stringtranslate.com

Малая интерферирующая РНК

Опосредование РНК-интерференции в культивируемых клетках млекопитающих.

Малая интерферирующая РНК ( siRNA ), иногда называемая короткой интерферирующей РНК или заглушающей РНК , представляет собой класс двухцепочечных некодирующих молекул РНК , обычно длиной 20–24 пары оснований , похожих на микроРНК (miRNA), и работающих в рамках пути РНК-интерференции (RNAi). Она препятствует экспрессии определенных генов с комплементарными нуклеотидными последовательностями, разрушая информационную РНК (мРНК) после транскрипции , предотвращая трансляцию . [1] [2] Она была открыта в 1998 году Эндрю Файром из Института науки Карнеги в Вашингтоне, округ Колумбия, и Крейгом Мелло из Массачусетского университета в Вустере.

Структура

Природные siRNA имеют четко определенную структуру, которая представляет собой короткую (обычно от 20 до 24 п.н. ) двухцепочечную РНК (dsRNA) с фосфорилированными 5'-концами и гидроксилированными 3'-концами с двумя выступающими нуклеотидами. Фермент Dicer катализирует производство siRNA из длинных dsRNA и небольших шпилечных РНК . [3] siRNA также могут быть введены в клетки путем трансфекции . Поскольку в принципе любой ген может быть подавлен синтетической siRNA с комплементарной последовательностью, siRNA являются важным инструментом для проверки функции гена и нацеливания лекарств в постгеномную эру.

История

В 1998 году Эндрю Файер из Института науки Карнеги в Вашингтоне (округ Колумбия) и Крейг Мелло из Массачусетского университета в Вустере открыли механизм РНК-интерференции , работая над экспрессией генов у нематоды Caenorhabditis elegans . [4] В 2006 году они получили Нобелевскую премию за свои исследования с использованием РНК-интерференции . siRNA и их роль в посттранскрипционном подавлении генов (PTGS) были обнаружены в растениях группой Дэвида Болкомба в лаборатории Сейнсбери в Норвиче , Англия , и опубликованы в журнале Science в 1999 году. [5] Томас Тушл и его коллеги вскоре сообщили в журнале Nature , что синтетические siRNA могут вызывать РНК-интерференцию в клетках млекопитающих. [6] В 2001 году экспрессия определенного гена была успешно подавлена ​​путем введения химически синтезированной siRNA в клетки млекопитающих (Tuschl et al.). Эти открытия привели к всплеску интереса к использованию РНК-интерференции для биомедицинских исследований и разработки лекарств . Значительные разработки в терапии siRNA были сделаны с использованием как органических (на основе углерода), так и неорганических (не на основе углерода) наночастиц , которые были успешны в доставке лекарств в мозг , предлагая многообещающие методы доставки терапевтических средств в организм человека. Однако применение siRNA у людей имело существенные ограничения для его успеха. Одним из них было нецелевое действие. [2] Существует также вероятность того, что эти терапии могут вызывать врожденный иммунитет . [4] Животные модели не смогли точно отобразить степень этого ответа у людей. Следовательно, изучение эффектов терапии siRNA было сложной задачей.  

В последние годы были одобрены siRNA-терапии и созданы новые методы для преодоления этих проблем. Существуют одобренные терапии, доступные для коммерческого использования, и несколько в настоящее время находятся в стадии разработки и ожидают одобрения. [7] [8]

Механизм

Механизм, посредством которого природная siRNA вызывает подавление генов посредством подавления трансляции, происходит следующим образом:

Механизм siRNA
  1. Длинная dsRNA (которая может происходить из шпильки, комплементарных РНК и РНК-зависимых РНК-полимераз) расщепляется эндорибонуклеазой под названием Dicer . Dicer разрезает длинную dsRNA, образуя короткую интерферирующую РНК или siRNA; это то, что позволяет молекулам образовывать комплекс подавления, индуцированный РНК (RISC).
  2. После того, как siRNA проникает в клетку, она встраивается в другие белки, образуя RISC .
  3. После того как siRNA становится частью комплекса RISC, она раскручивается, образуя одноцепочечную siRNA.
  4. Цепь, которая термодинамически менее стабильна из-за спаривания оснований на 5'-конце, выбирается так, чтобы оставаться частью RISC-комплекса.
  5. Одноцепочечная siRNA, которая является частью комплекса RISC, теперь может сканировать и находить комплементарную мРНК
  6. Как только одноцепочечная siRNA (часть комплекса RISC) связывается с целевой мРНК, она вызывает расщепление мРНК .
  7. Теперь мРНК разрезается и распознается клеткой как аномальная. Это вызывает деградацию мРНК и, в свою очередь, отсутствие трансляции мРНК в аминокислоты, а затем и в белки. Таким образом, ген, кодирующий эту мРНК, подавляется.

siRNA также похожа на miRNA , однако miRNA происходят от более коротких продуктов РНК-петли. miRNA обычно подавляют гены путем подавления трансляции и обладают более широкой специфичностью действия, в то время как siRNA обычно работают с более высокой специфичностью, расщепляя мРНК перед трансляцией со 100% комплементарностью. [9] [10]

Индукция РНК-интерференции с использованием siRNA или их биосинтетических предшественников

Белок Dicer окрашен по домену белка .

Нокдаун гена путем трансфекции экзогенной siRNA часто неудовлетворителен, поскольку эффект является лишь временным, особенно в быстро делящихся клетках. Это можно преодолеть, создав вектор экспрессии для siRNA. Последовательность siRNA модифицируется для введения короткой петли между двумя цепями. Полученный транскрипт представляет собой короткую шпилечную РНК (shRNA), которая может быть преобразована в функциональную siRNA с помощью Dicer обычным способом. [11] Типичные транскрипционные кассеты используют промотор РНК-полимеразы III (например, U6 или H1) для управления транскрипцией малых ядерных РНК (мяРНК) (U6 участвует в сплайсинге РНК ; H1 является компонентом РНКазы человеческой РНКазы P). Предполагается, что полученный транскрипт siRNA затем обрабатывается Dicer .

