводит к образованию фосфопротеина, когда фосфатная группа фосфопротеина реагирует с группой -ОН боковой цепи Ser, Thr или Tyr в реакции этерификации . [48] Однако, поскольку фосфорилированные тирозином белки относительно легко очистить с помощью антител , сайты фосфорилирования тирозина относительно хорошо изучены. Фосфорилирование гистидина и аспартата происходит у прокариот как часть двухкомпонентной сигнализации и в некоторых случаях у эукариот в некоторых путях передачи сигнала. Анализ фосфорилированного гистидина с использованием стандартных биохимических и масс-спектрометрических подходов гораздо сложнее, чем анализ Ser, Thr или Tyr. [49] [7] [5] и [50] У прокариот, архей и некоторых низших эукариот азот гистидина действует как нуклеофил и связывается с фосфатной группой. [51] После фосфорилирования гистидина регуляторный домен регулятора ответа катализирует перенос фосфата в аспартат.
Хотя фосфорилирование тирозина встречается в относительно небольшом количестве, оно хорошо изучено из-за простоты очистки фосфотирозина с помощью антител. Рецепторные тирозинкиназы являются важным семейством рецепторов клеточной поверхности, участвующих в передаче внеклеточных сигналов, таких как гормоны, факторы роста и цитокины. Связывание лиганда с мономерной рецепторной тирозинкиназой стабилизирует взаимодействия между двумя мономерами с образованием димера , после чего два связанных рецептора фосфорилируют остатки тирозина в транс . Фосфорилирование и активация рецептора активируют сигнальный путь через ферментативную активность и взаимодействие с адаптерными белками. [52] Сигнализация через рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) , рецепторную тирозинкиназу, имеет решающее значение для развития множественных систем органов, включая кожу, легкие, сердце и мозг. Избыточная сигнализация через путь EGFR обнаруживается во многих видах рака у человека. [53]
Циклинзависимые киназы (CDK) являются серин-треониновыми киназами, которые регулируют прогрессирование через эукариотический клеточный цикл . CDK каталитически активны только при связывании с регуляторным циклином . Животные клетки содержат по крайней мере девять различных CDK, которые связываются с различными циклинами со значительной специфичностью. Ингибиторы CDK (CKI) блокируют активность киназы в комплексе циклин-CDK, чтобы остановить клеточный цикл в G1 или в ответ на сигналы окружающей среды или повреждение ДНК. Активность различных CDK активирует сигнальные пути клетки и факторы транскрипции, которые регулируют ключевые события в митозе, такие как переход фазы G1/S. Более ранние комплексы циклин-CDK обеспечивают сигнал для активации последующих комплексов циклин-CDK. [54]
В каждой клетке существуют тысячи различных участков фосфорилирования, поскольку:
Поскольку фосфорилирование любого сайта на данном белке может изменить функцию или локализацию этого белка, понимание «состояния» клетки требует знания состояния фосфорилирования ее белков. Например, обычно, если аминокислота Серин-473 в белке AKT фосфорилирована, AKT функционально активна как киназа, а если она не фосфорилирована, AKT является неактивной киназой.
Сайты фосфорилирования имеют решающее значение для белков, их транспортировки и функций. Они представляют собой ковалентную модификацию белков посредством обратимого фосфорилирования. Это позволяет белкам оставаться входящими в клетку, поскольку отрицательный фосфорилированный сайт препятствует их проницаемости через клеточную мембрану. Дефосфорилирование белка позволяет клетке восполнять фосфаты посредством высвобождения пирофосфатов , что экономит использование АТФ в клетке. [55] Пример фосфорилирующего фермента обнаружен у бактерий E. coli . Он обладает щелочной фосфатазой в своей периплазматической области своей мембраны. Самая внешняя мембрана проницаема для фосфорилированных молекул, однако внутренняя цитоплазматическая мембрана непроницаема из-за больших отрицательных зарядов. [56] Таким образом, бактерии E. coli хранят белки и пирофосфаты в своей периплазматической мембране до тех пор, пока они не понадобятся внутри клетки.
