Допинг крови — это форма допинга , при которой количество эритроцитов в кровотоке увеличивается с целью улучшения спортивных результатов. Поскольку такие клетки крови переносят кислород из легких в мышцы , более высокая концентрация в крови может улучшить аэробную способность (VO 2 max) и выносливость спортсмена . [1] Допинга крови можно достичь, заставляя организм самостоятельно производить больше эритроцитов с помощью лекарств, переливая кровь либо от другого человека, либо обратно тому же человеку, либо используя заменители крови.
Многие методы применения кровяного допинга являются незаконными, особенно в профессиональном спорте, где считается, что он дает спортсмену искусственное преимущество. Антидопинговые агентства используют тесты, чтобы попытаться идентифицировать лиц, принимавших допинг в крови, используя ряд методов, обычно путем анализа образцов крови участников.
Допинг крови определяется как использование запрещенных продуктов (например, эритропоэтина (ЭПО), дарбэпоэтина-альфа, стабилизаторов фактора, индуцируемого гипоксией (HIF)) и методов (например, увеличения аэробной способности за счет максимального поглощения O 2 ) с целью повышения Транспортировка О 2 тела к мышцам. [2]
Организм подвергается аэробному дыханию, чтобы обеспечить достаточную доставку O 2 к тренируемым скелетным мышцам, и основные определяющие факторы показаны на рисунке 1. Скорость максимального поглощения O 2 (O 2 max) зависит от сердечного выброса, экстракции O 2 и масса гемоглобина. Сердечный выброс спортсмена во время соревнований трудно манипулировать, а распределение сердечного выброса во время соревнований происходит с максимальной скоростью (т.е. 80%). Кроме того, при максимальной нагрузке экстракция О 2 составляет примерно 90%. Поэтому единственным способом повышения физической работоспособности остается повышение содержания О 2 в артерии за счет увеличения массы гемоглобина. Другими словами, концентрация гемоглобина и объем крови влияют на массу гемоглобина. [2]
Многие формы допинга крови происходят из-за злоупотребления фармацевтическими препаратами. Эти лекарственные препараты были созданы для клинического использования с целью увеличения доставки кислорода, когда человеческий организм не может делать это естественным путем.
Эритропоэтин (ЭПО) представляет собой гликопротеиновый гормон, вырабатываемый интерстициальными фибробластами почек, который сигнализирует об эритропоэзе в костном мозге. Повышенная активность гемоцитобластов (стволовых клеток эритроцитов) позволяет крови иметь большую пропускную способность для кислорода. ЭПО был впервые разработан для противодействия эффектам химиотерапии и лучевой терапии у онкологических больных. [3] ЭПО также стимулирует ускоренное заживление ран. [4] Из-за своих физиологических побочных эффектов, в частности, повышения гематокрита, ЭПО стал препаратом, которым могут злоупотреблять профессиональные велосипедисты и любители.
Стабилизатор фактора, индуцируемого гипоксией (стабилизатор HIF) — фармацевтический препарат, используемый для лечения хронического заболевания почек. Как и большинство факторов транскрипции, фактор транскрипции HIF отвечает за экспрессию белка. Стабилизатор HIF активирует активность ЭПО вследствие гипоксии, вызванной анемией, метаболического стресса и васкулогенеза — создания новых кровеносных сосудов. [5] Стабилизаторы HIF, используемые велосипедистами в сочетании с хлоридом кобальта/десферриоксамином, стимулируют и дерегулируют естественную выработку гормона эритропоэтина. [6] При физиологически низком уровне PaO 2 около 40 мм рт.ст. ЭПО высвобождается почками для увеличения транспорта гемоглобина. [7] Комбинация препаратов последовательно высвобождает ЭПО из-за увеличения транскрипции на клеточном уровне. Эффект проходит, когда стабилизаторы HIF, хлорид кобальта/десферриоксамин, выводятся из организма и/или распадаются в организме.
