Четвертичная структура белка [a] является четвертым (и самым высоким) уровнем классификации структуры белка . Четвертичная структура белка относится к структуре белков, которые сами состоят из двух или более меньших белковых цепей (также называемых субъединицами). Четвертичная структура белка описывает количество и расположение множественных свернутых белковых субъединиц в многосубъединичном комплексе . Она включает организации от простых димеров до крупных гомоолигомеров и комплексов с определенным или переменным числом субъединиц. [1] В отличие от первых трех уровней структуры белка, не все белки будут иметь четвертичную структуру, поскольку некоторые белки функционируют как отдельные единицы. Четвертичная структура белка может также относиться к биомолекулярным комплексам белков с нуклеиновыми кислотами и другими кофакторами .
Многие белки на самом деле являются сборками нескольких полипептидных цепей. Четвертичная структура относится к числу и расположению субъединиц белка по отношению друг к другу. [2] Примерами белков с четвертичной структурой являются гемоглобин , ДНК-полимераза , рибосомы , антитела и ионные каналы .
Ферменты, состоящие из субъединиц с разнообразными функциями, иногда называют голоферментами , в которых некоторые части могут быть известны как регуляторные субъединицы, а функциональное ядро известно как каталитическая субъединица. Другие сборки, называемые вместо этого мультипротеиновыми комплексами, также обладают четвертичной структурой. Примерами являются нуклеосомы и микротрубочки . Изменения в четвертичной структуре могут происходить посредством конформационных изменений внутри отдельных субъединиц или посредством переориентации субъединиц относительно друг друга. Именно посредством таких изменений, которые лежат в основе кооперативности и аллостерии в «мультимерных» ферментах, многие белки подвергаются регуляции и выполняют свою физиологическую функцию.
Вышеприведенное определение следует классическому подходу к биохимии, установленному во времена, когда было трудно провести различие между белком и функциональной белковой единицей. В последнее время люди ссылаются на взаимодействие белок-белок при обсуждении четвертичной структуры белков и рассматривают все сборки белков как белковые комплексы .
Число субъединиц в олигомерном комплексе описывается с помощью названий, которые заканчиваются на -mer (греч. «часть, субъединица»). Формальные и греко-латинские названия обычно используются для первых десяти типов и могут использоваться для двадцати субъединиц, тогда как комплексы более высокого порядка обычно описываются числом субъединиц, за которым следует -meric.
Наименьшая единица, образующая гомоолигомер, т. е. одну белковую цепь или субъединицу , обозначается как мономер, субъединица или протомер . Последний термин был первоначально придуман для обозначения наименьшей единицы гетероолигомерных белков, но в современной литературе также применяется к гомоолигомерным белкам. Субъединицы обычно располагаются в циклической симметрии, образуя замкнутые точечные групповые симметрии .
Хотя комплексы выше октамеров редко наблюдаются для большинства белков, есть некоторые важные исключения. Вирусные капсиды часто состоят из кратных 60 белков. Несколько молекулярных машин также обнаружены в клетке, такие как протеасома (четыре гептамерных кольца = 28 субъединиц), транскрипционный комплекс и сплайсосома . Рибосома , вероятно, является самой большой молекулярной машиной и состоит из множества молекул РНК и белков.
В некоторых случаях белки образуют комплексы, которые затем собираются в еще более крупные комплексы. В таких случаях используют номенклатуру, например, «димер димеров» или «тример димеров». Это может означать, что комплекс может диссоциировать на более мелкие субкомплексы перед диссоциацией на мономеры. Обычно это подразумевает, что комплекс состоит из различных интерфейсов олигомеризации. Например, тетрамерный белок может иметь одну ось вращения четверного порядка, т. е. точечную группу симметрии 4 или C 4 . В этом случае четыре интерфейса между субъединицами идентичны. Он также может иметь точечную группу симметрии 222 или D 2 . Этот тетрамер имеет различные интерфейсы, и тетрамер может диссоциировать на два идентичных гомодимера. Тетрамеры с симметрией 222 являются «димером димеров». Гексамеры с симметрией 32 являются «тримером димеров» или «димером тримеров». Таким образом, номенклатура «димер димеров» используется для указания точечной групповой симметрии или расположения олигомера, независимо от информации, касающейся его свойств диссоциации.
Другое различие, которое часто делается при упоминании олигомеров, заключается в том, являются ли они гомомерными или гетеромерными, имея в виду, являются ли меньшие белковые субъединицы, которые объединяются для создания белкового комплекса, одинаковыми (гомомерными) или разными (гетеромерными) друг от друга. Например, два идентичных белковых мономера объединятся, чтобы сформировать гомодимер, тогда как два разных белковых мономера создадут гетеродимер.
