stringtranslate.com

Трансфекция

Трансфекция — это процесс преднамеренного введения голых или очищенных нуклеиновых кислот в эукариотические клетки . [1] [2] Это может также относиться к другим методам и типам клеток, хотя часто предпочитаются другие термины: « трансформация » обычно используется для описания невирусного переноса ДНК в бактериях и неживотных эукариотических клетках, включая растительные клетки. В животных клетках предпочтительным термином является трансфекция, поскольку трансформация также используется для обозначения прогрессирования в раковое состояние ( канцерогенез ) в этих клетках. Трансдукция часто используется для описания вирус-опосредованного переноса генов в эукариотические клетки. [2] [3]

Слово трансфекция является гибридом транс- и инфекции . Генетический материал (такой как суперспиральная плазмидная ДНК или конструкции siRNA ) может быть трансфицирован. Трансфекция клеток животных обычно включает открытие временных пор или «отверстий» в клеточной мембране для обеспечения поглощения материала. Трансфекция может быть выполнена с использованием фосфата кальция (т. е. трикальцийфосфата ), электропорацией , сдавливанием клеток или смешиванием катионного липида с материалом для получения липосом , которые сливаются с клеточной мембраной и размещают свой груз внутри.

Трансфекция может привести к неожиданным морфологиям и аномалиям в клетках-мишенях.

Терминология

Значение термина эволюционировало. [4] Первоначальное значение трансфекции было «инфекция путем трансформации», т. е. введение генетического материала, ДНК или РНК, из прокариотического вируса или бактериофага в клетки, что приводит к инфекции. Для работы с бактериальными и архейными клетками трансфекция сохраняет свое первоначальное значение как особый случай трансформации. Поскольку термин трансформация имел другое значение в биологии клеток животных (генетическое изменение, позволяющее долгосрочное размножение в культуре или приобретение свойств, типичных для раковых клеток), термин трансфекция приобрел для клеток животных свое нынешнее значение изменения свойств клетки, вызванного введением ДНК. [ необходима цитата ]

Методы

Существуют различные методы введения чужеродной ДНК в эукариотическую клетку : некоторые основаны на физической обработке (электропорация, сдавливание клеток, наночастицы , магнитофекция); другие основаны на химических материалах или биологических частицах (вирусах), которые используются в качестве носителей. Существует много различных методов доставки генов, разработанных для различных типов клеток и тканей, от бактериальных до млекопитающих. Как правило, методы можно разделить на три категории: физические, химические и биологические. [5]

Физические методы включают электропорацию , микроинъекцию , генную пушку , импалефекцию , гидростатическое давление , непрерывную инфузию и обработку ультразвуком. Химические методы включают такие методы, как липофекция , которая представляет собой процесс трансфекции ДНК, опосредованный липидами, с использованием липосомальных векторов. Он также может включать использование полимерных носителей генов (полиплексов). [6] Биологическая трансфекция обычно опосредуется вирусами , использующими способность вируса вводить свою ДНК внутрь клетки-хозяина. Ген, предназначенный для доставки, упаковывается в вирусную частицу с дефектом репликации. Вирусы, используемые на сегодняшний день, включают ретровирус , лентивирус , аденовирус , аденоассоциированный вирус и вирус простого герпеса . [ требуется ссылка ]

Физические методы

Электропоратор с квадратными волнами и экспоненциальным затуханием для электропорации in vitro, in vivo, адгезивных клеток и 96-луночных приложений. Изготовлен компанией BTX Harvard Apparatus, Холлистон, Массачусетс, США.

Физические методы являются концептуально самыми простыми, они используют некоторые физические средства для принудительного введения трансфицированного материала в ядро ​​клетки-мишени. Наиболее широко используемый физический метод — электропорация , при которой короткие электрические импульсы разрушают клеточную мембрану, позволяя трансфицированным нуклеиновым кислотам проникать в клетку. [5] Другие физические методы используют другие средства для прокалывания отверстий в клеточной мембране: сонопорация использует высокоинтенсивный ультразвук (в основном обусловленный кавитацией газовых пузырьков, взаимодействующих с близлежащими клеточными мембранами), оптическая трансфекция использует высокосфокусированный лазер для формирования отверстия диаметром ~1 мкм. [7]