Мио-инозитолтриспирофосфат (ITPP), также известный как соединение номер OXY111A, представляет собой аллостерический эффектор гемоглобина, который вызывает сдвиг вправо кривой диссоциации кислород-гемоглобин , увеличивая количество кислорода, высвобождаемого из эритроцитов в окружающие ткани во время каждого прохождения. через сердечно-сосудистую систему. [8] ITPP был предметом антидопинговых исследований как на людях [9], так и на скаковых лошадях . [10]
Переливания крови традиционно можно классифицировать как аутологичные , когда донор крови и реципиент переливания являются одними и теми же, или как аллогенные /гомологичные, когда кровь переливается кому-либо, кроме донора. Переливание крови начинается с забора от 1 до 4 единиц крови (1 единица = 450 мл крови) за несколько недель до соревнований. Кровь центрифугируют, компоненты плазмы немедленно вводят повторно, а корпускулярные элементы, в основном эритроциты (эритроциты), хранят в холодильнике при температуре 4 °C или замораживают при температуре -80 °C. [11] Поскольку в крови, хранящейся в холодильнике, количество эритроцитов постоянно снижается, значительный процент, до 40%, хранящихся эритроцитов может оказаться нежизнеспособным. [12] Процесс замораживания, наоборот, ограничивает старение клеток, позволяя хранить кровь до 10 лет с потерей от 10% до 15% эритроцитов. [13] Затем сохраненные эритроциты реинфузируют, обычно за 1–7 дней до события высокой выносливости. Поскольку при каждом аутологичном переливании удаляется значительное количество железа, пациентам, перенесшим аутологичную донацию, обычно требуется достаточное время для восстановления, составляющее не менее 3 дней с момента последней донации, и соответствующие добавки железа. Около 50% аутологичных донорских материалов не используются донором и выбрасываются, поскольку действующие стандарты не допускают переливания этих единиц другому пациенту по соображениям безопасности. [ нужна цитата ]
Биохимические и биотехнологические разработки позволили найти новые подходы к этой проблеме в виде искусственно созданных переносчиков O 2 , широко известных как «заменители крови». Доступные в настоящее время кровезаменители представляют собой в основном растворы полимеризованного гемоглобина или переносчики кислорода на основе гемоглобина (HBOC) и перфторуглероды (PFC). [14] [15]
Переносчики кислорода на основе гемоглобина представляют собой внутри/межмолекулярно сконструированные гемоглобины человека или животных, оптимизированные только для доставки кислорода и более длительного внутрисосудистого кровообращения. Присутствие 2,3-дифосфоглицерата в эритроцитах поддерживает нормальное сродство гемоглобина к кислороду. HBOC не содержат эритроцитов и теряют это взаимодействие, поэтому немодифицированные растворы HBOC человека имеют очень высокое сродство к кислороду, что ставит под угрозу их функцию. Химические методы, разработанные для решения этой проблемы, привели к созданию носителей, которые эффективно высвобождают кислород при физиологическом рО 2 периферических тканей. [16]
Общей особенностью всех HBOC является их устойчивость к диссоциации при растворении в средах, в отличие от гемоглобина естественной диссоциации в нефизиологических условиях. Гипотетически HBOC могут принести спортсменам большую пользу, чем эквивалентный гемоглобин при традиционном вливании эритроцитов. Недавние разработки показали, что HBOC являются не только простыми заменителями эритроцитов, но и высокоэффективными донорами O 2 с точки зрения оксигенации тканей. Дополнительные эффекты включают повышение уровня железа, ферритина и ЭПО в сыворотке крови; [17] увеличение диффузии кислорода до 20% и улучшение способности к физической нагрузке; [18] увеличили производство CO 2 ; и снижение образования молочной кислоты при анаэробной активности. [19] Исследования показали, что HBOC чрезвычайно опасны для человека. Поскольку HBOCs увеличивают как риск смерти, так и риск инфаркта миокарда, клинические исследования были прекращены. Они не коммерчески доступны в США или Европе, и для них нет одобренного использования. [20]
