В микроскопии негативное окрашивание является общепринятым методом, часто используемым в диагностической микроскопии для контрастирования тонкого образца с оптически непрозрачной жидкостью . В этом методе фон окрашивается , оставляя сам образец нетронутым и, таким образом, видимым. Это контрастирует с позитивным окрашиванием , при котором окрашивается сам образец.
Для микроскопии в светлом поле негативное окрашивание обычно выполняется с использованием черной чернильной жидкости, такой как нигрозин и тушь . Образец, такой как влажная бактериальная культура, нанесенная на предметное стекло, смешивается с негативным красителем и высушивается. При просмотре под микроскопом бактериальные клетки и, возможно, их споры кажутся светлыми на темном окружающем фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водостойкого маркера для нанесения негативного красителя. [1]
В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность для электронов связана с атомным номером , т. е. числом протонов. Некоторые подходящие негативные красители включают молибдат аммония , ацетат уранила , формиат уранила , фосфорновольфрамовую кислоту , тетроксид осмия , феррицианид осмия [ необходимо разъяснение ] [2] и ауроглюкотионат. Они были выбраны, потому что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются на биологическом веществе. Структуры, которые могут быть негативно окрашены, намного меньше тех, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь метод используется для просмотра вирусов , бактерий, бактериальных жгутиков , биологических мембранных структур и белков или белковых агрегатов, которые все имеют низкую способность рассеивать электроны. Некоторые красители, такие как тетроксид осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Будучи сильными окислителями, они сшивают липиды, в основном, реагируя с ненасыщенными углерод-углеродными связями, и тем самым фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей и одновременно окрашивают их. [3] [4]
Выбор негативного окрашивания в электронной микроскопии может быть очень важным. Раннее исследование вирусов растений с использованием негативно окрашенных листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним окрашиванием и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод состоял в том, что это растение страдало от смешанной инфекции двумя отдельными вирусами. Негативное окрашивание как на уровне светового микроскопа, так и на уровне электронного микроскопа никогда не следует проводить с инфекционными организмами, если не соблюдаются строгие меры предосторожности. Негативное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, таким образом, не снижает вероятность заражения оператора.
Негативное окрашивание просвечивающей электронной микроскопии также успешно применялось для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как пластинчатые липосомы (le), перевернутые сферические мицеллы (M) и перевернутые гексагональные цилиндрические фазы HII (H) (см. рисунок). [5]