stringtranslate.com

Молекулярная биология

Молекулярная биология / m ə ˈ l ɛ k j ʊ l ər / — это раздел биологии , который стремится понять молекулярные основы биологической активности внутри и между клетками , включая биомолекулярный синтез, модификацию, механизмы и взаимодействия. [1] [2] [3]

Молекулярная биология была впервые описана как подход, направленный на изучение основ биологических явлений — раскрытие структур биологических молекул, а также их взаимодействий и того, как эти взаимодействия объясняют наблюдения классической биологии. [4]

Термин «молекулярная биология» впервые был использован в 1945 году физиком Уильямом Эстбери . В 1953 году Фрэнсис Крик , Джеймс Уотсон , Розалинд Франклин и коллеги, работавшие в Отделении Совета медицинских исследований Кавендишской лаборатории , создали модель двойной спирали ДНК . Они предложили структуру ДНК на основе предыдущих исследований, проведенных Франклином и Морисом Уилкинсом . Это привело к открытию материала ДНК у других микроорганизмов, растений и животных. [5]

Область молекулярной биологии включает методы, которые позволяют ученым изучать молекулярные процессы. [6] Эти методы используются для эффективного поиска новых лекарств , диагностики заболеваний и лучшего понимания физиологии клеток. [7] Некоторые клинические исследования и медицинские методы лечения, основанные на молекулярной биологии, подпадают под категорию генной терапии, тогда как использование молекулярной биологии или молекулярно-клеточной биологии в медицине теперь называется молекулярной медициной .

История молекулярной биологии

Описание угла в структуре ДНК
Схематическое изображение структуры ДНК Уотсона и Крика.

Молекулярная биология находится на стыке биохимии и генетики; По мере того как эти научные дисциплины возникли и развивались в 20 веке, стало ясно, что они обе стремятся определить молекулярные механизмы, лежащие в основе жизненно важных клеточных функций. [8] Достижения молекулярной биологии тесно связаны с разработкой новых технологий и их оптимизацией. [9] Молекулярная биология была объяснена работами многих ученых, и, таким образом, история этой области зависит от понимания этих ученых и их экспериментов. [ нужна цитата ]

Область генетики возникла как попытка понять молекулярные механизмы генетического наследования и структуру гена . Грегор Мендель стал пионером этой работы в 1866 году, когда он впервые написал законы генетического наследования, основанные на его исследованиях скрещивания растений гороха. [10] Одним из таких законов генетического наследования является закон сегрегации , который гласит, что диплоидные особи с двумя аллелями определенного гена передадут одну из этих аллелей своему потомству. [11] Из-за его критической работы изучение генетической наследственности обычно называют менделевской генетикой . [12]

Важнейшей вехой в молекулярной биологии стало открытие структуры ДНК . Эта работа началась в 1869 году Фридрихом Мишером , швейцарским биохимиком, который первым предложил структуру, называемую нуклеином , которая, как мы теперь знаем, представляет собой (дезоксирибонуклеиновую кислоту) или ДНК. [13] Он открыл это уникальное вещество, изучая компоненты гнойных повязок и отмечая уникальные свойства «фосфорсодержащих веществ». [14] Другим заметным автором модели ДНК был Феб Левен , который предложил «полинуклеотидную модель» ДНК в 1919 году в результате своих биохимических экспериментов на дрожжах. [15] В 1950 году Эрвин Чаргафф расширил работу Левена и объяснил несколько важных свойств нуклеиновых кислот: во-первых, последовательность нуклеиновых кислот варьируется у разных видов. [16] Во-вторых, общая концентрация пуринов (аденина и гуанина) всегда равна общей концентрации пиримидинов (цистеина и тимина). [13] Теперь это известно как правило Чаргаффа. В 1953 году Джеймс Уотсон и Фрэнсис Крик опубликовали двойную спиральную структуру ДНК [17] , используя работы по рентгеновской кристаллографии , выполненные Розалиндой Франклин и Морисом Уилкинсом . Уотсон и Крик описали структуру ДНК и высказали предположения о значении этой уникальной структуры для возможных механизмов репликации ДНК. [17] Уотсон и Крик были удостоены Нобелевской премии по физиологии и медицине в 1962 году вместе с Уилкинсом за предложение модели структуры ДНК. [5]

В 1961 году было продемонстрировано, что когда ген кодирует белок , три последовательных основания ДНК гена определяют каждую последующую аминокислоту белка. [18] Таким образом, генетический код представляет собой триплетный код, где каждый триплет (называемый кодоном ) определяет определенную аминокислоту. Кроме того, было показано, что кодоны не перекрываются друг с другом в последовательности ДНК, кодирующей белок, и что каждая последовательность считывается с фиксированной начальной точки. В 1962–1964 годах благодаря использованию условно летальных мутантов бактериального вируса [19] были достигнуты фундаментальные успехи в понимании функций и взаимодействий белков, участвующих в механизмах репликации ДНК , репарации ДНК , рекомбинации ДНК и при сборке молекулярных структур. [20]

Эксперимент Гриффита

Схематическое изображение эксперимента Гриффита.