ПФУ, также известные как фторуглероды , представляют собой инертные, нерастворимые в воде синтетические соединения, состоящие в основном из атомов углерода и фтора, связанных между собой прочными связями C–F. ПФУ представляют собой практически прозрачные и бесцветные жидкие эмульсии, неоднородные по молекулярной массе, площади поверхности, электронному заряду и вязкости; их высокое содержание электронно-плотных атомов фтора приводит к небольшому внутримолекулярному взаимодействию и низкому поверхностному натяжению, что делает такие вещества отличными растворителями газов, особенно кислорода и углекислого газа. [14] Некоторые из этих молекул могут растворять в 100 раз больше кислорода, чем плазма. ПФУ по своей природе гидрофобны, и для внутривенного введения их необходимо эмульгировать. Поскольку ПФУ растворяют, а не связывают кислород, их способность служить кровезаменителем определяется главным образом градиентами рО 2 в легких и тканях-мишенях. Поэтому их кислородтранспортные свойства существенно отличаются от свойств цельной крови и, особенно, от свойств эритроцитов. [21] При обычном pO 2 окружающей среды, равном 135 мм рт. ст., содержание кислорода в перфторуглероде 900 мл/л составляет менее 50 мл/л, тогда как оптимальное содержание кислорода составляет 160 мл/л, что все же ниже, чем в цельной крови. в нормальных условиях можно достичь только при значении pO 2 более 500 мм рт. ст. На практике при обычном альвеолярном рО 2 , равном 135 мм рт. ст., ПФУ не смогут обеспечить достаточную оксигенацию периферических тканей. [21] [22]
Благодаря своему небольшому размеру ПФУ способны проникать в кровоток там, где эритроциты не могут течь. В крошечных капиллярах ПФУ приносят наибольшую пользу, поскольку они увеличивают местную доставку кислорода гораздо эффективнее, чем можно было бы ожидать от увеличения содержания кислорода в более крупных артериях. [23] Кроме того, поскольку газы в ПФУ находятся в растворенном состоянии, pO 2 способствует эффективной доставке кислорода к периферическим тканям. С середины 1980-х годов улучшение как кислородной емкости, так и эмульсионных свойств ПФУ привело к разработке переносчиков кислорода на основе ПФУ второго поколения; два продукта PFC в настоящее время проходят клинические испытания фазы III. [24]
Широко известно, что комплексы переходных металлов играют важную роль в эритропоэзе ; Таким образом, неорганические добавки становятся новым методом допинга крови. Особого внимания заслуживает комплекс кобальта, кобаламин (витамин B 12 ), обычно используемый в качестве пищевой добавки. Кобаламин представляет собой важный комплекс, используемый при производстве эритроцитов, и поэтому представляет интерес для потенциального использования в допинге крови. Однако экспериментальные данные показали, что кобаламин не оказывает влияния на эритропоэз при отсутствии дефицита эритроцитов/кислорода. [25] Эти результаты, кажется, подтверждают многое из того, что уже известно о функционировании кобаламина. [25] Сигнальный путь, который индуцирует секрецию эритропоэтина и последующее производство эритроцитов с использованием кобаламина, зависит от кислорода . Эритропоэтин секретируется почками только при дефиците О 2 , поэтому производство эритроцитов не зависит от количества вводимого кобаламина при отсутствии дефицита О 2 . Соответственно, кобаламин практически не имеет ценности при допинге крови.
