stringtranslate.com

Трансфекция

Трансфекция — это процесс преднамеренного введения обнаженных или очищенных нуклеиновых кислот в эукариотические клетки . [1] [2] Это может также относиться к другим методам и типам клеток, хотя часто предпочтительны другие термины: « трансформация » обычно используется для описания переноса невирусной ДНК в бактерии и эукариотические клетки неживотного происхождения , включая растительные клетки. В клетках животных термин «трансфекция» является предпочтительным, поскольку термин «трансформация» также используется для обозначения прогрессирования этих клеток в раковое состояние ( канцерогенез ). Трансдукцию часто используют для описания вирусопосредованного переноса генов в эукариотические клетки. [2] [3]

Слово «трансфекция» представляет собой сочетание слов «транс-» и «инфекция» . Генетический материал (такой как сверхспиральная плазмидная ДНК или конструкции siРНК ) может быть трансфицирован. Трансфекция клеток животных обычно включает открытие временных пор или «отверстий» в клеточной мембране для обеспечения поглощения материала. Трансфекцию можно осуществлять с использованием фосфата кальция (т.е. трикальцийфосфата ), электропорации , сжатия клеток или смешивания катионного липида с материалом для получения липосом , которые сливаются с клеточной мембраной и откладывают свой груз внутри.

Трансфекция может привести к неожиданной морфологии и аномалиям в клетках-мишенях.

Терминология

Значение этого термина изменилось. [4] Первоначальное значение трансфекции было «заражение путем трансформации», т.е. введение генетического материала, ДНК или РНК из вируса, инфицирующего прокариот , или бактериофага в клетки, что приводит к инфекции. При работе с бактериальными и архейными клетками трансфекция сохраняет свое первоначальное значение как частный случай трансформации. Поскольку термин «трансформация» имел другой смысл в биологии клеток животных (генетическое изменение, позволяющее долговременное размножение в культуре или приобретение свойств, типичных для раковых клеток), термин «трансфекция» приобрел для клеток животных свое нынешнее значение изменения в клетке. свойства, обусловленные введением ДНК. [ нужна цитата ]

Методы

Существуют различные методы введения чужеродной ДНК в эукариотическую клетку : некоторые полагаются на физическую обработку (электропорация, сдавливание клеток, наночастицы , магнитофекция); другие полагаются на химические материалы или биологические частицы (вирусы), которые используются в качестве носителей. Существует множество различных методов доставки генов, разработанных для различных типов клеток и тканей, от бактерий до млекопитающих. В целом методы можно разделить на три категории: физические, химические и биологические. [5]

Физические методы включают электропорацию , микроинъекцию , генную пушку , прокалывание , гидростатическое давление , непрерывную инфузию и обработку ультразвуком. Химические вещества включают такие методы, как липофекция , которая представляет собой липидопосредованный процесс трансфекции ДНК с использованием липосомальных векторов. Сюда же можно отнести использование полимерных носителей генов (полипплексов). [6] Биологическая трансфекция обычно осуществляется с помощью вирусов , использующих способность вируса вводить свою ДНК внутрь клетки-хозяина. Ген, предназначенный для доставки, упаковывается в вирусную частицу с дефицитом репликации. Вирусы, используемые на сегодняшний день, включают ретровирус , лентивирус , аденовирус , аденоассоциированный вирус и вирус простого герпеса . [ нужна цитата ]

Физические методы

Электропоратор с прямоугольными и экспоненциальными волнами затухания для применений in vitro, in vivo, прилипших клеток и 96-луночной электропорации. Изготовлено компанией BTX Harvard Apparatus, Холлистон, Массачусетс, США.

Физические методы являются концептуально самыми простыми: они используют некоторые физические средства для введения трансфицированного материала в ядро ​​клетки-мишени. Наиболее широко используемый физический метод — электропорация , при которой короткие электрические импульсы разрушают клеточную мембрану, позволяя трансфицированным нуклеиновым кислотам проникнуть в клетку. [5] Другие физические методы используют различные средства для проделывания отверстий в клеточной мембране: сонопорация использует ультразвук высокой интенсивности (в основном это связано с кавитацией пузырьков газа, взаимодействующих с близлежащими клеточными мембранами), оптическая трансфекция использует высокофокусированный лазер для формирования ~ Отверстие диаметром 1 мкм. [7]