Эффективность подавления генов также можно повысить, используя сжатие клеток . [12]

Активность siRNA в RNAi во многом зависит от ее способности связываться с комплексом РНК-индуцированного сайленсинга (RISC). Связывание дуплексной siRNA с RISC сопровождается раскручиванием и расщеплением смысловой цепи эндонуклеазами. Оставшийся комплекс антисмысловой цепи-RISC затем может связываться с целевыми мРНК для инициирования транскрипционного сайленсинга. [13]

активация РНК

Было обнаружено, что dsRNA также может активировать экспрессию генов, механизм, который был назван «малой РНК-индуцированной активацией генов» или RNAa . Было показано, что dsRNA, нацеленные на промоторы генов, вызывают мощную транскрипционную активацию связанных генов. RNAa была продемонстрирована в клетках человека с использованием синтетических dsRNA, названных « малыми активирующими РНК » (saRNA). В настоящее время неизвестно, насколько консервативна RNAa в других организмах. [14] Один отчет по комару Aedes aegypti показал, что есть некоторые доказательства для RNAa, и ее можно достичь с помощью коротких или длинных dsRNA, нацеленных на промоторные области. [15]

Посттранскрипционное подавление генов

Посттранскрипционное подавление генов, вызванное siRNA, инициируется сборкой комплекса подавления, вызванного РНК (RISC). Комплекс подавляет экспрессию определенных генов, расщепляя молекулы мРНК, кодирующие целевые гены. Чтобы начать процесс, одна из двух цепей siRNA, направляющая цепочка (антисмысловая цепочка), будет загружена в RISC, в то время как другая цепочка, пассажирская цепочка (смысловая цепочка), будет деградирована. Определенные ферменты Dicer могут быть ответственны за загрузку направляющей цепочки в RISC. [16] Затем siRNA сканирует и направляет RISC к идеально комплементарной последовательности на молекулах мРНК. [17] Считается, что расщепление молекул мРНК катализируется доменом Piwi белков Argonaute RISC. Затем молекула мРНК разрезается точно путем расщепления фосфодиэфирной связи между целевыми нуклеотидами, которые спарены с остатками siRNA 10 и 11, считая с 5'-конца. [18] Это расщепление приводит к фрагментам мРНК, которые далее разрушаются клеточными экзонуклеазами . 5'-фрагмент разрушается с 3'-конца экзосомой , в то время как 3'-фрагмент разрушается с 5'-конца 5'-3'-экзорибонуклеазой 1 ( XRN1 ). [19] Диссоциация целевой цепи мРНК от RISC после расщепления позволяет подавить больше мРНК. Этот процесс диссоциации, вероятно, стимулируется внешними факторами, вызванными гидролизом АТФ . [18]

Иногда расщепление целевой молекулы мРНК не происходит. В некоторых случаях эндонуклеолитическое расщепление фосфодиэфирного остова может быть подавлено несовпадением siRNA и целевой мРНК вблизи сайта расщепления. В других случаях белки Argonaute RISC не обладают эндонуклеазной активностью, даже когда целевая мРНК и siRNA идеально спарены. [18] В таких случаях экспрессия гена будет подавлена ​​механизмом, индуцированным miRNA [17]

Упрощенная версия метода пинг-понга, в которой белки Aubergine (Aub) и Argonaute-3 (Ago3) расщепляют 3'- и 5'-концы piRNA.

[2]

Piwi-взаимодействующие РНК отвечают за подавление транспозонов и не являются siRNA. [20] PIWI-взаимодействующие РНК (piRNA) — это недавно открытый класс малых некодирующих РНК (ncRNA) длиной 21–35 нуклеотидов. Они играют роль в регуляции экспрессии генов, подавлении транспозонов и ингибировании вирусных инфекций. Когда-то считавшиеся «темной материей» ncRNA, piRNA стали важными игроками во множестве клеточных функций в различных организмах. [21]

Транскрипционное подавление генов

Многие модельные организмы, такие как растения ( Arabidopsis thaliana ), дрожжи ( Saccharomyces cerevisiae ), мухи ( Drosophila melanogaster ) и черви ( C. elegans ), использовались для изучения подавления транскрипционных генов, управляемого малыми некодирующими РНК. В клетках человека подавление транскрипционных генов, управляемое РНК, наблюдалось десять лет назад, когда экзогенные siRNA подавили трансгенный промотор фактора удлинения 1 α, управляющий репортерным геном зеленого флуоресцентного белка (GFP). [22] Основные механизмы подавления транскрипционных генов (TGS), включающие аппарат РНК-интерференции, включают метилирование ДНК, посттрансляционные модификации гистонов и последующее ремоделирование хроматина вокруг целевого гена в гетерохроматиновое состояние. [22] SiRNA могут быть включены в комплекс подавления транскрипции, индуцированного РНК (RITS). Активный комплекс RITS запускает образование гетерохроматина вокруг ДНК, соответствующей siRNA, эффективно подавляя гены в этой области ДНК.

Применение: Аллель-специфическое подавление генов

Одним из эффективных применений siRNA является способность различать целевую и нецелевую последовательности с разницей в один нуклеотид. Этот подход считается терапевтически важным для расстройств с доминантным усилением функции подавления (GOF), где мутантный аллель, вызывающий заболевание, отличается от wt-аллеля одним нуклеотидом (nt). Эти типы siRNA, способные различать разницу в один нуклеотид, называются аллель-специфичными siRNA. [2]

ASP-РНКi — это инновационная категория РНКi, целью которой является подавление доминирующего мутантного аллеля при сохранении экспрессии соответствующего нормального аллеля со спецификой однонуклеотидных различий между ними. [2] ASP-siRNAs потенциально являются новой и лучшей альтернативой для лечения аутосомно-доминантных генетических заболеваний, особенно в случаях, когда экспрессия аллеля дикого типа имеет решающее значение для выживания организма, таких как болезнь Хантингтона (HD), дистония DYT1 (Gonzalez-Alegre et al. 2003, 2005), болезнь Альцгеймера (Sierant et al. 2011), болезнь Паркинсона (PD) (Takahashi et al. 2015), боковой амилоидный склероз (ALS) (Schwarz et al. 2006) и болезнь Мачадо–Джозефа (Alves et al. 2008). Их терапевтический потенциал также оценивался при различных заболеваниях кожи, таких как простой буллезный эпидермолиз (Atkinson et al. 2011), эпидермолитическая ладонно-подошвенная кератодермия (EPPK) (Lyu et al. 2016) и решетчатая дистрофия роговицы I типа (LCDI) (Courtney et al. 2014). [2]

Проблемы: избежание неспецифических эффектов

РНК-интерференция пересекается с рядом других путей; по состоянию на 2010 год неудивительно, что иногда неспецифические эффекты вызываются экспериментальным введением siRNA. [23] [24] Когда клетка млекопитающего сталкивается с двухцепочечной РНК, такой как siRNA, она может ошибочно принять ее за вирусный побочный продукт и вызвать иммунный ответ. Кроме того, поскольку структурно связанные микроРНК модулируют экспрессию генов в основном посредством неполного комплементарного взаимодействия пар оснований с целевой мРНК , введение siRNA может вызвать непреднамеренное нецелевое воздействие. Химические модификации siRNA могут изменить термодинамические свойства, что также приводит к потере специфичности отдельных нуклеотидов. [25]

Врожденный иммунитет

Введение слишком большого количества siRNA может привести к неспецифическим событиям из-за активации врожденных иммунных реакций. [26] Большинство имеющихся на сегодняшний день данных свидетельствуют о том, что это, вероятно, связано с активацией сенсора dsRNA PKR, хотя также может быть задействован ген I, индуцируемый ретиноевой кислотой (RIG-I). [27] Также была описана индукция цитокинов через toll-подобный рецептор 7 (TLR7). Химическая модификация siRNA используется для снижения активации врожденного иммунного ответа для функции гена и терапевтических применений. Одним из перспективных методов снижения неспецифических эффектов является преобразование siRNA в микроРНК. [28] МикроРНК встречаются в природе, и, используя этот эндогенный путь, можно достичь аналогичного нокдауна гена при сравнительно низких концентрациях полученных siRNA. Это должно минимизировать неспецифические эффекты.

Нецелевой

Нецелевое использование является еще одной проблемой использования siRNA в качестве инструмента для подавления генов. [24] Здесь гены с неполной комплементарностью непреднамеренно подавляются siRNA (по сути, siRNA действует как miRNA), что приводит к проблемам в интерпретации данных и потенциальной токсичности. Однако это можно частично решить путем разработки соответствующих контрольных экспериментов, и в настоящее время разрабатываются алгоритмы проектирования siRNA для получения siRNA, свободных от нецелевого использования. Затем для проверки этого и дальнейшего уточнения алгоритмов можно использовать анализ экспрессии по всему геному, например, с помощью технологии микрочипов. В статье 2006 года из лаборатории доктора Хворовой говорится о 6- или 7-парных участках от позиции 2 и далее в сопоставлении siRNA с областями 3'UTR в нецелевых генах. [29] Инструмент для прогнозирования нецелевых siRNA доступен по адресу http://crdd.osdd.net/servers/aspsirna/asptar.php и опубликован как ресурс ASPsiRNA. [30]

Адаптивные иммунные реакции

Простые РНК могут быть плохими иммуногенами, но антитела могут быть легко созданы против комплексов РНК-белок. Многие аутоиммунные заболевания наблюдают эти типы антител. Пока не было сообщений об антителах против siRNA, связанных с белками. Некоторые методы доставки siRNA присоединяют полиэтиленгликоль (PEG) к олигонуклеотиду, уменьшая выведение и улучшая период полураспада в кровотоке. Однако недавно крупное исследование фазы III ПЭГилированного РНК-аптамера против фактора IX пришлось прекратить Regado Biosciences из-за тяжелой анафилактической реакции на часть ПЭГ РНК. Эта реакция привела к смерти в некоторых случаях и вызывает серьезные опасения относительно доставки siRNA, когда задействованы ПЭГилированные олигонуклеотиды. [31]

Насыщенность аппарата РНК-интерференции

Трансфекция siRNA в клетки обычно снижает экспрессию многих генов, однако также наблюдается повышение регуляции генов. Повышение регуляции экспрессии генов может быть частично объяснено предсказанными генными мишенями эндогенных miRNA. Вычислительный анализ более 150 экспериментов по трансфекции siRNA поддерживает модель, в которой экзогенные siRNA могут насыщать эндогенный аппарат RNAi, что приводит к дерепрессии эндогенных генов, регулируемых miRNA. [32] Таким образом, в то время как siRNA могут вызывать нежелательные нецелевые эффекты, т. е. непреднамеренную нисходящую регуляцию мРНК посредством частичного совпадения последовательности между siRNA и целью, насыщение аппарата RNAi является другим отчетливым неспецифическим эффектом, который включает дерепрессию генов, регулируемых miRNA, и приводит к аналогичным проблемам в интерпретации данных и потенциальной токсичности. [33]

Химическая модификация

siRNA были химически модифицированы для улучшения их терапевтических свойств. Короткая интерферирующая РНК (siRNA) должна быть доставлена ​​к месту действия в клетках целевых тканей, чтобы RNAi выполнила свое терапевтическое обещание. Подробная база данных всех таких химических модификаций вручную курируется как siRNAmod в научной литературе. [34] Химическая модификация siRNA также может непреднамеренно привести к потере однонуклеотидной специфичности. [35]

Терапевтические применения и проблемы

Учитывая возможность подавления, по сути, любого интересующего гена, РНК-интерференция посредством siRNA вызвала большой интерес как в фундаментальной [36] , так и в прикладной биологии. [37]

Одной из самых больших проблем для терапии на основе siRNA и RNAi является внутриклеточная доставка. [38] siRNA также имеет слабую стабильность и фармакокинетическое поведение. [39] Доставка siRNA с помощью наночастиц показала себя многообещающей. [38] siRNA олигонуклеотиды in vivo уязвимы к деградации плазменными и тканевыми эндонуклеазами и экзонуклеазами [40] и показали лишь слабую эффективность в локализованных местах доставки, таких как человеческий глаз. [41] Доставка чистой ДНК в целевые организмы является сложной задачей, поскольку ее большой размер и структура не позволяют ей легко диффундировать через мембраны . [38] siRNA олигонуклеотиды обходят эту проблему благодаря своему небольшому размеру в 21-23 олигонуклеотида. [42] Это позволяет осуществлять доставку с помощью наномасштабных средств доставки, называемых нановекторами. [41]

Хороший нановектор для доставки siRNA должен защищать siRNA от деградации, обогащать siRNA в целевом органе и способствовать клеточному поглощению siRNA. [40] Три основные группы нановекторов siRNA: на основе липидов, на основе нелипидных органических веществ и неорганические. [40] Нановекторы на основе липидов отлично подходят для доставки siRNA в солидные опухоли, [40] но для других видов рака могут потребоваться другие нановекторы на основе нелипидных органических веществ, такие как наночастицы на основе циклодекстрина . [40] [43]

Было показано, что siRNA, доставляемые с помощью липидных наночастиц, обладают терапевтическим потенциалом при расстройствах центральной нервной системы ( ЦНС) . [44] Расстройства центральной нервной системы встречаются нередко, но гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) часто блокирует доступ потенциальных терапевтических средств к мозгу . [44] Было показано, что siRNA, которые нацелены на белки оттока на поверхности ГЭБ и подавляют их, увеличивают проницаемость ГЭБ. [44] siRNA, доставляемые с помощью липидных наночастиц, способны полностью пересекать ГЭБ. [44]

Огромной трудностью в доставке siRNA является проблема нецелевого воздействия. [38] [41] Поскольку гены считываются в обоих направлениях, существует вероятность того, что даже если предполагаемая антисмысловая цепь siRNA будет считана и выведет целевую мРНК, смысловая цепь siRNA может нацелиться на другой белок, участвующий в другой функции. [45]

