stringtranslate.com

Комагатаэлла

Komagataella — метилотрофные дрожжи отряда Saccharomycetales . Он был обнаружен в 1960-х годах как Pichia Pastoris , с его особенностью использования метанола в качестве источника углерода и энергии. [2] В 1995 году P. Pastoris был преобразован в единственного представителя рода Komagataella , став Komagataella Pastoris . [3] Более поздние исследования выявили новые виды в этом роде, в результате чего было выделено в общей сложности 7 признанных видов. [4] Нередко можно увидеть, что по состоянию на 2023 год старое название все еще используется в контексте производства белка; [5] при менее формальном использовании дрожжи можно сбить с толку называть пичиа .

После многих лет изучения Комагатаелла широко используется в биохимических исследованиях и биотехнологических отраслях . Имея большой потенциал в качестве системы экспрессии для производства белка , а также в качестве модельного организма для генетических исследований, Komagataella phaffii стала важной для биологических исследований и биотехнологических приложений. [1] [5]

Таксономия

По данным GBIF : [4]

Комагатаэлла в природе

Естественная среда обитания

В природе Комагатаелла встречается на деревьях, например, каштанах . [7] Они являются гетеротрофами и могут использовать для жизни несколько источников углерода, таких как глюкоза , глицерин и метанол . [8] Однако они не могут использовать лактозу .

Воспроизведение

Komagataella может подвергаться как бесполому , так и половому размножению путем почкования и аскоспоры . [9] При этом существуют два типа клеток Komagataella : гаплоидные и диплоидные клетки. В бесполом жизненном цикле гаплоидные клетки подвергаются митозу для размножения. В половом жизненном цикле диплоидные клетки подвергаются споруляции и мейозу . [10] Скорость роста колоний может варьироваться в широком диапазоне: от почти 0 до времени удвоения в один час, что подходит для промышленных процессов. [11]

Комагатаелла как модельный организм

За последние несколько лет Komagataella была исследована и признана хорошим модельным организмом с рядом преимуществ. Прежде всего, комагатаеллу можно легко выращивать и использовать в лаборатории. Как и другие широко используемые модели дрожжей, они имеют относительно короткий срок службы и быстрое время регенерации. Более того, были разработаны недорогие питательные среды, позволяющие Komagataella быстро расти на них с высокой плотностью клеток. [12] Было проведено полногеномное секвенирование Komagataella . Геном K. phaffii GS115 был секвенирован Институтом биотехнологии Фландрии и Гентским университетом и опубликован в журнале Nature Biotechnology . [13] Последовательность генома и аннотацию гена можно просмотреть в системе ORCAE. Полные геномные данные позволяют ученым идентифицировать гомологичные белки и эволюционные связи между другими видами дрожжей и Komagataella . Кроме того, к 2022 году были секвенированы все семь видов. [7] Кроме того, Komagataella представляют собой отдельные эукариотические клетки, что означает, что исследователи смогут исследовать белки внутри Komagataella . Затем можно провести гомологическое сравнение с другими, более сложными видами эукариот, чтобы выяснить их функции и происхождение. [14]

Еще одним преимуществом Komagataella является ее сходство с хорошо изученной моделью дрожжей — Saccharomyces cerevisiae . В качестве модельного биологического организма S. cerevisiae хорошо изучалась на протяжении десятилетий и на протяжении всей истории использовалась исследователями для различных целей. Два рода дрожжей; Pichia ( sensu lato ) и Saccharomyces имеют схожие условия роста и толерантность; таким образом, культура Komagataella может быть принята в лабораториях без особых модификаций. [15] Более того, в отличие от S. cerevisiae , Komagataella обладает способностью функционально обрабатывать белки с большой молекулярной массой, что полезно для трансляционного хозяина. [16] Учитывая все преимущества, Komagataella может быть с пользой использована как в качестве генетического, так и в качестве экспериментального модельного организма.