В нескольких методах используются инструменты, которые вводят нуклеиновую кислоту в клетку, а именно: микроинъекция нуклеиновой кислоты тонкой иглой; [5] доставка биолистических частиц , при которой нуклеиновая кислота прикрепляется к частицам тяжелых металлов (обычно золота) и продвигается в клетки на высокой скорости; [8] и магнитофекция , при которой нуклеиновые кислоты прикрепляются к магнитным частицам оксида железа и вводятся в клетки-мишени с помощью магнитов. [8]

Гидродинамическая доставка — это метод, используемый на мышах и крысах, при котором нуклеиновые кислоты можно доставить в печень путем инъекции относительно большого объема в кровь менее чем за 10 секунд; Благодаря этой процедуре почти вся ДНК экспрессируется в печени. [9]

Химические методы

Химическую трансфекцию можно разделить на несколько видов: циклодекстрин , [10] полимеры, [11] липосомы или наночастицы [12] (с химической или вирусной функционализацией или без нее. См. ниже).

Вирусные методы

ДНК также можно вводить в клетки, используя в качестве носителя вирусы . В таких случаях метод называется трансдукцией , а клетки называются трансдуцированными. Аденовирусные векторы могут быть полезны для методов вирусной трансфекции, поскольку они могут переносить гены в самые разные клетки человека и имеют высокую скорость переноса. [2] Лентивирусные векторы также полезны благодаря их способности трансдуцировать клетки, в настоящее время не находящиеся в стадии митоза.

Слияние протопластов — это метод, при котором трансформированные бактериальные клетки обрабатываются лизоцимом с целью удаления клеточной стенки. После этого используются слияющие агенты (например, вирус Сендай, ПЭГ, электропорация) для слияния протопласта, несущего интересующий ген, с клеткой-мишенью-реципиентом. Основным недостатком этого метода является то, что бактериальные компоненты также неспецифично вводятся в клетку-мишень.

Стабильная и временная трансфекция

Стабильная и временная трансфекция различаются по долгосрочному воздействию на клетку; Стабильно трансфицированная клетка будет непрерывно экспрессировать трансфицированную ДНК и передавать ее дочерним клеткам , тогда как временно трансфицированная клетка будет экспрессировать трансфицированную ДНК в течение короткого периода времени и не передавать ее дочерним клеткам.

Для некоторых применений трансфекции достаточно, чтобы трансфицированный генетический материал экспрессировался лишь временно. Поскольку ДНК, введенная в процессе трансфекции, обычно не интегрируется в ядерный геном, чужеродная ДНК будет разбавлена ​​в результате митоза или деградирована. [5] Клеточные линии, экспрессирующие ядерный антиген 1 (EBNA1) вируса Эпштейна-Барра (EBV) или большой T-антиген SV40, позволяют эписомальную амплификацию плазмид, содержащих точки начала репликации вируса EBV (293E) или SV40 (293T), что значительно снижает скорость разбавления. [25]

Если желательно, чтобы трансфицированный ген действительно оставался в геноме клетки и ее дочерних клеток, должна произойти стабильная трансфекция. Для этого маркерный ген котрансфицируется, что дает клетке определенное преимущество, такое как устойчивость к определенному токсину . Некоторые (очень немногие) трансфицированные клетки случайно интегрируют чужеродный генетический материал в свой геном. Если затем токсин добавить в культуру клеток, только те немногие клетки, в геном которых интегрирован маркерный ген, смогут пролиферировать , в то время как другие клетки погибнут. После применения этого селективного стресса (давления отбора) в течение некоторого времени остаются только клетки со стабильной трансфекцией, которые можно культивировать дальше. [26]

Обычными агентами для выбора стабильной трансфекции являются:

Трансфекция РНК

РНК также можно трансфицировать в клетки для временной экспрессии закодированного ею белка или для изучения кинетики распада РНК . Трансфекция РНК часто используется в первичных клетках, которые не делятся.

siRNA также можно трансфицировать для достижения подавления РНК (т.е. потери РНК и белка из целевого гена). Это стало основным применением в исследованиях по « нокдауну » интересующих белков (например, эндотелина-1 [27] ) с потенциальным применением в генной терапии. Ограничением метода подавления является токсичность трансфекции для клеток и потенциальные «нецелевые» эффекты на экспрессию других генов/белков.