Результаты первой фазы первых двух терапевтических испытаний РНК-интерференции (показанных для лечения возрастной макулярной дегенерации , или ВМД) в конце 2005 года показали, что siRNA хорошо переносятся и обладают подходящими фармакокинетическими свойствами. [46]

В клиническом исследовании фазы 1 41 пациенту с запущенным раком, метастазирующим в печень, вводили РНК-интерференцию, доставляемую через липидные наночастицы . РНК-интерференция была нацелена на два гена, кодирующих ключевые белки в росте раковых клеток, фактор роста эндотелия сосудов ( VEGF ) и белок веретена кинезина ( KSP ). Результаты показали клинические преимущества, при этом рак либо стабилизировался через шесть месяцев, либо у некоторых пациентов наблюдалась регрессия метастазов. Фармакодинамический анализ образцов биопсии пациентов выявил наличие конструкций РНК-интерференции в образцах, что доказывает, что молекулы достигли намеченной цели. [47] [48]

Испытания, подтверждающие концепцию, показали, что siRNA, нацеленные на вирус Эбола, могут быть эффективны в качестве профилактики после заражения людей, при этом 100% нечеловекообразных приматов выживают после смертельной дозы вируса Эбола Заира, самого смертоносного штамма. [49]

Юридическая категоризация и правовые вопросы в ближайшем будущем

В настоящее время SiRNA синтезируются химически и, таким образом, юридически классифицируются в ЕС и США как простые лекарственные средства. Но поскольку биоинженерные siRNA (BERA) находятся в стадии разработки, они будут классифицироваться как биологические лекарственные средства, по крайней мере, в ЕС. Развитие технологии BERA поднимает вопрос о категоризации лекарств, имеющих тот же механизм действия, но производимых химическим или биологическим путем. Это отсутствие согласованности следует устранить. [50]

Внутриклеточная доставка

Существует большой потенциал для терапевтического использования РНК-интерференции (РНКi) для обратимого подавления любого гена. Для того чтобы РНКi реализовала свой терапевтический потенциал, малая интерферирующая РНК (siRNA) должна быть доставлена ​​к месту действия в клетках тканей-мишеней. Но поиск безопасных и эффективных механизмов доставки является основным препятствием для достижения полного потенциала терапии на основе siRNA. Немодифицированная siRNA нестабильна в кровотоке, может вызывать иммуногенность и с трудом перемещается через клеточные мембраны. [51]  В результате для безопасной передачи siRNA к месту ее действия необходимы химические изменения и/или инструменты доставки. [51] Существует три основных метода доставки siRNA, которые различаются по эффективности и токсичности.

Трансфекция

В этой технике siRNA сначала должна быть разработана против целевого гена. После того, как siRNA настроена против гена, она должна быть эффективно доставлена ​​через протокол трансфекции. Доставка обычно осуществляется с помощью катионных липосом , полимерных наночастиц и липидной конъюгации. [52] Этот метод выгоден, поскольку он может доставлять siRNA в большинство типов клеток, имеет высокую эффективность и воспроизводимость и предлагается на коммерческой основе. Наиболее распространенными коммерческими реагентами для трансфекции siRNA являются Lipofectamine и Neon Transfection. Однако он совместим не со всеми типами клеток и имеет низкую эффективность in vivo. [53] [54]

Электропорация

Электрические импульсы также используются для внутриклеточной доставки siRNA в клетки. Клеточная мембрана состоит из фосфолипидов, что делает ее восприимчивой к электрическому полю. Когда инициируются быстрые, но мощные электрические импульсы, липидные молекулы переориентируются, подвергаясь термическим фазовым переходам из-за нагрева. Это приводит к образованию гидрофильных пор и локализованных возмущений в липидном бислое клеточной мембраны, что также вызывает временную потерю полупроницаемости. Это позволяет выходить многим внутриклеточным содержимым, таким как ионы и метаболиты, а также одновременно поглощать лекарства, молекулярные зонды и нуклеиновые кислоты. Для клеток, которые трудно трансфицировать, электропорация выгодна, однако при этой технике гибель клеток более вероятна. [55]

Этот метод использовался для доставки siRNA, нацеленной на VEGF, в ксенотрансплантированные опухоли у голых мышей, что привело к значительному подавлению роста опухоли. [56]

Вирусно-опосредованная доставка

Эффекты подавления генов трансфицированной разработанной siRNA, как правило, временны, но эту трудность можно преодолеть с помощью подхода RNAi. Доставка этой siRNA из шаблонов ДНК может быть осуществлена ​​с помощью нескольких рекомбинантных вирусных векторов на основе ретровируса, аденоассоциированного вируса, аденовируса и лентивируса . [57] Последний является наиболее эффективным вирусом, который стабильно доставляет siRNA в целевые клетки, поскольку он может трансдуцировать неделящиеся клетки, а также напрямую нацеливаться на ядро. [58] Эти специфические вирусные векторы были синтезированы для эффективного содействия siRNA, которая нежизнеспособна для трансфекции в клетки. Другой аспект заключается в том, что в некоторых случаях синтетические вирусные векторы могут интегрировать siRNA в клеточный геном, что обеспечивает стабильную экспрессию siRNA и долгосрочное подавление генов. Этот метод выгоден, поскольку он работает in vivo и эффективен для трудно трансфицируемых клеток. Однако возникают проблемы, поскольку он может вызывать противовирусные реакции в некоторых типах клеток, что приводит к мутагенным и иммуногенным эффектам.

Этот метод потенциально может быть использован для подавления генов центральной нервной системы с целью лечения болезни Хантингтона . [59]

Терапии

Спустя десятилетие после открытия механизма РНК-интерференции в 1993 году фармацевтический сектор активно инвестировал в исследования и разработку терапии siRNA. Эта терапия имеет несколько преимуществ по сравнению с малыми молекулами и антителами. Ее можно вводить ежеквартально или каждые шесть месяцев. Еще одним преимуществом является то, что в отличие от малых молекул и моноклональных антител, которым необходимо распознавать специфическую конформацию белка, siRNA функционирует путем спаривания оснований Уотсона-Крика с мРНК. Таким образом, можно выбрать любую целевую молекулу, которую необходимо лечить с высокой аффинностью и специфичностью, если доступна правильная последовательность нуклеотидов. [39] Одной из самых больших проблем, которую необходимо было преодолеть исследователям, была идентификация и создание системы доставки, через которую терапия будет поступать в организм. И иммунная система часто ошибочно принимает терапию RNAi за остатки инфекционных агентов, которые могут вызвать иммунный ответ. [4] Животные модели неточно отображали степень иммунного ответа, которая наблюдалась у людей, и, несмотря на обещания в лечении, инвесторы отказались от RNAi. [4]

Однако было несколько компаний, которые продолжили разработку терапии РНК-интерференции для людей. Alnylam Pharmaceuticals , Sirna Therapeutics и Dicerna Pharmaceuticals — это немногие из компаний, которые все еще работают над выводом терапии РНК-интерференции на рынок. Было установлено, что почти все терапии siRNA, вводимые в кровоток, накапливаются в печени. Вот почему большинство ранних целей лекарств были заболеваниями, которые поражали печень. Повторные опытно-конструкторские работы также пролили свет на улучшение химического состава молекулы РНК для снижения иммунного ответа, впоследствии вызывая мало или вообще не вызывая побочных эффектов. [60] Ниже перечислены некоторые из одобренных методов лечения или методов лечения, находящихся в разработке.

Alnylam Фармасьютикалс

В 2018 году Alnylam Pharmaceuticals стала первой компанией, терапия которой siRNA была одобрена FDA . Препарат Onpattro (патисиран) был одобрен для лечения полинейропатии наследственного транстиретин-опосредованного (hATTR) амилоидоза у взрослых. hATTR — редкое, прогрессирующее изнурительное состояние. При амилоидозе hATTR неправильно свернутый белок транстиретина (TTR) откладывается во внеклеточном пространстве. При типичных условиях сворачивания тетрамеры TTR состоят из четырех мономеров. Наследственный амилоидоз ATTR вызывается ошибкой или мутацией в гене транстиретина (TTR), который передается по наследству. Изменение всего одной аминокислоты изменяет тетрамерные белки транстиретина, что приводит к нестабильному тетрамерному белку транстиретина, который агрегирует в мономеры и образует нерастворимые внеклеточные амилоидные отложения. Накопление амилоида в различных системах органов вызывает кардиомиопатию, полинейропатию, желудочно-кишечную дисфункцию. Это затрагивает 50 000 человек по всему миру. Для доставки препарата непосредственно в печень siRNA заключена в липидную наночастицу. Молекула siRNA останавливает выработку амилоидных белков, вмешиваясь в выработку РНК аномальных белков TTR. Это предотвращает накопление этих белков в различных органах тела и помогает пациентам справиться с этим заболеванием. [61] [62]

Традиционно трансплантация печени была стандартным лечением наследственного транстиретинового амилоидоза, однако ее эффективность может быть ограничена постоянным отложением дикого типа транстиретинового амилоида после трансплантации. Существуют также препараты с малыми молекулами, которые обеспечивают временное облегчение. До того, как был выпущен Onpattro, варианты лечения hATTR были ограничены. После одобрения Onpattro FDA присвоило Alnylam статус прорывной терапии, который присваивается препаратам, предназначенным для лечения серьезных заболеваний и являющимся существенным улучшением по сравнению с любой доступной терапией. Ему также были присвоены статусы сиротских препаратов, присваиваемые тем видам лечения, которые предназначены для безопасного лечения заболеваний, затрагивающих менее 200 000 человек. [63]

Наряду с Onpattro был также обнаружен другой терапевтический препарат РНК-интерференции (Partisiran), обладающий свойством ингибировать синтез транстиретина в печени. Целевая информационная РНК (мРНК) расщепляется в результате крошечными интерферирующими РНК, связанными с комплексом подавления РНК-индуцированного . Patisiran, исследуемый терапевтический препарат РНК-интерференции, использует этот процесс для снижения продукции мутантного и дикого типа транстиретина путем расщепления на 3-нетранслируемой области мРНК транстиретина. [64]

В 2019 году FDA одобрило вторую терапию РНК-интерференцией, Givlaari (гивосиран), используемую для лечения острой печеночной порфирии (ОГП). Заболевание вызвано накоплением токсичных молекул порфобилиногена (ПБГ), которые образуются при производстве гема. Эти молекулы накапливаются в различных органах, что может привести к симптомам или приступам ОГП.

Givlaari — это препарат siRNA, который подавляет экспрессию синтазы аминолевулиновой кислоты 1 (ALAS1), фермента печени, участвующего в раннем этапе производства гема. Подавление ALAS1 снижает уровни нейротоксичных промежуточных продуктов, которые вызывают симптомы AHP. [39]

Годы исследований привели к более глубокому пониманию терапии siRNA, выходящей за рамки тех, которые влияют на печень. По состоянию на 2019 год Alnylam Pharmaceuticals участвовала в терапии, которая может лечить амилоидоз и расстройства ЦНС, такие как болезнь Хантингтона и болезнь Альцгеймера . [4] Они также сотрудничали с Regeneron Pharmaceuticals для разработки терапии заболеваний ЦНС, глаз и печени.

По состоянию на 2020 год ONPATTRO и GIVLAARI были доступны для коммерческого применения, а две siRNA, lumasiran (ALN-GO1) и inclisiran , были поданы на рассмотрение в FDA для подачи заявки на новые лекарства. Несколько siRNA проходят клинические исследования фазы 3, и еще больше кандидатов находятся на ранней стадии разработки. [39] В 2020 году Alnylam и Vir Pharmaceuticals объявили о партнерстве и начали работу над терапией RNAi, которая будет лечить тяжелые случаи COVID-19. [65]