Недавние достижения в фосфопротеомной идентификации привели к открытию бесчисленных сайтов фосфорилирования в белках. Это потребовало интегративной среды для доступных данных, в которой организованы известные сайты фосфорилирования белков. Была создана курируемая база данных dbPAF, содержащая известные сайты фосфорилирования в H. sapiens , M. musculus , R. norvegicus , D. melanogaster , C. elegans , S. pombe и S. cerevisiae . В настоящее время база данных содержит 294 370 неизбыточных сайтов фосфорилирования 40 432 белков. [57] Другие инструменты прогнозирования фосфорилирования в белках включают NetPhos [58] для эукариот, NetPhosBac [58] для бактерий и ViralPhos [59] для вирусов.
Существует большое разнообразие остатков серина, и фосфорилирование каждого остатка может приводить к различным метаболическим последствиям.
Известно, что фосфорилирование остатков серина и треонина перекрестно влияет на модификацию остатков серина и треонина O -GlcNAc .
Фосфорилирование тирозина — это быстрая, обратимая реакция и один из основных регуляторных механизмов в передаче сигнала . Рост клеток , дифференциация , миграция и метаболический гомеостаз — это клеточные процессы, поддерживаемые фосфорилированием тирозина. Функция протеинтирозинкиназ и протеинтирозинфосфатазы уравновешивает уровень фосфотирозина в любом белке. Неисправность определенных цепей протеинтирозинкиназ и протеинтирозинфосфатазы связана с множеством заболеваний человека, таких как ожирение , резистентность к инсулину и сахарный диабет 2 типа . [64] Фосфорилирование тирозина происходит у эукариот, некоторых видов бактерий и присутствует среди прокариот. Фосфорилирование тирозина поддерживает клеточную регуляцию у бактерий, аналогичную его функции у эукариот. [65]
Фосфорилирование аргинина во многих грамположительных бактериях маркирует белки для деградации протеазой Clp . [34]
Широко распространенное фосфорилирование человеческого белка происходит на нескольких неканонических аминокислотах, включая мотивы, содержащие фосфорилированный гистидин (1 и 3 позиции), аспартат, цистеин, глутамат, аргинин и лизин в экстрактах клеток HeLa. Из-за химической и термической лабильности этих фосфорилированных остатков требуются специальные процедуры и методы разделения для сохранения наряду с термостабильным «классическим» фосфорилированием Ser, Thr и Tyr. [66]
Антитела можно использовать как мощный инструмент для определения фосфорилирования белка в определенном месте. Антитела связываются с конформационными изменениями белка, вызванными фосфорилированием, и обнаруживают их. Такие антитела называются фосфоспецифическими антителами; сейчас доступны сотни таких антител. Они становятся критически важными реагентами как для фундаментальных исследований, так и для клинической диагностики.
Изоформы посттрансляционной модификации (PTM) легко обнаруживаются на 2D-гелях . Действительно, фосфорилирование заменяет нейтральные гидроксильные группы на серинах, треонинах или тирозинах отрицательно заряженными фосфатами с pKs около 1,2 и 6,5. Таким образом, ниже pH 5,5 фосфаты добавляют один отрицательный заряд; около pH 6,5 они добавляют 1,5 отрицательных заряда; выше pH 7,5 они добавляют 2 отрицательных заряда. Относительное количество каждой изоформы также можно легко и быстро определить по интенсивности окрашивания на 2D-гелях.
В некоторых очень специфических случаях обнаружение фосфорилирования как сдвига электрофоретической подвижности белка возможно на простых одномерных гелях SDS-PAGE, как это описано, например, для транскрипционного коактиватора Ковачем и др. [67]. Считается, что в основе этого явления лежат сильные конформационные изменения, связанные с фосфорилированием (которые сохраняются в растворах, содержащих детергенты). Большинство сайтов фосфорилирования, для которых был описан такой сдвиг подвижности, попадают в категорию сайтов SP и TP (т. е. остаток пролина следует за фосфорилированным остатком серина или треонина).