РНК можно очистить из клеток после лизиса или синтезировать из свободных нуклеотидов химически или ферментативно с использованием РНК-полимеразы для транскрипции матрицы ДНК . Как и ДНК, РНК можно доставлять в клетки различными способами, включая микроинъекцию , электропорацию и липид-опосредованную трансфекцию . Если РНК кодирует белок , трансфицированные клетки могут транслировать РНК в кодируемый белок. [28] Если РНК является регуляторной РНК (например, микроРНК ), РНК может вызывать другие изменения в клетке (например, нокдаун, опосредованный РНКи ).

Инкапсулирование молекулы РНК в липидные наночастицы стало прорывом в производстве жизнеспособных РНК-вакцин , разрешив ряд ключевых технических барьеров при доставке молекулы РНК в клетку человека. [29] [30]

Молекулы РНК длиной менее 25 нуклеотидов (нуклеотиды) в значительной степени ускользают от обнаружения врожденной иммунной системой , которая активируется более длинными молекулами РНК. Большинство клеток организма экспрессируют белки врожденной иммунной системы, и при воздействии экзогенных длинных молекул РНК эти белки инициируют сигнальные каскады, которые приводят к воспалению . Это воспаление повышает чувствительность подвергшихся воздействию клеток и близлежащих клеток к последующему воздействию. В результате, хотя клетку можно неоднократно трансфицировать короткой РНК с небольшими неспецифическими эффектами, повторная трансфекция клеток даже небольшим количеством длинной РНК может привести к гибели клетки, если не будут приняты меры по подавлению или обходу врожденной иммунной системы (см. «Трансфекция длинной РНК» ниже).

Трансфекция короткой РНК обычно используется в биологических исследованиях для подавления экспрессии интересующего белка (с использованием миРНК ) или для экспрессии или блокирования активности микроРНК ( с использованием короткой РНК, которая действует независимо от клеточного механизма РНКи и, следовательно, не называемые siRNA). Хотя также можно использовать векторы на основе ДНК ( вирусы , плазмиды ), которые кодируют короткую молекулу РНК, трансфекция короткой РНК не подвергает риску модификацию клеточной ДНК, что привело к развитию коротких РНК как нового класса макромолекулярные препараты . [31]

Трансфекция длинной РНК — это процесс преднамеренного введения молекул РНК длиной более 25 нуклеотидов в живые клетки. Различают трансфекцию коротких и длинных РНК, поскольку экзогенные молекулы длинной РНК вызывают врожденный иммунный ответ в клетках, который может вызывать различные неспецифические эффекты, включая блокировку трансляции , остановку клеточного цикла и апоптоз .

Эндогенная и экзогенная длинная РНК

Врожденная иммунная система эволюционировала для защиты от инфекции путем обнаружения молекулярных структур, связанных с патогенами (PAMP), и запуска сложного набора реакций, известных под общим названием « воспаление ». Многие клетки экспрессируют специфические рецепторы распознавания образов (PRR) для экзогенной РНК, включая толл-подобные рецепторы 3,7,8 ( TLR3 , TLR7 , TLR8 ), [32] [33] [34] [35] РНК- хеликазу RIG1 (RARRES3). , [36] протеинкиназа R (PKR, также известная как EIF2AK2), [37] [38] члены семейства белков олигоаденилатсинтетаз ( OAS1 , OAS2 , OAS3 ) и другие. Все эти белки могут специфически связываться с экзогенными молекулами РНК и запускать иммунный ответ. Конкретные химические, структурные или другие характеристики длинных молекул РНК, необходимые для распознавания PRR, остаются в значительной степени неизвестными, несмотря на интенсивные исследования. В любой момент времени типичная клетка млекопитающего может содержать несколько сотен тысяч мРНК и других регуляторных длинных молекул РНК . Как клетки отличают экзогенную длинную РНК от большого количества эндогенной длинной РНК, является важным открытым вопросом в клеточной биологии . В нескольких сообщениях предполагается, что фосфорилирование 5'-конца длинной молекулы РНК может влиять на ее иммуногенность , в частности, что 5'-трифосфат РНК, которая может вырабатываться во время вирусной инфекции, более иммуногенна, чем 5'-дифосфат РНК, 5' -монофосфатная РНК или РНК, не содержащая 5'-фосфата. [39] [40] [41] [42] [43] [44] Однако транскрибируемая in vitro (ivT) длинная РНК, содержащая 7-метилгуанозиновый кэп (присутствует в мРНК эукариот ), также обладает высокой иммуногенностью, несмотря на отсутствие 5'-конца. фосфат, [45] предполагая, что характеристики, отличные от 5'-фосфорилирования, могут влиять на иммуногенность молекулы РНК.

