stringtranslate.com

Рекомбинантная ДНК

Конструирование рекомбинантной ДНК, при котором фрагмент чужеродной ДНК встраивают в плазмидный вектор. В этом примере ген, обозначенный белым цветом, инактивируется при вставке чужеродного фрагмента ДНК.

Молекулы рекомбинантной ДНК ( рДНК ) — это молекулы ДНК , образованные лабораторными методами генетической рекомбинации (такими как молекулярное клонирование ), которые объединяют генетический материал из нескольких источников, создавая последовательности , которые иначе не были бы обнаружены в геноме .

Рекомбинантная ДНК — это общее название участка ДНК, созданного путем объединения двух или более фрагментов из разных источников. Рекомбинантная ДНК возможна, поскольку молекулы ДНК всех организмов имеют одинаковую химическую структуру и отличаются только нуклеотидной последовательностью . Молекулы рекомбинантной ДНК иногда называют химерной ДНК, поскольку они могут состоять из материала двух разных видов, как, например, мифическая химера . Технология рДНК использует палиндромные последовательности и приводит к образованию липких и тупых концов .

Последовательности ДНК, используемые при построении молекул рекомбинантной ДНК, могут происходить от любого вида . Например, ДНК растений можно соединить с ДНК бактерий, а ДНК человека — с ДНК грибов. Кроме того, путем химического синтеза ДНК можно создать последовательности ДНК, не встречающиеся нигде в природе, и включить их в молекулы рекомбинантной ДНК. Используя технологию рекомбинантной ДНК и синтетическую ДНК, можно создать и внедрить в живые организмы любую последовательность ДНК.

Белки, которые могут возникнуть в результате экспрессии рекомбинантной ДНК в живых клетках, называются рекомбинантными белками . Когда рекомбинантную ДНК, кодирующую белок, вводят в организм хозяина, рекомбинантный белок не обязательно образуется. [1] Экспрессия чужеродных белков требует использования специализированных векторов экспрессии и часто требует значительной реструктуризации с помощью чужеродных кодирующих последовательностей. [2]

Рекомбинантная ДНК отличается от генетической рекомбинации тем, что первая возникает в результате искусственных методов, а вторая представляет собой нормальный биологический процесс, приводящий к ремиксу существующих последовательностей ДНК практически во всех организмах.

Производство

Молекулярное клонирование — это лабораторный процесс, используемый для получения рекомбинантной ДНК. [3] [4] [5] [6] Это один из двух наиболее широко используемых методов, наряду с полимеразной цепной реакцией (ПЦР), используемый для управления репликацией любой конкретной последовательности ДНК, выбранной экспериментатором. Между методами есть два принципиальных различия. Во-первых, молекулярное клонирование предполагает репликацию ДНК внутри живой клетки, тогда как ПЦР реплицирует ДНК в пробирке, свободной от живых клеток. Другое отличие состоит в том, что клонирование включает в себя вырезание и вставку последовательностей ДНК, тогда как ПЦР амплифицируется путем копирования существующей последовательности.

Для формирования рекомбинантной ДНК требуется вектор клонирования — молекула ДНК, которая реплицируется внутри живой клетки. Векторы обычно получают из плазмид или вирусов и представляют собой относительно небольшие сегменты ДНК, которые содержат необходимые генетические сигналы для репликации, а также дополнительные элементы для удобства вставки чужеродной ДНК, идентификации клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, и, при необходимости, экспрессии чужая ДНК. Выбор вектора для молекулярного клонирования зависит от выбора организма-хозяина, размера клонируемой ДНК, а также от того, будет ли и как экспрессироваться чужеродная ДНК. [7] Сегменты ДНК можно объединять с помощью различных методов, таких как клонирование ферментов рестрикции/лигазы или сборка Гибсона . [ нужна цитата ]

В стандартных протоколах клонирования клонирование любого фрагмента ДНК по существу включает семь этапов: (1) Выбор организма-хозяина и вектора клонирования, (2) Подготовка векторной ДНК, (3) Подготовка ДНК для клонирования, (4) Создание рекомбинантной ДНК, (5) Введение рекомбинантной ДНК в организм хозяина, (6) Отбор организмов, содержащих рекомбинантную ДНК, и (7) Скрининг клонов с желаемыми вставками ДНК и биологическими свойствами. [6] Эти шаги подробно описаны в соответствующей статье ( молекулярное клонирование ).

экспрессия ДНК

Экспрессия ДНК требует трансфекции подходящих клеток-хозяев. Обычно в качестве клеток-хозяев используют бактериальные, дрожжевые, насекомые или клетки млекопитающих (такие как эмбриональные клетки почек человека или клетки CHO ). [8]

После трансплантации в организм хозяина чужеродная ДНК, содержащаяся в конструкции рекомбинантной ДНК, может экспрессироваться или не экспрессироваться . То есть ДНК может быть просто реплицирована без экспрессии или ее можно транскрибировать и транслировать и получать рекомбинантный белок. Вообще говоря, экспрессия чужеродного гена требует реструктуризации гена, чтобы он включал последовательности, необходимые для производства молекулы мРНК , которая может использоваться трансляционным аппаратом хозяина (например, промотор , сигнал инициации трансляции и терминатор транскрипции ). [9] В организм хозяина могут быть внесены специфические изменения для улучшения экспрессии эктопического гена. Кроме того, могут потребоваться изменения и в кодирующих последовательностях, чтобы оптимизировать трансляцию, сделать белок растворимым, направить рекомбинантный белок в нужное клеточное или внеклеточное местоположение и стабилизировать белок от деградации. [10] [11] [12]

Свойства организмов, содержащих рекомбинантную ДНК

В большинстве случаев организмы, содержащие рекомбинантную ДНК, имеют очевидно нормальный фенотип . То есть их внешний вид, поведение и метаболизм обычно не изменяются, и единственный способ продемонстрировать наличие рекомбинантных последовательностей — это изучить саму ДНК, обычно с помощью теста полимеразной цепной реакции (ПЦР). [13] Существуют существенные исключения, которые обсуждаются ниже.

Если последовательности рДНК кодируют экспрессируемый ген, то присутствие РНК и/или белковых продуктов рекомбинантного гена можно обнаружить, обычно используя методы RT-PCR или вестерн-гибридизации . [13] Грубые фенотипические изменения не являются нормой, если только рекомбинантный ген не был выбран и модифицирован таким образом, чтобы генерировать биологическую активность в организме хозяина. [14] Дополнительные встречающиеся фенотипы включают токсичность для организма-хозяина, вызванную продуктом рекомбинантного гена, особенно если он сверхэкспрессируется или экспрессируется в неподходящих клетках или тканях. [ нужна цитата ]

В некоторых случаях рекомбинантная ДНК может оказывать вредное воздействие, даже если она не экспрессируется. Одним из механизмов, с помощью которого это происходит, является инсерционная инактивация , при которой рДНК встраивается в ген клетки-хозяина. В некоторых случаях исследователи используют это явление, чтобы « выбить » гены, чтобы определить их биологическую функцию и важность. [15] Другой механизм, с помощью которого вставка рДНК в хромосомную ДНК может влиять на экспрессию генов, заключается в неадекватной активации ранее неэкспрессированных генов клетки-хозяина. Это может произойти, например, когда фрагмент рекомбинантной ДНК, содержащий активный промотор, оказывается рядом с ранее молчащим геном клетки-хозяина или когда ген клетки-хозяина, который функционирует для ограничения экспрессии гена, подвергается инсерционной инактивации рекомбинантной ДНК. [ нужна цитата ]

Применение рекомбинантной ДНК

Рекомбинантная ДНК широко используется в биотехнологии , медицине и научных исследованиях . Сегодня рекомбинантные белки и другие продукты, полученные в результате использования технологии ДНК, можно найти практически в каждой западной аптеке, врачебном или ветеринарном кабинете, медицинской испытательной лаборатории и лаборатории биологических исследований. Кроме того, организмы, которыми манипулировали с помощью технологии рекомбинантной ДНК, а также продукты, полученные из этих организмов, попали на многие фермы, супермаркеты , домашние аптечки и даже зоомагазины, например те, которые продают GloFish и другие генетически модифицированные продукты. модифицированные животные .