В 1928 году Фредерик Гриффит обнаружил свойство вирулентности бактерий пневмококка, которое убивало лабораторных крыс. Согласно распространенному в то время Менделю, передача генов могла происходить только от родительских клеток к дочерним. Гриффит выдвинул другую теорию, заявив, что перенос генов, происходящий у представителей одного поколения, известен как горизонтальный перенос генов (HGT). Это явление теперь называется генетической трансформацией. [ нужна цитата ]

Эксперимент Гриффита касался бактерий Streptococcus pneumoniae , у которых было два разных штамма: один вирулентный и гладкий, а другой авирулентный и шероховатый. Гладкий штамм имел блестящий вид благодаря наличию особого типа полисахарида – капсулы полимера глюкозы и глюкуроновой кислоты. Из-за этого полисахаридного слоя бактерий иммунная система хозяина не может распознать бактерии и убивает хозяина. Другой, авирулентный, шероховатый штамм лишен этой полисахаридной капсулы и имеет тусклый, шероховатый вид. [ нужна цитата ]

Известно, что наличие или отсутствие капсулы у штамма генетически детерминировано. Гладкие и шероховатые деформации встречаются в нескольких различных типах, таких как SI, S-II, S-III и т. д. и RI, R-II, R-III и т. д. соответственно. Все эти подтипы бактерий S и R отличаются друг от друга типом продуцируемого ими антигена. [5]

Эксперимент Херши-Чейза

Эксперимент Херши-Чейза

Подтверждение того, что ДНК является генетическим материалом, вызывающим инфекцию, было получено в эксперименте Херши-Чейза . Для эксперимента они использовали кишечную палочку и бактериофаг. Этот эксперимент также известен как эксперимент с блендером, поскольку кухонный блендер использовался в качестве основного прибора. Альфред Херши и Марта Чейз продемонстрировали, что ДНК, введенная фаговой частицей в бактерию, содержит всю информацию, необходимую для синтеза фаговых частиц-потомков. Они использовали радиоактивность, чтобы пометить белковую оболочку бактериофага радиоактивной серой и ДНК радиоактивным фосфором в двух разных пробирках соответственно. После смешивания бактериофага и E.coli в пробирке начинается инкубационный период, в течение которого фаг трансформирует генетический материал в клетках E.coli . Затем смесь смешивают или взбалтывают, что отделяет фаг от клеток E.coli . Всю смесь центрифугировали, осадок, содержащий клетки E.coli , проверяли, а супернатант отбрасывали. В клетках E.coli был обнаружен радиоактивный фосфор, что указывало на то, что трансформированный материал представлял собой ДНК, а не белковую оболочку.

Трансформированная ДНК прикрепляется к ДНК E.coli , и радиоактивность наблюдается только на ДНК бактериофага. Эта мутировавшая ДНК может быть передана следующему поколению, и появилась теория трансдукции. Трансдукция — это процесс, при котором бактериальная ДНК переносит фрагмент бактериофага и передает его следующему поколению. Это также тип горизонтального переноса генов. [5]

Современная молекулярная биология

В начале 2020-х годов молекулярная биология вступила в золотой век, определяемый как вертикальным, так и горизонтальным техническим развитием. В вертикальном плане новые технологии позволяют в режиме реального времени отслеживать биологические процессы на атомном уровне. [21] Сегодня молекулярные биологи имеют доступ к все более доступным данным секвенирования на все более глубоких глубинах, что облегчает разработку новых методов генетических манипуляций с новыми немодельными организмами. Аналогичным образом, синтетические молекулярные биологи будут стимулировать промышленное производство малых и макромолекул путем введения экзогенных метаболических путей в различные линии прокариотических и эукариотических клеток. [22]

Горизонтально данные секвенирования становятся все более доступными и используются во многих различных научных областях. Это будет способствовать развитию промышленности в развивающихся странах и увеличит доступность для отдельных исследователей. Аналогичным образом эксперименты по редактированию генов CRISPR-Cas9 теперь могут быть задуманы и реализованы отдельными людьми менее чем за 10 000 долларов США на новых организмах, что будет способствовать развитию промышленных и медицинских приложений. [23]

Связь с другими биологическими науками

Схематическая связь между биохимией , генетикой и молекулярной биологией.