Эукариотическая мРНК содержит химически модифицированные нуклеотиды, такие как N 6 -метиладенозин , 5-метилцитидин и 2'-O-метилированные нуклеотиды. Хотя в типичной молекуле мРНК присутствует лишь очень небольшое количество этих модифицированных нуклеотидов, они могут помочь предотвратить активацию мРНК врожденной иммунной системы, разрушая вторичную структуру , которая напоминает двухцепочечную РНК (дсРНК) [46] [34] тип РНК, который, как полагают, присутствует в клетках только во время вирусной инфекции. Иммуногенность длинных РНК использовалась для изучения как врожденного, так и адаптивного иммунитета .

Повторная трансфекция длинной РНК

Ингибирования только трех белков, интерферона-β , STAT2 и EIF2AK2 , достаточно, чтобы спасти фибробласты человека от гибели клеток, вызванной частой трансфекцией длинной РНК, кодирующей белок. [45] Ингибирование передачи сигналов интерферона разрушает петлю положительной обратной связи, которая обычно повышает чувствительность клеток к экзогенной длинной РНК. Исследователи недавно использовали этот метод для экспрессии перепрограммирующих белков в первичных фибробластах человека . [47]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Трансфекция в медицинских предметных рубриках Национальной медицинской библиотеки США (MeSH).
  2. ^ abc «Трансфекция». Руководство по протоколам и приложениям . Промега. Архивировано из оригинала 25 июня 2014 года . Проверено 25 октября 2014 г.
  3. ^ Трансдукция, генетика, Национальная медицинская библиотека США по медицинским предметным рубрикам (MeSH).
  4. ^ «Трансфекция» в Медицинском словаре Дорланда.
  5. ^ abcd Ким Т.К., Эбервин Дж.Х. (август 2010 г.). «Трансфекция клеток млекопитающих: настоящее и будущее». Аналитическая и биоаналитическая химия . 397 (8): 3173–8. дои : 10.1007/s00216-010-3821-6. ПМЦ 2911531 . ПМИД  20549496. 
  6. ^ Саул Дж.М., член парламента от Линнеса, Ратнер Б.Д., Джачелли СМ, ​​Пун Ш. (ноябрь 2007 г.). «Доставка невирусных носителей генов из фибриновых каркасов со сферическими шаблонами для устойчивой экспрессии трансгена». Биоматериалы . 28 (31): 4705–16. doi :10.1016/j.bimaterials.2007.07.026. ПМИД  17675152.
  7. ^ Цукакоши М., Курата С., Номия Ю. и др. (1984). «Новый метод трансфекции ДНК с помощью лазерной микролучевой хирургии клеток». Прикладная физика B: Фотофизика и лазерная химия . 35 (3): 135–140. Бибкод : 1984ApPhB..35..135T. дои : 10.1007/BF00697702. S2CID  123250337.
  8. ^ аб Мейер-Умберт С., Гай Р.Х. (апрель 2005 г.). «Физические методы переноса генов: улучшение кинетики доставки генов в клетки». Adv Drug Deliv Rev. 57 (5): 733–53. doi :10.1016/j.addr.2004.12.007. ПМИД  15757758.
  9. ^ Суда Т, Лю Д (2015). «Гидродинамическая доставка». Адв Генет . Достижения генетики. 89 : 89–111. дои : 10.1016/bs.adgen.2014.10.002. ISBN 9780128022726. ПМИД  25620009.
  10. ^ Менуэль С., Фонтане С., Кларо I, Дюваль Р.Э., Диес Л., Марсура А. (декабрь 2008 г.). «Синтез и способность к комплексообразованию нового бис-(гуанидиния)-тетракис-(бета-циклодекстрина) дендримерного тетрапода как потенциальной системы доставки генов (ДНК и миРНК). Исследование клеточной трансфекции миРНК». Биоконъюгатная химия . 19 (12): 2357–62. дои : 10.1021/bc800193p. ПМИД  19053312.