Несколько методов используют инструменты, которые вводят нуклеиновую кислоту в клетку, а именно: микроинъекция нуклеиновой кислоты тонкой иглой; [5] биолистическая доставка частиц , при которой нуклеиновая кислота прикрепляется к частицам тяжелого металла (обычно золота) и продвигается в клетки с высокой скоростью; [8] и магнитофекция , при которой нуклеиновые кислоты прикрепляются к магнитным частицам оксида железа и продвигаются в целевые клетки с помощью магнитов. [8]

Гидродинамическая доставка — это метод, используемый на мышах и крысах, при котором нуклеиновые кислоты могут быть доставлены в печень путем инъекции относительно большого объема в кровь менее чем за 10 секунд; почти вся ДНК экспрессируется в печени с помощью этой процедуры. [9]

Химические методы

Химическую трансфекцию можно разделить на несколько видов: циклодекстрин , [10] полимеры, [11] липосомы или наночастицы [12] (с химической или вирусной функционализацией или без нее. См. ниже).

Вирусные методы

ДНК также может быть введена в клетки с использованием вирусов в качестве носителя. В таких случаях метод называется трансдукцией , а клетки считаются трансдуцированными. Аденовирусные векторы могут быть полезны для методов вирусной трансфекции, поскольку они могут переносить гены в самые разные клетки человека и имеют высокую скорость переноса. [2] Лентивирусные векторы также полезны из-за их способности трансдуцировать клетки, которые в данный момент не проходят митоз.

Слияние протопластов — это метод, при котором трансформированные бактериальные клетки обрабатываются лизоцимом для удаления клеточной стенки. После этого используются фузогенные агенты (например, вирус Сендай, ПЭГ, электропорация) для слияния протопласта, несущего интересующий ген, с целевой клеткой-реципиентом. Главным недостатком этого метода является то, что бактериальные компоненты также неспецифично вводятся в целевую клетку.

Стабильная и временная трансфекция

Стабильная и транзиторная трансфекция различаются по долгосрочному воздействию на клетку: стабильно трансфицированная клетка будет непрерывно экспрессировать трансфицированную ДНК и передавать ее дочерним клеткам , в то время как транзиторно трансфицированная клетка будет экспрессировать трансфицированную ДНК в течение короткого периода времени и не передавать ее дочерним клеткам.

Для некоторых применений трансфекции достаточно, если трансфицированный генетический материал экспрессируется только временно. Поскольку ДНК, введенная в процессе трансфекции, обычно не интегрируется в ядерный геном, чужеродная ДНК будет разбавлена ​​посредством митоза или деградирована. [5] Клеточные линии, экспрессирующие ядерный антиген 1 вируса Эпштейна-Барр (EBV) (EBNA1) или большой антиген T SV40, позволяют проводить эписомальную амплификацию плазмид, содержащих вирусные точки начала репликации EBV (293E) или SV40 (293T), что значительно снижает скорость разбавления. [25]

Если желательно, чтобы трансфицированный ген фактически оставался в геноме клетки и ее дочерних клеток, должна произойти стабильная трансфекция. Для этого ко-трансфицируется ген-маркер , что дает клетке некоторое селективное преимущество, например, устойчивость к определенному токсину . Некоторые (очень немногие) трансфицированные клетки случайно интегрируют чужеродный генетический материал в свой геном. Если затем в клеточную культуру добавить токсин, то только те немногие клетки, в геномы которых интегрирован ген-маркер, смогут размножаться , в то время как другие клетки погибнут. После применения этого селективного стресса (давления отбора) в течение некоторого времени остаются только клетки со стабильной трансфекцией, которые могут культивироваться дальше. [26]

Распространенными агентами для выбора стабильной трансфекции являются:

РНК-трансфекция

РНК также может быть трансфицирована в клетки для временной экспрессии ее кодируемого белка или для изучения кинетики распада РНК . Трансфекция РНК часто используется в первичных клетках, которые не делятся.

siRNA также могут быть трансфицированы для достижения РНК-сайленсинга (т.е. потери РНК и белка из целевого гена). Это стало основным применением в исследованиях для достижения " нокдауна " интересующих белков (например, эндотелина-1 [27] ) с потенциальным применением в генной терапии. Ограничением подхода сайленсинга является токсичность трансфекции для клеток и потенциальные "внецелевые" эффекты на экспрессию других генов/белков.

