stringtranslate.com

Сиртуин 1

Сиртуин 1 , также известный как НАД -зависимая деацетилаза сиртуин-1 , представляет собой белок , который у людей кодируется геном SIRT1 . [5] [6] [7]

SIRT1 означает сиртуин (гомолог информации о регуляции типа молчаливого спаривания 2) 1 ( S. cerevisiae ) , ссылаясь на тот факт, что его гомолог сиртуина (биологический эквивалент у разных видов) в дрожжах ( Saccharomyces cerevisiae ) — это Sir2. SIRT1 — это фермент, расположенный в основном в ядре клетки , который деацетилирует факторы транскрипции , которые способствуют клеточной регуляции (реакция на стрессоры, долголетие). [8] [9]

Функция

Сиртуин 1 является членом семейства белков сиртуинов, гомологов гена Sir2 в S. cerevisiae . Члены семейства сиртуинов характеризуются доменом ядра сиртуина и сгруппированы в четыре класса. Функции человеческих сиртуинов еще не определены; однако известно, что дрожжевые сиртуиновые белки регулируют эпигенетическое подавление генов и подавляют рекомбинацию рДНК. Белок, кодируемый этим геном, входит в класс I семейства сиртуинов. [6]

Сиртуин 1 подавляется в клетках с высокой резистентностью к инсулину . [10] Кроме того, было показано, что SIRT1 деацетилирует и влияет на активность обоих членов комплекса PGC1-альфа / ERR-альфа , которые являются важными факторами регуляции транскрипции метаболизма. [11] [12]

Было показано, что in vitro SIRT1 деацетилирует и тем самым дезактивирует белок p53 [13] и может играть роль в активации клеток T-хелперов 17 [14] .

Селективные лиганды

Активаторы

Хотя ни ресвератрол, ни SRT1720 напрямую не активируют SIRT1, ресвератрол и, вероятно, SRT1720 косвенно активируют SIRT1 путем активации AMP-активируемой протеинкиназы (AMPK), [25] что повышает уровень NAD+ (который является кофактором, необходимым для активности SIRT1). [26] [27] Повышение уровня NAD+ является более прямым и надежным способом активации SIRT1. [27]

Взаимодействия

Было показано, что сиртуин 1 in vitro взаимодействует с ERR-альфа [11] и AIRE . [28]

В интерактомных исследованиях было отмечено 136 прямых взаимодействий человеческого Sirt1, участвующих в многочисленных процессах. [29]

Дрожжевой гомолог

Sir2 ( гомолог которого у млекопитающих известен как SIRT1 ) был первым из генов сиртуинов , который был обнаружен. Он был обнаружен в почкующихся дрожжах , и с тех пор члены этого высококонсервативного семейства были обнаружены почти во всех изученных организмах. [30] Предполагается, что сиртуины играют ключевую роль в реакции организма на стрессы (такие как жара или голод) и отвечают за эффекты ограничения калорийности , увеличивающие продолжительность жизни . [31] [32]

Трехбуквенный символ гена дрожжей Sir означает Silent Information Regulator , а цифра 2 отражает тот факт, что это был второй обнаруженный и охарактеризованный ген SIR. [ 33] [34]

У круглого червя Caenorhabditis elegans Sir-2.1 используется для обозначения продукта гена, наиболее похожего по структуре и активности на Sir2 дрожжей. [35] [36]

Метод действия и наблюдаемые эффекты

Сиртуины действуют в первую очередь путем удаления ацетильных групп из остатков лизина в белках в присутствии NAD + ; таким образом, они классифицируются как «NAD + -зависимые деацетилазы» и имеют номер EC 3.5.1. [37] Они добавляют ацетильную группу из белка к компоненту АДФ-рибозы NAD + для образования O-ацетил-АДФ-рибозы. HDAC-активность Sir2 приводит к более плотной упаковке хроматина и снижению транскрипции в целевом локусе гена. Сайленсинговая активность Sir2 наиболее заметна в теломерных последовательностях, скрытых локусах MAT (локусах HM) и локусе рибосомной ДНК (рДНК) (RDN1), с которого транскрибируется рибосомная РНК .