  11. ^ Фишер Д., фон Харпе А., Кунат К., Петерсен Х., Ли Ю., Киссель Т. (2002). «Сополимеры этиленимина и N-(2-гидроксиэтил)-этилимина как инструменты для изучения влияния структуры полимера на физико-химические и биологические свойства комплексов ДНК». Биоконъюгатная химия . 13 (5): 1124–33. дои : 10.1021/bc025550w. ПМИД  12236795.
  12. ^ «Реагенты для трансфекции на основе наночастиц». Ресурс по исследованию биологической трансфекции . Трансфекция.ws. Архивировано из оригинала 21 апреля 2013 года . Проверено 30 сентября 2009 г.
  13. ^ Грэм Флорида, ван дер Эб Эй Джей (апрель 1973 г.). «Новый метод анализа инфекционности ДНК аденовируса человека 5». Вирусология . 52 (2): 456–67. дои : 10.1016/0042-6822(73)90341-3. ПМИД  4705382.
  14. ^ Баккетти С., Грэм Флорида (апрель 1977 г.). «Перенос гена тимидинкиназы в клетки человека с дефицитом тимидинкиназы с помощью очищенной ДНК вируса простого герпеса». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 74 (4): 1590–4. Бибкод : 1977PNAS...74.1590B. дои : 10.1073/pnas.74.4.1590 . ПМК 430836 . ПМИД  193108. 
  15. ^ Криглер М (1991). Перенос и экспрессия: Лабораторное руководство . У. Х. Фриман. стр. 96–97. ISBN 978-0-7167-7004-6.
  16. ^ Фельгнер П.Л., Гадек Т.Р., Холм М., Роман Р., Чан Х.В., Венц М., Нортроп Дж.П., Ринголд Г.М., Даниэльсен М. (ноябрь 1987 г.). «Липофекция: высокоэффективная процедура липид-опосредованной трансфекции ДНК». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 84 (21): 7413–7. Бибкод : 1987PNAS...84.7413F. дои : 10.1073/pnas.84.21.7413 . ПМК 299306 . ПМИД  2823261. 
  17. ^ Фельгнер Дж. Х., Кумар Р., Шридхар С. Н., Уилер С. Дж., Цай Ю. Дж., Бордер Р., Рэмси П., Мартин М., Фельгнер П. Л. (январь 1994 г.). «Улучшенная доставка генов и исследования механизмов с использованием новой серии составов катионных липидов». Журнал биологической химии . 269 ​​(4): 2550–61. дои : 10.1016/S0021-9258(17)41980-6 . ПМИД  8300583.
  18. ^ Пайпс Б.Л., Васанвала Ф.Х., Цанг Т.К., Чжан Т., Луо П., Харрис Д.Т. (январь 2005 г.). «Краткий тепловой шок увеличивает стабильную интеграцию липид-опосредованных трансфекций ДНК». БиоТехники . 38 (1): 48–52. дои : 10.2144/05381bm05 . ПМИД  15679084.
  19. ^ Якобсен Л.Б., Кэлвин С.А., Колвин К.Е., Райт М. (июнь 2004 г.). «Реагент для трансфекции FuGENE 6: бережная сила». Методы . Трансфекция клеток млекопитающих. 33 (2): 104–12. дои : 10.1016/j.ymeth.2003.11.002. ПМИД  15121164.
  20. ^ Хеллгрен I, Дрвота В, Пипер Р, Энокссон С, Бломберг П, Ислам КБ, Сильвен С (август 2000 г.). «Высокоэффективный клеточный перенос генов с использованием невирусных векторов и FuGene6: исследования in vitro и in vivo». Клеточные и молекулярные науки о жизни . 57 (8–9): 1326–33. дои : 10.1007/PL00000769. PMID  11028922. S2CID  27916034.
  21. ^ Лакшмипатия У, Тьягараджан Б (2011). Первичные и стволовые клетки: технологии и применение переноса генов (1-е изд.). Уайли-Блэквелл. ISBN 978-0-470-61074-9.
  22. ^ Арнольд А.С., Лапорт В., Дюмон С., Апперт-Коллин А., Эрбахер П., Купен Г., Леви Р., Пойндрон П., Гис Дж. П. (февраль 2006 г.). «Сравнение реагентов для эффективной трансфекции первичных миобластов человека: FuGENE 6, Effectene и ExGen 500». Фундаментальная и клиническая фармакология . 20 (1): 81–9. дои : 10.1111/j.1472-8206.2005.00344.x. PMID  16448398. S2CID  42585711.