РНК может быть очищена из клеток после лизиса или синтезирована из свободных нуклеотидов либо химически, либо ферментативно с использованием РНК-полимеразы для транскрипции ДНК - матрицы. Как и в случае с ДНК, РНК может быть доставлена ​​в клетки различными способами, включая микроинъекцию , электропорацию и липидно-опосредованную трансфекцию . Если РНК кодирует белок , трансфицированные клетки могут транслировать РНК в закодированный белок. [28] Если РНК является регуляторной РНК (такой как miRNA ), РНК может вызывать другие изменения в клетке (например, опосредованный РНКi нокдаун ).

Инкапсуляция молекулы РНК в липидные наночастицы стала прорывом в производстве жизнеспособных вакцин РНК , решив ряд ключевых технических барьеров в доставке молекулы РНК в клетку человека. [29] [30]

Молекулы РНК короче примерно 25 нуклеотидов (нуклеотидов) в значительной степени избегают обнаружения врожденной иммунной системой , которая активируется более длинными молекулами РНК. Большинство клеток организма экспрессируют белки врожденной иммунной системы, и при воздействии экзогенных длинных молекул РНК эти белки инициируют сигнальные каскады, которые приводят к воспалению . Это воспаление делает подвергнутую воздействию клетку и близлежащие клетки сверхчувствительными к последующему воздействию. В результате, в то время как клетка может быть многократно трансфицирована короткой РНК с небольшим количеством неспецифических эффектов, многократная трансфекция клеток даже небольшим количеством длинной РНК может вызвать гибель клетки, если не будут приняты меры для подавления или уклонения от врожденной иммунной системы (см. «Трансфекция длинной РНК» ниже).

Трансфекция короткой РНК обычно используется в биологических исследованиях для подавления экспрессии интересующего белка (используя siRNA ) или для экспрессии или блокирования активности miRNA (используя короткую РНК, которая действует независимо от клеточного RNAi- механизма и поэтому не называется siRNA). Хотя векторы на основе ДНК ( вирусы , плазмиды ), которые кодируют короткую молекулу РНК, также могут быть использованы, трансфекция короткой РНК не несет риска модификации ДНК клетки, что привело к разработке короткой РНК как нового класса макромолекулярных препаратов . [31]

Трансфекция длинной РНК — это процесс преднамеренного введения молекул РНК длиннее примерно 25 нт в живые клетки. Различают трансфекцию короткой и длинной РНК, поскольку экзогенные длинные молекулы РНК вызывают врожденный иммунный ответ в клетках, который может вызывать различные неспецифические эффекты, включая блокировку трансляции , остановку клеточного цикла и апоптоз .

Эндогенные и экзогенные длинные РНК

Врожденная иммунная система развилась для защиты от инфекции путем обнаружения патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP) и запуска сложного набора реакций, известных под общим названием « воспаление ». Многие клетки экспрессируют специфические рецепторы распознавания паттернов (PRR) для экзогенной РНК, включая толл-подобный рецептор 3,7,8 ( TLR3 , TLR7 , TLR8 ), [32] [33] [34] [35] РНК- хеликазу RIG1 (RARRES3) , [36] протеинкиназу R (PKR, также известную как EIF2AK2), [37] [38] членов семейства белков олигоаденилатсинтетазы ( OAS1 , OAS2 , OAS3 ) и другие. Все эти белки могут специфически связываться с экзогенными молекулами РНК и вызывать иммунный ответ. Конкретные химические, структурные или другие характеристики длинных молекул РНК, необходимые для распознавания PRR, остаются в значительной степени неизвестными, несмотря на интенсивное изучение. В любой момент времени типичная клетка млекопитающего может содержать несколько сотен тысяч мРНК и других регуляторных длинных молекул РНК . То, как клетки отличают экзогенную длинную РНК от большого количества эндогенной длинной РНК, является важным открытым вопросом в клеточной биологии . Несколько отчетов предполагают, что фосфорилирование 5'-конца длинной молекулы РНК может влиять на ее иммуногенность , и в частности, что 5'-трифосфатная РНК, которая может вырабатываться во время вирусной инфекции, более иммуногенна, чем 5'-дифосфатная РНК, 5'-монофосфатная РНК или РНК, не содержащая 5'-фосфата. [39] [40] [41] [42] [43] [44] Однако транскрибированная in vitro (ivT) длинная РНК, содержащая 7-метилгуанозиновый колпачок (присутствующий в эукариотической мРНК), также является высокоиммуногенной, несмотря на отсутствие 5'-фосфата, [45] предполагая, что характеристики, отличные от 5'-фосфорилирования, могут влиять на иммуногенность молекулы РНК.