Комагатаелла как генетический модельный организм

В качестве генетического модельного организма Komagataella может использоваться для генетического анализа и крупномасштабного генетического скрещивания , имея полные данные о геноме и ее способность выполнять сложную эукариотическую генетическую обработку в относительно небольшом геноме. Функциональные гены сборки пероксисом были исследованы путем сравнения штаммов дикого типа и мутантных штаммов Komagataella . [17]

Комагатаелла как экспериментальный модельный организм

В качестве экспериментального модельного организма Komagataella в основном использовалась в качестве системы-хозяина для трансформации. Благодаря его способности рекомбинировать с чужеродной ДНК и обрабатывать большие белки, было проведено много исследований с целью изучения возможности производства новых белков и функции искусственно созданных белков с использованием Komagataella в качестве хозяина трансформации. [18] В последнее десятилетие Komagataella была разработана для создания платформ системы экспрессии , что является типичным применением для стандартной экспериментальной модели организма, как описано ниже.

Комагатаелла как платформа системы экспрессии

Комагатаелла часто используется в качестве системы экспрессии для производства гетерологичных белков. Несколько свойств делают Комагатаеллу подходящей для этой задачи. В настоящее время в биотехнических целях используется несколько штаммов Komagataella , между которыми имеются существенные различия по росту и продукции белка. [19] Некоторые распространенные варианты обладают мутацией в гене HIS4 , что приводит к отбору клеток, которые успешно трансформируются векторами экспрессии . Технология интеграции вектора в геном Komagataella аналогична технологии Saccharomyces cerevisiae . [20]

Преимущество

  1. Комагатаелла способна расти на простой и недорогой среде с высокой скоростью роста. Комагатаелла может расти как во встряхиваемых колбах , так и в ферментерах , что делает ее подходящей как для мелкого, так и для крупномасштабного производства. [21]
  2. Komagataella имеет два гена алкогольоксидазы , Aox1 и Aox2 , которые включают сильно индуцируемые промоторы . [22] Эти два гена позволяют Komagataella использовать метанол в качестве источника углерода и энергии. Промоторы АОХ индуцируются метанолом и подавляются глюкозой . Обычно ген нужного белка вводят под контролем промотора Aox1 , а это означает, что продукцию белка можно индуцировать добавлением метанола в среду. После нескольких исследований ученые обнаружили, что промотор, полученный из гена AOX1 Komagataella , чрезвычайно подходит для контроля экспрессии чужеродных генов, которые были трансформированы в геном Komagataella , производя гетерологичные белки. [23]
  3. Обладая ключевым свойством , Komagataella может расти в культуре с чрезвычайно высокой плотностью клеток. Эта особенность совместима с экспрессией гетерологичных белков, что обеспечивает более высокие выходы продукции. [24]
  4. Технология, необходимая для генетических манипуляций с Komagataella, аналогична технологии Saccharomyces cerevisiae , которая является одним из наиболее хорошо изученных модельных организмов дрожжей. В результате протокол эксперимента и материалы для Komagataella легко составить . [25]

Недостаток

Поскольку некоторым белкам для правильного сворачивания требуется шаперонин , Komagataella не может производить ряд белков, поскольку не содержит соответствующих шаперонов. Технологии введения генов шаперонинов млекопитающих в геном дрожжей и сверхэкспрессии существующих шаперонинов все еще требуют совершенствования. [26] [27]

Сравнение с другими системами экспрессии

В стандартных молекулярно-биологических исследованиях бактерия Escherichia coli является наиболее часто используемым организмом для системы экспрессии для производства гетерологичных белков из-за ее особенностей быстрой скорости роста, высокой скорости производства белка, а также нетребовательных условий роста. Производство белка у E. coli обычно происходит быстрее, чем у Komagataella , и на это есть причины: компетентные клетки E. coli можно хранить замороженными и размораживать перед использованием, тогда как клетки Komagataella необходимо производить непосредственно перед использованием. Урожайность экспрессии Komagataella варьируется в зависимости от разных клонов , поэтому необходимо проверить большое количество клонов на выработку белка, чтобы найти лучшего производителя. Самым большим преимуществом Komagataella перед E. coli является то, что Komagataella способна образовывать дисульфидные связи и гликозилировать в белках, а E. coli не может. [28] E. coli может производить неправильно свернутый белок, когда дисульфиды включены в конечный продукт, что приводит к неактивным или нерастворимым формам белков. [29]

Хорошо изученные Saccharomyces cerevisiae также используются в качестве системы экспрессии с такими же преимуществами перед E. coli , как и Komagataella . Однако Komagataella имеет два основных преимущества перед S. cerevisiae в лабораторных и промышленных условиях:

  1. Komagataella , как упоминалось выше, является метилотрофом , что означает, что она может расти с использованием простого метанола в качестве единственного источника энергии. Komagataella может быстро расти в клеточной суспензии с достаточно крепким раствором метанола, что убивает большинство других микроорганизмов. В этом случае система экспрессии не требует больших затрат в настройке и обслуживании.
  2. Комагатаелла может достигать очень высокой плотности клеток. В идеальных условиях он может размножаться до такой степени, что суспензия клеток превращается практически в пасту. Поскольку выход белка из системы экспрессии в микробе примерно равен продукту белков, продуцируемых на клетку, что делает Komagataella очень полезным при попытке производства больших количеств белка без дорогостоящего оборудования. [28]

По сравнению с другими системами экспрессии, такими как S2-клетки Drosophila melanogaster и клетки яичников китайского хомячка , Komagataella обычно дает гораздо лучшие урожаи. Как правило, клеточные линии многоклеточных организмов требуют сложных и дорогостоящих сред, включая аминокислоты , витамины , а также другие факторы роста . Эти типы сред значительно увеличивают стоимость производства гетерологичных белков. Кроме того, Komagataella может расти в средах, содержащих только один источник углерода и один источник азота , что подходит для приложений изотопного мечения, таких как ЯМР белков . [28]

Промышленное применение

Комагатаелла использовалась в нескольких видах биотехнологических отраслей, например, в фармацевтической промышленности . Все приложения основаны на его особенности экспрессии белков.

Биотерапевтическая продукция

За последние несколько лет Komagataella использовалась для производства более 500 видов биотерапевтических препаратов , таких как IFNγ . Вначале одним недостатком этой системы экспрессии белка является чрезмерное гликозилирование с высокой плотностью структуры маннозы , что является потенциальной причиной иммуногенности . [30] [31] В 2006 году исследовательской группе удалось создать новый штамм под названием YSH597. [a] Этот штамм может экспрессировать эритропоэтин в его нормальной форме гликозилирования путем обмена ферментов, ответственных за гликозилирование грибкового типа, с гомологами млекопитающих. Таким образом, измененный характер гликозилирования позволил белку стать полностью функциональным. [32]

Производство ферментов

В пищевой промышленности, такой как пивоварня и пекарня, Komagataella используется для производства различных видов ферментов, в качестве технологических вспомогательных средств и пищевых добавок с множеством функций. Например, некоторые ферменты, вырабатываемые генетически модифицированной Komagataella , могут сохранять хлеб мягким. Между тем, в пиве можно использовать ферменты для снижения концентрации алкоголя. [33] Рекомбинантная фосфолипаза C может обезжиривать масла с высоким содержанием фосфора, расщепляя фосфолипиды. [34]

В кормах для животных фитаза , продуцируемая K. paffi , используется для расщепления фитиновой кислоты , антипитательного вещества. [34]

Рекомендации

  1. ^ YSH597 основан на штамме NRRL-Y11430, который теперь считается частью K. paffi .
  1. ^ ab Де Шуттер, К., Лин, Ю., Тилс, П. (2009). «Последовательность генома хозяина, производящего рекомбинантный белок Pichia Pastoris». Природная биотехнология . 27 (6): 561–566. дои : 10.1038/nbt.1544 . ПМИД  19465926.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  2. ^ Коичи Огата, Хидео Нисикава и Масахиро Осуги (1969). «Дрожжи, способные использовать метанол». Сельскохозяйственная и биологическая химия . 33 (10): 1519–1520. дои : 10.1080/00021369.1969.10859497.
  3. ^ Ямада, Юзо; Мацуда, Минако; Маэда, Кодзиро; Миката, Козабуро (январь 1995 г.). «Филогенетические взаимоотношения метанолассимилирующих дрожжей на основе частичных последовательностей 18S и 26S рибосомальных РНК: предложение Komagataella Gen. Nov. (Saccharomycetaceae)». Бионауки, биотехнологии и биохимия . 59 (3): 439–444. дои : 10.1271/bbb.59.439. ПМИД  7766181.
  4. ^ ab "Комагатаэлла Ю.Ямада, М.Мацуда, К.Маэда и Миката, 1995" . www.gbif.org .
  5. ^ аб Хейстингер, Лина; Гассер, Бриджит; Маттанович, Дитард (01 июля 2020 г.). «Микробный профиль: Komagataella phaffii: биотехнологические дрожжи, пожирающие метанол, ранее известные как Pichia Pastoris». Микробиология . 166 (7): 614–616. дои : 10.1099/mic.0.000958 . ISSN  1350-0872. ПМИД  32720891.
  6. ^ Курцман, Клетус Пол (ноябрь 2009 г.). «Биотехнологические штаммы Komagataella (Pichia) пасторис представляют собой Komagataella phaffii, что определено на основе анализа мультигенных последовательностей». Журнал промышленной микробиологии и биотехнологии . 36 (11): 1435–1438. дои : 10.1007/s10295-009-0638-4 .
  7. ^ аб Хейстингер, Л; Дом, Дж.К.; Паес, Б.Г.; Койзар, Д; Тройер, К; Ата, Ö; Штайнингер-Майрингер, Т; Маттанович, Д. (25 апреля 2022 г.). «Генотипическое и фенотипическое разнообразие видов Komagataella раскрывает скрытый путь утилизации ксилозы». Заводы по производству микробных клеток . 21 (1): 70. дои : 10.1186/s12934-022-01796-3 . ПМЦ 9036795 . ПМИД  35468837. 
  8. ^ Ребнеггер, К., Вос, Т., Граф, А.Б., Валли, М., Пронк, Дж. Т., Даран-Лапухаде, П., и Маттанович, Д. (2016). «Pichia Pastoris демонстрирует высокую жизнеспособность и низкие потребности в энергии при практически нулевых удельных темпах роста». Прикладная и экологическая микробиология . 82 (15): 4570–4583. Бибкод : 2016ApEnM..82.4570R. дои : 10.1128/AEM.00638-16 . ПМЦ 4984280 . ПМИД  27208115. {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  9. ^ Курцман (1998). «42 - Пичия ЕС, исправление Хансена. Курцман». Дрожжи: таксономическое исследование . 1 : 273–352. дои : 10.1016/B978-044481312-1/50046-0. ISBN 9780444813121.
  10. ^ Зёрго Э., Хвиалковска К., Гьювсланд А.Б., Гарре Э., Суннерхаген П., Лити Г., Бломберг А., Омхольт С.В., Уоррингер Дж. (2013). «Древние эволюционные компромиссы между состояниями плоидности дрожжей». ПЛОС Генетика . 9 (3): e1003388. дои : 10.1371/journal.pgen.1003388 . ПМК 3605057 . ПМИД  23555297. {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  11. ^ Кастилан Р., Боес А., Шпигель Х. (2017). «Улучшение процесса ферментации для производства двух кандидатов на вакцину против малярии на основе PfAMA1-DiCo в Pichia Pastoris». Природа . 1 (1): 7. Бибкод : 2017НатСР...711991К. дои : 10.1038/s41598-017-11819-4 . ПМК 5607246 . ПМИД  28931852. {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  12. ^ MM Гуарна Г. Дж. Лесницки BM Тэм Дж. Робинсон CZ Радзиминский Д. Хасенвинкль А. Борастон Э. Джервис RTA МакГилливрей RFB Тернер Д. Г. Килберн (1997). «Онлайн-мониторинг и контроль концентрации метанола в культурах Pichia Pastoris во встряхиваемых колбах». Биотехнология и биоинженерия . 56 (3): 279–286. doi :10.1002/(SICI)1097-0290(19971105)56:3<279::AID-BIT5>3.0.CO;2-G. ПМИД  18636643.