В следующем списке описывается точка зрения на междисциплинарные отношения между молекулярной биологией и другими смежными областями. [24]

Хотя исследователи практикуют методы, специфичные для молекулярной биологии, обычно они комбинируются с методами генетики и биохимии . Большая часть молекулярной биологии носит количественный характер, и в последнее время значительный объем работы был выполнен с использованием таких методов информатики, как биоинформатика и вычислительная биология . Молекулярная генетика , изучение структуры и функции генов, была одной из наиболее известных областей молекулярной биологии с начала 2000-х годов. Другие разделы биологии получают информацию от молекулярной биологии, либо напрямую изучая взаимодействия молекул сами по себе, например, в клеточной биологии и биологии развития , либо косвенно, когда молекулярные методы используются для вывода об исторических атрибутах популяций или видов , как в области эволюционной биологии , такие как популяционная генетика и филогенетика . В биофизике также существует давняя традиция изучения биомолекул «с нуля», или молекулярно . [27]

Методы молекулярной биологии

ДНК-анимация

Молекулярное клонирование

Трансдукционное изображение

Молекулярное клонирование используется для выделения и последующего переноса интересующей последовательности ДНК в плазмидный вектор. [28] Эта технология рекомбинантной ДНК была впервые разработана в 1960-х годах. [29] В этом методе последовательность ДНК , кодирующая интересующий белок, клонируется с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или ферментов рестрикции в плазмиду ( вектор экспрессии ). Плазмидный вектор обычно имеет как минимум три отличительные особенности: начало репликации, сайт множественного клонирования (MCS) и селективный маркер (обычно устойчивость к антибиотикам ). Кроме того, выше MCS находятся промоторные области и сайт начала транскрипции , которые регулируют экспрессию клонированного гена.

Эту плазмиду можно вставлять как в бактериальные, так и в животные клетки. Введение ДНК в бактериальные клетки может быть осуществлено путем трансформации путем поглощения обнаженной ДНК, конъюгации посредством межклеточного контакта или трансдукции с помощью вирусного вектора. Введение ДНК в эукариотические клетки, например клетки животных, физическими или химическими средствами называется трансфекцией . Доступно несколько различных методов трансфекции, таких как трансфекция фосфатом кальция, электропорация , микроинъекция и трансфекция липосом . Плазмида может быть интегрирована в геном , что приводит к стабильной трансфекции, или может оставаться независимой от генома и временно экспрессироваться, что называется временной трансфекцией. [30] [31]

ДНК, кодирующая интересующий белок, теперь находится внутри клетки, и теперь этот белок можно экспрессировать. Доступны различные системы, такие как индуцируемые промоторы и специфические клеточные сигнальные факторы, которые помогают экспрессировать интересующий белок на высоких уровнях. Затем из бактериальной или эукариотической клетки можно экстрагировать большие количества белка. Белок можно проверить на ферментативную активность в различных ситуациях, белок можно кристаллизовать для изучения его третичной структуры или, в фармацевтической промышленности, можно изучить активность новых лекарств против белка. [32]

Полимеразной цепной реакции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — чрезвычайно универсальный метод копирования ДНК. Короче говоря, ПЦР позволяет копировать или модифицировать определенную последовательность ДНК заранее определенным образом. Реакция чрезвычайно мощная и в идеальных условиях может амплифицировать одну молекулу ДНК до 1,07 миллиарда молекул менее чем за два часа. ПЦР имеет множество применений, включая изучение экспрессии генов, обнаружение патогенных микроорганизмов, обнаружение генетических мутаций и введение мутаций в ДНК. [33] Метод ПЦР можно использовать для введения сайтов рестрикционных ферментов на концы молекул ДНК или для мутации определенных оснований ДНК; последний метод называется сайт-направленным мутагенезом . ПЦР также можно использовать для определения того, обнаружен ли конкретный фрагмент ДНК в библиотеке кДНК . ПЦР имеет множество разновидностей, таких как ПЦР с обратной транскрипцией ( ОТ-ПЦР ) для амплификации РНК и, в последнее время, количественная ПЦР , которая позволяет количественно измерять молекулы ДНК или РНК. [34] [35]

Двухпроцентный агарозный гель в боратном буфере, отлитый в лотке для геля.

Гель-электрофорез

SDS-СТРАНИЦА

Гель-электрофорез — это метод разделения молекул по размеру с использованием агарозного или полиакриламидного геля. [36] Этот метод является одним из основных инструментов молекулярной биологии. Основной принцип заключается в том, что фрагменты ДНК можно разделить, пропуская через гель электрический ток — поскольку основная цепь ДНК содержит отрицательно заряженные фосфатные группы, ДНК будет мигрировать через агарозный гель к положительному концу тока. [36] Белки также можно разделить по размеру с использованием геля SDS-PAGE или по размеру и их электрическому заряду с помощью так называемого 2D-гель-электрофореза . [37]

Белки, окрашенные на геле PAGE красителем Кумасси синим.