Рекомбинантная ДНК чаще всего применяется в фундаментальных исследованиях, в которых эта технология важна для большинства современных работ в области биологических и биомедицинских наук. [13] Рекомбинантная ДНК используется для идентификации, картирования и секвенирования генов, а также для определения их функции. Зонды рДНК используются для анализа экспрессии генов в отдельных клетках и во всех тканях целых организмов. Рекомбинантные белки широко используются в качестве реагентов в лабораторных экспериментах и ​​для создания зондов антител для изучения синтеза белка в клетках и организмах. [4]

Многие дополнительные практические применения рекомбинантной ДНК находят в промышленности, производстве продуктов питания, медицине и ветеринарии, сельском хозяйстве и биоинженерии. [4] Некоторые конкретные примеры приведены ниже.

Рекомбинантный химозин

Химозин , обнаруженный в сычужном ферменте , является ферментом, ответственным за гидролиз κ - казеина с образованием пара- κ -казеина и гликомакропептида , что является первым шагом в образовании сыра , а затем творога и сыворотки . [16] Это была первая генно-инженерная пищевая добавка, используемая в коммерческих целях. Традиционно переработчики получали химозин из сычужного фермента, препарата, полученного из четвертого желудка телят, вскармливаемых молоком. Ученые создали непатогенный штамм (К-12) бактерий E. coli для крупномасштабного лабораторного производства фермента. Этот рекомбинантный фермент, полученный микробиологическим путем, структурно идентичен ферменту, полученному из телят, стоит дешевле и производится в больших количествах. Сегодня около 60% твердого сыра в США производится из генно-инженерного химозина. В 1990 году FDA присвоило химозину статус « общепризнанного безопасного » (GRAS) на основании данных, показывающих, что фермент безопасен. [17]

Рекомбинантный человеческий инсулин

Рекомбинантный человеческий инсулин почти полностью заменил инсулин, полученный из животных источников (например, свиней и крупного рогатого скота) для лечения диабета 1 типа . Широко используются различные препараты рекомбинантного инсулина. [18] Рекомбинантный инсулин синтезируется путем вставки гена человеческого инсулина в E. coli или дрожжи (Saccharomyces cerevisiae) [19] , которые затем производят инсулин для использования человеком. [20] Инсулин, продуцируемый E. coli, требует дальнейших посттрансляционных модификаций (например, гликозилирования), тогда как дрожжи способны выполнять эти модификации самостоятельно, поскольку являются более сложными организмами-хозяевами. Преимущество рекомбинантного человеческого инсулина заключается в том, что после его хронического применения у пациентов не вырабатывается иммунная защита против него, подобно тому, как инсулин животного происхождения стимулирует иммунную систему человека. [21]

Рекомбинантный гормон роста человека (ГРЧ, соматотропин)

Назначается пациентам, у которых гипофиз вырабатывает недостаточное количество препарата для поддержания нормального роста и развития. До того, как рекомбинантный гормон роста стал доступен, гормон роста для терапевтического использования получали из гипофизов трупов. Эта небезопасная практика привела к тому, что у некоторых пациентов развилась болезнь Крейтцфельдта-Якоба . Рекомбинантный гормон роста устранил эту проблему и теперь используется в терапевтических целях. [22] Спортсмены и другие люди злоупотребляли им в качестве препарата для повышения работоспособности. [23] [24]

Рекомбинантный фактор свертывания крови VIII

Это рекомбинантная форма фактора VIII , белка свертывания крови, который вводится пациентам с нарушением свертываемости крови гемофилией , которые не способны вырабатывать фактор VIII в количествах, достаточных для поддержания нормального свертывания крови. [25] До разработки рекомбинантного фактора VIII белок получали путем обработки больших количеств человеческой крови от нескольких доноров, что несло очень высокий риск передачи инфекционных заболеваний, передающихся через кровь , например ВИЧ и гепатита B.

