stringtranslate.com

Морфолино

Сегмент гетеродуплекса морфолино-РНК, показан 8-мерный

Морфолино , также известный как олигомер морфолино и фосфородиамидатный олигомер морфолино ( PMO ), представляет собой тип молекулы олигомера (в просторечии олиго ), используемой в молекулярной биологии для модификации экспрессии генов . Его молекулярная структура содержит основания ДНК, прикрепленные к остову метиленморфолиновых колец, связанных через фосфородиамидатные группы. Морфолино блокируют доступ других молекул к небольшим (~25 оснований) специфическим последовательностям поверхностей спаривания оснований рибонуклеиновой кислоты (РНК). Морфолино используются в качестве исследовательских инструментов для обратной генетики , вызывая нарушение функции гена.

В этой статье рассматриваются только антисмысловые олигомеры морфолино, которые являются аналогами нуклеиновых кислот . Слово «морфолино» может встречаться в других химических названиях, ссылаясь на химические вещества, содержащие шестичленное морфолиновое кольцо. Чтобы избежать путаницы с другими морфолинсодержащими молекулами, при описании олиго «морфолино» часто пишут с заглавной буквы как торговое название , но такое использование не является единообразным в научной литературе. Морфолино-олиго иногда называют PMO (фосфородиамидат морфолино-олигомер), особенно в медицинской литературе. Vivo-морфолино и PPMO являются модифицированными формами морфолино с химическими группами, ковалентно присоединенными для облегчения проникновения в клетки.

Снижение экспрессии гена достигается путем снижения экспрессии определенного гена в клетке. В случае генов, кодирующих белок, это обычно приводит к снижению количества соответствующего белка в клетке. Снижение экспрессии гена является методом изучения функции определенного белка; аналогичным образом, заставляя определенный экзон быть сплайсингованным из транскрипта РНК, кодирующего белок, может помочь определить функцию белковой части, кодируемой этим экзоном, или иногда может полностью снизить активность белка. Эти молекулы были применены в исследованиях на нескольких модельных организмах , включая мышей , данио-рерио , лягушек и морских ежей . [1] Морфолино также могут изменять сплайсинг пре-мРНК [ 2] или ингибировать созревание и активность микроРНК. [3] Методы нацеливания морфолино на РНК и доставки морфолино в клетки недавно были рассмотрены в журнальной статье [4] и в форме книги. [5]

Морфолино находятся в разработке в качестве фармацевтических терапевтических средств, нацеленных на патогенные организмы, такие как бактерии [6] или вирусы [7] и генетические заболевания . [8] Препарат на основе морфолино этеплирсен от Sarepta Therapeutics получил ускоренное одобрение от Управления по контролю за продуктами и лекарствами США в сентябре 2016 года для лечения некоторых мутаций, вызывающих мышечную дистрофию Дюшенна , [9] хотя процесс одобрения был охвачен спорами. Другие препараты на основе морфолино голодирсен , вилтоларсен и казимерсен (также для мышечной дистрофии Дюшенна) были одобрены FDA в 2019–2021 годах. [10] [11] [12]

История

Морфолино-олигонуклеотиды были задуманы Саммертоном ( Gene Tools ) в AntiVirals Inc. (теперь Sarepta Therapeutics) и первоначально разрабатывались в сотрудничестве с Уэллером. [13]

Структура

Морфолино — это синтетические молекулы , которые являются продуктом перепроектирования структуры природной нуклеиновой кислоты . [14] Обычно длиной 25 оснований, они связываются с комплементарными последовательностями РНК или одноцепочечной ДНК с помощью стандартного спаривания оснований нуклеиновой кислоты . С точки зрения структуры, разница между морфолино и ДНК заключается в том, что, хотя морфолино имеют стандартные основания нуклеиновой кислоты, эти основания связаны с метиленморфолиновыми кольцами , связанными через фосфородиамидатные группы вместо фосфатов . [14] На рисунке сравниваются структуры двух изображенных там нитей, одной из РНК и другой из морфолино. Замена анионных фосфатов незаряженными фосфородиамидатными группами устраняет ионизацию в обычном физиологическом диапазоне pH , поэтому морфолино в организмах или клетках являются незаряженными молекулами. Весь остов морфолино состоит из этих модифицированных субъединиц.