Белковый анализ Брэдфорда

Анализ Брэдфорда — это метод молекулярной биологии, который позволяет быстро и точно определить количество белковых молекул, используя уникальные свойства красителя Coomassie Brilliant Blue G-250. [38] Кумасси синий претерпевает видимый сдвиг цвета от красновато-коричневого до ярко-синего при связывании с белком. [38] В нестабильном катионном состоянии кумасси синий имеет фоновую длину волны 465 нм и излучает красновато-коричневый цвет. [39] Когда кумасси синий связывается с белком в кислом растворе, длина волны фона смещается до 595 нм, и краситель приобретает ярко-синий цвет. [39] Белки, участвовавшие в анализе, связываются с кумасси синим примерно за 2 минуты, а комплекс белок-краситель стабилен в течение примерно часа, хотя рекомендуется измерять поглощение в течение 5–20 минут после начала реакции. [38] Концентрацию белка в анализе Брэдфорда можно затем измерить с помощью спектрофотометра видимого света , и поэтому не требуется обширное оборудование. [39]

Этот метод был разработан в 1975 году Мэрион М. Брэдфорд и позволил значительно быстрее и точнее количественно определить белок по сравнению с предыдущими методами: процедурой Лоури и биуретовым анализом. [38] В отличие от предыдущих методов, анализ Брэдфорда не подвержен помехам со стороны нескольких небелковых молекул, включая этанол, хлорид натрия и хлорид магния. [38] Однако он подвержен влиянию сильных щелочных буферных агентов, таких как додецилсульфат натрия (SDS). [38]

Блоттинг и зондирование макромолекул

Термины нозерн- , вестерн- и восточный блоттинг произошли от того, что первоначально было шуткой молекулярной биологии, которая разыграла термин Саузерн-блоттинг после метода, описанного Эдвином Саузерн для гибридизации блоттинга ДНК. Патрисия Томас, разработчик РНК-блоттинга, который затем стал известен как нозерн-блоттинг , на самом деле не использовала этот термин. [40]

Саузерн-блоттинг

Саузерн-блоттинг, названный в честь своего изобретателя, биолога Эдвина Саузерна , представляет собой метод исследования наличия определенной последовательности ДНК в образце ДНК. Образцы ДНК до или после расщепления ферментом рестрикции (рестрикционной эндонуклеазой) разделяются с помощью гель-электрофореза, а затем переносятся на мембрану путем блоттинга посредством капиллярного действия . Затем мембрану подвергают воздействию меченого ДНК-зонда, который имеет последовательность оснований, комплементарную последовательности интересующей ДНК. [41] Саузерн-блоттинг реже используется в лабораторных исследованиях из-за способности других методов, таких как ПЦР , обнаруживать определенные последовательности ДНК из образцов ДНК. Однако эти блоты все еще используются для некоторых приложений, таких как измерение количества копий трансгена у трансгенных мышей или при конструировании линий эмбриональных стволовых клеток с нокаутом генов . [27]

Нозерн-блоттинг

Нозерн-блот-диаграмма

Нозерн-блоттинг используется для изучения присутствия определенных молекул РНК в качестве относительного сравнения между набором различных образцов РНК. По сути, это комбинация денатурирующего гель-электрофореза РНК и блоттинга . В этом процессе РНК разделяется по размеру, а затем переносится на мембрану, которая затем исследуется меченым комплементом интересующей последовательности. Результаты можно визуализировать различными способами в зависимости от используемой метки; однако большинство из них приводит к обнаружению полос, отражающих размеры РНК, обнаруженной в образце. Интенсивность этих полос связана с количеством целевой РНК в анализируемых образцах. Эта процедура обычно используется для изучения того, когда и в каком объеме происходит экспрессия генов, путем измерения количества этой РНК, присутствующей в различных образцах, при условии, что посттранскрипционная регуляция не происходит и что уровни мРНК отражают пропорциональные уровни соответствующего белка, находящегося в организме. произведено. Это один из основных инструментов для определения того, в какое время и при каких условиях определенные гены экспрессируются в живых тканях. [42] [43]