  23. ^ Сапра, Рахит; Верма, Рам П.; Маурья, Говинд П.; Дхаван, Самир; Бабу, Джиша; Харидас, В. (13 ноября 2019 г.). «Конструктор пептидов и белковых дендримеров: перекрестный анализ». Химические обзоры . 119 (21): 11391–11441. doi : 10.1021/acs.chemrev.9b00153. ISSN  0009-2665. PMID  31556597. S2CID  203435702.
  24. ^ Хейтц, Марк; Явор, Саша; Дарбре, Тамис; Реймонд, Жан-Луи (21 августа 2019 г.). «Стереоселективные pH-чувствительные пептидные дендримеры для трансфекции миРНК». Биоконъюгатная химия . 30 (8): 2165–2182. doi : 10.1021/acs.bioconjchem.9b00403. ISSN  1043-1802. PMID  31398014. S2CID  199519310.
  25. ^ Дюрошер Ю., Перрет С., Камен А. (январь 2002 г.). «Высокоуровневое и высокопроизводительное производство рекомбинантного белка путем временной трансфекции суспензионно растущих клеток человека 293-EBNA1». Исследования нуклеиновых кислот . 30 (2): 9д–9. дои : 10.1093/нар/30.2.e9. ПМК 99848 . ПМИД  11788735. 
  26. ^ Фанелли А (2016). «Наука создания стабильных клеточных линий» . Проверено 23 декабря 2017 г.
  27. ^ Мауджи И.А., Марсден, Пенсильвания (июнь 2006 г.). «Трансфекция РНК является универсальным инструментом для изучения посттранскрипционной регуляции эндотелина-1». Экспериментальная биология и медицина . 231 (6): 704–708. doi : 10.3181/00379727-231-2310704 (неактивен 31 января 2024 г.). ПМИД  16740984.{{cite journal}}: CS1 maint: DOI неактивен по состоянию на январь 2024 г. ( ссылка )
  28. ^ Херб М., Фарид А., Глушко А., Кренке М., Шрамм М. (ноябрь 2019 г.). «Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов транскрибируемой in vitro мРНК». Журнал визуализированных экспериментов (153). дои : 10.3791/60143 . ПМИД  31762462.
  29. ↑ Куни, Элизабет (1 декабря 2020 г.). «Как нанотехнологии помогают мРНК-вакцинам против Covid-19 работать». Стат . Проверено 3 декабря 2020 г.
  30. ↑ Фоли, Кэтрин Эллен (22 декабря 2020 г.). «Первые вакцины против Covid-19 навсегда изменили биотехнологии». Кварц . Кварц Медиа . Проверено 11 января 2021 г.
  31. ^ Тэнси Б (11 августа 2006 г.). «Лечение дегенерации желтого пятна мешает передаче сообщений РНК». Хроники Сан-Франциско.
  32. ^ Алексопулу Л., Холт AC, Меджитов Р., Флавелл Р.А. (2001). «Распознавание двухцепочечной РНК и активация NF-каппаB Toll-подобным рецептором 3». Природа . 413 (6857): 732–738. Бибкод : 2001Natur.413..732A. дои : 10.1038/35099560. PMID  11607032. S2CID  4346537.
  33. ^ Карико К., Ни Х., Каподичи Дж., Ламфьер М., Вайсман Д. (2004). «МРНК является эндогенным лигандом Toll-подобного рецептора 3». J Биол Хим . 279 (13): 12542–12550. дои : 10.1074/jbc.M310175200 . ПМИД  14729660.
  34. ^ ab Карико К., Бакштейн М., Ни Х., Вайсман Д. (2005). «Подавление распознавания РНК Toll-подобными рецепторами: влияние модификации нуклеозидов и эволюционное происхождение РНК». Иммунитет . 23 (2): 165–175. doi : 10.1016/j.immuni.2005.06.008 . ПМИД  16111635.
  35. ^ Диболд СС, Кайшо Т, Хемми Х, Акира С, Рейс и Соуза С (2004). «Врожденные противовирусные ответы посредством TLR7-опосредованного распознавания одноцепочечной РНК». Наука . 303 (5663): 1529–1531. Бибкод : 2004Sci...303.1529D. дои : 10.1126/science.1093616 . PMID  14976261. S2CID  33144196.
