Тест на совместимость крови

Тест на совместимость крови проводится в медицинской лаборатории для выявления потенциальной несовместимости между системами групп крови при переливании крови . Он также используется для диагностики и предотвращения некоторых осложнений беременности , которые могут возникнуть, если у ребенка группа крови отличается от группы крови матери. Тест на совместимость крови включает определение группы крови , которое обнаруживает антигены на эритроцитах , определяющие группу крови человека; тестирование на неожиданные антитела против антигенов группы крови ( скрининг и идентификация антител ); и, в случае переливания крови, смешивание плазмы реципиента с эритроцитами донора для выявления несовместимости ( перекрестная совместимость ). Рутинное определение группы крови включает определение типа ABO и RhD (резус-фактора) ^{[примечание 1]} и включает как идентификацию антигенов ABO на эритроцитах (прямая группировка), так и идентификацию антител ABO в плазме (обратная группировка). Другие антигены группы крови могут быть проверены в определенных клинических ситуациях.

Тест на совместимость крови использует реакции между антигенами группы крови и антителами — в частности, способность антител вызывать слипание эритроцитов при связывании с антигенами на поверхности клеток, явление, называемое агглютинацией . Методы, которые основаны на реакциях антиген-антитело, называются серологическими методами, и доступно несколько таких методов, начиная от ручного тестирования с использованием пробирок или слайдов до полностью автоматизированных систем. Группы крови также можно определить с помощью генетического тестирования , которое используется при наличии условий, мешающих серологическому тестированию, или когда требуется высокая степень точности идентификации антигена.

Несколько условий могут привести к ложным или неубедительным результатам теста на совместимость крови. Когда эти проблемы влияют на типирование ABO, они называются расхождениями ABO . Расхождения ABO должны быть исследованы и устранены до того, как будет сообщена группа крови человека. Другие источники ошибок включают феномен « слабого D », при котором люди, положительные по антигену RhD, демонстрируют слабые или отрицательные реакции при тестировании на RhD, и наличие антител иммуноглобулина G на эритроцитах, что может помешать скринингу антител, перекрестной пробе и типированию для некоторых антигенов группы крови.

Медицинское применение

Тест на совместимость крови обычно проводится перед переливанием крови . Полный процесс тестирования на совместимость включает типирование ABO и RhD (резус-фактор); скрининг на антитела против других систем групп крови ; и перекрестную проверку , которая включает тестирование плазмы крови реципиента против эритроцитов донора в качестве окончательной проверки на несовместимость. Если обнаружено неожиданное антитело группы крови, требуется дополнительное тестирование для идентификации антитела ^[3]^{: 740} и обеспечения того, чтобы кровь донора была отрицательной по соответствующему антигену. ^[1]^{: 261} