Предметное стекло микроскопа представляет собой тонкий плоский кусок стекла , обычно размером 75 на 26 мм (3 на 1 дюйм) и толщиной около 1 мм, используемый для хранения объектов для исследования под микроскопом . Обычно объект монтируется (закрепляется) на предметном стекле, а затем оба объекта вставляются вместе в микроскоп для просмотра. Такое расположение позволяет быстро вставлять и удалять из микроскопа несколько объектов, закрепленных на предметном стекле, маркировать, транспортировать и хранить в соответствующих футлярах для предметных стекол или папках и т. д.
Предметные стекла для микроскопа часто используются вместе с покровным стеклом или покровным стеклом — меньшим и более тонким листом стекла, который помещается на образец. Предметные стекла удерживаются на предметном столике микроскопа с помощью зажимов для предметных стекол, зажимов для предметных стекол или поперечного стола, который используется для достижения точного, дистанционного перемещения предметного стекла по предметному столику микроскопа (например, в автоматизированной/компьютерной системе или при прикосновении слайд с пальцами неуместен либо из-за риска загрязнения , либо из-за недостаточной точности).
Истоком концепции послужили кусочки слоновой кости или кости , содержащие образцы, помещенные между дисками прозрачной слюды , которые скользили в зазор между сценой и объективом. [1] Эти «слайдеры» были популярны в викторианской Англии до тех пор, пока Королевское микроскопическое общество не представило стандартизированное предметное стекло для микроскопа. [2]
Стандартное предметное стекло микроскопа имеет размеры примерно 75 на 25 мм (3 на 1 дюйм) и толщину около 1 мм. Для различных специальных целей доступен ряд других размеров, например 75 x 50 мм для геологического использования, 46 x 27 мм для петрографических исследований и 48 x 28 мм для тонких срезов . Слайды обычно изготавливаются из обычного стекла, а их края часто шлифуются или полируются.
Предметные стекла микроскопа обычно изготавливаются из стекла оптического качества , такого как натриево- кальциевое или боросиликатное стекло , но также используются специальные пластмассы. Слайды из плавленого кварца часто используются, когда важна прозрачность ультрафиолета , например, во флуоресцентной микроскопии . [3] [4]
Хотя простые слайды являются наиболее распространенными, существует несколько специализированных типов. Вогнутое предметное стекло или полое предметное стекло имеет одно или несколько неглубоких углублений («лунок»), предназначенных для удерживания слегка более толстых объектов и определенных образцов, таких как жидкости и тканевые культуры . [5] Слайды могут иметь закругленные углы для повышения безопасности или прочности или срезанный угол для использования с зажимом слайдов или поперечным столом, где слайд фиксируется подпружиненным изогнутым рычагом, контактирующим с одним углом, заставляя противоположный угол слайда против прямоугольного рычага, который не движется. Если бы эта система использовалась с направляющей, которая не имела этих срезанных углов, углы могли бы расколоться, и направляющая могла бы разбиться. [5]
Слайд масштабной сетки отмечен сеткой линий (например, сетка 1 мм), что позволяет легко оценить размер объектов, видимых под увеличением, и обеспечивает контрольные области для подсчета мельчайших объектов. Иногда один квадрат сетки сам делится на более мелкую сетку. Слайды для специализированных применений, таких как гемоцитометры для подсчета клеток, могут иметь различные резервуары, каналы и барьеры, вытравленные или отшлифованные на их верхней поверхности. [6] Различные постоянные маркировки или маски могут быть напечатаны , подвергнуты пескоструйной обработке или нанесены на поверхность производителем, обычно с использованием инертных материалов, таких как ПТФЭ . [7]
Некоторые слайды имеют на одном конце матовую или эмалированную область для маркировки карандашом или ручкой. [5] Слайды могут иметь специальное покрытие, нанесенное производителем, например, для химической инертности или повышенной адгезии клеток . Покрытие может иметь постоянный электрический заряд , позволяющий удерживать тонкие или порошкообразные образцы. Обычные покрытия включают поли-L-лизин , силаны , эпоксидные смолы , [5] [7] или даже золото . [8]
Установка образцов на предметные стекла микроскопа часто имеет решающее значение для успешного просмотра. За последние два столетия этой проблеме уделялось много внимания, и она представляет собой хорошо развитую область со множеством специализированных, а иногда и весьма сложных методов. Образцы часто удерживаются на месте с помощью стеклянных покровных стекол меньшего размера .
Основная функция покровного стекла — удерживать твердые образцы в плоском состоянии, а жидкие — в плоском слое одинаковой толщины. Это необходимо, поскольку микроскопы высокого разрешения имеют очень узкую область фокусировки.