Другие компании, которые добились успеха в разработке линейки siRNA-терапии, — это Dicerna Pharmaceuticals в партнерстве с Eli Lilly and Company и Arrowhead Pharmaceuticals в партнерстве с Johnson and Johnson . Несколько других крупных фармацевтических компаний, таких как Amgen и AstraZeneca, также вложили значительные средства в siRNA-терапию, поскольку они видят потенциальный успех этой области биологических препаратов. [66]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Лагана А, Венециано Д, Руссо Ф, Пульвиренти А, Джуньо Р, Кроче СМ, Ферро А (2015). «Вычислительный дизайн искусственных молекул РНК для регуляции генов». РНК Биоинформатика . Методы молекулярной биологии. Том. 1269. стр. 393–412. дои : 10.1007/978-1-4939-2291-8_25. ISBN 978-1-4939-2290-1. PMC  4425273 . PMID  25577393.
  2. ^ abcdef Monga I, Qureshi A, Thakur N, Gupta AK, Kumar M (2017). «ASPsiRNA: Ресурс ASP-siRNA, имеющих терапевтический потенциал для генетических заболеваний человека, и алгоритм прогнозирования их ингибирующей эффективности». G3: Гены, геномы, генетика . 7 (9): 2931–2943. doi : 10.1534/g3.117.044024. PMC 5592921. PMID  28696921 .  Текст скопирован из этого источника, который доступен по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International.
  3. ^ Bernstein E , Caudy AA, Hammond SM, Hannon GJ (январь 2001 г.). «Роль бидентатной рибонуклеазы на этапе инициации РНК-интерференции». Nature . 409 (6818): 363–6. Bibcode :2001Natur.409..363B. doi :10.1038/35053110. PMID  11201747. S2CID  4371481.
  4. ^ abcde Eisenstein M (16 октября 2019 г.). «Американские горки в отношениях фармацевтики с РНК-терапией». Nature . 574 (7778): S4–S6. Bibcode :2019Natur.574S...4E. doi :10.1038/d41586-019-03069-3. S2CID  204741280.
  5. ^ Hamilton AJ, Baulcombe DC (октябрь 1999 г.). «Вид малых антисмысловых РНК в посттранскрипционном подавлении генов у растений». Science . 286 (5441): 950–2. doi :10.1126/science.286.5441.950. PMID  10542148. S2CID  17480249.
  6. ^ Elbashir SM, Harborth J, Lendeckel W, Yalcin A, Weber K, Tuschl T (май 2001 г.). «Дуплексы РНК из 21 нуклеотида опосредуют интерференцию РНК в культивируемых клетках млекопитающих». Nature . 411 (6836): 494–8. Bibcode :2001Natur.411..494E. doi :10.1038/35078107. PMID  11373684. S2CID  710341.
  7. ^ Чен, Чжихан; Кришнамачари, Баладжи; Пачечо-Торрес, Иисус; Пенет, Мари-Франс; Бхуджвалла, Завер М. (март 2020 г.). «Тераностические малые интерферирующие РНК-наночастицы в прецизионной наномедицине рака». WIREs Nanomedicine and Nanobiotechnology . 12 (2): e1595. doi :10.1002/wnan.1595. ISSN  1939-5116. PMC 7360334. PMID 31642207  . 
  8. ^ «Новый вид препарата, подавляющий гены, получил одобрение FDA». The Wall Street Journal . 10 августа 2018 г. Получено 26 марта 2021 г.
  9. ^ Куреши А, Такур Н, Монга И, Такур А, Кумар М (1 января 2014 г.). «VIRmiRNA: всеобъемлющий ресурс для экспериментально подтвержденных вирусных miRNA и их целей». База данных . 2014 : bau103. doi :10.1093/database/bau103. PMC 4224276. PMID  25380780 . 
  10. ^ Mack GS (июнь 2007 г.). «МикроРНК приступает к делу». Nature Biotechnology . 25 (6): 631–8. doi :10.1038/nbt0607-631. PMID  17557095. S2CID  35357127.
  11. ^ "РНК-интерференция (РНКi)" . Получено 27 июля 2018 г.
  12. ^ Sharei A, Zoldan J, Adamo A, Sim WY, Cho N, Jackson E и др. (февраль 2013 г.). «Безвекторная микрожидкостная платформа для внутриклеточной доставки». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 110 (6): 2082–7. Bibcode : 2013PNAS..110.2082S. doi : 10.1073/pnas.1218705110 . PMC 3568376. PMID  23341631 . 
  13. ^ Дэнехолт, Б. (2006). «Расширенная информация: РНК-интерференция». Премия за новинку в области физиологии и медицины .
  14. ^ Li LC (2008). «Активация генов, опосредованная малыми РНК». В Morris KV (ред.). РНК и регуляция экспрессии генов: скрытый уровень сложности . Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-25-7.
  15. ^ De Hayr L, Asad S, Hussain M, Asgari S (2020). «Активация РНК у насекомых: целевая активация эндогенных и экзогенных генов». Insect Biochem Mol Biol . 119 : 103325. Bibcode : 2020IBMB..11903325D. doi : 10.1016/j.ibmb.2020.103325. PMID  31978586. S2CID  210891954.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  16. ^ Lee YS, Nakahara K, Pham JW, Kim K, He Z, Sontheimer EJ, Carthew RW (апрель 2004 г.). «Различные роли Dicer-1 и Dicer-2 у дрозофилы в путях подавления siRNA/miRNA». Cell . 117 (1): 69–81. doi : 10.1016/s0092-8674(04)00261-2 . PMID  15066283. S2CID  6683459.
  17. ^ ab Carthew RW, Sontheimer EJ (февраль 2009 г.). «Происхождение и механизмы микроРНК и siRNA». Cell . 136 (4): 642–55. doi :10.1016/j.cell.2009.01.035. PMC 2675692 . PMID  19239886. 
  18. ^ abc Tomari Y, Zamore PD (март 2005 г.). «Перспектива: машины для РНК-интерференции». Гены и развитие . 19 (5): 517–29. doi : 10.1101/gad.1284105 . PMID  15741316.
  19. ^ Orban TI, Izaurralde E (апрель 2005 г.). «Распад мРНК, нацеленный на RISC, требует XRN1, комплекса Ski и экзосомы». РНК . 11 (4): 459–69. doi :10.1261/rna.7231505. PMC 1370735 . PMID  15703439. 
  20. ^ Ozata DM, Gainetdinov I, Zoch A, Phillip D, Zamore PD (2019). "PIWI-взаимодействующие РНК: малые РНК с большими функциями" (PDF) . Nature Reviews Genetics . 20 (2): 89–108. doi :10.1038/s41576-018-0073-3. PMID  30446728. S2CID  53565676.
  21. ^ Монга И, Банерджи И (2019). «Вычислительная идентификация пиРНК с использованием признаков, основанных на последовательности РНК, структуре, термодинамических и физико-химических свойствах». Current Genomics . 20 (2): 508–518. doi :10.2174/1389202920666191129112705. PMC 7327968 . PMID  32655289. 