Вестерн-блоттинг

Вестерн-блоттинг — это метод, с помощью которого можно обнаружить определенные белки из смеси белков. [44] Вестерн-блоттинг можно использовать для определения размера выделенных белков, а также для количественной оценки их экспрессии. [45] При вестерн-блоттинге белки сначала разделяются по размеру в тонком геле, зажатом между двумя стеклянными пластинами, с помощью метода, известного как SDS-PAGE . Белки в геле затем переносятся на поливинилиденфторид (ПВДФ), нитроцеллюлозу, нейлон или другую поддерживающую мембрану. Эту мембрану затем можно исследовать растворами антител . Антитела, которые специфически связываются с интересующим белком, затем можно визуализировать с помощью различных методов, включая цветные продукты, хемилюминесценцию или авторадиографию . Часто антитела метят ферментами. Когда хемилюминесцентный субстрат подвергается воздействию фермента, это позволяет его обнаружить. Использование методов вестерн-блоттинга позволяет не только обнаруживать, но и проводить количественный анализ. Методы, аналогичные вестерн-блоттингу, можно использовать для прямого окрашивания специфических белков в живых клетках или срезах тканей . [44] [46]

Восточный блоттинг

Техника истерн-блоттинга используется для обнаружения посттрансляционной модификации белков. Белки, нанесенные на мембрану из ПВДФ или нитроцеллюлозы, исследуются на наличие модификаций с использованием определенных субстратов. [47]

Микрочипы

Печатается микрочип ДНК
Гибридизация цели для зондирования

Микрочип ДНК представляет собой набор пятен, прикрепленных к твердой основе, такой как предметное стекло микроскопа , где каждое пятно содержит один или несколько фрагментов одноцепочечных олигонуклеотидов ДНК . Массивы позволяют наносить большое количество очень маленьких (диаметром 100 микрометров) пятен на одно предметное стекло. Каждое пятно содержит молекулу фрагмента ДНК, комплементарную одной последовательности ДНК . Вариант этого метода позволяет оценить экспрессию генов организма на определенной стадии развития ( профилирование экспрессии ). В этом методе РНК в ткани выделяется и преобразуется в меченую комплементарную ДНК (кДНК). Затем эта кДНК гибридизуется с фрагментами матрицы, и можно провести визуализацию гибридизации. Поскольку можно создать несколько массивов с одинаковым положением фрагментов, они особенно полезны для сравнения экспрессии генов в двух разных тканях, таких как здоровая и раковая ткань. Кроме того, можно измерить, какие гены экспрессируются и как эта экспрессия меняется со временем или под воздействием других факторов. Существует много разных способов изготовления микрочипов; наиболее распространенными являются кремниевые чипы, предметные стекла с пятнами диаметром около 100 микрометров, индивидуальные матрицы и матрицы с более крупными пятнами на пористых мембранах (макрочипы). В одном массиве может быть от 100 до более 10 000 мест. Массивы также можно создавать с использованием других молекул, помимо ДНК. [48] ​​[49] [50] [51]

Аллель-специфический олигонуклеотид

Аллель-специфический олигонуклеотид (АСО) — это метод, который позволяет обнаруживать мутации одного основания без необходимости ПЦР или гель-электрофореза. Короткие (20–25 нуклеотидов в длину) меченые зонды подвергаются воздействию нефрагментированной целевой ДНК, гибридизация происходит с высокой специфичностью из-за короткой длины зондов, и даже изменение одного основания будет препятствовать гибридизации. Затем целевую ДНК промывают и удаляют меченые зонды, которые не гибридизовались. Затем целевую ДНК анализируют на наличие зонда с помощью радиоактивности или флуоресценции. В этом эксперименте, как и в большинстве методов молекулярной биологии, необходимо использовать контроль, чтобы обеспечить успешное экспериментирование. [52] [53]