Более эффективным для использования в допинге крови является Co 2+ (вводится в виде хлорида кобальта(II) , CoCl 2 ). Известно, что хлорид кобальта полезен при лечении пациентов с анемией. [26] [27] Недавние экспериментальные данные доказали эффективность хлорида кобальта при допинге крови. [26] Исследования действия этого вида показали, что Co 2+ вызывает реакции, подобные гипоксии, наиболее значимой реакцией является эритропоэз. Co 2+ индуцирует этот ответ путем связывания с N-концом (домен «петля-спираль-петля») факторов транскрипции, индуцирующих гипоксию, HIF-1α и HIF-2α, и, таким образом, стабилизирует эти белковые комплексы. [27] [28] При нормальных условиях O 2 HIF дестабилизируются, поскольку остатки пролина и аспарагина гидроксилируются HIF-α-гидроксилазами, эти нестабильные HIF впоследствии разрушаются по пути убиквитин-протеосомы, поэтому они не могут затем связываться и активироваться. транскрипция генов, кодирующих эритропоэтин (ЭПО). [27] [28] При стабилизации Co 2+ предотвращается деградация и затем можно активировать гены, кодирующие ЭПО. Механизм этой стабилизации Co 2+ N-конца еще не до конца понятен. Помимо связывания на N-конце, также было высказано предположение, что замена Fe 2+ на Co 2+ в активном центре гидроксилазы может быть фактором, способствующим стабилизирующему действию Co 2+ . [27] Однако понятно, что связывание Co 2+ позволяет связывать убиквитин, но предотвращает протеосомную деградацию. [28]
В 2004 году был внедрен тест на выявление аллогенного/гомологичного допинга при переливании крови. Проточная цитометрия является методом выбора. Исследуя маркеры на поверхности клеток крови, метод может определить, присутствует ли в кровообращении спортсмена кровь более чем одного человека. В тесте используются 12 антисывороток, направленных против антигенов групп крови, полученных из донорской плазмы. Антигены метят вторичными антителами, которые конъюгированы с фикоэритрином для маркировки эритроцитов, покрытых IgG или IgM, и улучшают обнаружение с помощью проточной цитометрии [2] [29]. Проточная цитометрия способна обнаруживать незначительные различия в антигенах групп крови. Оценка позволила отличить кровь субъектов, ранее получивших хотя бы одну единицу аллогенной крови. [29] Этот метод позволяет обнаружить небольшие (<5%) популяции клеток, которые антигенно отличаются от собственных эритроцитов человека. [29]
Обнаружение допинга в аутологичной крови осуществляется косвенно с помощью метода повторного дыхания CO для измерения нефизиологического увеличения массы гемоглобина. Принцип метода повторного дыхания CO, используемый в настоящее время, требует вдыхания газовой смеси O 2 -CO в течение примерно 10-15 минут. [30] Измеряя разницу в концентрации карбоксигемоглобина (HbCO) до и после повторного дыхания, объема CO и связывающей способности Hb для CO (1,39 мл г-1), можно рассчитать общую массу Hb. [30] Этот метод обнаружения проблематичен для спортсменов, поскольку нежелательно вдыхать CO незадолго до соревнований, что потенциально может повлиять на их результаты.
Метод обнаружения переносчиков кислорода на основе гемоглобина (т.е. оксиглобулина) выполняется в четыре отдельных этапа. Первый этап включает устранение большого количества белков в образцах крови путем иммунодеплеции (например, набора для иммунодеплеции плазмы Proteo Prep 20). [31] Этот процесс гарантирует, что другие белки (т.е. альбумин и иммуноглобулин) не мешают разделению капиллярным электрофорезом (КЭ) путем изменения ионизации. Второй этап, разделение CE, выполняется при определенных условиях, в данном случае фоновым электролитом, состоящим из формиата аммония (75 мМ при pH 9,5), чтобы обеспечить достаточное разрешение между HBOC и Hb. [31] Третий этап: УФ/видимое обнаружение осуществляли при длине волны 415 нм для избирательного обнаружения HBOC и HB. Четвертый этап, времяпролетный или масс-спектрометр, позволил повысить точность селективности между гемопротеинами и другими белками и точно определить поглощение HBOC. [32] Пределы обнаружения CE-UV/Vis при 415 нм и CE-ESI-TOF/MS составляют 0,20 и 0,45 г/дл для плазмы соответственно. [31]
Кобальт можно обнаружить с помощью лабораторного анализа крови, если его количество превышает 400 мкг в день. Поскольку концентрация в цельной крови превышает 1 мкг/л, а концентрация в моче превышает 10 мкг/л после по меньшей мере 10 дней введения. Доза, которая увеличивает выработку эритроцитов примерно на 16-21%, составляет около 68 мг Co в день в течение как минимум 10 дней перорального приема. Прогнозируемая концентрация кобальта в цельной крови превышает 200 мкг/л через два часа после последнего приема, а средняя концентрация кобальта в моче превышает 3000 мкг/л в течение 24 часов после приема. Было проведено исследование, в котором 23 субъекта должны были принимать 900 мкг в день в форме CoCl 2 в течение 10 дней. Затем прогнозы модели сравнивались с исследованием. Результат показывает, что прогнозы модели для крови и мочи находятся между медианной концентрацией мужской и женской групп, что указывает на то, что прогнозы модели в достаточной степени отражают исследуемую популяцию в целом. [33]
