Нейрогенины , часто сокращенно Ngn , представляют собой семейство факторов транскрипции bHLH , участвующих в определении нейрональной дифференциации. Семейство, состоящее из Нейрогенина-1, Нейрогенина-2 и Нейрогенина-3, играет фундаментальную роль в определении нейронных клеток-предшественников и регуляции дифференциации нейронов во время эмбрионального развития. Это одно из многих семейств генов, связанных с атональным геном у Drosophila . Другие положительные регуляторы нейрональной дифференциации, также экспрессируемые во время раннего нейронного развития, включают NeuroD и ASCL1 . [1]
Нейрогенины в первую очередь управляют переходом нейронных клеток-предшественников в нейроны , активируя специфические нижестоящие гены, связанные с нейрональной дифференциацией. Их участие охватывает различные стадии нейрогенеза , включая определение идентичности нейронных клеток-предшественников, выход из клеточного цикла и приобретение нейронных характеристик. В частности, нейрогенины влияют на спецификацию различных подтипов нейронов, способствуя разнообразному массиву нейронов в центральной и периферической нервной системе. [2]
В клетках нервного гребня семейство нейрогенинов необходимо для нейрогенеза в развивающихся ганглиях задних корешков и развития сенсорной линии. [3] [4]
Активность нейрогенинов сложно регулируется молекулярными путями и внешними сигналами. Взаимодействие с другими факторами транскрипции , такими как пронейральные факторы и сигнализация Notch, еще больше совершенствует нейрогенные каскады. Их пространственно-временные паттерны экспрессии и перекрестная регуляция способствуют изысканной точности, необходимой для правильного развития нейронов. [5] [6]
Нейрогенины имеют важное значение для клинических исследований, особенно в контексте нарушений развития нервной системы и неврологической регенерации. [7] Аберрации в экспрессии или регуляции нейрогенинов были связаны с такими состояниями, как расстройства аутистического спектра и нейродегенеративные заболевания . [8] Текущие исследования продолжают изучать терапевтический потенциал манипулирования активностью нейрогенинов для восстановления и регенерации нейронов.
Нейрогенин 1 (Ngn1) — это фактор транскрипции класса А «базовая спираль-петля-спираль » (bHLH) , который действует как регулятор нейрональной дифференциации и действует путем связывания с регуляторными элементами усилителя на генах , кодирующих транскрипционные регуляторы нейрогенеза . Для того чтобы Ngn1 связывался с геномной ДНК с высокой точностью , он должен димеризоваться с другим белком bHLH . [9] Ngn1 — это пронейральный ген, поскольку его экспрессия наблюдается до определения нейронной линии , что указывает на то, что он играет роль в нейрональной дифференциации. [1]
У крыс E14, когда Ngn1 присутствует в коре головного мозга , он связывается с комплексом транскрипционного коактиватора CBP / p300 / Smad1 , который привлекает его к энхансерному блоку выше гена в промоторе нейрональных генов. Связывание Ngn1 с энхансерным блоком побуждает транскрипционный фактор NeuroD связываться с его собственными энхансерными блоками, индуцируя гены, участвующие в нейрональной дифференциации. [10]
Сигнализация костного морфогенетического белка (BMP) отвечает за экспрессию транскрипционных коактиваторов CBP, p300 и Smad1. [10] В присутствии Ngn1 BMP способствуют нейрональной дифференциации в стволовых клетках посредством связывания всех эндогенных CBP/p300/Smad1 с Ngn1 и привлечения к нейрональным промоутерам, вызывая нейрональную дифференциацию. [10] В эмбриональном переднем мозге Ngn1 связан с дорсальным паттернированием и спецификацией судьбы клеток, при этом паттернирующие молекулы и пронейральные белки устанавливают пространственные домены как пронейральной, так и гомеодоменной экспрессии белков. Это имеет решающее значение для инициации нейрогенеза. [11]
В присутствии Ngn1 путь фактора ингибирования лейкемии (LIF) ингибируется Ngn1, блокирующим активацию STAT . Обычно сайт связывания STAT способствует транскрипции GFAP посредством связывания комплекса STAT1/3, который активируется через путь LIF. [10]
Наряду с поддержкой нейрональной дифференциации, при экспрессии в эмбриональной нервной ткани, Ngn1 также действует, ингибируя глиальную дифференциацию. [12] В отсутствие Ngn1 транскрипционный коактиваторный комплекс CBP/p300/Smad1 привлекается и связывается с активированным STAT1/3, что в свою очередь вызывает экспрессию GFAP, вызывая глиальную дифференциацию. В присутствии Ngn1 ингибирование глиогенеза происходит посредством связывания Ngn1 с транскрипционным коактиваторным комплексом CBP/p300/Smad1, отвлекая его от STAT1/3. [10]
В случаях низкого уровня Ngn1 BMP способствуют глиальной дифференциации. Поскольку Ngn1 является ограничивающим фактором, CBP/p300/Smad1 способен взаимодействовать со STAT1/3 и вызывать глиогенез. [10]
Активация пути Notch вызывает ингибирование пронейральных генов bHLH, таких как Ngn1, что позволяет CBP/p300/Smad1 взаимодействовать со STAT1/3 и индуцировать глиогенез. [10] Наряду с эмбрионами крысы, у данио-рерио было также замечено , что подавление Ngn1 Notch способствует образованию глиальной линии в нервном гребне и центральной нервной системе посредством ингибирования нейрональной дифференцировки. [1] [13] Помимо пути Notch, активирующего транскрипционные факторы, участвующие в продвижении глиогенеза, возможно, что эти же факторы участвуют в ингибировании других судеб.