Покровное стекло часто выполняет несколько других функций. Он удерживает образец на месте (либо за счет веса покровного стекла, либо, в случае мокрого монтажа, за счет поверхностного натяжения ) и защищает образец от пыли и случайного контакта. Он защищает объектив микроскопа от контакта с образцом и наоборот; в масляно-иммерсионной или водо-иммерсионной микроскопии покровное стекло предотвращает контакт иммерсионной жидкости с образцом. Покровное стекло можно приклеить к предметному стеклу, чтобы изолировать образец, замедляя обезвоживание и окисление образца, а также предотвращая контаминацию. Используется ряд герметиков, в том числе коммерческие герметики, лабораторные препараты или даже обычный прозрачный лак для ногтей , в зависимости от образца. Герметик, не содержащий растворителей, который можно использовать для образцов живых клеток, представляет собой «валап», смесь вазелина , ланолина и парафина в равных частях. [9] Микробные и клеточные культуры можно выращивать непосредственно на покровном стекле перед тем, как его поместить на предметное стекло, а образцы можно постоянно закреплять на предметном стекле, а не на предметном стекле. [9]
Покровные стекла доступны в различных размерах и толщинах. [10] Использование неправильной толщины может привести к сферической аберрации и снижению разрешения и интенсивности изображения. Специальные объективы могут использоваться для изображения образцов без покровных стекол или могут иметь корректирующие кольца, позволяющие пользователю адаптироваться к альтернативной толщине покровных стекол. [11] [12]
При сухом монтаже , самом простом виде монтажа, объект просто помещается на слайд. Сверху можно положить покровное стекло, чтобы защитить образец и объектив микроскопа, а также сохранить его неподвижным и прижатым. Эту установку можно с успехом использовать для просмотра таких образцов, как пыльца, перья, волосы и т. д. Она также используется для исследования частиц, попавших в прозрачные мембранные фильтры (например, при анализе взвешенной в воздухе пыли ).
При влажном методе образец помещают в каплю йода или другой жидкости, удерживаемой между предметным и покровным стеклами за счет поверхностного натяжения. Этот метод обычно используется, например, для наблюдения за микроскопическими организмами, растущими в прудовой воде или других жидких средах, особенно в озерах.
Для патологоанатомических и биологических исследований образец обычно подвергается сложной гистологической подготовке, включающей его фиксацию для предотвращения гниения, удаление содержащейся в нем воды , замену воды парафином , нарезку на очень тонкие срезы с помощью микротома , помещение срезов на предметное стекло микроскопа, окрашивание ткани различными красителями для выявления конкретных компонентов ткани, очистка ткани, чтобы сделать ее прозрачной, и накрытие ее покровным стеклом и заливочной средой.
Рассеянный монтаж описывает изготовление предметных стекол для палинологического микроскопа путем суспендирования концентрированного образца в дистиллированной воде , помещения образцов на предметное стекло и обеспечения испарения воды . [13]
Монтажной средой является раствор, в который погружают образец, обычно под покровное стекло. Простые жидкости, такие как вода или глицерин , можно считать средой для крепления, хотя этот термин обычно относится к соединениям, которые затвердевают, образуя постоянное соединение. К популярным закрепляющим средам относятся Permount , [14] и закрепляющая среда Хойера, а также альтернативный глицериновый желе [15]. Свойства хорошей закрепляющей среды включают показатель преломления, близкий к показателю преломления стекла (1,518), отсутствие реакции с образцом, стабильность время без кристаллизации, потемнения или изменения показателя преломления, растворимость в среде, в которой был приготовлен образец ( водной или неполярной , такой как ксилол или толуол ), отсутствие выцветания или вымывания пятна образца. [16]
Широко используется в иммунофлуоресцентной цитохимии, где флуоресценцию невозможно архивировать. Временное хранение должно осуществляться в темном влажном помещении. Общие примеры:
Используется, когда требуется постоянное крепление.
В отличие от монтажа, необходимого для покровных стекол, аналогичный монтаж можно выполнить для хранения более объемных образцов в стеклянных контейнерах в музеях. Однако для подготовки проб используется совершенно другой тип монтажа , который может относиться к биологическим или небиологическим материалам и далее подразделяется на процессы монтажа «горячего» (сжимающего) и «холодного» (литьевого) типа. [18] [19] Хотя это и называется «монтированием», оно больше похоже на встраивание в гистологию, и его не следует путать с описанным выше монтажом. Термин «монтаж» в других областях имеет множество других значений.