  22. ^ ab Marc S, Weinberg; Kevin V, Morris (август 2016 г.). «Транскрипционное подавление генов у людей». Nucleic Acids Research . 44 (14): 6505–6517. doi : 10.1093/nar/gkw139 . PMC 5001580. PMID  27060137 . 
  23. ^ Джексон АЛ, Линсли ПС (январь 2010 г.). «Распознавание и предотвращение нецелевых эффектов siRNA для идентификации цели и терапевтического применения». Nature Reviews Drug Discovery . 9 (1): 57–67. doi :10.1038/nrd3010. PMID  20043028. S2CID  20903257.
  24. ^ ab Woolf TM, Melton DA, Jennings CG (август 1992 г.). «Специфичность антисмысловых олигонуклеотидов in vivo». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 89 (16): 7305–9. Bibcode : 1992PNAS...89.7305W. doi : 10.1073/pnas.89.16.7305 . PMC 49698. PMID  1380154 . 
  25. ^ Dua P, Yoo JW, Kim S, Lee DK (сентябрь 2011 г.). «Модифицированная структура siRNA с однонуклеотидным выступом преодолевает обычное опосредованное siRNA подавление нецелевых сигналов». Molecular Therapy . 19 (9): 1676–87. doi :10.1038/mt.2011.109. PMC 3182346 . PMID  21673662. 
  26. ^ Whitehead KA, Dahlman JE, Langer RS, Anderson DG (17 июня 2011 г.). «Подавление или стимуляция? Доставка siRNA и иммунная система». Annual Review of Chemical and Biomolecular Engineering . 2 (1): 77–96. doi :10.1146/annurev-chembioeng-061010-114133. PMID  22432611. S2CID  28803811.
  27. ^ Matsumiya T, Stafforini DM (2010). «Функция и регуляция гена I, индуцируемого ретиноевой кислотой». Critical Reviews in Immunology . 30 (6): 489–513. doi :10.1615/critrevimmunol.v30.i6.10. PMC 3099591. PMID 21175414  . 
  28. ^ Barøy T, Sørensen K, Lindeberg MM, Frengen E (июнь 2010 г.). «shRNA-экспрессионные конструкции, разработанные непосредственно из siRNA-олигонуклеотидных последовательностей». Molecular Biotechnology . 45 (2): 116–20. doi :10.1007/s12033-010-9247-8. PMID  20119685. S2CID  24309609.
  29. ^ Бирмингем А., Андерсон Э.М., Рейнольдс А., Илсли-Тайри Д., Лик Д., Федоров Ю. и др. (март 2006 г.). «Совпадения семян 3' UTR, но не общая идентичность, связаны с РНК-интерференцией вне мишеней». Nature Methods . 3 (3): 199–204. doi :10.1038/nmeth854. PMID  16489337. S2CID  52809577.
  30. ^ Monga I, Qureshi A, Thakur N, Gupta AK, Kumar M (2017). «ASPsiRNA: Ресурс ASP-siRNA, имеющих терапевтический потенциал для генетических заболеваний человека, и алгоритм прогнозирования их ингибирующей эффективности». G3: Гены, геномы, генетика . 7 (9): 2931–2943. doi : 10.1534/g3.117.044024. PMC 5592921. PMID  28696921 . 
  31. ^ Wittrup A, Lieberman J (сентябрь 2015 г.). «Knocking down disease: a progress report on siRNA therapys». Nature Reviews. Genetics . 16 (9): 543–52. doi :10.1038/nrg3978. PMC 4756474. PMID 26281785  . 
  32. ^ Хан AA, Бетел Д, Миллер ML, Сандер К, Лесли CS, Маркс DS (июнь 2009 г.). «Трансфекция малых РНК глобально нарушает регуляцию генов эндогенными микроРНК». Nature Biotechnology . 27 (6): 549–55. doi :10.1038/nbt.1543. PMC 2782465 . PMID  19465925. 
  33. ^ Grimm D, Streetz KL, Jopling CL, Storm TA, Pandey K, Davis CR и др. (май 2006 г.). «Смерть у мышей из-за перенасыщения клеточных путей микроРНК/коротких шпилек РНК». Nature . 441 (7092): 537–41. Bibcode :2006Natur.441..537G. doi :10.1038/nature04791. PMID  16724069. S2CID  15118504.
  34. ^ Dar SA, Thakur A, Qureshi A, Kumar M (январь 2016 г.). "siRNAmod: База данных экспериментально подтвержденных химически модифицированных siRNA". Scientific Reports . 6 (1): 20031. Bibcode :2016NatSR...620031D. doi :10.1038/srep20031. PMC 4730238 . PMID  26818131. 
  35. ^ Hickerson RP, Smith FJ, Reeves RE, Contag CH, Leake D, Leachman SA и др. (март 2008 г.). «Нацеливание siRNA на отдельные нуклеотиды в модели доминантно-негативной кожи». Журнал исследовательской дерматологии . 128 (3): 594–605. CiteSeerX 10.1.1.465.8240 . doi :10.1038/sj.jid.5701060. PMID  17914454. 
  36. ^ Алексеев OM, Ричардсон RT, Алексеев O, О'Рэнд MG (май 2009). "Анализ профилей экспрессии генов в клетках HeLa в ответ на сверхэкспрессию или опосредованное siRNA истощение NASP". Репродуктивная биология и эндокринология . 7 (1): 45. doi : 10.1186/1477-7827-7-45 . PMC 2686705. PMID  19439102 . 
  37. ^ Mahfuz A, Khan MA, Sajib EH, Deb A, Mahmud S, Hasan M, Saha O, Islam A, Rahaman MM (август 2022 г.). «Проектирование потенциальных молекул siRNA для подавления гена нуклеокапсидного белка вируса Нипах: вычислительное исследование». Инфекция, генетика и эволюция: журнал молекулярной эпидемиологии и эволюционной генетики в инфекционных заболеваниях . 102 : 105310. Bibcode : 2022InfGE.10205310M. doi : 10.1016/j.meegid.2022.105310 . ISSN  1567-7257. PMID  35636695.
  38. ^ abcd Petrocca F, Lieberman J (февраль 2011 г.). «Перспективы и проблемы терапии рака на основе РНК-интерференции». Журнал клинической онкологии . 29 (6): 747–54. doi :10.1200/JCO.2009.27.6287. PMID  21079135. S2CID  15337692.
  39. ^ abcd Hu B, Zhong L, Weng Y, Peng L, Huang Y, Zhao Y, Liang XJ (июнь 2020 г.). «Терапевтические siRNA: современное состояние». Signal Transduction and Targeted Therapy . 5 (1): 101. doi :10.1038/s41392-020-0207-x. PMC 7305320 . PMID  32561705. 
  40. ^ abcde Shen H, Sun T, Ferrari M (июнь 2012 г.). «Нановекторная доставка siRNA для терапии рака». Cancer Gene Therapy . 19 (6): 367–73. doi :10.1038/cgt.2012.22. PMC 3842228. PMID  22555511 . 
  41. ^ abc Burnett JC, Rossi JJ (январь 2012 г.). «Терапия на основе РНК: текущий прогресс и будущие перспективы». Химия и биология . 19 (1): 60–71. doi :10.1016/j.chembiol.2011.12.008. PMC 3269031. PMID 22284355  . 
  42. ^ Elbashir SM, Lendeckel W, Tuschl T (январь 2001 г.). «РНК-интерференция опосредуется 21- и 22-нуклеотидными РНК». Genes & Development . 15 (2): 188–200. doi :10.1101/gad.862301. PMC 312613. PMID  11157775 . 