Ограниченная сверхэкспрессия гена Sir2 приводит к увеличению продолжительности жизни примерно на 30% [38] , если продолжительность жизни измеряется как количество клеточных делений, которые может претерпеть материнская клетка до смерти клетки. Соответственно, удаление Sir2 приводит к сокращению продолжительности жизни на 50%. [38] В частности, подавление активности Sir2 в комплексе с Sir3 и Sir4 в локусах HM предотвращает одновременную экспрессию обоих факторов спаривания, которые могут вызывать бесплодие и сокращение продолжительности жизни. [39] Кроме того, активность Sir2 в локусе рДНК коррелирует с уменьшением образования колец рДНК. Подавление хроматина в результате активности Sir2 снижает гомологичную рекомбинацию между повторами рДНК, что является процессом, ведущим к образованию колец рДНК. Поскольку накопление этих колец рДНК является основным способом, посредством которого дрожжи, как полагают, «стареют», то действие Sir2 по предотвращению накопления этих колец рДНК является необходимым фактором долголетия дрожжей. [39]

Голодание дрожжевых клеток приводит к аналогичному увеличению продолжительности жизни, и действительно голодание увеличивает доступное количество НАД + и снижает никотинамид , оба из которых имеют потенциал для увеличения активности Sir2. Более того, удаление гена Sir2 устраняет эффект продления жизни от ограничения калорийности. [40] Эксперименты на нематоде Caenorhabditis elegans и плодовой мушке Drosophila melanogaster [41] подтверждают эти выводы. По состоянию на 2006 год проводятся эксперименты на мышах . [31]

Однако некоторые другие результаты ставят под сомнение вышеприведенную интерпретацию. Если измерять продолжительность жизни дрожжевой клетки как количество времени, которое она может прожить в неделящейся стадии, то подавление гена Sir2 фактически увеличивает продолжительность жизни [42]. Более того, ограничение калорий может существенно продлить репродуктивную продолжительность жизни дрожжей даже при отсутствии Sir2. [43]

В организмах, более сложных, чем дрожжи, Sir2, по-видимому, действует путем деацетилирования нескольких других белков, помимо гистонов.

У плодовой мушки Drosophila melanogaster ген Sir2, по-видимому, не является существенным; потеря гена сиртуина имеет лишь очень незначительные последствия. [40] Однако мыши, у которых отсутствовал ген SIRT1 (биологический эквивалент sir2), были меньше обычных при рождении, часто умирали рано или становились бесплодными. [44]

Ингибирование SIRT1

Старение человека характеризуется хроническим, слабовыраженным уровнем воспаления [45] , а провоспалительный фактор транскрипции NF-κB является основным транскрипционным регулятором генов, связанных с воспалением. [46] SIRT1 ингибирует экспрессию генов, регулируемую NF-κB, путем деацетилирования субъединицы RelA/p65 NF-κB в положении лизина 310. [47] [48] Но NF-κB сильнее ингибирует SIRT1. NF-κB увеличивает уровни микроРНК miR -34a (которая ингибирует синтез никотинамидадениндинуклеотида NAD+) путем связывания с его промоторной областью. [49] что приводит к более низким уровням SIRT1.

Как фермент SIRT1, так и фермент поли -АДФ- рибозополимераза 1 ( PARP1 ) требуют NAD+ для активации. [50] PARP1 является ферментом репарации ДНК , поэтому в условиях сильного повреждения ДНК уровень NAD+ может быть снижен на 20–30%, тем самым снижая активность SIRT1. [50]

Гомологичная рекомбинация

Белок SIRT1 активно способствует гомологичной рекомбинации (HR) в клетках человека и, вероятно, способствует рекомбинационному восстановлению разрывов ДНК . [51] SIRT1-опосредованный HR требует белка WRN . [51] Белок WRN функционирует в восстановлении двухцепочечных разрывов с помощью HR. [52] Белок WRN является геликазой RecQ и в своей мутировавшей форме вызывает синдром Вернера , генетическое состояние у людей, характеризующееся многочисленными признаками преждевременного старения. Эти результаты связывают функцию SIRT1 с HR, процессом восстановления ДНК, который, вероятно, необходим для поддержания целостности генома во время старения. [51]

