В микроскопии негативное окрашивание является общепринятым методом, часто используемым в диагностической микроскопии для контрастирования тонкого образца с оптически непрозрачной жидкостью . В этой технике фон окрашивается , оставляя сам образец нетронутым и, таким образом, видимым. Это контрастирует с позитивным окрашиванием , при котором окрашивается сам образец.
Для микроскопии в светлом поле негативное окрашивание обычно выполняется с использованием черной чернильной жидкости, такой как нигрозин и тушь . Образец, такой как влажная бактериальная культура, нанесенная на предметное стекло, смешивается с негативным красителем и высушивается. При просмотре под микроскопом бактериальные клетки и, возможно, их споры кажутся светлыми на темном окружающем фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водостойкого маркера для нанесения негативного красителя. [1]
В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность для электронов связана с атомным номером , т. е. числом протонов. Некоторые подходящие негативные красители включают молибдат аммония , ацетат уранила , формиат уранила , фосфорновольфрамовую кислоту , тетроксид осмия , феррицианид осмия [ необходимо разъяснение ] [2] и ауроглюкотионат. Они были выбраны, потому что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются на биологическом веществе. Структуры, которые могут быть негативно окрашены, намного меньше тех, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь метод используется для просмотра вирусов , бактерий, бактериальных жгутиков , биологических мембранных структур и белков или белковых агрегатов, которые все имеют низкую способность рассеивать электроны. Некоторые красители, такие как тетроксид осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Будучи сильными окислителями, они сшивают липиды, в основном, реагируя с ненасыщенными углерод-углеродными связями, и тем самым фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей и одновременно окрашивают их. [3] [4]
Выбор негативного окрашивания в электронной микроскопии может быть очень важным. Раннее исследование вирусов растений с использованием негативно окрашенных листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним окрашиванием и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод состоял в том, что это растение страдало от смешанной инфекции двумя отдельными вирусами. Негативное окрашивание как на уровне светового микроскопа, так и на уровне электронного микроскопа никогда не следует проводить с инфекционными организмами, если не соблюдаются строгие меры предосторожности. Негативное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, таким образом, не снижает вероятность заражения оператора.
Просвечивающая электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием также успешно применялась для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как пластинчатые липосомы (le), перевернутые сферические мицеллы (M) и перевернутые гексагональные цилиндрические фазы HII (H) (см. рисунок). [5]