  36. ^ Ёнеяма М., Кикучи М., Нацукава Т., Синобу Н., Имаидзуми Т. и др. (2004). «РНК-хеликаза RIG-I выполняет важную функцию в врожденных противовирусных ответах, индуцированных двухцепочечной РНК». Нат Иммунол . 5 (7): 730–737. дои : 10.1038/ni1087. PMID  15208624. S2CID  34876422.
  37. ^ Дас Х.К., Дас А., Гош-Дастидар П., Ралстон Р.О., Ягмай Б. и др. (1981). «Синтез белка в ретикулоцитах кролика. Очистка и характеристика ингибитора двухцепочечного РНК-зависимого синтеза белка из лизатов ретикулоцитов». J Биол Хим . 256 (12): 6491–6495. дои : 10.1016/S0021-9258(19)69192-1 . ПМИД  7240221.
  38. ^ Левин Д.Х., Петришин Р., Лондонский IM (1981). «Характеристика очищенной двухцепочечной РНК-активируемой альфа-киназы eIF-2 из ретикулоцитов кролика». J Биол Хим . 256 (14): 7638–7641. дои : 10.1016/S0021-9258(19)69008-3 . ПМИД  6265457.
  39. ^ Хорнунг В., Эллегаст Дж., Ким С., Брзозка К., Юнг А. и др. (2006). «5'-трифосфатная РНК является лигандом RIG-I». Наука . 314 (5801): 994–997. Бибкод : 2006Sci...314..964H. дои : 10.1126/science.1132505 . PMID  17038590. S2CID  22436759.
  40. ^ Сайто Т; Оуэн ДМ; Цзян Ф; Маркотриджано Дж; Гейл М. младший (2008). «Врожденный иммунитет, индуцированный зависимым от состава распознаванием RIG-I РНК вируса гепатита С». Природа . 454 (7203): 523–527. Бибкод : 2008Natur.454..523S. дои : 10.1038/nature07106. ПМЦ 2856441 . ПМИД  18548002. 
  41. ^ Такахаси К., Йонеяма М., Нишихори Т., Хираи Р., Кумета Х. и др. (2008). «Механизм восприятия несобственной РНК геликазы RIG-I и активация противовирусного иммунного ответа». Мол Клетка . 29 (4): 428–440. doi : 10.1016/j.molcel.2007.11.028 . ПМИД  18242112.
  42. ^ Йонеяма М., Фудзита Т. (2008). «Структурный механизм узнавания РНК RIG-I-подобными рецепторами». Иммунитет . 29 (2): 178–181. doi : 10.1016/j.immuni.2008.07.009 . ПМИД  18701081.
  43. ^ Шмидт А., Шверд Т., Хамм В., Хельмут Дж.К., Куи С. и др. (2009). «5'-трифосфатная РНК требует структур, спаренных оснований, для активации противовирусной передачи сигналов через RIG-I». Proc Natl Acad Sci США . 106 (29): 12067–12072. Бибкод : 2009PNAS..10612067S. дои : 10.1073/pnas.0900971106 . ПМЦ 2705279 . ПМИД  19574455. 
  44. ^ Шле М., Рот А., Хорнунг В., Хагманн К.А., Вимменауэр В. и др. (2009). «Для распознавания 5'-трифосфата хеликазой RIG-I требуется короткая тупая двухцепочечная РНК, содержащаяся в ручке вируса с отрицательной цепью». Иммунитет . 31 (1): 25–34. doi :10.1016/j.immuni.2009.05.008. ПМЦ 2824854 . ПМИД  19576794. 
  45. ^ аб Анхель М, Яник М.Ф. (2010). «Врожденная иммуносупрессия обеспечивает частую трансфекцию РНК, кодирующей перепрограммирующие белки». ПЛОС ОДИН . 5 (7): е11756. Бибкод : 2010PLoSO...511756A. дои : 10.1371/journal.pone.0011756 . ПМК 2909252 . ПМИД  20668695. 
  46. ^ Херб М., Фарид А., Глушко А., Кренке М., Шрамм М. (ноябрь 2019 г.). «Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов транскрибируемой in vitro мРНК». Журнал визуализированных экспериментов (153). дои : 10.3791/60143 . ПМИД  31762462.
  47. ^ Трафтон А (26 июля 2010 г.). «РНК предлагает более безопасный способ перепрограммирования клеток». Пресс-служба Массачусетского технологического института.

дальнейшее чтение

Внешние ссылки

Scholia имеет профиль трансфекции (Q1429031).