Функция

Морфолино не запускают деградацию своих целевых молекул РНК, в отличие от многих антисмысловых структурных типов (например, фосфоротиоатов , siRNA ). Вместо этого морфолино действуют путем «стерического блокирования», связываясь с целевой последовательностью внутри РНК, ингибируя молекулы, которые в противном случае могли бы взаимодействовать с РНК. [15] Олигоморфолино часто используются для исследования роли специфического транскрипта мРНК в эмбрионе . Биологи развития вводят олигоморфолино в яйца или эмбрионы данио-рерио , [16] африканской когтистой лягушки ( Xenopus ), [17] морского ежа [18] и киллифиша ( F. heteroclitus ), производя эмбрионы -морфанты , или электропорируют морфолино в эмбрионы цыплят [19] на более поздних стадиях развития. При наличии соответствующих цитозольных систем доставки морфолино эффективны в клеточной культуре . [20] [21] Vivo-морфолины, в которых олигонуклеотид ковалентно связан с дендримером доставки , проникают в клетки при системном введении взрослым животным или в тканевые культуры. [22]

Нормальная экспрессия генов у эукариот

Экспрессия эукариотических генов без вмешательства Морфолино

В эукариотических организмах пре-мРНК транскрибируется в ядре, интроны вырезаются , затем зрелая мРНК экспортируется из ядра в цитоплазму . Малая субъединица рибосомы обычно начинает связываться с 5'-концом мРНК и присоединяется там различными другими эукариотическими факторами инициации , образуя комплекс инициации . Комплекс инициации сканирует вдоль цепи мРНК, пока не достигнет стартового кодона , а затем большая субъединица рибосомы присоединяется к малой субъединице, и начинается трансляция белка . Весь этот процесс называется экспрессией гена; это процесс, посредством которого информация в гене , закодированная в виде последовательности оснований в ДНК , преобразуется в структуру белка . Морфолино может модифицировать сплайсинг, блокировать трансляцию или блокировать другие функциональные сайты на РНК в зависимости от последовательности оснований морфолино.

Блокировка перевода

Перевод заблокирован олигонуклеотидом Морфолино

Связанные с 5'-нетранслируемой областью информационной РНК (мРНК), морфолино могут мешать прогрессированию рибосомального инициирующего комплекса от 5'-кэпа до стартового кодона. Это предотвращает трансляцию кодирующей области целевого транскрипта (называемого « выключением » экспрессии гена ). Это полезно экспериментально, когда исследователь хочет узнать функцию конкретного белка; морфолино предоставляют удобный способ выключения экспрессии белка и изучения того, как это выключение изменяет клетки или организм. Некоторые морфолино так эффективно выключают экспрессию, что после деградации уже существующих белков целевые белки становятся необнаружимыми с помощью вестерн-блоттинга .

В 2016 году было обнаружено, что синтетический пептид-конъюгированный PMO (PPMO) подавляет экспрессию металло-бета-лактамазы Нью-Дели , фермента, который многие бактерии, устойчивые к лекарственным препаратам, используют для разрушения карбапенемов. [23] [24]

Изменение сплайсинга пре-мРНК

Сплайсинг заблокирован олигонуклеотидом Морфолино

Морфолино могут вмешиваться в этапы обработки пре-мРНК либо путем предотвращения связывания комплексов малых ядерных рибонуклеопротеинов ( мяРНП ) , направляющих сплайсинг , с их мишенями на границах интронов на нити пре-мРНК, либо путем блокирования нуклеофильного основания аденина и предотвращения его образования структуры лариата сплайсинга, либо путем вмешательства в связывание регуляторных белков сплайсинга, таких как сайленсеры сплайсинга [25] и усилители сплайсинга . [26] Предотвращение связывания мяРНП U1 (в донорском сайте) или U2 / U5 (в полипиримидиновом фрагменте и акцепторном сайте) может вызвать измененный сплайсинг , обычно исключающий экзоны из зрелой мРНК. Нацеливание на некоторые цели сплайсинга приводит к включениям интронов, в то время как активация скрытых сайтов сплайсинга может привести к частичным включениям или исключениям. [27] Цели U11 / U12 snRNP также могут быть заблокированы. [28] Модификацию сплайсинга можно легко проанализировать с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой ( ОТ-ПЦР ) и увидеть ее как сдвиг полосы после гель-электрофореза продуктов ОТ-ПЦР. [2]

Другие применения: блокирование других участков мРНК и использование в качестве зондов.