Эукариотическая мРНК содержит химически модифицированные нуклеотиды, такие как N 6 -метиладенозин , 5-метилцитидин и 2'-O-метилированные нуклеотиды. Хотя в типичной молекуле мРНК присутствует лишь очень небольшое количество этих модифицированных нуклеотидов, они могут помочь предотвратить активацию мРНК врожденной иммунной системы путем нарушения вторичной структуры , которая будет напоминать двухцепочечную РНК (dsRNA), [46] [34] тип РНК, который, как считается, присутствует в клетках только во время вирусной инфекции. Иммуногенность длинной РНК использовалась для изучения как врожденного, так и адаптивного иммунитета .

Повторная трансфекция длинной РНК

Ингибирование только трех белков, интерферона-β , STAT2 и EIF2AK2 , достаточно для спасения человеческих фибробластов от гибели клеток, вызванной частой трансфекцией длинной РНК, кодирующей белок. [45] Ингибирование интерфероновой сигнализации нарушает петлю положительной обратной связи, которая обычно делает клетки гиперсенсибилизирующими, подвергаясь воздействию экзогенной длинной РНК. Исследователи недавно использовали эту технику для экспрессии репрограммирующих белков в первичных человеческих фибробластах . [47]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Трансфекция в Национальной медицинской библиотеке США, медицинские предметные рубрики (MeSH)
  2. ^ abc "Трансфекция". Руководство по протоколам и приложениям . Promega. Архивировано из оригинала 25 июня 2014 г. Получено 25 октября 2014 г.
  3. ^ Трансдукция, Генетика в Национальной медицинской библиотеке США Медицинские предметные рубрики (MeSH)
  4. ^ «Трансфекция» в Медицинском словаре Дорланда
  5. ^ abcd Kim TK, Eberwine JH (август 2010 г.). «Трансфекция клеток млекопитающих: настоящее и будущее». Аналитическая и биоаналитическая химия . 397 (8): 3173–8. doi :10.1007/s00216-010-3821-6. PMC 2911531. PMID  20549496 . 
  6. ^ Saul JM, Linnes MP, Ratner BD, Giachelli CM, Pun SH (ноябрь 2007 г.). «Доставка невирусных носителей генов из сферических фибриновых каркасов для устойчивой экспрессии трансгенов». Biomaterials . 28 (31): 4705–16. doi :10.1016/j.biomaterials.2007.07.026. PMID  17675152.
  7. ^ Tsukakoshi M, Kurata S, Nomiya Y и др. (1984). «Новый метод трансфекции ДНК с помощью лазерной микролучевой клеточной хирургии». Applied Physics B: Photophysics and Laser Chemistry . 35 (3): 135–140. Bibcode : 1984ApPhB..35..135T. doi : 10.1007/BF00697702. S2CID  123250337.
  8. ^ ab Mehier-Humbert S, Guy RH (апрель 2005 г.). «Физические методы переноса генов: улучшение кинетики доставки генов в клетки». Adv Drug Deliv Rev. 57 ( 5): 733–53. doi :10.1016/j.addr.2004.12.007. PMID  15757758.
  9. ^ Suda T, Liu D (2015). «Гидродинамическая доставка». Невирусные векторы для генной терапии — физические методы и медицинский перевод . Достижения в генетике. Т. 89. С. 89–111. doi :10.1016/bs.adgen.2014.10.002. ISBN 9780128022726. PMID  25620009.
  10. ^ Menuel S, Fontanay S, Clarot I, Duval RE, Diez L, Marsura A (декабрь 2008 г.). «Синтез и комплексообразующая способность нового бис-(гуанидиний)-тетракис-(бета-циклодекстрин) дендримерного тетрапода как потенциальной системы доставки генов (ДНК и siRNA). Изучение клеточной трансфекции siRNA». Bioconjugate Chemistry . 19 (12): 2357–62. doi :10.1021/bc800193p. PMID  19053312.