В молекулярной биологии процедуры и технологии постоянно развиваются, а старые технологии отказываются от них. Например, до появления гель-электрофореза ДНК ( агароза или полиакриламид ) размер молекул ДНК обычно определялся по скорости седиментации в градиентах сахарозы - медленный и трудоемкий метод, требующий дорогостоящего оборудования; до градиентов сахарозы использовали вискозиметрию . Помимо исторического интереса, часто стоит знать и о старых технологиях, поскольку иногда бывает полезно решить другую новую проблему, для которой новая техника непригодна. [54]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Альбертс Б., Джонсон А., Льюис Дж., Морган Д., Рафф М., Робертс К., Уолтер П. (2014). Молекулярная биология клетки, шестое издание. Гирляндная наука. стр. 1–10. ISBN 978-1-317-56375-4.
  2. ^ Ганнон Ф (февраль 2002 г.). «Молекулярная биология - что в названии?». Отчеты ЭМБО . 3 (2): 101. doi : 10.1093/embo-reports/kvf039. ПМЦ 1083977 . ПМИД  11839687. 
  3. ^ «Молекулярная биология - Последние исследования и новости | Природа» . Nature.com . Проверено 7 ноября 2021 г.
  4. ^ Эстбери, WT (июнь 1961 г.). «Молекулярная биология или ультраструктурная биология?». Природа . 190 (4781): 1124. Бибкод : 1961Natur.190.1124A. дои : 10.1038/1901124a0 . ISSN  1476-4687. PMID  13684868. S2CID  4172248.
  5. ^ abcd Верма, PS (2004). Клеточная биология, генетика, молекулярная биология, эволюция и экология. С. Чанд и компания. ISBN 81-219-2442-1. ОСЛК  1045495545.
  6. ^ Моранж, Мишель (15 февраля 2016 г.), «История молекулярной биологии», eLS , Чичестер, Великобритания: John Wiley & Sons, Ltd, стр. 1–8, doi : 10.1002/9780470015902.a0003079.pub3, ISBN 9780470016176, получено 7 ноября 2021 г.
  7. ^ Белло, Элизабет А.; Швинн, Дебра А. (1 декабря 1996 г.). «Молекулярная биология и медицина: учебник для клинициста». Анестезиология . 85 (6): 1462–1478. дои : 10.1097/00000542-199612000-00029 . ISSN  0003-3022. PMID  8968195. S2CID  29581630.
  8. ↑ Моранж, Мишель (июнь 2021 г.). История биологии. Издательство Принстонского университета. ISBN 978-0-691-18878-2. OCLC  1184123419.
  9. ^ Филдс, Стэнли (28 августа 2001 г.). «Взаимодействие биологии и технологии». Труды Национальной академии наук . 98 (18): 10051–10054. дои : 10.1073/pnas.191380098 . ISSN  0027-8424. ПМК 56913 . ПМИД  11517346. 
  10. ^ Эллис, Т. Х. Ноэль; Хофер, Джули М.И.; Тиммерман-Вон, Гейл М.; Койн, Кларис Дж.; Хелленс, Роджер П. (1 ноября 2011 г.). «Мендель, 150 лет спустя». Тенденции в науке о растениях . 16 (11): 590–596. doi :10.1016/j.tplants.2011.06.006. ISSN  1360-1385. ПМИД  21775188.
  11. ^ «12.3C: Закон сегрегации Менделя». Свободные тексты по биологии . 12 июля 2018 г. Проверено 18 ноября 2021 г.
  12. ^ «Менделевское наследование». Genome.gov . Проверено 18 ноября 2021 г.
  13. ^ ab «Открытие двойной спирали ДНК: Уотсон и Крик | Изучайте науку в Scitable». www.nature.com . Проверено 25 ноября 2021 г.
  14. ^ Джордж., Вольф (2003). Фридрих Мишер: человек, открывший ДНК. ОКЛК  907773747.
  15. ^ Левен, Пенсильвания (1919). «Структура дрожжевой нуклеиновой кислоты». Журнал биологической химии . 43 (2): 379–382. дои : 10.1016/s0021-9258(18)86289-5 . ISSN  0021-9258.
  16. ^ Чаргафф, Эрвин (1950). «Химическая специфичность нуклеиновых кислот и механизм их ферментативной деградации». Эксперименты . 6 (6): 201–209. дои : 10.1007/bf02173653. ISSN  0014-4754. PMID  15421335. S2CID  2522535.
  17. ^ Аб Уотсон, JD ; Крик, FHC (апрель 1953 г.). «Молекулярная структура нуклеиновых кислот: структура нуклеиновой кислоты дезоксирибозы». Природа . 171 (4356): 737–738. Бибкод : 1953Natur.171..737W. дои : 10.1038/171737a0. ISSN  1476-4687. PMID  13054692. S2CID  4253007.