Рекомбинантная вакцина против гепатита В

Инфекцию гепатита В можно успешно контролировать с помощью рекомбинантной субъединичной вакцины против гепатита В , которая содержит форму поверхностного антигена вируса гепатита В, вырабатываемую дрожжевыми клетками. Разработка рекомбинантной субъединичной вакцины была важным и необходимым событием, поскольку вирус гепатита В, в отличие от других распространенных вирусов, таких как вирус полиомиелита , нельзя выращивать in vitro . [26]

Рекомбинантные антитела

Рекомбинантные антитела (rAb) получают in vitro с помощью систем экспрессии на основе клеток млекопитающих. Их моноспецифическое связывание со специфическим эпитопом делает rAb пригодными не только для исследовательских целей, но и в качестве вариантов терапии против определенных типов рака, инфекций и аутоиммунных заболеваний. [27]

Диагностика ВИЧ-инфекции

Каждый из трех широко используемых методов диагностики ВИЧ-инфекции разработан с использованием рекомбинантной ДНК. Тест на антитела ( ИФА или вестерн-блоттинг ) использует рекомбинантный белок ВИЧ для проверки наличия антител , которые организм вырабатывает в ответ на ВИЧ-инфекцию. ДНК-тест позволяет выявить наличие генетического материала ВИЧ с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Разработка теста RT-PCR стала возможной благодаря молекулярному клонированию и анализу последовательности геномов ВИЧ. Страница тестирования на ВИЧ от Центров по контролю заболеваний США (CDC)

Золотой рис

Золотой рис — это рекомбинантный сорт риса, созданный для экспрессии ферментов, ответственных за биосинтез β-каротина . [14] Этот сорт риса имеет существенные перспективы для снижения заболеваемости дефицитом витамина А среди населения мира. [28] Золотой рис в настоящее время не используется до решения вопросов регулирования и интеллектуальной собственности. [29]

Устойчивые к гербицидам культуры

Были разработаны коммерческие сорта важных сельскохозяйственных культур (включая сою, кукурузу/кукурузу, сорго, канолу, люцерну и хлопок), которые включают рекомбинантный ген, который приводит к устойчивости к гербициду глифосату (торговое название Раундап ) и упрощает борьбу с сорняками с помощью глифосата. приложение. [30] Эти культуры широко используются в коммерческих целях в нескольких странах.

Устойчивые к насекомым культуры

Bacillus thuringiensis — это бактерия, которая естественным образом производит белок ( токсин Bt ) с инсектицидными свойствами. [28] Бактерия уже много лет применяется к сельскохозяйственным культурам в качестве стратегии борьбы с насекомыми, и эта практика получила широкое распространение в сельском хозяйстве и садоводстве. Недавно были разработаны растения, экспрессирующие рекомбинантную форму бактериального белка, которая может эффективно контролировать некоторых насекомых-хищников. Экологические проблемы, связанные с использованием этих трансгенных культур, до конца не решены. [31]

История

Идея рекомбинантной ДНК была впервые предложена Питером Лоббаном, аспирантом профессора Дейла Кайзера на кафедре биохимии Медицинской школы Стэнфордского университета. [32] Первые публикации, описывающие успешное производство и внутриклеточную репликацию рекомбинантной ДНК, появились в 1972 и 1973 годах в Стэнфорде и Калифорнийском университете в Сан-Франциско . [33] [34] [35] [36] В 1980 году Пол Берг , профессор кафедры биохимии в Стэнфорде и автор одной из первых статей [33], был удостоен Нобелевской премии по химии за свою работу по нуклеиновым кислотам. «с особым вниманием к рекомбинантной ДНК». Вернер Арбер , Гамильтон Смит и Дэниел Натанс получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине 1978 года за открытие эндонуклеаз рестрикции , которые усовершенствовали методы технологии рДНК. [ нужна цитата ]

Стэнфордский университет подал заявку на патент США на рекомбинантную ДНК 4 ноября 1974 года, указав изобретателей Герберта В. Бойера (профессора Калифорнийского университета в Сан-Франциско ) и Стэнли Н. Коэна (профессора Стэнфордского университета ); этот патент, US 4,237,224A, был выдан 2 декабря 1980 года. [37] [38] Первым лицензированным препаратом, созданным с использованием технологии рекомбинантной ДНК, был человеческий инсулин, разработанный Genentech и лицензированный Eli Lilly and Company . [39]