Ссылки

  1. ^ abc GRCh38: Ensembl выпуск 89: ENSG00000096717 – Ensembl , май 2017 г.
  2. ^ abc GRCm38: Ensembl выпуск 89: ENSMUSG00000020063 – Ensembl , май 2017 г.
  3. ^ "Human PubMed Reference:". Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .
  4. ^ "Mouse PubMed Reference:". Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США .
  5. ^ Frye RA (июнь 1999). «Характеристика пяти человеческих кДНК с гомологией с геном дрожжей SIR2: белки, подобные Sir2 (сиртуины), метаболизируют НАД и могут обладать активностью АДФ-рибозилтрансферазы белка». Biochemical and Biophysical Research Communications . 260 (1): 273–79. doi :10.1006/bbrc.1999.0897. PMID  10381378.
  6. ^ ab "Ген Entrez: сиртуин SIRT1 (гомолог регуляции информации о молчаливом типе спаривания 2) 1 (S. cerevisiae)".
  7. ^ Расположение гена SIRT1 человека в браузере генома UCSC .
  8. ^ Синклер ДА, Гуаренте Л (март 2006 г.). «Раскрытие секретов генов долголетия». Scientific American . 294 (3): 48–51, 54–7. Bibcode : 2006SciAm.294c..48S. doi : 10.1038/scientificamerican0306-48. PMID  16502611.
  9. ^ Фудзита Y, Ямашита T (2018). «Сиртуины в нейроэндокринной регуляции и неврологических заболеваниях». Frontiers in Neuroscience . 12 : 778. doi : 10.3389/fnins.2018.00778 . PMC 6213750. PMID  30416425 . 
  10. ^ ab Sun C, Zhang F, Ge X, Yan T, Chen X, Shi X, Zhai Q (октябрь 2007 г.). «SIRT1 улучшает чувствительность к инсулину в условиях резистентности к инсулину, подавляя PTP1B». Cell Metabolism . 6 (4): 307–19. doi : 10.1016/j.cmet.2007.08.014 . PMID  17908559.
  11. ^ ab Wilson BJ, Tremblay AM, Deblois G, Sylvain-Drolet G, Giguère V (июль 2010 г.). «Переключатель ацетилирования модулирует транскрипционную активность эстроген-связанного рецептора альфа». Молекулярная эндокринология . 24 (7): 1349–58. doi :10.1210/me.2009-0441. PMC 5417470. PMID  20484414 . 
  12. ^ Cantó C, Gerhart-Hines Z, Feige JN, Lagouge M, Noriega L, Milne JC, Elliott PJ, Puigserver P, Auwerx J (апрель 2009 г.). «AMPK регулирует расход энергии, модулируя метаболизм NAD+ и активность SIRT1». Nature . 458 (7241): 1056–60. Bibcode :2009Natur.458.1056C. doi :10.1038/nature07813. PMC 3616311 . PMID  19262508. 
  13. ^ EntrezGene 23411 Человек Sirt1
  14. ^ Verdin E (декабрь 2015 г.). «NAD⁺ в старении, метаболизме и нейродегенерации». Science . 350 (6265): 1208–13. Bibcode :2015Sci...350.1208V. doi :10.1126/science.aac4854. PMID  26785480. S2CID  27313960.
  15. ^ ab Liu B, Ghosh S, Yang X, Zheng H, Liu X, Wang Z, Jin G, Zheng B, Kennedy BK, Suh Y, Kaeberlein M, Tryggvason K, Zhou Z (декабрь 2012 г.). «Ресвератрол спасает зависимое от SIRT1 снижение стволовых клеток взрослых и смягчает прогероидные признаки при прогерии, вызванной ламинопатией». Клеточный метаболизм . 16 (6): 738–50. doi : 10.1016/j.cmet.2012.11.007 . PMID  23217256.
  16. ^ ab Alcaín FJ, Villalba JM (апрель 2009 г.). «Активаторы сиртуина». Экспертное мнение о терапевтических патентах . 19 (4): 403–14. doi :10.1517/13543770902762893. PMID  19441923. S2CID  20849750.