  11. ^ Фишер Д., фон Харпе А., Кунат К., Петерсен Х., Ли И., Киссель Т. (2002). «Сополимеры этиленимина и N-(2-гидроксиэтил)-этиленимина как инструменты для изучения влияния структуры полимера на физико-химические и биологические свойства комплексов ДНК». Bioconjugate Chemistry . 13 (5): 1124–33. doi :10.1021/bc025550w. PMID  12236795.
  12. ^ "Реагенты для трансфекции на основе наночастиц". Ресурс по исследованию биологической трансфекции . Transfection.ws. Архивировано из оригинала 21 апреля 2013 г. Получено 30 сентября 2009 г.
  13. ^ Graham FL, van der Eb AJ (апрель 1973 г.). «Новый метод анализа инфекционности ДНК человеческого аденовируса 5». Вирусология . 52 (2): 456–67. doi :10.1016/0042-6822(73)90341-3. PMID  4705382.
  14. ^ Bacchetti S, Graham FL (апрель 1977 г.). «Перенос гена тимидинкиназы в клетки человека с дефицитом тимидинкиназы очищенной ДНК вируса простого герпеса». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 74 (4): 1590–4. Bibcode : 1977PNAS...74.1590B. doi : 10.1073/pnas.74.4.1590 . PMC 430836. PMID  193108 . 
  15. ^ Криглер М. (1991). Передача и выражение: лабораторное руководство . WH Freeman. стр. 96–97. ISBN 978-0-7167-7004-6.
  16. ^ Felgner PL, Gadek TR, Holm M, Roman R, Chan HW, Wenz M, Northrop JP, Ringold GM, Danielsen M (ноябрь 1987 г.). «Липофекция: высокоэффективная процедура трансфекции ДНК с использованием липидов». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 84 (21): 7413–7. Bibcode : 1987PNAS...84.7413F. doi : 10.1073/pnas.84.21.7413 . PMC 299306. PMID  2823261 . 
  17. ^ Felgner JH, Kumar R, Sridhar CN, Wheeler CJ, Tsai YJ, Border R, Ramsey P, Martin M, Felgner PL (январь 1994). «Улучшенная доставка генов и исследования механизмов с новой серией катионных липидных формулировок». Журнал биологической химии . 269 (4): 2550–61. doi : 10.1016/S0021-9258(17)41980-6 . PMID  8300583.
  18. ^ Pipes BL, Vasanwala FH, Tsang TC, Zhang T, Luo P, Harris DT (январь 2005 г.). «Кратковременный тепловой шок увеличивает стабильную интеграцию липидно-опосредованных трансфекций ДНК». BioTechniques . 38 (1): 48–52. doi : 10.2144/05381bm05 . PMID  15679084.[ постоянная мертвая ссылка ]
  19. ^ Jacobsen LB, Calvin SA, Colvin KE, Wright M (июнь 2004 г.). «Реагент для трансфекции FuGENE 6: нежная сила». Методы . Трансфекция клеток млекопитающих. 33 (2): 104–12. doi :10.1016/j.ymeth.2003.11.002. PMID  15121164.
  20. ^ Hellgren I, Drvota V, Pieper R, Enoksson S, Blomberg P, Islam KB, Sylvén C (август 2000 г.). «Высокоэффективный клеточно-опосредованный перенос генов с использованием невирусных векторов и FuGene6: исследования in vitro и in vivo». Cellular and Molecular Life Sciences . 57 (8–9): 1326–33. doi :10.1007/PL00000769. PMC 11146917 . PMID  11028922. S2CID  27916034. 
  21. ^ Лакшмипати У, Тиагараджан Б (2011). Первичные и стволовые клетки: технологии и применение переноса генов (1-е изд.). Wiley-Blackwell. ISBN 978-0-470-61074-9.
  22. ^ Arnold AS, Laporte V, Dumont S, Appert-Collin A, Erbacher P, Coupin G, Levy R, Poindron P, Gies JP (февраль 2006 г.). «Сравнение реагентов для эффективной трансфекции первичных миобластов человека: FuGENE 6, Effectene и ExGen 500». Fundamental & Clinical Pharmacology . 20 (1): 81–9. doi :10.1111/j.1472-8206.2005.00344.x. PMID  16448398. S2CID  42585711.