Споры

Ученые, принимавшие участие в первоначальной разработке методов рекомбинантной ДНК, признали, что организмы, содержащие рекомбинантную ДНК, могут иметь нежелательные или опасные свойства. На Асиломарской конференции 1975 года по рекомбинантной ДНК эти проблемы обсуждались, и был инициирован добровольный мораторий на исследования рекомбинантной ДНК для экспериментов, которые считались особенно рискованными. Этот мораторий широко соблюдался до тех пор, пока Национальные институты здравоохранения (США) не разработали и не выпустили официальные рекомендации по работе с рДНК. Сегодня рекомбинантные молекулы ДНК и рекомбинантные белки обычно не считаются опасными. Однако сохраняются опасения по поводу некоторых организмов, экспрессирующих рекомбинантную ДНК, особенно когда они покидают лабораторию и попадают в окружающую среду или пищевую цепь. Эти проблемы обсуждаются в статьях о генетически модифицированных организмах и спорах о генетически модифицированных продуктах питания . Кроме того, существуют опасения по поводу побочных продуктов биофармацевтического производства, где рекомбинантная ДНК приводит к образованию специфических белковых продуктов. Основной побочный продукт, называемый белком клетки-хозяина , поступает из системы экспрессии хозяина и представляет угрозу для здоровья пациента и окружающей среды в целом. [40] [41]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Розано, Херман Л.; Чекарелли, Эдуардо А. (17 апреля 2014 г.). «Экспрессия рекомбинантного белка в Escherichia coli: достижения и проблемы». Границы микробиологии . 5 : 172. дои : 10.3389/fmicb.2014.00172 . ISSN  1664-302X. ПМК  4029002 . ПМИД  24860555.
  2. ^ «Промоторы, используемые для регулирования экспрессии генов» . www.cambia.org . Архивировано из оригинала 24 сентября 2018 года . Проверено 16 февраля 2018 г.
  3. ^ Кэмпбелл, Нил А. и Рис, Джейн Б. (2002). Биология (6-е изд.) . Сан-Франциско: Эддисон Уэсли. стр. 375–401. ISBN 978-0-201-75054-6.
  4. ^ abc Питер Уолтер; Альбертс, Брюс; Джонсон, Александр С.; Льюис, Джулиан; Рафф, Мартин С.; Робертс, Кейт (2008). Молекулярная биология клетки (5-е издание, расширенная версия) . Нью-Йорк: Garland Science. ISBN 978-0-8153-4111-6.. Четвертое издание доступно онлайн на книжной полке NCBI: ссылка
  5. ^ Берг, Джереми Марк; Тимочко, Джон Л.; Страйер, Люберт (2010). Биохимия, 7-е изд. (Биохимия (Берг)) . WH Freeman & Company. ISBN 978-1-4292-2936-4.Пятое издание доступно онлайн на книжной полке NCBI: ссылка
  6. ^ Аб Уотсон, Джеймс Д. (2007). Рекомбинантная ДНК: гены и геномы: краткий курс . Сан-Франциско: WH Freeman. ISBN 978-0-7167-2866-5.
  7. ^ Рассел, Дэвид В.; Сэмбрук, Джозеф (2001). Молекулярное клонирование: лабораторное пособие . Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лаборатория Колд-Спринг-Харбор. ISBN 978-0-87969-576-7.
  8. ^ Эберле, Кристиан (декабрь 2022 г.). «Технология рекомбинантной ДНК – этапы, методы и примеры» . Проверено 18 июля 2023 г.
  9. ^ Ханниг, Г.; Макридес, С. (1998). «Стратегии оптимизации экспрессии гетерологичных белков в Escherichia coli». Тенденции в биотехнологии . 16 (2): 54–60. дои : 10.1016/S0167-7799(97)01155-4. ПМИД  9487731.
  10. ^ Махмуди Гомари, Мохаммед; Сарайгорд-Афшари, Неда; Фарсимадан, Марзие; Ростами, Неда; Агамири, Шахин; Фарахоллахия, Мохаммад М. (1 декабря 2020 г.). «Возможности и проблемы методов очистки белков с помощью меток: применение в фармацевтической промышленности». Достижения биотехнологии . 45 : 107653. doi : 10.1016/j.biotechadv.2020.107653. ISSN  0734-9750. PMID  33157154. S2CID  226276355.