При отсутствии Ngn1 путь LIF способен активировать STAT1/3, что позволяет стимулировать транскрипцию GFAP через сайт связывания STAT. Стимулирование транскрипции GFAP индуцировало глиальную дифференциацию. [10]
Нейрогенин 2 (Ngn2) — это фактор транскрипции bHLH, участвующий как в нейрогенезе, так и в нейронной спецификации. Этот белок связывается с регуляторными элементами энхансерного бокса на промоторах многих генов, связанных с нейрогенезом и нейронной спецификацией. Для достаточного связывания ДНК Ngn2 должен образовать димер с энхансерным белком. [14]
Ngn2 — это фактор транскрипции, который как увеличивает экспрессию пронейральных генов, так и управляет нейронной судьбой, подавляя экспрессию глиальных генов в нейронных клетках-предшественниках (NPC). Это наблюдалось у мышей, лишенных Ngn2 и mash-1 (другого пронейрального фактора транскрипции bHLH), у которых в коре больше глии и снижена способность генерировать нейроны. Экспрессия Olig2 в том, что станет NPC, предшествует Ngn2 и способствует его экспрессии. [10] Во время переключения с судьбы нейронных предшественников на глиальную судьбу, Ngn2 подавляется, а Nkx2.2 , который подавляет пронейральные гены, повышается. [15] Переключение глиальной судьбы было снижено путем ингибирования Nkx2.2 и Olig2 в нейронных предшественниках, при этом позволяя экспрессию Ngn2. Способность Olig2 вызывать экспрессию Ngn2 снижается, когда экспрессируется Nkx2.2. [16]
У мышей, у которых отсутствует Ngn2, меньше двигательных нейронов и вентральных интернейронов , что указывает на то, что Ngn2 играет роль в спецификации этих нейронов. [17]
Гетеродимеризованный комплекс белка Ngn2/энхансера может связываться с энхансерными блоками, способствуя транскрипции генов, связанных с неспецифической нейронной судьбой. [17]
Когда энхансерный блок промотора, связанный с комплексом белка Ngn-2/энхансера, также связан с димером адаптерного ядерного интерактора LIM (NLI), связанного с двумя гомеобоксными белками LIM 3 (Lhx3), экспрессируются гены, связанные с идентичностью интернейронов V2. [17]
Димер адаптера NLI, связанный с двумя белками островка 1 (Isl1), и каждый Isl1 связан с Lhx3, называется транскрипционным комплексом LIM-гомеодомен (LIM-HD). Когда энхансерный блок промотора, связанный с гетеродимеризованным комплексом Ngn2/E-белка, транскрипционный комплекс LIM-HD способен связываться для управления экспрессией генов, связанных с судьбой двигательного нейрона, но только если Ngn2 был правильно фосфорилирован . [17]
Ngn2 имеет два серина , S231 и S234, которые могут фосфорилироваться гликогенсинтазой киназой 3 (Gsk3). Фосфорилирование Ngn2 обеспечивает взаимодействие с белками гомеодомена LIM, что приводит к вентральной нейронной судьбе и спецификации двигательных нейронов. [18] Важность этого фосфорилирования была определена с использованием мышей, которые экспрессируют мутированную форму белка Ngn2, в которой серины из ранее упомянутых участков фосфорилирования мутировали в аланины , которые не могут фосфорилироваться. Эти мутантные мыши имеют уменьшенное количество двигательных нейронов и увеличенное количество интернейронов V2, что позволяет предположить, что фосфорилирование необходимо для управления экспрессией генов, связанных с судьбой двигательных нейронов, но не с судьбой интернейронов V2 и неспецифической нейронной судьбой. [17]