  17. ^ Kaeberlein M, McDonagh T, Heltweg B, Hixon J, Westman EA, Caldwell SD, Napper A, Curtis R, DiStefano PS, Fields S, Bedalov A, Kennedy BK (апрель 2005 г.). «Субстрат-специфическая активация сиртуинов ресвератролом». Журнал биологической химии . 280 (17): 17038–45. doi : 10.1074/jbc.M500655200 . PMID  15684413.
  18. ^ Beher D, Wu J, Cumine S, Kim KW, Lu SC, Atangan L, Wang M (декабрь 2009 г.). «Ресвератрол не является прямым активатором активности фермента SIRT1». Chemical Biology & Drug Design . 74 (6): 619–24. doi :10.1111/j.1747-0285.2009.00901.x. PMID  19843076. S2CID  205913187.
  19. ^ Lakshminarasimhan M, Rauh D, Schutkowski M, Steegborn C (март 2013 г.). «Активация Sirt1 ресвератролом селективна по отношению к последовательности субстрата». Aging . 5 (3): 151–54. doi :10.18632/aging.100542. PMC 3629287 . PMID  23524286. 
  20. ^ Хаббард Б.П., Гомес А.П., Дай Х., Ли Дж., Кейс А.В., Консидайн Т., Риера ТВ, Ли Дж.Э., Э.С.И., Ламминг Д.В., Пентелют Б.Л., Шуман Э.Р., Стивенс Л.А., Линг А.Дж., Армор СМ, Мичан С., Чжао Х., Цзян Ю., Свейцер С.М., Блюм К.А., Диш Дж.С., Нг П.И., Ховитц К.Т., Роло А.П., Хамуро Ю., Мосс Дж., Перни Р.Б., Эллис Дж.Л., Власук Г.П., Синклер Д.А. (март 2013 г.). «Доказательства общего механизма регуляции SIRT1 аллостерическими активаторами». Наука . 339 (6124): 1216–19. Бибкод : 2013Sci...339.1216H. doi : 10.1126/science.1231097. PMC 3799917. PMID 23471411  . 
  21. ^ Ajami M, Pazoki-Toroudi H, Amani H, Nabavi SF, Braidy N, Vacca RA, Atanasov AG, Mocan A, Nabavi SM (ноябрь 2016 г.). «Терапевтическая роль сиртуинов при нейродегенеративных заболеваниях и их модуляция полифенолами». Neuroscience and Biobehavioral Reviews . 73 : 39–47. doi : 10.1016/j.neubiorev.2016.11.022. PMID  27914941. S2CID  3991428.
  22. ^ Pacholec M, Bleasdale JE, Chrunyk B, Cunningham D, Flynn D, Garofalo RS, Griffith D, Griffor M, Loulakis P, Pabst B, Qiu X, Stockman B, Thanabal V, Varghese A, Ward J, Withka J, Ahn K (март 2010 г.). «SRT1720, SRT2183, SRT1460 и ресвератрол не являются прямыми активаторами SIRT1». Журнал биологической химии . 285 (11): 8340–51. doi : 10.1074/jbc.M109.088682 . PMC 2832984. PMID  20061378 . 
  23. ^ Shin SY, Kim TH, Wu H, Choi YH, Kim SG (март 2014 г.). «Активация SIRT1 метиленовым синим, перепрофилированным препаратом, приводит к AMPK-опосредованному ингибированию стеатоза и стеатогепатита». European Journal of Pharmacology . 727 : 115–24. doi : 10.1016/j.ejphar.2014.01.035. PMID  24486702.
  24. ^ Song YM, Lee YH, Kim JW, Ham DS, Kang ES, Cha BS, Lee HC, Lee BW (2015). «Метформин облегчает гепатостеатоз, восстанавливая индукцию аутофагии, опосредованную SIRT1, через AMP-активируемый протеинкиназно-независимый путь». Аутофагия . 11 (1): 46–59. doi :10.4161/15548627.2014.984271. PMC 4502778 . PMID  25484077. 
  25. ^ Джоши Т., Сингх АК., Харатипур П., Фарзаи М.Х. (2019). «Воздействие на сигнальный путь AMPK натуральными продуктами для лечения сахарного диабета и его осложнений». Журнал клеточной физиологии . 234 (10): 17212–17231. doi :10.1002/jcp.28528. PMID  30916407. S2CID  85533334.
  26. ^ Фаргали Х, Кемело МК, Канова НК (2019). «Модуляторы SIRT1 при экспериментально вызванном повреждении печени». Окислительная медицина и клеточное долголетие . 2019 : 8765954. doi : 10.1155/2019/8765954 . PMC 6589266. PMID  31281594 . 