  11. ^ Брондык, WH (2009). «Глава 11. Выбор подходящего метода экспрессии рекомбинантного белка». Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы энзимологии. Том. 463. стр. 131–147. дои : 10.1016/S0076-6879(09)63011-1. ISBN 9780123745361. ПМИД  19892171.
  12. ^ Ортега, Клаудия; Прието, Даниэль; Абреу, Сесилия; Оппеццо, Пабло Хавьер; Корреа, Агустин (2018). «Набор многокамерных и многохозяинных векторов для экспрессии и очистки рекомбинантных белков». Границы микробиологии . 9 : 1384. дои : 10.3389/fmicb.2018.01384 . ISSN  1664-302X. ПМК 6030378 . ПМИД  29997597. 
  13. ^ abc Браун, Терри (2006). Клонирование генов и анализ ДНК: введение . Кембридж, Массачусетс: Паб Blackwell. ISBN 978-1-4051-1121-8.
  14. ^ аб Йе, X .; Аль-Бабили, С.; Клёти, А.; Чжан, Дж.; Лукка, П.; Бейер, П.; Потрикус, И. (2000). «Разработка пути биосинтеза провитамина А (бета-каротина) в (без каротиноидов) эндосперма риса». Наука . 287 (5451): 303–305. Бибкод : 2000Sci...287..303Y. дои : 10.1126/science.287.5451.303. PMID  10634784. S2CID  40258379.
  15. ^ Коллер, Б.Х.; Смитис, О. (1992). «Изменение генов животных путем нацеливания на гены». Ежегодный обзор иммунологии . 10 : 705–730. дои : 10.1146/annurev.iy.10.040192.003421. ПМИД  1591000.
  16. ^ «Химозин - обзор | Темы ScienceDirect» . Архивировано из оригинала 10 декабря 2023 г. Проверено 10 декабря 2023 г.Ссылка на оригинальную публикацию
  17. ^ Донна У. Фогт и Микки Пэриш. (1999) Пищевая биотехнология в Соединенных Штатах: наука, регулирование и проблемы.
  18. ^ Гуаланди-Синьорини, А.; Георгий, Г. (2001). «Составы инсулина - обзор». Европейский обзор медицинских и фармакологических наук . 5 (3): 73–83. ПМИД  12004916.
  19. ^ #Инсулин аспарт
  20. ^ «Инсулин человеческий». go.drugbank.com . Проверено 10 декабря 2023 г.
  21. ^ Миллс, Джошуа (16 мая 2022 г.). «Биологическая рекомбинантная технология HSC: производство инсулина». Эдцион . Проверено 26 декабря 2022 г.
  22. ^ Фон Фанге, Т.; МакДиармид, Т.; МакКлер, Л.; Золотор, А. (2008). «Клинические исследования: может ли рекомбинантный гормон роста эффективно лечить идиопатическую низкорослость?». Журнал семейной практики . 57 (9): 611–612. ПМИД  18786336.
  23. ^ Фернандес, М.; Хоузи, Р. (2009). «Стимулирующие препараты заманивают в ловушку и неспортсменов». Журнал семейной практики . 58 (1): 16–23. ПМИД  19141266.
  24. ^ «Соматотропин». go.drugbank.com . Проверено 10 декабря 2023 г.
  25. ^ Манко-Джонсон, MJ (2010). «Достижения в области ухода и лечения детей, больных гемофилией». Достижения педиатрии . 57 (1): 287–294. дои :10.1016/j.yapd.2010.08.007. ПМИД  21056743.
  26. ^ «Информация о вакцине против гепатита B от Фонда гепатита B» . 28 июня 2011 г. Архивировано из оригинала 28 июня 2011 г. Проверено 10 декабря 2023 г.
  27. ^ Наранг, Аарти (2022). «Рекомбинантные антитела: новый уровень технологии антител».
  28. ^ Аб Пейн, Дж. А.; Шиптон, Калифорния; Чаггар, С.; Хауэллс, Р.М.; Кеннеди, MJ; Вернон, Г.; Райт, С.Ю.; Хинчлифф, Э.; Адамс, Дж.Л.; Сильверстоун, Алабама; Дрейк, Р. (2005). «Улучшение пищевой ценности золотого риса за счет увеличения содержания провитаминов». Природная биотехнология . 23 (4): 482–487. дои : 10.1038/nbt1082. PMID  15793573. S2CID  632005.