  18. ^ Крик, FHC; Барнетт, Лесли; Бреннер, С.; Уоттс-Тобин, Р.Дж. (1961). «Общая природа генетического кода белков». Природа . ООО «Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа». 192 (4809): 1227–1232. Бибкод : 1961Natur.192.1227C. дои : 10.1038/1921227a0. ISSN  0028-0836. PMID  13882203. S2CID  4276146.
  19. ^ Эпштейн, Р.Х.; Болле, А.; Стейнберг, CM; Келленбергер, Э.; Бой де ла Тур, Э.; и другие. (1 января 1963 г.). «Физиологические исследования условно-летальных мутантов бактериофага T4D». Симпозиумы Колд-Спринг-Харбор по количественной биологии . Лаборатория Колд-Спринг-Харбор. 28 : 375–394. дои : 10.1101/sqb.1963.028.01.053. ISSN  0091-7451.
  20. ^ Эдгар Б. Геном бактериофага Т4: археологические раскопки. Генетика. Октябрь 2004 г.;168(2):575-82. дои: 10.1093/генетика/168.2.575. PMID: 15514035; PMCID: PMC1448817
  21. ^ Модзири, Сохейл; Исбанер, Себастьян; Мюле, Штеффен; Чан, Хончже; Бэ, Альберт Иоганн; Грегор, Инго; Голами, Азам; Голами, Азам; Эндерляйн, Йорг (01 июня 2021 г.). «Быстрая многоплоскостная фазово-контрастная микроскопия выявляет крутильную динамику при движении жгутиков». Биомедицинская оптика Экспресс . 12 (6): 3169–3180. дои : 10.1364/BOE.419099. ISSN  2156-7085. ПМК 8221972 . ПМИД  34221652. 
  22. ^ ван Вармердам, Т. «Ресурсы лаборатории молекулярной биологии». Вашбиохелпер.com .
  23. ^ ван Вармердам, Т. «Ресурс лаборатории молекулярной биологии». Вашбиохелпер.com .
  24. ^ Лодиш Х., Берк А., Зипурски С.Л., Мацудайра П., Балтимор Д., Дарнелл Дж. (2000). Молекулярно-клеточная биология (4-е изд.). Нью-Йорк: Книги Scientific American. ISBN 978-0-7167-3136-8.
  25. ^ Берг, Джереми (2002). Биохимия . Тимочко, Джон Л.; Страйер, Люберт (5-е изд.). Нью-Йорк: WH Freeman. ISBN 0-7167-3051-0. ОСЛК  48055706.
  26. ^ Справочник, Дом генетики. «Помогите мне понять генетику». Домашний справочник по генетике . Проверено 31 декабря 2016 г.
  27. ^ аб Тиан Дж, изд. (2013). Молекулярная визуализация: основы и приложения. Springer-Verlag Berlin & Heidelberg GmbH & Co. K. p. 542. ИСБН 9783642343032. Проверено 8 июля 2019 г.
  28. ^ «Основы молекулярного клонирования - прошлое, настоящее и будущее | NEB» . www.neb.com . Проверено 25 ноября 2021 г.
  29. ^ «Основы молекулярного клонирования - прошлое, настоящее и будущее | NEB» . www.neb.com . Проверено 4 ноября 2021 г.
  30. ^ Альбертс Б., Джонсон А., Льюис Дж., Рафф М., Робертс К., Уолтер П. Выделение, клонирование и секвенирование ДНК . Проверено 31 декабря 2016 г.
  31. ↑ Лессард, Джулиана К. (1 января 2013 г.). «Молекулярное клонирование». Лабораторные методы в энзимологии: ДНК . Методы энзимологии. Том. 529. стр. 85–98. дои : 10.1016/B978-0-12-418687-3.00007-0. ISBN 978-0-12-418687-3. ISSN  1557-7988. ПМИД  24011038.
  32. ^ Кокате С., Джалалпур СС, Хуракадле П.Дж. (2016). Учебник фармацевтической биотехнологии. Клонирование выражений. Эльзевир. п. 125. ИСБН 9788131239872. Проверено 8 июля 2019 г.
  33. ^ Ленстра, JA (июль 1995 г.). «Применение полимеразной цепной реакции в науках о жизни». Клеточная и молекулярная биология (Нуази-Ле-Гран, Франция) . 41 (5): 603–614. ISSN  0145-5680. ПМИД  7580841.
  34. ^ «Полимеразная цепная реакция (ПЦР)» . Национальный центр биотехнологической информации . Национальная медицинская библиотека США . Проверено 31 декабря 2016 г.
  35. ^ «Информационный бюллетень о полимеразной цепной реакции (ПЦР)» . Национальный институт исследования генома человека (NHGRI) . Проверено 31 декабря 2016 г.
  36. ^ Аб Ли, Пей Юн; Костумбрадо, Джон; Сюй, Чжи-Юань; Ким, Ён Хун (20 апреля 2012 г.). «Электрофорез в агарозном геле для разделения фрагментов ДНК». Журнал визуализированных экспериментов (62): 3923. doi : 10.3791/3923. ISSN  1940-087X. ПМЦ 4846332 . ПМИД  22546956. 
  37. ^ Ли П.Ю., Костумбрадо Дж., Сюй С.И., Ким Ю.Х. (апрель 2012 г.). «Электрофорез в агарозном геле для разделения фрагментов ДНК». Журнал визуализированных экспериментов (62). дои : 10.3791/3923. ПМЦ 4846332 . ПМИД  22546956. 