  13. ^ Де Шуттер К., Лин Ю.К., Тилс П., Ван Хекке А., Глинка С., Вебер-Леманн Дж., Рузе П., Ван де Пер Ю., Каллеварт Н. (июнь 2009 г.). «Последовательность генома хозяина, производящего рекомбинантный белок Pichia Pastoris». Природная биотехнология . 27 (6): 561–6. дои : 10.1038/nbt.1544 . ПМИД  19465926.
  14. ^ Бриджит Гассер, Роланд Прильхофер, Ганс Маркс, Михаэль Маурер, Юстина Нокон, Матиас Штайгер, Верена Пуксбаум, Михаэль Зауэр и Дитхард Маттанович (2013). «Pichia Pastoris: хозяин, производящий белок, и модельный организм для биомедицинских исследований». Будущая микробиология . 8 (2): 191–208. дои : 10.2217/fmb.12.133. ПМИД  23374125.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  15. ^ Тран, А., Нгуен, Т., Нгуен, К. (2017). «Pichia Pastoris против Saccharomyces cerevisiae: тематическое исследование рекомбинантного производства человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора». Примечания к резолюциям BMC . 10 (1): 148. дои : 10.1186/s13104-017-2471-6 . ПМЦ 5379694 . ПМИД  28376863. {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  16. ^ Хайдебрехт, Аниела и Томас Шайбель (2013). «Рекомбинантное производство белков паучьего шелка». Достижения прикладной микробиологии . 82 : 115–153. дои : 10.1016/B978-0-12-407679-2.00004-1. ISBN 9780124076792. ПМИД  23415154.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  17. ^ Гулд, С. Дж., Макколлум, Д., Спонг, А. П., Хейман, Дж. А., и Субрамани, С. (1992). «Разработка дрожжей Pichia Pastoris как модельного организма для генетического и молекулярного анализа сборки пероксисом». Дрожжи: таксономическое исследование . 8 (8): 613–628. дои : 10.1002/да.320080805. PMID  1441741. S2CID  8840145.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  18. ^ Крегг, Дж. М., Бэрринджер, К. Дж., Хесслер, А. Ю., и Мэдден, КР (1985). «Pichia Pastoris как хост-система преобразований». Молекулярная и клеточная биология . 5 (12): 3376–3385. дои : 10.1128/MCB.5.12.3376. ПМК 369166 . ПМИД  3915774. {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  19. ^ Брэди, младший (2020). «Сравнительный геномный анализ вариантов Pichia Pastoris позволяет выбрать оптимальный базовый штамм». Биотехнология и биоинженерия . 117 (2): 543–555. дои : 10.1002/бит.27209. ПМЦ 7003935 . ПМИД  31654411. 
  20. ^ Хиггинс, Д.Р., и Крегг, Дж.М. (1998). «Знакомство с Pichia Pastoris». Протоколы Пичиа . Методы молекулярной биологии. Том. 103. стр. 1–15. дои : 10.1385/0-89603-421-6:1. ISBN 0-89603-421-6. ПМИД  9680629.{{cite book}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  21. ^ Вэньхуэй Чжан Марк А. Бевинс Брэдли А. Планц Леонард А. Смит Майкл М. Мигер. (2000). «Моделирование роста Pichia Pastoris на метаноле и оптимизация производства рекомбинантного белка, фрагмента тяжелой цепи C ботулинического нейротоксина, серотипа А». Биотехнология и биоинженерия . 70 (1): 1–8. doi :10.1002/1097-0290(20001005)70:1<1::AID-BIT1>3.0.CO;2-Y. ПМИД  10940857.
  22. ^ Дейли Р., Хирн MT (2005). «Экспрессия гетерологичных белков в Pichia Pastoris: полезный экспериментальный инструмент в области инженерии и производства белков». Журнал молекулярного распознавания . 18 (2): 119–38. дои : 10.1002/jmr.687. PMID  15565717. S2CID  7476149.
  23. ^ Романос, Майк. (1995). «Достижения в использовании Pichia Pastoris для экспрессии генов высокого уровня». Современное мнение в области биотехнологии . 6 (5): 527–533. дои : 10.1016/0958-1669(95)80087-5.