  27. ^ ab Cantó C, Auwerx J (2012). «Нацеливание сиртуина 1 на улучшение метаболизма: все, что вам нужно, это НАД(+)?». Pharmacological Reviews . 64 (1): 166–187. doi :10.1124/pr.110.003905. PMC 3616312. PMID  22106091 . 
  28. ^ Чуприн А, Авин А, Гольдфарб Ю, Герциг Ю, Леви Б, Якоб А, Села А, Кац С, Гроссман М, Гийон К, Ратхаус М, Коэн HY, Саги И, Жиро М, МакБерни МВ, Хусебай ЭС, Абрамсон Дж (июль 2015 г.). «Деацетилаза Sirt1 является важным регулятором индукции центральной иммунологической толерантности, опосредованной Aire». Nature Immunology . 16 (7): 737–45. doi :10.1038/ni.3194. PMID  26006015. S2CID  205369422.
  29. ^ Шарма А., Гаутам В., Костантини С., Паладино А., Колонна Г. (2012). «Интерактомические и фармакологические идеи человеческого sirt-1». Frontiers in Pharmacology . 3 : 40. doi : 10.3389/fphar.2012.00040 . PMC 3311038. PMID 22470339  . 
  30. ^ Frye RA (июль 2000 г.). «Филогенетическая классификация прокариотических и эукариотических белков, подобных Sir2». Biochemical and Biophysical Research Communications . 273 (2): 793–98. doi :10.1006/bbrc.2000.3000. PMID  10873683.
  31. ^ ab Sinclair DA, Guarente L (март 2006 г.). «Раскрытие секретов генов долголетия». Scientific American . 294 (3): 48–51, 54–57. Bibcode : 2006SciAm.294c..48S. doi : 10.1038/scientificamerican0306-48. PMID  16502611.
  32. ^ Noriega LG, Feige JN, Canto C, Yamamoto H, Yu J, Herman MA, Mataki C, Kahn BB, Auwerx J (сентябрь 2011 г.). «CREB и ChREBP противоположно регулируют экспрессию SIRT1 в ответ на доступность энергии». EMBO Reports . 12 (10): 1069–76. doi :10.1038/embor.2011.151. PMC 3185337. PMID  21836635 . 
  33. ^ Райн Дж., Херсковиц И. (май 1987 г.). «Четыре гена, ответственные за эффект положения на экспрессию HML и HMR в Saccharomyces cerevisiae». Генетика . 116 (1): 9–22. doi :10.1093/genetics/116.1.9. PMC 1203125. PMID  3297920 . 
  34. ^ North BJ, Verdin E (2004). "Сиртуины: связанные с Sir2 NAD-зависимые протеиндеацетилазы". Genome Biology . 5 (5): 224. doi : 10.1186/gb-2004-5-5-224 . PMC 416462 . PMID  15128440. 
  35. ^ Обзор белка WormBase: Sir-2.1
  36. ^ http://mediwire.skyscape.com/main/Default.aspx?P=Content&ArticleID=174239 Архивировано 27 сентября 2007 г. на Wayback Machine "Skyscape Content: Способствуют ли антивозрастные подходы долголетию?". Архивировано из оригинала 27 сентября 2007 г. Получено 6 июля 2016 г.{{cite web}}: CS1 maint: бот: исходный статус URL неизвестен ( ссылка )Skyscape Content: Способствуют ли методы борьбы со старением долголетию?
  37. ^ Семейство белков Sir2 из базы данных InterPro EMBL
  38. ^ ab Chang KT, Min KT (июнь 2002 г.). «Регулирование продолжительности жизни гистондеацетилазой». Ageing Research Reviews . 1 (3): 313–26. doi :10.1016/S1568-1637(02)00003-X. PMID  12067588. S2CID  39452909.
  39. ^ ab Kaeberlein M, McVey M, Guarente L (октябрь 1999 г.). «Комплекс SIR2/3/4 и SIR2 в отдельности способствуют долголетию Saccharomyces cerevisiae двумя различными механизмами». Genes & Development . 13 (19): 2570–80. doi :10.1101/gad.13.19.2570. PMC 317077 . PMID  10521401. 
  40. ^ ab EntrezGene 34708 Дрозофила Sir2