Нейрогенин 3 (Ngn3) — еще один член семейства факторов транскрипции bHLH. Ngn3 функционирует в дифференциации эндокринных клеток поджелудочной железы . Хотя его ключевая функция находится в поджелудочной железе, кишечные клетки и нервные клетки также экспрессируют Ngn3. Несколько исследований подчеркнули важность Ngn3 для дифференциации эндокринных клеток. У мышей Ngn3 присутствует в клетках, когда поджелудочная железа начинает почковаться и формируются клетки глюкагона . Существует несколько путей, по которым работает Ngn3. [19] [20] [21] [22]
Ngn3 является важнейшим компонентом в развитии поджелудочной железы и играет вспомогательную роль в развитии кишечных и нейронных клеток. Исследования показали, что нокаутирование Ngn3 у мышей приводит к смерти вскоре после рождения, возможно, из-за последствий тяжелого диабета. [19] Проводятся дальнейшие исследования для изучения возможной роли Ngn3 в лечении диабета и регенерации клеток поджелудочной железы. [19] [21]
Нейрогенин 3 (NGN3) экспрессируется 2–10 % ацинарных и протоковых клеток в гистологически нормальной поджелудочной железе взрослого человека. Клетки NGN3+, выделенные из культивируемой экзокринной ткани с помощью коэкспрессированного гликопротеина клеточной поверхности CD133, имеют транскриптом, соответствующий экзокринной дедифференцировке, фенотип, напоминающий эндокринные клетки-предшественники во время развития, и способность к эндокринной дифференцировке in vitro. [23] Экзокринные клетки человека [24] и грызунов [25] [ 26] [27] [28] [29] [30] [31] [ 32 ] [33] были перепрограммированы в клетки с фенотипом, подобным фенотипу островковых клеток, после прямой экспрессии NGN3 или манипуляции, которая приводит к его экспрессии.
Развитие поджелудочной железы делится на три фазы: первичную, вторичную и третичную. Ngn3 активен в первичной и вторичной фазах. В первичной фазе Ngn3 помогает в дифференцировке α-клеток , а во вторичной фазе другая волна Ngn3 помогает в дифференцировке β-клеток , клеток панкреатического полипептида и δ-клеток . Дифференциация считается завершенной после вторичной фазы. Ngn3 позволяет панкреатическим клеткам-предшественникам стать эндокринными мультипотентными про-предшественниками. [19]
Путь Notch является одним из ключевых модуляторов Ngn3. Связывание Delta и Serrate, активирующих лигандов для пути Notch, активирует молекулу поверхности Notch. Это позволяет внутриклеточному домену Notch активировать RBK-Jκ для транслокации в ядро. Затем этот комплекс активирует белки типа hairy и enhancer of split (HES), которые являются ингибиторами Ngn3. Клетки, которые позволяют комплексу Notch/RBK-Jκ войти, — это те, которые не будут дифференцироваться в клетки поджелудочной железы, поскольку Ngn3 подавлен. Важно отметить, что Ngn3 имеет три сайта связывания HES1, прилегающие к последовательности TATA-бокса , что позволяет регулировать этот фактор транскрипции. [19]
Ngn3 также может активировать нейрогенный фактор дифференциации 1 (NeuroD1), как и большинство других членов его семейства, через усилительные коробки, присутствующие в его структуре. Поскольку NeuroD1 экспрессируется вместе с Ngn3 в дифференцирующихся клетках, он считается одной из нижестоящих целей факторов транскрипции. [19]
Другой важной целью является парный ген 4 (Pax4), который играет важную роль в дифференциации β- и δ-клеток. Ngn3 работает рука об руку с HNF1α , чтобы активировать промотор Pax4 для индукции специфической дифференциации клеток. [19]
Другим фактором транскрипции, который может быть нисходящей целью Ngn3, является Nkx2.2, поскольку он часто коэкспрессируется с ним. Исследования показали, что нарушение экспрессии Nkx2.2 приводит к проблемам с дифференцировкой α- и β-клеток. [20] [21]