  24. ^ Чжоу, X., Ю, Ю., Тао, Дж., и Ю, Л. (2014). «Производство LYZL6, нового человеческого лизоцима c-типа, в рекомбинантной Pichia Pastoris с использованием периодической ферментации с подпиткой и высокой плотностью клеток». Журнал бионауки и биоинженерии . 118 (4): 420–425. doi : 10.1016/j.jbiosc.2014.03.009. ПМИД  24745549.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  25. ^ Мортон, CL, и Поттер, PM (2000). «Сравнение клеток Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Pichia Pastoris, Spodoptera frugiperda и COS7 на предмет экспрессии рекомбинантных генов». Молекулярная биотехнология . 16 (3): 193–202. дои : 10.1385/МБ: 16:3:193. PMID  11252804. S2CID  22792748.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  26. ^ Банкефа, ОЕ; Ван, М; Чжу, Т; Ли, Ю (июль 2018 г.). «Гомологи Hac1p высших эукариот могут улучшить секрецию гетерологичных белков в дрожжах Pichia Pastoris». Биотехнологические письма . 40 (7): 1149–1156. дои : 10.1007/s10529-018-2571-y . PMID  29785668. S2CID  29155989.
  27. ^ Ю, Сяо-Вэй; Сунь, Вэй-Хун; Ван, Ин-Чжэн; Сюй, Ян (24 ноября 2017 г.). «Идентификация новых факторов, усиливающих выработку рекомбинантного белка у многокопийной Komagataella phaffii, на основе транскриптомного анализа эффектов сверхэкспрессии». Научные отчеты . 7 (1): 16249. Бибкод : 2017NatSR...716249Y. дои : 10.1038/s41598-017-16577-x . ПМК 5701153 . ПМИД  29176680. 
  28. ^ abc Крегг Дж. М., Толсторуков И., Кусари А., Сунга Дж., Мэдден К., Чаппелл Т. (2009). «Глава 13 Экспрессия дрожжей Pichia Pastoris». Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы энзимологии. Том. 463. стр. 169–89. дои : 10.1016/S0076-6879(09)63013-5. ISBN 978-0-12-374536-1. ПМИД  19892173. {{cite book}}: |journal=игнорируется ( помощь )
  29. ^ Брондык WH (2009). «Глава 11. Выбор подходящего метода экспрессии рекомбинантного белка». Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы энзимологии. Том. 463. стр. 131–47. дои : 10.1016/S0076-6879(09)63011-1. ISBN 978-0-12-374536-1. ПМИД  19892171. {{cite book}}: |journal=игнорируется ( помощь )
  30. ^ Разаги А., Тан Э., Луа Л.Х., Оуэнс Л., Картикеян О.П., Хейманн К. (январь 2017 г.). «Является ли Pichia Pastoris реальной платформой для промышленного производства рекомбинантного человеческого гамма-интерферона?». Биологические препараты . 45 : 52–60. doi :10.1016/j.biologicals.2016.09.015. PMID  27810255. S2CID  28204059.
  31. ^ Али Разаги; Роджер Хюрлиманн; Ли Оуэнс; Кирстен Хейманн (2015). «Повышение экспрессии и секреции рекомбинантного hIFNγ за счет избирательного давления, вызванного аминокислотным голоданием, на соседний ген HIS4 у Pichia Pastoris». Европейский фармацевтический журнал . 62 (2): 43–50. дои : 10.1515/afpuc-2015-0031 .
  32. ^ Гамильтон С.Р., Дэвидсон Р.С., Сетураман Н., Нетт Дж.Х., Цзян Й., Риос С., Бобровиц П., Стадхайм Т.А., Ли Х., Чой Б.К., Хопкинс Д., Вишневски Х., Розер Дж., Митчелл Т., Строубридж Р.Р., Хупс Дж., Вильдт С., Гернгросс ТУ (сентябрь 2006 г.). «Гуманизация дрожжей для получения сложных терминально сиалилированных гликопротеинов». Наука . 313 (5792): 1441–3. Бибкод : 2006Sci...313.1441H. дои : 10.1126/science.1130256. PMID  16960007. S2CID  43334198.
  33. ^ Спонер, С.К., Мюллер, Х., Квитманн, Х., и Чермак, П. (2015). «Экспрессия ферментов для использования в пищевой и кормовой промышленности с помощью Pichia Pastoris». Журнал биотехнологии . 202 : 420–425. doi : 10.1016/j.jbiotec.2015.01.027. ПМИД  25687104.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  34. ^ аб Бароне, Греция; Эммерсторфер-Августин, А; Бюндо, А; Пизано, я; Кокчетти, П; Мапелли, В; Каматтари, А. (26 февраля 2023 г.). «Промышленное производство белков с использованием Pichia Pastoris-Komagataella phaffii». Биомолекулы . 13 (3): 441. doi : 10.3390/biom13030441 . ПМЦ 10046876 . ПМИД  36979376.