  38. ^ abcdef Брэдфорд, Мэрион М. (7 мая 1976). «Быстрый и чувствительный метод количественного определения микрограммов белка, использующий принцип связывания белка с красителем». Аналитическая биохимия . 72 (1): 248–254. дои : 10.1016/0003-2697(76)90527-3. ISSN  0003-2697. PMID  942051. S2CID  4359292.
  39. ^ abc «Определение белка методом Брэдфорда». www.ruf.rice.edu . Проверено 8 ноября 2021 г.
  40. ^ Томас PS (сентябрь 1980 г.). «Гибридизация денатурированной РНК и небольших фрагментов ДНК, перенесенных на нитроцеллюлозу». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 77 (9): 5201–5. Бибкод : 1980PNAS...77.5201T. дои : 10.1073/pnas.77.9.5201 . ПМК 350025 . ПМИД  6159641. 
  41. ^ Браун Т. (май 2001 г.). «Южный блоттинг». Современные протоколы в иммунологии . Глава 10: Блок 10.6А. дои : 10.1002/0471142735.im1006as06. ISBN 978-0-471-14273-7. PMID  18432697. S2CID  20686993.
  42. ^ Йозефсен К., Нильсен Х (2011). «Нозерн-блоттинг-анализ». В Нильсене Х (ред.). РНК . Методы молекулярной биологии. Том. 703. Нью-Йорк: Humana Press. стр. 87–105. дои : 10.1007/978-1-59745-248-9_7. ISBN 978-1-59745-248-9. ПМИД  21125485.
  43. ^ Он С.Л., Грин Р. (1 января 2013 г.). «Нозерн-блоттинг». Лабораторные методы в энзимологии: РНК . Методы энзимологии. Том. 530. стр. 75–87. дои : 10.1016/B978-0-12-420037-1.00003-8. ISBN 978-0-12-420037-1. ПМК  4287216 . ПМИД  24034315.
  44. ^ Аб Махмуд Т., Ян ПК (сентябрь 2012 г.). «Вестерн-блоттинг: техника, теория и устранение неполадок». Североамериканский журнал медицинских наук . 4 (9): 429–34. дои : 10.4103/1947-2714.100998 . ПМЦ 3456489 . ПМИД  23050259. 
  45. ^ «Вестерн-блот | Изучайте науку в Scitable» . www.nature.com . Проверено 25 ноября 2021 г.
  46. ^ Куриен Б.Т., Скофилд Р.Х. (апрель 2006 г.). «Вестерн-блоттинг». Методы . 38 (4): 283–93. дои : 10.1016/j.ymeth.2005.11.007. ПМИД  16483794. – через ScienceDirect (может потребоваться подписка или контент может быть доступен в библиотеках.) 
  47. ^ Томас С., Тирумалапура Н., Кроссли ЕС, Исмаил Н., Уокер Д.Х. (июнь 2009 г.). «Модификации антигенных белков у эрлихий». Иммунология паразитов . 31 (6): 296–303. дои : 10.1111/j.1365-3024.2009.01099.x. ПМЦ 2731653 . ПМИД  19493209. 
  48. ^ «Микрочипы». Национальный центр биотехнологической информации . Национальная медицинская библиотека США . Проверено 31 декабря 2016 г.
  49. ^ Бамгарнер Р. (январь 2013 г.). Фредерик М. Осубель и др. (ред.). «Обзор ДНК-микрочипов: типы, применение и их будущее». Современные протоколы молекулярной биологии . Глава 22: Раздел 22.1. дои : 10.1002/0471142727.mb2201s101. ISBN 978-0-471-14272-0. ПМК  4011503 . ПМИД  23288464.
  50. ^ Говиндараджан Р., Дурайян Дж., Калияппан К., Паланисами М. (август 2012 г.). «Микроматрица и ее приложения». Журнал фармации и биологических наук . 4 (Приложение 2): S310-2. дои : 10.4103/0975-7406.100283 . ПМЦ 3467903 . ПМИД  23066278. 
  51. ^ Тарка А.Л., Ромеро Р., Драгичи С. (август 2006 г.). «Анализ экспериментов на микрочипах по профилированию экспрессии генов». Американский журнал акушерства и гинекологии . 195 (2): 373–88. дои : 10.1016/j.ajog.2006.07.001. ПМЦ 2435252 . ПМИД  16890548. 
  52. ^ Ченг Л., Чжан Д.И., ред. (2008). Молекулярно-генетическая патология. Тотова, Нью-Джерси: Хумана. п. 96. ИСБН 978-1-59745-405-6. Проверено 31 декабря 2016 г.
  53. ^ Леонард Д.Г. (2016). Молекулярная патология в клинической практике. Спрингер. п. 31. ISBN 978-3-319-19674-9. Проверено 31 декабря 2016 г.
  54. ^ Тянь Дж, изд. (2013). Молекулярная визуализация: основы и приложения. Springer-Verlag Berlin & Heidelberg GmbH & Co.K. стр. 550, 552. ISBN. 9783642343032. Проверено 8 июля 2019 г.

дальнейшее чтение

Внешние ссылки