Четвертичную структуру белка можно определить с помощью различных экспериментальных методов, которые требуют образца белка в различных экспериментальных условиях. Эксперименты часто дают оценку массы нативного белка и, вместе со знанием масс и/или стехиометрии субъединиц, позволяют предсказать четвертичную структуру с заданной точностью. Не всегда возможно получить точное определение состава субъединицы по ряду причин.
Число субъединиц в белковом комплексе часто можно определить, измерив гидродинамический молекулярный объем или массу неповрежденного комплекса, что требует условий нативного раствора. Для сложенных белков массу можно вывести из его объема, используя парциальный удельный объем 0,73 мл/г. Однако измерения объема менее точны, чем измерения массы, поскольку развернутые белки, по-видимому, имеют гораздо больший объем, чем сложенные; требуются дополнительные эксперименты, чтобы определить, развернут ли белок или образовал олигомер.
Методы, измеряющие массу или объем в условиях разворачивания (такие как масс-спектрометрия MALDI-TOF и SDS-PAGE ), как правило, бесполезны, поскольку ненативные условия обычно приводят к диссоциации комплекса на мономеры. Однако иногда они могут быть применимы; например, экспериментатор может применить SDS-PAGE после первой обработки интактного комплекса химическими сшивающими реагентами.
Были разработаны некоторые методы биоинформатики для прогнозирования четвертичных структурных атрибутов белков на основе информации об их последовательности с использованием различных режимов псевдоаминокислотного состава . [2] [8] [9]
Программы предсказания сворачивания белка, используемые для предсказания третичной структуры белка, также расширяются для лучшего предсказания четвертичной структуры белка. Одной из таких разработок является AlphaFold-Multimer [10], построенный на основе модели AlphaFold для предсказания третичной структуры белка.
Четвертичная структура белка также играет важную роль в определенных сигнальных путях клетки. Путь рецептора, сопряженного с G-белком, включает гетеротримерный белок, известный как G-белок. G-белки содержат три отдельных субъединицы, известные как субъединицы G-альфа, G-бета и G-гамма. Когда G-белок активируется, он связывается с белком рецептора, сопряженным с G-белком, и инициируется сигнальный путь клетки. Другим примером является путь рецепторной тирозинкиназы (RTK), который инициируется димеризацией двух мономеров рецепторной тирозинкиназы. Когда образуется димер, две киназы могут фосфорилировать друг друга и инициировать сигнальный путь клетки. [11]
Белки способны образовывать очень плотные, но также только временные комплексы. Например, ингибитор рибонуклеазы связывается с рибонуклеазой А с константой диссоциации примерно 20 фМ . Другие белки эволюционировали, чтобы специфически связываться с необычными фрагментами на другом белке, например, группами биотина (авидин), фосфорилированными тирозинами ( домены SH2 ) или богатыми пролином сегментами ( домены SH3 ). Взаимодействия белок-белок могут быть сконструированы так, чтобы способствовать определенным состояниям олигомеризации. [12]
Когда несколько копий полипептида, кодируемого геном , образуют четвертичный комплекс, эта белковая структура называется мультимером. [13] Когда мультимер образуется из полипептидов, продуцируемых двумя различными мутантными аллелями определенного гена, смешанный мультимер может проявлять большую функциональную активность, чем несмешанные мультимеры, образованные каждым из мутантов в отдельности. В таком случае явление называется внутригенной комплементарностью (также называемой межаллельной комплементарностью). Внутригенная комплементарность, по-видимому, распространена и была изучена во многих различных генах у различных организмов, включая грибы Neurospora crassa , Saccharomyces cerevisiae и Schizosaccharomyces pombe ; бактерию Salmonella typhimurium ; вирус бактериофаг T4 , [14] РНК-вирус, [15] и людей. [16] Межмолекулярные силы, вероятно, ответственные за самораспознавание и образование мультимеров, обсуждались Йеле. [17]
Прямое взаимодействие двух зарождающихся белков, появляющихся из близлежащих рибосом , по-видимому, является общим механизмом образования олигомеров. [18] Были идентифицированы сотни белковых олигомеров, которые собираются в клетках человека посредством такого взаимодействия. [18] Наиболее распространенной формой взаимодействия было взаимодействие между N-концевыми областями взаимодействующих белков. Образование димеров, по-видимому, может происходить независимо от специализированных сборочных машин.
Раздел 4: Спектроскопия ядерного магнитного резонанса