Морфолино использовались для блокирования активности микроРНК [29] [30] и созревания. [3] Флуоресцеин -меченые морфолино в сочетании с флуоресцеин-специфическими антителами могут использоваться в качестве зондов для гибридизации in situ с микроРНК. [31] Морфолино могут блокировать активность рибозима . [32] Функции U2 и U12 snRNP были ингибированы морфолино. [33] Морфолино, нацеленные на «скользкие» последовательности мРНК в кодирующих белка областях, могут вызывать сдвиги рамки трансляции . [34] Морфолино могут блокировать редактирование РНК, [35] поли(А)-хвост [36] и транслокационные последовательности. [37] Активность морфолино против этого разнообразия целей предполагает, что морфолино можно использовать в качестве универсального инструмента для блокирования взаимодействий белков или нуклеиновых кислот с мРНК.

Специфичность, стабильность и неантисмысловые эффекты

Морфолино стали стандартным инструментом нокдауна в эмбриональных системах животных, которые имеют более широкий диапазон экспрессии генов, чем взрослые клетки , и могут быть сильно затронуты нецелевым взаимодействием. После первоначальных инъекций в эмбрионы лягушек или рыб на одноклеточной или малоклеточной стадии эффекты морфолино можно измерить до пяти дней спустя, [38] после того, как большинство процессов органогенеза и дифференциации уже позади, с наблюдаемыми фенотипами, соответствующими нокдауну целевого гена. Контрольные олигонуклеотиды с нерелевантными последовательностями обычно не вызывают никаких изменений в эмбриональном фенотипе, что свидетельствует о специфичности последовательности олигонуклеотида морфолино и отсутствии неантисмысловых эффектов. Дозу, необходимую для нокдауна, можно уменьшить путем совместной инъекции нескольких олигонуклеотидов морфолино, нацеленных на одну и ту же мРНК, что является эффективной стратегией для снижения или устранения зависимых от дозы нецелевых взаимодействий РНК. [39]

Эксперименты по спасению мРНК иногда могут восстановить фенотип дикого типа у эмбрионов и предоставить доказательства специфичности морфолино. При спасении мРНК морфолино совместно вводят с мРНК, которая кодирует белок морфолино. Однако спасательная мРНК имеет модифицированную 5'-UTR (нетранслируемую область), так что спасательная мРНК не содержит мишени для морфолино. Кодирующая область спасательной мРНК кодирует интересующий белок. Трансляция спасательной мРНК заменяет выработку белка, который был подавлен морфолино. Поскольку спасательная мРНК не повлияет на фенотипические изменения из-за модуляции экспрессии генов вне целевого участка морфолино, этот возврат к фенотипу дикого типа является еще одним доказательством специфичности морфолино. [38] В некоторых случаях эктопическая экспрессия спасательной РНК делает восстановление фенотипа дикого типа невозможным.

В эмбрионах морфолино можно тестировать в нулевых мутантах для проверки неожиданных взаимодействий РНК, а затем использовать в эмбрионе дикого типа для выявления острого фенотипа нокдауна. Фенотип нокдауна часто более экстремальный, чем фенотип мутанта; в мутанте эффекты потери нулевого гена могут быть скрыты генетической компенсацией. [40]

Из-за их совершенно неестественных остовов, Морфолино не распознаются клеточными белками. Нуклеазы не разрушают Морфолино, [41] и они не разрушаются в сыворотке или в клетках. [42]

До 18% морфолино, по-видимому, вызывают нецелевые фенотипы, включая гибель клеток в центральной нервной системе и сомитных тканях эмбрионов данио-рерио. [43] Большинство этих эффектов обусловлены активацией апоптоза, опосредованного p53 , и могут быть подавлены совместной инъекцией анти-p53 морфолино вместе с экспериментальным морфолино. Более того, опосредованный p53 апоптотический эффект нокдауна морфолино был фенокопирован с использованием другого антисмыслового структурного типа, показывающего, что опосредованный p53 апоптоз является следствием потери целевого белка, а не следствием нокдауна олиготипа. [44] Похоже, что эти эффекты являются специфичными для последовательности; как и в большинстве случаев, если морфолино связано с нецелевыми эффектами, 4-основное несоответствие морфолино не вызовет этих эффектов.

Причиной беспокойства при использовании морфолино является потенциал для «внецелевых» эффектов. Является ли наблюдаемый фенотип морфанта следствием предполагаемого нокдауна или взаимодействия с нецелевой РНК, часто можно решить на эмбрионах, проведя другой эксперимент, чтобы подтвердить, что наблюдаемый фенотип морфанта является результатом нокдауна ожидаемой цели. Это можно сделать, повторив фенотип морфанта со вторым, неперекрывающимся морфолино, нацеленным на ту же мРНК, [38] путем подтверждения наблюдаемых фенотипов путем сравнения с мутантным штаммом (хотя компенсация скроет фенотип у некоторых мутантов), путем тестирования морфолино на нулевом мутантном фоне для обнаружения дополнительных фенотипических изменений или с помощью доминантно-негативных методов. Как упоминалось выше, спасение наблюдаемых фенотипов путем коинъекции спасательной мРНК является, когда это осуществимо, надежным тестом специфичности морфолино. [38] [40]

Доставка

Чтобы морфолино было эффективным, его необходимо доставить через клеточную мембрану в цитозоль клетки. Попав в цитозоль, морфолино свободно диффундируют между цитозолем и ядром, о чем свидетельствует ядерная сплайсинг-модифицирующая активность морфолино, наблюдаемая после микроинъекции в цитозоль клеток. Для доставки в эмбрионы, в культивируемые клетки или во взрослых животных используются различные методы. Для доставки в эмбрион обычно используется аппарат для микроинъекций , причем инъекции чаще всего выполняются на стадии одной клетки или нескольких клеток; [45] альтернативным методом эмбриональной доставки является электропорация , которая может доставлять олигонуклеотиды в ткани на более поздних эмбриональных стадиях. [46] Обычные методы доставки в культивируемые клетки включают пептид Эндо-Портера (который заставляет морфолино высвобождаться из эндосом ), [21] Специальную систему доставки (больше не доступна для приобретения, использовала гетеродуплекс морфолино-ДНК и этоксилированный полиэтилениминовый реагент доставки), [20] электропорацию, [47] или загрузку соскобом. [48]

Доставка во взрослые ткани обычно затруднена, хотя существует несколько систем, позволяющих эффективно поглощать немодифицированные олигоморфолино (включая поглощение мышечными клетками при мышечной дистрофии Дюшенна [49] или эндотелиальными клетками сосудов, подвергающимися стрессу во время баллонной ангиопластики [50] ). Хотя они эффективно проникают через межклеточные пространства в тканях, неконъюгированные PMO имеют ограниченное распространение в цитозольных и ядерных пространствах в здоровых тканях после внутривенного введения. Системная доставка во многие клетки во взрослых организмах может быть достигнута с помощью ковалентных конъюгатов олигоморфолино с проникающими в клетки пептидами , и, хотя токсичность была связана с умеренными дозами пептидных конъюгатов, [51] [52] они использовались in vivo для эффективной доставки олиго в дозах ниже тех, которые вызывают наблюдаемую токсичность. [7] [53] Октагуанидиновый дендример, прикрепленный к концу морфолино, может доставлять модифицированный олиго (называемый Vivo-морфолино) из крови в цитозоль. [22] [54] Морфолино с возможностью доставки, такие как пептидные конъюгаты и Vivo-морфолино, показывают перспективность в качестве терапевтических средств для вирусных и генетических заболеваний. [55]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Heasman J (март 2002 г.). «Морфолино-олигонуклеотиды: придание смысла антисмысловым?». Developmental Biology . 243 (2): 209–14. doi : 10.1006/dbio.2001.0565 . PMID  11884031.
  2. ^ ab Draper BW, Morcos PA, Kimmel CB (июль 2001 г.). «Ингибирование сплайсинга пре-мРНК fgf8 данио-рерио с помощью морфолино-олигонуклеотидов: количественный метод подавления генов». Genesis . 30 (3): 154–6. doi : 10.1002/gene.1053 . PMID  11477696.
  3. ^ ab Kloosterman WP, Lagendijk AK, Ketting RF, Moulton JD, Plasterk RH (август 2007 г.). «Целенаправленное ингибирование созревания miRNA с помощью морфолино выявляет роль miR-375 в развитии островков поджелудочной железы». PLOS Biology . 5 (8): e203. doi : 10.1371/journal.pbio.0050203 . PMC 1925136 . PMID  17676975. (В настоящее время в этой статье выражена обеспокоенность , см. doi :10.1371/journal.pbio.3001631, PMID  35486652. Если это преднамеренная ссылка на такую ​​статью, замените на . ){{expression of concern|...}}{{expression of concern|...|intentional=yes}}
  4. ^ Moulton JD (2016). «Руководство для пользователей морфолино: на пути к терапии» (PDF) . J Drug Discov Develop and Deliv . 3 (2): 1023.
  5. ^ Moulton HM, Moulton JD, ред. (2017). Морфолино-олигомеры . Методы в молекулярной биологии. Т. 1565. Humana Press (Springer). стр. 284. doi :10.1007/978-1-4939-6817-6. ISBN 978-1-4939-6815-2. S2CID  28338321.
  6. ^ Geller BL (апрель 2005 г.). «Антибактериальные антисмысловые». Current Opinion in Molecular Therapeutics . 7 (2): 109–13. PMID  15844617.
  7. ^ ab Deas TS, Bennett CJ, Jones SA, Tilgner M, Ren P, Behr MJ, Stein DA, Iversen PL, Kramer LD, Bernard KA, Shi PY (июль 2007 г.). «Выбор устойчивости in vitro и эффективность морфолиноолигомеров против вируса Западного Нила in vivo». Antimicrobial Agents and Chemotherapy . 51 (7): 2470–82. doi :10.1128/AAC.00069-07. PMC 1913242 . PMID  17485503. 
  8. ^ McClorey G, Fall AM, Moulton HM, Iversen PL, Rasko JE, Ryan M, Fletcher S, Wilton SD (октябрь 2006 г.). «Индуцированный пропуск экзона дистрофина в эксплантатах человеческих мышц». Neuromuscular Disorders . 16 (9–10): 583–90. doi :10.1016/j.nmd.2006.05.017. PMID  16919955. S2CID  21338534.
  9. ^ "Пресс-объявления - FDA выдает ускоренное одобрение первому препарату для лечения мышечной дистрофии Дюшенна". Управление по контролю за продуктами и лекарствами . 2019-09-10.
  10. ^ Комиссар, Офис (2019-12-12). "FDA предоставляет ускоренное одобрение первому целевому лечению редкой мутации мышечной дистрофии Дюшенна". FDA . Получено 2019-12-14 .
  11. ^ Рошми, Р. Р.; Йокота, Т. (октябрь 2019 г.). «Вилтоларсен для лечения мышечной дистрофии Дюшенна». Drugs of Today . 55 (10): 627–639. doi :10.1358/dot.2019.55.10.3045038. ISSN  1699-3993. PMID  31720560. S2CID  207935659.
  12. ^ Ширли, Мэтт (май 2021 г.). «Казимерсен: Первое одобрение». Drugs . 81 (7): 875–879. doi :10.1007/s40265-021-01512-2. ISSN  1179-1950. PMID  33861387. S2CID  233248050.
  13. ^ Summerton JE (2017). «Изобретение и ранняя история морфолино: от несбыточной мечты до практических продуктов». Олигомеры морфолино . Методы в молекулярной биологии. Том 1565. Humana Press (Springer). стр. 1–15. doi : 10.1007/978-1-4939-6817-6_1. ISBN 978-1-4939-6817-6. PMID  28364229.
  14. ^ ab Summerton J, Weller D (июнь 1997 г.). "Морфолино антисмысловые олигомеры: дизайн, приготовление и свойства". Antisense & Nucleic Acid Drug Development . 7 (3): 187–95. doi :10.1089/oli.1.1997.7.187. PMID  9212909. S2CID  19372403.
  15. ^ Summerton J (декабрь 1999 г.). «Морфолино-антисмысловые олигомеры: случай структурного типа, независимого от РНКазы H». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Структура и экспрессия генов . 1489 (1): 141–58. doi :10.1016/S0167-4781(99)00150-5. PMID  10807004.
  16. ^ Насевичус А., Эккер СК. (октябрь 2000 г.). «Эффективный целевой ген «нокдаун» у данио-рерио». Nature Genetics . 26 (2): 216–20. doi :10.1038/79951. PMID  11017081. S2CID  21451111.
  17. ^ Хеасман Дж., Кофрон М., Уайли К. (июнь 2000 г.). «Сигнальная активность бета-катенина, выявленная в раннем эмбрионе Xenopus: новый антисмысловой подход». Developmental Biology . 222 (1): 124–34. doi : 10.1006/dbio.2000.9720 . PMID  10885751.
  18. ^ Howard EW, Newman LA, Oleksyn DW, Angerer RC, Angerer LM (февраль 2001 г.). "SpKrl: прямая цель регуляции бета-катенина, необходимая для дифференциации эндодермы у эмбрионов морских ежей". Development . 128 (3): 365–75. doi :10.1242/dev.128.3.365. PMID  11152635.
  19. ^ Kos R, Reedy MV, Johnson RL, Erickson CA (апрель 2001 г.). «Транскрипционный фактор крылатой спирали FoxD3 важен для установления линии нервного гребня и подавления меланогенеза у эмбрионов птиц». Development . 128 (8): 1467–79. doi :10.1242/dev.128.8.1467. PMID  11262245.
  20. ^ ab Morcos PA (июль 2001 г.). «Достижение эффективной доставки морфолино-олигонуклеотидов в культивируемые клетки». Genesis . 30 (3): 94–102. doi :10.1002/gene.1039. PMID  11477682.
  21. ^ ab Summerton JE (ноябрь 2005 г.). «Эндо-Портер: новый реагент для безопасной и эффективной доставки веществ в клетки». Анналы Нью-Йоркской академии наук . 1058 (1): 62–75. Bibcode : 2005NYASA1058...62S. doi : 10.1196/annals.1359.012. PMID  16394126. S2CID  28590429.
  22. ^ ab Morcos PA, Li Y, Jiang S (декабрь 2008 г.). «Vivo-Morpholinos: непептидный транспортер доставляет Morpholinos в широкий спектр тканей мыши». BioTechniques . 45 (6): 613–4, 616, 618 passim. doi : 10.2144/000113005 . PMID  19238792.
  23. ^ "Новая молекула отключает иммунитет супербактерий к антибиотикам". newatlas.com . 2017-01-20 . Получено 25-01-2017 .
  24. ^ Салли ЕК, Геллер BL, Ли Л, Муди CM, Бейли SM, Мур AL, Вонг М, Нордманн П, Дейли SM, Стердж CR, Гринберг DE (март 2017 г.). «Пептид-конъюгированный фосфородиамидат морфолино олигомер (PPMO) восстанавливает восприимчивость к карбапенемам у NDM-1-положительных патогенов in vitro и in vivo». Журнал антимикробной химиотерапии . 72 (3): 782–790. doi :10.1093/jac/dkw476. PMC 5890718. PMID  27999041 . 
  25. ^ Bruno IG, Jin W, Cote GJ (октябрь 2004 г.). «Исправление аберрантного альтернативного сплайсинга РНК FGFR1 путем нацеливания на интронные регуляторные элементы». Human Molecular Genetics . 13 (20): 2409–20. doi : 10.1093/hmg/ddh272 . PMID  15333583.
  26. ^ Ветрини Ф, Таммаро Р, Бонданса С, Сурасе Э.М., Ауриккио А, Де Лука М, Баллабио А, Мариго В (май 2006 г.). «Аберрантный сплайсинг в гене глазного альбинизма типа 1 (OA1/GPR143) корректируется in vitro с помощью морфолино-антисмысловых олигонуклеотидов». Человеческая мутация . 27 (5): 420–6. дои : 10.1002/humu.20303 . PMID  16550551. S2CID  21092974.
  27. ^ Morcos PA (июнь 2007 г.). «Достижение целенаправленного и количественно определяемого изменения сплайсинга мРНК с помощью олигонуклеотидов морфолино». Biochemical and Biophysical Research Communications . 358 (2): 521–7. doi :10.1016/j.bbrc.2007.04.172. PMID  17493584.
  28. ^ König H, Matter N, Bader R, Thiele W, Müller F (ноябрь 2007 г.). «Сегрегация сплайсинга: малая сплайсосома действует вне ядра и контролирует пролиферацию клеток». Cell . 131 (4): 718–29. doi : 10.1016/j.cell.2007.09.043 . PMID  18022366.
  29. ^ Kloosterman WP, Wienholds E, Ketting RF, Plasterk RH (2004). «Требования к субстрату для функции let-7 в развивающемся эмбрионе данио-рерио». Nucleic Acids Research . 32 (21): 6284–91. doi :10.1093/nar/gkh968. PMC 535676. PMID 15585662  . 
  30. ^ Flynt AS, Li N, Thatcher EJ, Solnica-Krezel L, Patton JG (февраль 2007 г.). «Zebrafish miR-214 модулирует сигнализацию Hedgehog, чтобы определить судьбу мышечных клеток». Nature Genetics . 39 (2): 259–63. doi :10.1038/ng1953. PMC 3982799 . PMID  17220889. 
  31. ^ Lagendijk AK, Moulton JD, Bakkers J (июнь 2012 г.). «Раскрытие деталей: протокол гибридизации in situ целых образцов микроРНК для эмбрионов данио-рерио и тканей взрослых животных». Biology Open . 1 (6): 566–9. doi :10.1242/bio.2012810. PMC 3509442. PMID 23213449  . 
  32. ^ Yen L, Svendsen J, Lee JS, Gray JT, Magnier M, Baba T, D'Amato RJ, Mulligan RC (сентябрь 2004 г.). «Экзогенный контроль экспрессии генов млекопитающих посредством модуляции саморасщепления РНК». Nature . 431 (7007): 471–6. Bibcode :2004Natur.431..471Y. doi :10.1038/nature02844. PMID  15386015. S2CID  4425795.
  33. ^ Matter N, König H (февраль 2005 г.). «Целевое „нокдаун“ функции сплайсосомы в клетках млекопитающих». Nucleic Acids Research . 33 (4): e41. doi :10.1093/nar/gni041. PMC 549580. PMID  15731334 . 
  34. ^ Howard MT, Gesteland RF, Atkins JF (октябрь 2004 г.). «Эффективная стимуляция сайт-специфического сдвига рамки рибосомы антисмысловыми олигонуклеотидами». РНК . 10 (10): 1653–61. doi :10.1261/rna.7810204. PMC 1370650 . PMID  15383681. 
  35. ^ Penn AC, Balik A, Greger IH (январь 2013 г.). «Стерическое антисмысловое ингибирование редактирования Q/R рецептора AMPA обнаруживает тесную связь с сайтами редактирования интронов и сплайсингом». Nucleic Acids Research . 41 (2): 1113–23. doi :10.1093/nar/gks1044. PMC 3553965. PMID  23172291 . 
  36. ^ Vorlová S, Rocco G, Lefave CV, Jodelka FM, Hess K, Hastings ML, Henke E, Cartegni L (сентябрь 2011 г.). «Индукция антагонистических растворимых рецепторных тирозиновых киназ с помощью активации интронного полиА». Molecular Cell . 43 (6): 927–39. doi :10.1016/j.molcel.2011.08.009. PMC 3781938 . PMID  21925381. 
  37. ^ Артур ПК, Клауссен М, Кох С, Тарбашевич К, Ян О, Пилер Т (июль 2009). «Участие белков типа Elr Xenopus в локализации растительной мРНК во время оогенеза». Журнал биологической химии . 284 (30): 19982–92. doi : 10.1074/jbc.M109.009928 . PMC 2740424. PMID  19458392 . 
  38. ^ abcd Bill BR, Petzold AM, Clark KJ, Schimmenti LA, Ekker SC (март 2009). «Праймер для использования морфолино у данио-рерио». Zebrafish . 6 (1): 69–77. doi :10.1089/zeb.2008.0555. PMC 2776066 . PMID  19374550. 
  39. ^ Kamachi Y, Okuda Y, Kondoh H (январь 2008 г.). «Количественная оценка эффективности нокдауна морфолино-антисмысловых олигонуклеотидов в эмбрионах зебровой рыбы с использованием анализа люциферазы». Genesis . 46 (1): 1–7. doi :10.1002/dvg.20361. PMID  18196596.
  40. ^ ab Stainier DY, Raz E, Lawson ND, Ekker SC, Burdine RD, Eisen JS, Ingham PW, Schulte-Merker S, Yelon D, Weinstein BM, Mullins MC, Wilson SW, Ramakrishnan L, Amacher SL, Neuhauss SC, Meng A, Mochizuki N, Panula P, Moens CB (октябрь 2017 г.). "Руководство по использованию морфолино у данио-рерио". PLOS Genetics . 13 (10): e1007000. doi : 10.1371/journal.pgen.1007000 . PMC 5648102. PMID  29049395 . 
  41. ^ Hudziak RM, Barofsky E, Barofsky DF, Weller DL, Huang SB, Weller DD (1996). «Устойчивость олигомеров морфолинофосфодиамидата к ферментативной деградации». Antisense & Nucleic Acid Drug Development . 6 (4): 267–72. doi :10.1089/oli.1.1996.6.267. PMID  9012862.