  29. ^ ДХНС. «Иностранные группы болеет за« золотой рис »в Индии». Декан Вестник . Проверено 10 декабря 2023 г.
  30. ^ Функе, Т.; Хан, Х.; Хили-Фрид, М.; Фишер, М.; Шенбрунн, Э. (2006). «Молекулярная основа устойчивости к гербицидам культур, готовых к Раундапу». Труды Национальной академии наук . 103 (35): 13010–13015. Бибкод : 2006PNAS..10313010F. дои : 10.1073/pnas.0603638103 . ПМЦ 1559744 . ПМИД  16916934. 
  31. ^ Мендельсон, М.; Коф, Дж.; Вайтузис, З.; Мэтьюз, К. (2003). «Безопасны ли посевы Bt?». Природная биотехнология . 21 (9): 1003–1009. дои : 10.1038/nbt0903-1003. PMID  12949561. S2CID  16392889.
  32. ^ Лир, Дж. (1978). Рекомбинантная ДНК: нерассказанная история . Нью-Йорк: Издательство Crown. п. 43.
  33. ^ Аб Джексон, Д.; Саймонс, Р.; Берг, П. (1972). «Биохимический метод внедрения новой генетической информации в ДНК вируса обезьян 40: кольцевые молекулы ДНК SV40, содержащие гены фага лямбда и галактозный оперон Escherichia coli». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 69 (10): 2904–2909. Бибкод : 1972PNAS...69.2904J. дои : 10.1073/pnas.69.10.2904 . ПМК 389671 . ПМИД  4342968. 
  34. ^ Мерц, Дж. Э.; Дэвис, RW (1972). «Расщепление ДНК эндонуклеазой рестрикции R 1 приводит к образованию слипшихся концов». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 69 (11): 3370–4. Бибкод : 1972PNAS...69.3370M. дои : 10.1073/pnas.69.11.3370 . ПМЦ 389773 . ПМИД  4343968. 
  35. ^ Лоббан, П.; Кайзер, А. (1973). «Ферментативное сквозное соединение молекул ДНК». Журнал молекулярной биологии . 78 (3): 453–471. дои : 10.1016/0022-2836(73)90468-3. ПМИД  4754844.
  36. ^ Коэн, С.; Чанг, А.; Бойер, Х.; Хеллинг, Р. (1973). «Конструирование биологически функциональных бактериальных плазмид in vitro». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 70 (11): 3240–3244. Бибкод : 1973PNAS...70.3240C. дои : 10.1073/pnas.70.11.3240 . ПМК 427208 . ПМИД  4594039. 
  37. ^ «Процесс производства биологически функциональных молекулярных химер», получено из патента Google.
  38. ^ Хьюз, С. (2001). «Заработок долларов на ДНК. Первый крупный патент в области биотехнологии и коммерциализация молекулярной биологии, 1974–1980». Исида; Международный обзор, посвященный истории науки и ее культурному влиянию . 92 (3): 541–575. дои : 10.1086/385281. hdl : 10161/8125 . PMID  11810894. S2CID  22823711. Архивировано из оригинала (PDF) 14 февраля 2021 г. Проверено 05 сентября 2019 г.
  39. ^ Джонсон, IS (1983). «Человеческий инсулин, полученный с помощью технологии рекомбинантной ДНК». Наука . 219 (4585): 632–637. Бибкод : 1983Sci...219..632J. дои : 10.1126/science.6337396. ПМИД  6337396.
  40. ^ Ван, Син; Хантер, Алан К.; Мозье, Нед М. (15 июня 2009 г.). «Белки клеток-хозяев в разработке биологических препаратов: идентификация, количественный анализ и оценка риска». Биотехнология и биоинженерия . 103 (3): 446–458. дои : 10.1002/бит.22304 . ISSN  0006-3592. PMID  19388135. S2CID  22707536.
  41. ^ Брейсвелл, Дэниел Г.; Фрэнсис, Ричард; Смейлс, К. Марк (14 июля 2015 г.). «Будущее идентификации белков клеток-хозяев (HCP) во время разработки процессов и производства связано с управлением, основанным на рисках, для их контроля». Биотехнология и биоинженерия . 112 (9): 1727–1737. дои : 10.1002/bit.25628. ISSN  0006-3592. ПМЦ 4973824 . ПМИД  25998019. 

дальнейшее чтение

Внешние ссылки

Ресурсы библиотеки о
рекомбинантных белках
  • Ресурсы в вашей библиотеке
  • Ресурсы в других библиотеках