Для определения участков фосфорилирования белков использовались крупномасштабные масс-спектрометрические анализы. Были опубликованы десятки исследований, каждое из которых идентифицировало тысячи участков, многие из которых ранее не были описаны. [68] [69] Масс-спектрометрия идеально подходит для таких анализов с использованием фрагментации HCD или ETD , поскольку добавление фосфорилирования приводит к увеличению массы белка и фосфорилированного остатка. Для этих исследований необходимы современные, высокоточные масс-спектрометры, что ограничивает технологию лабораториями с высококлассными масс-спектрометрами. Однако анализ фосфорилированных пептидов с помощью масс-спектрометрии все еще не так прост, как для «обычных», немодифицированных пептидов. EThcD был разработан, объединяя перенос электронов и диссоциацию столкновений с более высокой энергией. По сравнению с обычными методами фрагментации схема EThcD обеспечивает более информативные спектры MS/MS для однозначной локализации фосфорилирования. [70]
Подробная характеристика участков фосфорилирования очень сложна, а количественное определение фосфорилирования белка с помощью масс-спектрометрии требует подходов с использованием внутренних изотопных стандартов. [71] Относительное количественное определение может быть получено с помощью различных технологий дифференциальной изотопной маркировки. [72] Существует также несколько количественных методов фосфорилирования белка, включая флуоресцентный иммуноанализ, микромасштабный термофорез , FRET , TRF, поляризацию флуоресценции, гашение флуоресценции, сдвиг подвижности, детектирование на основе шариков и форматы на основе клеток. [73] [74]
Фосфорилирование белков распространено среди всех кладов жизни, включая всех животных, растения, грибы, бактерии и археи. Истоки механизмов фосфорилирования белков являются предковыми и сильно разошлись между разными видами. У эукариот, по оценкам, от 30 до 65% всех белков могут быть фосфорилированы, с десятками или даже сотнями тысяч отдельных участков фосфорилирования. [75] [2] Некоторые участки фосфорилирования, по-видимому, эволюционировали как условные «выключатели», блокирующие активный участок фермента, например, в прокариотическом метаболическом ферменте изоцитратдегидрогеназе. Однако в случае белков, которые должны быть фосфорилированы, чтобы стать активными, менее ясно, как они могли возникнуть из нефосфорилированных предков. Было показано, что подмножество сериновых фосфозитов часто заменяется кислотными остатками, такими как аспартат и глутамат между разными видами. Эти анионные остатки могут взаимодействовать с катионными остатками, такими как лизин и аргинин, образуя солевые мостики , стабильные нековалентные взаимодействия, которые изменяют структуру белка. Эти фосфозиты часто участвуют в солевых мостиках, что предполагает, что некоторые сайты фосфорилирования развились как условные переключатели «включения» для солевых мостиков, позволяя этим белкам принимать активную конформацию только в ответ на определенный сигнал. [76]
Известно около 600 эукариотических протеинкиназ, что делает их одним из крупнейших семейств эукариотических генов. Большая часть фосфорилирования осуществляется одним суперсемейством протеинкиназ, которые разделяют консервативный домен киназы. Фосфорилирование белка высоко консервативно в путях, имеющих центральное значение для выживания клеток, таких как прогрессирование клеточного цикла, зависящее от циклин-зависимых киназ (CDK), но отдельные сайты фосфорилирования часто являются гибкими. Цели фосфорилирования CDK часто имеют фосфозиты в неупорядоченных сегментах , которые находятся в неидентичных местах даже у близких видов. Напротив, цели фосфорилирования CDK в структурно определенных областях более высоко консервативны. Хотя активность CDK имеет решающее значение для роста и выживания клеток у всех эукариот, только очень немногие фосфозиты демонстрируют сильную консервативность своих точных положений. Позиционирование, вероятно, очень важно для фосфатов, которые аллостерически регулируют структуру белка, но гораздо более гибко для фосфатов, которые взаимодействуют с доменами связывания фосфопептидов для привлечения регуляторных белков. [77]
Фосфорилирование белков — это обратимая посттрансляционная модификация белков. У эукариот фосфорилирование белков функционирует в клеточной сигнализации, экспрессии генов и дифференциации. Оно также участвует в репликации ДНК во время клеточного цикла, а механизмы, которые справляются с вызванными стрессом блоками репликации, блокируют ее. По сравнению с эукариотами, прокариоты используют киназы и фосфатазы типа Хэнкса для передачи сигнала. Может ли фосфорилирование белков у бактерий также регулировать такие процессы, как репарация или репликация ДНК, до сих пор остается неясным. [78]
По сравнению с фосфорилированием белков прокариот, исследования фосфорилирования белков эукариот от дрожжей до клеток человека были довольно обширными. Известно, что эукариоты полагаются на фосфорилирование гидроксильной группы на боковых цепях серина, треонина и тирозина для клеточной сигнализации. Это основные регуляторные посттрансляционные модификации в эукариотических клетках, но фосфорилирование белков прокариот изучено менее интенсивно. В то время как серин, треонин и тирозин фосфорилируются в эукариотах, гистидин и аспартат фосфорилируются в прокариотах и эукариотах. У бактерий фосфорилирование гистидина происходит в фосфоенолпируватзависимых фосфотрансферазных системах (PTS), которые участвуют в процессе интернализации, а также фосфорилирования сахаров. [79]
Фосфорилирование белка протеинкиназой было впервые показано в E. coli и Salmonella typhimurium и с тех пор было продемонстрировано во многих других бактериальных клетках. [80] Было обнаружено, что бактерии используют фосфорилирование гистидина и аспартата в качестве модели для бактериальной сигнальной трансдукции. Фосфорилирование серина, треонина и тирозина также присутствует в бактериях. Бактерии несут киназы и фосфатазы, подобные таковым у их эукариотического эквивалента, а также разработали уникальные киназы и фосфатазы, не обнаруженные у эукариот. [79]
Аномальное фосфорилирование белков может быть причиной ряда заболеваний, включая рак , болезнь Альцгеймера , болезнь Паркинсона и другие дегенеративные заболевания .