  42. ^ Youngblood DS, Hatlevig SA, Hassinger JN, Iversen PL, Moulton HM (2007). «Стабильность конъюгатов олигомеров пептид-морфолино, проникающих в клетки, в сыворотке человека и в клетках». Bioconjugate Chemistry . 18 (1): 50–60. doi :10.1021/bc060138s. PMID  17226957.
  43. ^ Ekker SC, Larson JD (июль 2001 г.). «Морфантовая технология в системах модельного развития». Genesis . 30 (3): 89–93. doi : 10.1002/gene.1038 . PMID  11477681.
  44. ^ Robu ME, Larson JD, Nasevicius A, Beiraghi S, Brenner C, Farber SA, Ekker SC (май 2007 г.). "активация p53 с помощью технологий нокдауна". PLOS Genetics . 3 (5): e78. doi : 10.1371/journal.pgen.0030078 . PMC 1877875. PMID  17530925 . 
  45. ^ Rosen JN, Sweeney MF, Mably JD (март 2009). «Микроинъекция эмбрионов данио-рерио для анализа функции гена». Journal of Visualized Experiments . 9 (25). doi :10.3791/1115. PMC 2762901. PMID 19274045  . 
  46. ^ Cerda GA, Thomas JE, Allende ML, Karlstrom RO, Palma V (июль 2006 г.). «Электропорация ДНК, РНК и морфолино в эмбрионы данио-рерио». Методы . 39 (3): 207–11. doi :10.1016/j.ymeth.2005.12.009. hdl : 10533/178089 . PMID  16837210.
  47. ^ Jubin R (2004). «Оптимизация условий электропорации для внутриклеточной доставки антисмысловых олигонуклеотидов морфолино, направленных против внутреннего сайта входа рибосомы вируса гепатита С». Antisense Therapeutics . Т. 106. С. 309–22. doi :10.1385/1-59259-854-4:309. ISBN 978-1-59259-854-0. PMID  15375324. {{cite book}}: |journal=проигнорировано ( помощь )
  48. ^ Партридж М., Винсент А., Мэтьюз П., Пума Дж., Стайн Д., Саммертон Дж. (1996). «Простой метод доставки морфолино антисмысловых олигонуклеотидов в цитоплазму клеток». Разработка антисмысловых и нуклеиновых препаратов . 6 (3): 169–75. doi :10.1089/oli.1.1996.6.169. PMID  8915501. S2CID  8161222.
  49. ^ Fletcher S, Honeyman K, Fall AM, Harding PL, Johnsen RD, Wilton SD (февраль 2006 г.). «Экспрессия дистрофина у мышей mdx после локализованного и системного введения морфолино-антисмыслового олигонуклеотида». Журнал генной медицины . 8 (2): 207–16. doi :10.1002/jgm.838. PMID  16285002. S2CID  42463260.
  50. ^ Kipshidze NN, Kim HS, Iversen P, Yazdi HA, Bhargava B, New G, Mehran R, Tio F, Haudenschild C, Dangas G, Stone GW, Iyer S, Roubin GS, Leon MB, Moses JW (май 2002 г.). «Внутрикоронарный способ доставки усовершенствованных антисмысловых олигонуклеотидов снижает образование неоинтимы в модели рестеноза свиного стента». Журнал Американского колледжа кардиологии . 39 (10): 1686–91. doi : 10.1016/S0735-1097(02)01830-2 . PMID  12020498.
  51. ^ Abes S, Moulton HM, Clair P, Prevot P, Youngblood DS, Wu RP, Iversen PL, Lebleu B (декабрь 2006 г.). «Векторизация морфолино-олигомеров пептидом (R-Ahx-R)4 позволяет эффективно корректировать сплайсинг в отсутствие эндосомолитических агентов». Journal of Controlled Release . 116 (3): 304–13. doi :10.1016/j.jconrel.2006.09.011. PMID  17097177.
  52. ^ Беррер Р., Нойман Б.В., Тинг Дж.П., Штейн Д.А., Моултон Х.М., Иверсен П.Л., Кун П., Бухмайер М.Дж. (июнь 2007 г.). «Противовирусные эффекты антисмысловых морфолиноолигомеров на моделях мышиной коронавирусной инфекции». Журнал вирусологии . 81 (11): 5637–48. дои : 10.1128/JVI.02360-06. ПМК 1900280 . ПМИД  17344287. 
  53. ^ Amantana A, Moulton HM, Cate ML, Reddy MT, Whitehead T, Hassinger JN, Youngblood DS, Iversen PL (2007). «Фармакокинетика, биораспределение, стабильность и токсичность конъюгата пептид-морфолино олигомера, проникающего в клетки». Bioconjugate Chemistry . 18 (4): 1325–31. doi :10.1021/bc070060v. PMID  17583927.
  54. ^ Li YF, Morcos PA (июль 2008 г.). «Проектирование и синтез дендритного молекулярного транспортера, обеспечивающего эффективную доставку in vivo морфолино антисмыслового олиго». Bioconjugate Chemistry . 19 (7): 1464–70. doi :10.1021/bc8001437. PMID  18564870.
  55. ^ Moulton JD, Jiang S (март 2009). «Выключение генов у взрослых животных: PPMO и vivo-морфолины». Molecules . 14 (3): 1304–23. doi : 10.3390/molecules14031304 . PMC 6253989 . PMID  19325525. 

Дальнейшее чтение