Еще в 1947 году военные ученые изучали способы повышения толерантности летчиков-истребителей к гипоксии на большой высоте. В одном из таких исследований эритроциты были перелиты десяти мужчинам в исследовательском центре ВМС США, что привело к увеличению кислородной емкости. [34]
В 1993 году командиры спецназа США в Форт-Брэгге начали экспериментировать с допингом крови, также известным как загрузка крови. Операторы спецназа предоставят две порции цельной крови, из которых будут извлечены эритроциты, сконцентрированы и сохранены при низких температурах. За 24 часа до миссии или боя солдату снова вливают небольшое количество эритроцитов. Военные учёные считают, что эта процедура повышает выносливость и бдительность солдат за счёт увеличения способности крови переносить кислород. [ нужна цитата ]
В 1998 году Силы обороны Австралии одобрили эту технику для полка специальной воздушной службы. Старший диетолог Австралийской организации оборонной науки и технологий Крис Форбс-Юэн сказал, что, в отличие от спорта, «в любви и на войне все справедливо». «То, что мы пытаемся получить, — это преимущество перед любым потенциальным противником», — сказала Форбс-Юэн. [35] В этом исследовании было отклонено более 50 препаратов и методов, повышающих производительность. Шесть из них были одобрены: кофеин , эфедрин , энергетические напитки , модафинил , креатин и препараты, повышающие нагрузку на кровь. [36]
Кровавый допинг появился в конце 1960-х годов [37] , но был объявлен вне закона только в 1986 году. Хотя он все еще был законным, его широко использовали бегуны на средние и длинные дистанции. Первый известный случай применения кровяного допинга произошел на летних Олимпийских играх 1980 года в Москве, когда Каарло Маанинка перелили две пинты крови перед тем, как он выиграл медали в беговых гонках на 5 и 10 километров, хотя в то время это не противоречило правилам. [38] Велосипедист Йооп Зетемельк признался, что ему делали переливание крови во время Тур де Франс 1976 года , где он финишировал вторым, хотя он утверждал, что это было сделано для лечения его анемии, а не для улучшения его результатов. [39] [40] В том же году велосипедист Франческо Мозер использовал переливание крови, чтобы подготовиться к своей успешной попытке побить часовой рекорд . [39] «Допинг в крови» был запрещен Международным олимпийским комитетом (МОК) в 1985 году, хотя в то время никаких тестов на него не существовало. [40]
В 2000 году велосипедист Никлас Аксельссон дал положительный результат на ЭПО.
Велосипедист Тайлер Хэмилтон провалил тест на сортировку флуоресцентно-активируемых клеток для обнаружения гомологичных переливаний крови во время Олимпийских игр 2004 года . Ему разрешили сохранить свою золотую медаль, поскольку обработка его образца не позволила провести второй подтверждающий тест. Он подал апелляцию на второй положительный результат теста на гомологическое переливание крови на Вуэльте Испании 2004 года в Международный спортивный арбитражный суд, но его апелляция была отклонена. Адвокаты Гамильтона предположили, что Гамильтон мог быть генетической химерой или иметь « исчезающего близнеца », чтобы объяснить наличие эритроцитов более чем у одного человека. Хотя эти объяснения теоретически возможны, они были признаны «незначительными». [41]
Согласно различным новостным сообщениям от 24 июля 2007 года, гонщик «Тур де Франс» Александр Винокуров из команды «Астана» дал положительный результат на две разные популяции клеток крови и, следовательно, на гомологичное переливание крови. Винокуров прошел тестирование после победы на 13-м этапе гонки на время Тур 21 июля 2007 года. Допинг-тест не считается положительным до тех пор, пока не будет проверена вторая проба для подтверждения первой. Проба B Винокурова теперь оказалась положительной, и ему грозит дисквалификация на два года и штраф в размере годовой зарплаты. [42] Он также дал положительный результат после 15-й стадии. [43] [44]
Товарищ Винокурова по команде Андрей Кашечкин также дал положительный результат на гомологичный допинг в крови [45] 1 августа 2007 года, всего через несколько дней после завершения Тур де Франс 2007 года (гонки, в которой доминировали допинговые скандалы ). Его команда отказалась от участия после того, как стало известно, что Винокуров употреблял допинг.