  41. ^ Rogina B, Helfand SL (ноябрь 2004 г.). «Sir2 опосредует долголетие у мух через путь, связанный с ограничением калорий». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 101 (45): 15998–6003. Bibcode : 2004PNAS..10115998R. doi : 10.1073 /pnas.0404184101 . PMC 528752. PMID  15520384. 
  42. ^ Фабрицио П., Гаттаццо С., Батистелла Л., Вэй М., Ченг С., МакГрю К., Лонго В.Д. (ноябрь 2005 г.). «Sir2 блокирует чрезмерное увеличение продолжительности жизни». Клетка . 123 (4): 655–67. дои : 10.1016/j.cell.2005.08.042 . PMID  16286010. S2CID  1276690.
  43. ^ Kaeberlein M, Kirkland KT, Fields S, Kennedy BK (сентябрь 2004 г.). "Sir2-независимое увеличение продолжительности жизни путем ограничения калорий у дрожжей". PLOS Biology . 2 (9): E296. doi : 10.1371 /journal.pbio.0020296 . PMC 514491. PMID  15328540. 
  44. ^ McBurney MW, Yang X, Jardine K, Hixon M, Boekelheide K, Webb JR, Lansdorp PM, Lemieux M (январь 2003 г.). «Белок млекопитающих SIR2alpha играет роль в эмбриогенезе и гаметогенезе». Молекулярная и клеточная биология . 23 (1): 38–54. doi :10.1128/MCB.23.1.38-54.2003. PMC 140671. PMID  12482959. 
  45. ^ Franceschi C, Campisi J (июнь 2014 г.). «Хроническое воспаление (инфламмейджинг) и его потенциальный вклад в возрастные заболевания». Журналы геронтологии. Серия A, Биологические науки и медицинские науки . 69 (S1): S4–S9. doi : 10.1093/gerona/glu057 . PMID  24833586.
  46. ^ Lawrence T (декабрь 2009 г.). «Путь ядерного фактора NF-kappaB при воспалении». Cold Spring Harbor Perspectives in Biology . 1 (6): a001651. doi :10.1101/cshperspect.a001651. PMC 2882124. PMID 20457564  . 
  47. ^ Yeung F, Hoberg JE, Ramsey CS, Keller MD, Jones DR, Frye RA, Mayo MW (июнь 2004 г.). «Модуляция NF-kappaB-зависимой транскрипции и выживаемости клеток с помощью деацетилазы SIRT1». The EMBO Journal . 23 (12): 2369–80. doi :10.1038/sj.emboj.7600244. PMC 423286. PMID  15152190. 
  48. ^ Кауппинен А, Сууронен Т, Оджала Дж, Каарниранта К, Салминен А (октябрь 2013 г.). «Антагонистические перекрестные помехи между NF-κB и SIRT1 в регуляции воспаления и метаболических нарушений». Сотовая сигнализация . 25 (10): 1939–48. doi :10.1016/j.cellsig.2013.06.007. ПМИД  23770291.
  49. ^ de Gregorio E, Colell A, Morales A, Marí M (2020). «Значимость оси SIRT1-NF-κB как терапевтической мишени для облегчения воспаления при заболеваниях печени». International Journal of Molecular Sciences . 21 (11): 3858. doi : 10.3390/ijms21113858 . PMC 7312021. PMID  32485811 . 
  50. ^ ab Chung HT, Joe Y (2014). «Антагонистические перекрестные помехи между SIRT1, PARP-1 и -2 в регуляции хронического воспаления, связанного со старением и метаболическими заболеваниями». Integrative Medicine Research . 3 (4): 198–203. doi :10.1016/j.imr.2014.09.005. PMC 5481777. PMID 28664098  . 
  51. ^ abc Uhl M, Csernok A, Aydin S, Kreienberg R, Wiesmüller L, Gatz SA (2010). "Роль SIRT1 в гомологичной рекомбинации". DNA Repair (Amst.) . 9 (4): 383–93. doi :10.1016/j.dnarep.2009.12.020. PMID  20097625.
  52. ^ Томпсон Л. Х., Шильд Д. (2002). «Рекомбинационная репарация ДНК и болезни человека». Mutat. Res . 509 (1–2): 49–78. doi :10.1016/s0027-5107(02)00224-5. PMID  12427531.

Внешние ссылки