  23. ^ Sapra, Rachit; Verma, Ram P.; Maurya, Govind P.; Dhawan, Sameer; Babu, Jisha; Haridas, V. (13 ноября 2019 г.). «Дизайнерские пептидные и белковые дендримеры: кросс-секционный анализ». Chemical Reviews . 119 (21): 11391–11441. doi :10.1021/acs.chemrev.9b00153. ISSN  0009-2665. PMID  31556597. S2CID  203435702.
  24. ^ Heitz, Marc; Javor, Sacha; Darbre, Tamis; Reymond, Jean-Louis (21 августа 2019 г.). «Стереоселективные пептидные дендримеры, чувствительные к pH, для трансфекции siRNA». Bioconjugate Chemistry . 30 (8): 2165–2182. doi :10.1021/acs.bioconjchem.9b00403. ISSN  1043-1802. PMID  31398014. S2CID  199519310.
  25. ^ Durocher Y, Perret S, Kamen A (январь 2002 г.). «Высокоуровневое и высокопроизводительное производство рекомбинантного белка путем транзиентной трансфекции выращиваемых в суспензии клеток человека 293-EBNA1». Nucleic Acids Research . 30 (2): 9e–9. doi :10.1093/nar/30.2.e9. PMC 99848. PMID  11788735 . 
  26. ^ Фанелли А (2016). "Наука создания стабильной клеточной линии" . Получено 23 декабря 2017 г.
  27. ^ Mawji IA, Marsden PA (июнь 2006 г.). «Трансфекция РНК — универсальный инструмент для исследования посттранскрипционной регуляции эндотелина-1». Experimental Biology and Medicine . 231 (6): 704–708. doi :10.3181/00379727-231-2310704 (неактивен 12 сентября 2024 г.). PMID  16740984.{{cite journal}}: CS1 maint: DOI неактивен по состоянию на сентябрь 2024 г. ( ссылка )
  28. ^ Herb M, Farid A, Gluschko A, Krönke M, Schramm M (ноябрь 2019 г.). «Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов с помощью транскрибированной in vitro мРНК». Journal of Visualized Experiments (153). doi : 10.3791/60143 . PMID  31762462.
  29. ^ Куни, Элизабет (1 декабря 2020 г.). «Как нанотехнологии помогают работать вакцинам мРНК Covid-19». Статистика . Получено 3 декабря 2020 г.
  30. ^ Фоли, Кэтрин Эллен (22 декабря 2020 г.). «Первые вакцины от COVID-19 навсегда изменили биотехнологии». Quartz . Quartz Media . Получено 11 января 2021 г. .
  31. ^ Tansey B (11 августа 2006 г.). «Лечение дегенерации желтого пятна влияет на сообщения РНК». San Francisco Chronicle.
  32. ^ Alexopoulou L, Holt AC, Medzhitov R, Flavell RA (2001). «Распознавание двухцепочечной РНК и активация NF-kappaB Toll-подобным рецептором 3». Nature . 413 (6857): 732–738. Bibcode :2001Natur.413..732A. doi :10.1038/35099560. PMID  11607032. S2CID  4346537.
  33. ^ Карико К, Ни Х, Каподичи Дж, Лампхье М, Вайсман Д (2004). «мРНК является эндогенным лигандом для Toll-подобного рецептора 3». J Biol Chem . 279 (13): 12542–12550. doi : 10.1074/jbc.M310175200 . PMID  14729660.
  34. ^ ab Карико К, Бакштейн М, Ни Х, Вайсман Д (2005). «Подавление распознавания РНК Toll-подобными рецепторами: влияние модификации нуклеозидов и эволюционное происхождение РНК». Иммунитет . 23 (2): 165–175. doi : 10.1016/j.immuni.2005.06.008 . PMID  16111635.
  35. ^ Diebold SS, Kaisho T, Hemmi H, Akira S, Reis e Sousa C (2004). «Врожденные противовирусные ответы посредством распознавания одноцепочечной РНК, опосредованного TLR7». Science . 303 (5663): 1529–1531. Bibcode :2004Sci...303.1529D. doi : 10.1126/science.1093616 . PMID  14976261. S2CID  33144196.