По данным российских следователей, 19-летний перспективный игрок "Нью-Йорк Рейнджерс" и российский хоккеист Алексей Черепанов несколько месяцев принимал кровяной допинг, прежде чем скончался 13 октября 2008 года, потеряв сознание на скамейке запасных во время игры в России. У него также был миокардит . [46]
Немецкая конькобежка и пятикратная олимпийская чемпионка Клаудия Пехштейн была дисквалифицирована на два года в 2009 году за предполагаемый допинг в крови на основании нерегулярного уровня ретикулоцитов в ее крови и предположения, что эти уровни всегда были самыми высокими во время соревнований. Ее среднее количество ретикулоцитов за десять лет с 2000 по 2009 год составляло 2,1% во время таких важных событий, как Олимпийские игры и чемпионаты мира. На гонках Кубка мира средний уровень ретикулоцитов составлял 1,9%, а на этапах тренировок — 2,0%. [47] Спортивный арбитражный суд подтвердил запрет в ноябре 2009 года, заявив: «...как только возможность заболевания крови будет безопасно исключена...». [48] В сентябре 2010 года Федеральный верховный суд Швейцарии отклонил апелляцию спортсмена, заявив, что наследственная аномалия крови Пехштейна была известна и раньше («die vererbte Blutanomalie bekannt gewesen sei»). [49]
20 мая 2011 года Тайлер Хэмилтон сдал свою олимпийскую золотую медаль 2004 года в Антидопинговое агентство США [50] после того, как признался в употреблении допинга в 60-минутном интервью.
23 августа 2012 года Лэнс Армстронг был лишен семи титулов «Тур де Франс» и пожизненно дисквалифицирован руководящим органом велоспорта после отчета Антидопингового агентства США, в котором он обвинялся в руководстве допинговой программой во время своей велосипедной карьеры. Позже он признался в употреблении запрещенных веществ, включая допинг крови при переливании и ЭПО, в интервью Опре Уинфри 17 января 2013 года. [51]
В июне 2014 года боец UFC Чейл Соннен дал положительный результат на ЭПО. [52] Месяц спустя другой боец UFC, Али Багаутинов , также дал положительный результат на ЭПО. [53]
В феврале 2018 года рекордсменка мира в беге с препятствиями из Бахрейна и обладательница мирового рекорда в беге с препятствиями на 3000 метров Рут Джебет получила положительный результат на ЭПО, и 4 марта она была дисквалифицирована на 4 года. [54]
Простое увеличение количества эритроцитов в крови может быть связано с синдромом гипервязкости, который характеризуется увеличением вязкости крови и снижением сердечного выброса и скорости кровотока, что приводит к снижению периферической доставки кислорода. [55] Например, передозировка ЭПО может сгущать кровь и превращать ее в очень вязкий осадок, закупоривающий артерии. Это увеличивает вероятность сердечного приступа, инсульта, флебита и легочной эмболии , что наблюдается в случаях, когда в кровоток снова попадает слишком много крови. Поскольку допинг крови увеличивает объем эритроцитов, он эффективно вызывает состояние, называемое полицитемией , заболевание крови, которое имеет известные неблагоприятные последствия, такие как сердечные приступы или инсульты.
Загрязнение крови во время приготовления или хранения является еще одной проблемой. В 2002 году заражение наблюдалось в одном случае из каждых 500 000 переливаний эритроцитов. [56] Загрязнение крови может привести к сепсису или инфекции, поражающей весь организм.
Некоторые лекарства, используемые для увеличения эритроцитов, могут снизить функцию печени и привести к печеночной недостаточности, проблемам с гипофизом и повышению уровня холестерина. [57]