Белок тау относится к группе белков, ассоциированных с микротрубочками (MAP), которые помогают стабилизировать микротрубочки в клетках, включая нейроны. [81] Ассоциативная и стабилизирующая активность белка тау зависит от его фосфорилированного состояния. При болезни Альцгеймера из-за неправильного сворачивания и аномальных конформационных изменений в структуре белка тау он становится неэффективным в связывании с микротрубочками и неспособным поддерживать организованную структуру нейронного цитоскелета во время нейронных процессов. Аномальный тау ингибирует и нарушает организацию микротрубочек и выводит нормальный тау из микротрубочек в цитозольную фазу. [82] Неправильные сворачивания приводят к аномальной агрегации в фибриллярные клубки внутри нейронов. Белок тау должен быть фосфорилирован для функционирования, но гиперфосфорилирование белка тау является одним из основных факторов, влияющих на его неспособность к ассоциации. [82] Фосфатазы PP1, PP2A, PP2B и PP2C дефосфорилируют тау-белок in vitro , и их активность снижается в областях мозга у пациентов с болезнью Альцгеймера. [82] [83] Тау-фосфопротеин в три-четыре раза гиперфосфорилирован у пациента с болезнью Альцгеймера по сравнению с пожилым человеком, не страдающим болезнью. Тау при болезни Альцгеймера, по-видимому, удаляет MAP1 и MAP2 (два других основных ассоциированных белка) из микротрубочек, и этот пагубный эффект обращается вспять, когда выполняется дефосфорилирование, что свидетельствует о гиперфосфорилировании как единственной причине парализующей активности. [82]
α-синуклеин — это белок, связанный с болезнью Паркинсона. [84] У людей этот белок кодируется геном SNCA . [ 85] α-синуклеин участвует в рециркуляции синаптических пузырьков, которые переносят нейротрансмиттеры, и в природе встречается в развернутой форме. Повышенные уровни α-синуклеина обнаруживаются у пациентов с болезнью Паркинсона. Существует корреляция между концентрацией нефосфорилированного α-синуклеина, присутствующего у пациента, и тяжестью болезни Паркинсона. [86] В частности, фосфорилирование Ser129 в α-синуклеине влияет на тяжесть. У здоровых пациентов уровень нефосфорилированного α-синуклеина выше, чем у пациентов с болезнью Паркинсона. Измерение изменения соотношения концентраций фосфорилированного α-синуклеина к нефосфорилированному α-синуклеину у пациента может быть маркером прогрессирования заболевания. Антитела, нацеленные на α-синуклеин в фосфорилированном Ser129, используются для изучения молекулярных аспектов синуклеинопатий. [87] [88]
Фосфорилирование Ser129 связано с агрегацией белка и дальнейшим повреждением нервной системы. Агрегация фосфорилированного α-синуклеина может быть усилена, если пресинаптический каркасный белок Sept4 присутствует в недостаточном количестве. Прямое взаимодействие α-синуклеина с Sept4 ингибирует фосфорилирование Ser129. [89] [90] [91] Однако фосфорилирование Ser129 может наблюдаться без агрегации синуклеина в условиях сверхэкспрессии. [92]
{{cite journal}}
: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка ){{cite book}}
: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка ){{cite book}}
: |last1=
имеет общее название ( помощь )