  36. ^ Yoneyama M, Kikuchi M, Natsukawa T, Shinobu N, Imaizumi T и др. (2004). «РНК-хеликаза RIG-I имеет существенную функцию в врожденных противовирусных реакциях, индуцированных двухцепочечной РНК». Nat Immunol . 5 (7): 730–737. doi :10.1038/ni1087. PMID  15208624. S2CID  34876422.
  37. ^ Das HK, Das A, Ghosh-Dastidar P, Ralston RO, Yaghmai B и др. (1981). «Синтез белка в ретикулоцитах кролика. Очистка и характеристика ингибитора синтеза белка, зависящего от двухцепочечной РНК, из лизатов ретикулоцитов». J Biol Chem . 256 (12): 6491–6495. doi : 10.1016/S0021-9258(19)69192-1 . PMID  7240221.
  38. ^ Левин ДХ, Петришин Р, Лондон ИМ (1981). «Характеристика очищенной двухцепочечной РНК-активированной альфа-киназы eIF-2 из ретикулоцитов кролика». J Biol Chem . 256 (14): 7638–7641. doi : 10.1016/S0021-9258(19)69008-3 . PMID  6265457.
  39. ^ Hornung V, Ellegast J, Kim S, Brzozka K, Jung A и др. (2006). «5'-трифосфатная РНК является лигандом для RIG-I». Science . 314 (5801): 994–997. Bibcode :2006Sci...314..964H. doi : 10.1126/science.1132505 . PMID  17038590. S2CID  22436759.
  40. ^ Сайто Т.; Оуэн Д.М.; Цзян Ф.; Маркотриджиано Дж.; Гейл М., младший (2008). «Врожденный иммунитет, индуцированный зависимым от состава распознаванием RIG-I РНК вируса гепатита С». Nature . 454 (7203): 523–527. Bibcode :2008Natur.454..523S. doi :10.1038/nature07106. PMC 2856441 . PMID  18548002. 
  41. ^ Takahasi K, Yoneyama M, Nishihori T, Hirai R, Kumeta H и др. (2008). «Механизм восприятия чужеродной РНК геликазой RIG-I и активация противовирусных иммунных ответов». Mol Cell . 29 (4): 428–440. doi : 10.1016/j.molcel.2007.11.028 . PMID  18242112.
  42. ^ Yoneyama M, Fujita T (2008). «Структурный механизм распознавания РНК рецепторами типа RIG-I». Иммунитет . 29 (2): 178–181. doi : 10.1016/j.immuni.2008.07.009 . PMID  18701081.
  43. ^ Schmidt A, Schwerd T, Hamm W, Hellmuth JC, Cui S и др. (2009). «5'-трифосфатной РНК требуются спаренные основания для активации противовирусной сигнализации через RIG-I». Proc Natl Acad Sci USA . 106 (29): 12067–12072. Bibcode : 2009PNAS..10612067S. doi : 10.1073/pnas.0900971106 . PMC 2705279. PMID  19574455 . 
  44. ^ Schlee M, Roth A, Hornung V, Hagmann CA, Wimmenauer V и др. (2009). «Распознавание 5'-трифосфата геликазой RIG-I требует короткой тупой двухцепочечной РНК, содержащейся в panhandle вируса с отрицательной цепью». Immunity . 31 (1): 25–34. doi :10.1016/j.immuni.2009.05.008. PMC 2824854 . PMID  19576794. 
  45. ^ ab Angel M, Yanik MF (2010). «Врожденное подавление иммунитета обеспечивает частую трансфекцию с помощью РНК, кодирующей репрограммирующие белки». PLOS ONE . 5 (7): e11756. Bibcode : 2010PLoSO...511756A. doi : 10.1371/journal.pone.0011756 . PMC 2909252. PMID  20668695 . 
  46. ^ Herb M, Farid A, Gluschko A, Krönke M, Schramm M (ноябрь 2019 г.). «Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов с помощью транскрибированной in vitro мРНК». Journal of Visualized Experiments (153). doi : 10.3791/60143 . PMID  31762462.
  47. ^ Trafton A (26 июля 2010 г.). «РНК предлагает более безопасный способ перепрограммирования клеток». MIT News Office.

Дальнейшее чтение

Внешние ссылки

У Scholia есть профиль для трансфекции (Q1429031).