Декарбоксилаза ароматических L -аминокислот ( AADC или AAAD ), также известная как ДОФА-декарбоксилаза ( DDC ), триптофандекарбоксилаза и 5-гидрокситриптофандекарбоксилаза , представляет собой фермент лиазу ( EC 4.1.1.28), расположенный в регионе 7p12.2-p12.1.
Фермент использует пиридоксальфосфат (PLP), активную форму витамина B 6 , в качестве кофактора . PLP необходим для механизма декарбоксилирования в AADC. В активном ферменте PLP связан с лизином -303 AADC как основание Шиффа . При связывании субстрата Lys-303 замещается амином субстрата . Это располагает карбоксилат субстрата в активном центре таким образом, что декарбоксилирование является благоприятным. Декарбоксилирование субстрата дает хиноидный промежуточный продукт, который впоследствии протонируется с образованием аддукта основания Шиффа PLP и декарбоксилированного продукта. Затем Lys-303 может регенерировать исходное основание Шиффа, высвобождая продукт, сохраняя при этом PLP. [2]
При исследовании этого катализируемого PLP декарбоксилирования было обнаружено, что существует разница в концентрации и зависимости pH между субстратами. ДОФА оптимально декарбоксилируется при pH 6,7 и концентрации PLP 0,125 мМ, в то время как было обнаружено, что оптимальными условиями для декарбоксилирования 5-HTP являются pH 8,3 и 0,3 мМ PLP. [3]
Ароматическая декарбоксилаза L -аминокислот активна как гомодимер . До добавления кофактора пиридоксальфосфата апофермент существует в открытой конформации. После связывания кофактора происходит большая структурная трансформация, когда субъединицы сближаются и закрывают активный сайт. Это конформационное изменение приводит к активной закрытой голоферменте. [4]
В моделях мышей с дефицитом PLP было отмечено, что уровни дофамина не сильно отличаются от образцов с добавлением PLP; однако концентрация серотонина в модели мозга с дефицитом была значительной. Этот изменчивый эффект дефицита PLP указывает на возможные изоформы AADC с дифференциальной субстратной специфичностью для DOPA и 5-HTP. Исследования диализа также показывают, что потенциальная изоформа, ответственная за декарбоксилирование DOPA, имеет большую связывающую аффинность для PLP, чем у 5-HTP декарбоксилазы. [3]
Регуляция AADC, особенно в отношении декарбоксилирования L -ДОФА , была тщательно изучена. AADC имеет несколько консервативных участков распознавания протеинкиназы A (PKA) и протеинкиназы G с остатками S220, S336, S359, T320 и S429, все из которых являются потенциальными акцепторами фосфата. Исследования in vitro подтвердили, что PKA и PKG могут фосфорилировать AADC, вызывая значительное увеличение активности. [5] [6] Кроме того, было показано, что антагонисты дофаминовых рецепторов увеличивают активность AADC в моделях грызунов, в то время как активация некоторых дофаминовых рецепторов подавляет активность AADC. [7] Такая опосредованная рецепторами регуляция является двухфазной, с первоначальной краткосрочной активацией, за которой следует долгосрочная активация. Считается, что краткосрочная активация происходит через активацию киназы и последующее фосфорилирование AADC, в то время как чувствительность долгосрочного активирования к ингибиторам трансляции белков предполагает регуляцию транскрипции мРНК . [8]
AADC катализирует несколько различных реакций декарбоксилирования : [9]
Однако некоторые из этих реакций, по-видимому, не имеют большого или вообще никакого биологического значения. Например, гистамин биосинтезируется строго через фермент гистидиндекарбоксилазу у людей и других организмов. [10] [11]
При нормальном синтезе нейротрансмиттеров дофамина и серотонина (5-HT) AADC не является этапом, ограничивающим скорость, ни в одной из реакций. Однако AADC становится этапом, ограничивающим скорость синтеза дофамина у пациентов, получающих лечение L -ДОФА (например, при болезни Паркинсона ), и этапом, ограничивающим скорость синтеза серотонина у людей, получающих лечение 5-HTP (например, при легкой депрессии или дистимии ). [ необходима цитата ] AADC ингибируется карбидопой за пределами гематоэнцефалического барьера , чтобы ингибировать преждевременное преобразование L -ДОФА в дофамин при лечении болезни Паркинсона .
У людей AADC также является ферментом, ограничивающим скорость образования следовых аминов . Дефицит ароматической L -аминокислоты декарбоксилазы связан с различными симптомами, такими как тяжелая задержка развития, окулогирные кризы и вегетативная дисфункция. Молекулярный и клинический спектр дефицита AAAC неоднороден. Первый случай дефицита AADC был описан у братьев-близнецов в 1990 году. Пациентов можно лечить агонистами дофамина , ингибиторами МАО и пиридоксином ( витамином B6 ) . [15] Клинический фенотип и ответ на лечение изменчивы, а долгосрочный и функциональный результат неизвестны. Чтобы обеспечить основу для улучшения понимания эпидемиологии, корреляции генотипа и фенотипа и исхода этих заболеваний, их влияния на качество жизни пациентов, а также для оценки диагностических и терапевтических стратегий, некоммерческой Международной рабочей группой по нейротрансмиттерным расстройствам (iNTD) был создан реестр пациентов. [16]
Иммуногистохимические исследования показали, что AADC экспрессируется в различных типах нейрональных клеток , таких как серотонинергические и катехоламинергические нейроны. Нейроны, которые экспрессируют AADC, но не считаются классическими моноаминергическими клеточными нейронами, называются D-клетками. Клетки, которые иммунореактивны для AADC, также были обнаружены в стволе мозга человека . Эти клетки включают пигментированные меланином клетки, которые обычно обозначаются как катехоламинергические и также могут быть серотонинергическими. Значительная локализация дофаминергических клеток, которые также иммунореактивны для AADC, сообщается в черной субстанции , вентральной тегментальной области и мезэнцефальной ретикулярной формации . В отличие от предыдущих отчетов о животных моделях, неаминергические (D-клетки) вряд ли будут наблюдаться в человеческом мозге. [17]
Ген , кодирующий фермент, называется DDC , и находится на хромосоме 7 у людей. [18] Он состоит из 15 экзонов , кодирующих белок из 480 аминокислот . [19] Полиморфизмы отдельных нуклеотидов и другие вариации генов были исследованы в связи с нейропсихиатрическими расстройствами , например, делеция одной пары оснований в положении 601 и делеция четырех пар оснований в положении 722–725 в экзоне 1 в связи с биполярным расстройством [20] и аутизмом . Прямой корреляции между вариацией генов и аутизмом обнаружено не было. [21]
Более 50 мутаций DDC коррелируют с дефицитом AADC. [22] Это состояние наиболее распространено в Азии, предположительно из-за эффекта основателя . [23]
Альтернативные события сплайсинга и промоторы были обнаружены, что приводит к различным формам фермента AADC. Уникальное использование определенных промоторов приводит к транскрипции только первого экзона для получения вненейрональной изоформы , а сплайсинг экзона 3 приводит к продукту, лишенному ферментативной активности. Анализы с использованием образцов свиней выявили две изоформы AADC — в результате исключения экзона 5 и экзонов 5 и 6 — в которых отсутствует часть декарбоксилирующего домена. [19]