  43. ^ Heidel JD, Yu Z, Liu JY, Rele SM, Liang Y, Zeidan RK и др. (апрель 2007 г.). «Введение нечеловеческим приматам возрастающих внутривенных доз целевых наночастиц, содержащих субъединицу рибонуклеотидредуктазы M2 siRNA». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 104 (14): 5715–21. Bibcode : 2007PNAS..104.5715H. doi : 10.1073/pnas.0701458104 . PMC 1829492. PMID  17379663 . 
  44. ^ abcd Gomes MJ, Dreier J, Brewer J, Martins S, Brandl M, Sarmento B (апрель 2016 г.). «Новый подход к модели гематоэнцефалического барьера на основе фосфолипидных везикул: развитие мембраны и проницаемость наночастиц, загруженных siRNA». Журнал мембранной науки . 503 : 8–15. doi :10.1016/j.memsci.2016.01.002.
  45. ^ Шукла RS, Цинь Б, Ченг К (октябрь 2014 г.). «Пептиды, используемые для доставки малых некодирующих РНК». Молекулярная фармацевтика . 11 (10): 3395–408. doi :10.1021/mp500426r. PMC 4186677. PMID  25157701 . 
  46. ^ Tansey B (11 августа 2006 г.). «Перспективный глазной препарат от фирмы из Сан-Франциско / Лечение дегенерации желтого пятна мешает сообщениям РНК». SFGATE .
  47. ^ «Первое исследование на человеке демонстрирует терапевтический эффект подавления генов РНК-интерференции при лечении рака» (пресс-релиз). Институт онкологии Валь-д'Эброн. 11 февраля 2013 г.
  48. ^ Tabernero J, Shapiro GI, LoRusso PM, Cervantes A, Schwartz GK, Weiss GJ и др. (апрель 2013 г.). «Первое испытание на людях терапевтического метода интерференции РНК, нацеленного на VEGF и KSP у онкологических пациентов с поражением печени». Cancer Discovery . 3 (4): 406–17. doi : 10.1158/2159-8290.CD-12-0429 . PMID  23358650.
  49. ^ Geisbert TW, Lee AC, Robbins M, Geisbert JB, Honko AN, Sood V и др. (май 2010 г.). «Постконтактная защита нечеловекообразных приматов от смертельного заражения вирусом Эбола с помощью РНК-интерференции: исследование, подтверждающее концепцию». Lancet . 375 (9729): 1896–905. doi :10.1016/S0140-6736(10)60357-1. PMC 7138079 . PMID  20511019. 
  50. ^ Геррио, Матье; Кохли, Эвелин (2022). «Лекарства на основе РНК и регулирование: к необходимой эволюции определений, выданных законодательством Европейского союза». Frontiers in Medicine . 9. doi : 10.3389/fmed.2022.1012497 . ISSN  2296-858X . PMC 9618588. PMID 36325384  . 
  51. ^ ab Rosemary, Kanasty (2013). «Материалы для доставки терапевтических средств с помощью siRNA». Nat Mater . 12 (11): 967–977. Bibcode : 2013NatMa..12..967K. doi : 10.1038/nmat3765. PMID  24150415.
  52. ^ Fanelli A (2016). "Трансфекция: трансфекция in vitro" . Получено 5 декабря 2017 г.
  53. ^ Jensen K, Anderson JA, Glass EJ (апрель 2014 г.). «Сравнение доставки малых интерферирующих РНК (siRNA) в макрофаги, полученные из моноцитов быка, путем трансфекции и электропорации». Ветеринарная иммунология и иммунопатология . 158 (3–4): 224–32. doi :10.1016/j.vetimm.2014.02.002. PMC 3988888. PMID  24598124. 
  54. ^ Chatterjea MN (2012). Учебник медицинской биохимии (8-е изд.). Нью-Дели: Jaypee Brothers Medical Publishers. стр. 304.
  55. ^ «Методы доставки siRNA в клетки млекопитающих». 13 октября 2016 г.
  56. ^ Takei Y (2014). «Электропорационная-опосредованная доставка siRNA в опухоли». Протоколы электропорации . Методы в молекулярной биологии. Т. 1121. С. 131–8. doi :10.1007/978-1-4614-9632-8_11. ISBN 978-1-4614-9631-1. PMID  24510818.
  57. ^ Talwar GP, Hasnain S, Sarin SK (январь 2016 г.). Учебник по биохимии, биотехнологии, смежной и молекулярной медицине (4-е изд.). PHI Learning Private Limited. стр. 873. ISBN 978-81-203-5125-7.
  58. ^ Morris KV, Rossi JJ (март 2006 г.). «Лентивирусная доставка siRNA для противовирусной терапии». Gene Therapy . 13 (6): 553–8. doi :10.1038/sj.gt.3302688. PMC 7091755 . PMID  16397511. 
  59. ^ Cambon K, Déglon N (2013). «Lentiviral-Mediated Gene Transfer of siRNAs for the Treatment of Huntington's Disease». Протоколы тринуклеотидных повторов . Методы в молекулярной биологии. Т. 1010. С. 95–109. doi :10.1007/978-1-62703-411-1_7. ISBN 978-1-62703-410-4. PMID  23754221.
  60. ^ Tiemann K, Rossi JJ (июнь 2009 г.). «Терапия на основе РНК-интерференции — текущее состояние, проблемы и перспективы». EMBO Molecular Medicine . 1 (3): 142–51. doi :10.1002/emmm.200900023. PMC 3378126. PMID  20049714 . 
  61. ^ Ёнезава, Сэй; Коиде, Хироюки; Асаи, Томохиро (2020). «Последние достижения в доставке siRNA, опосредованной липидными наночастицами». Advanced Drug Delivery Reviews . 154 : 64–78. doi : 10.1016/j.addr.2020.07.022. ISSN  0169-409X. PMC 7406478. PMID 32768564  . 
  62. ↑ Комиссар, Офис (24 марта 2020 г.). «FDA одобряет первую в своем роде таргетную терапию на основе РНК для лечения редкого заболевания». FDA . Получено 24 мая 2021 г. .
  63. ^ «FDA одобряет первую в своем роде целевую терапию на основе РНК для лечения редкого заболевания» (пресс-релиз). Управление по контролю за продуктами и лекарствами США. 10 августа 2018 г.
  64. ^ Дэвид, Адамс (5 июля 2018 г.). «Патисиран, терапевтическое средство на основе РНК-интерференции для лечения наследственного транстиретинового амилоидоза». The New England Journal of Medicine . 379 (1): 11–21. doi : 10.1056/NEJMoa1716153 . hdl : 2445/138257 . PMID  29972753.
  65. ^ "Vir и Alnylam расширяют сотрудничество для продвижения исследовательских РНК-интерференционных терапевтических средств, нацеленных на факторы хозяина для t". Отношения с инвесторами | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Получено 24 мая 2021 г.
  66. ^ "Alnylam и Dicerna теперь друзья, что может обернуться проблемами для Arrowhead". BioPharma Dive . Получено 24 мая 2021 г.

Дальнейшее чтение

Внешние ссылки

На Викискладе есть медиафайлы по теме Малые интерферирующие РНК .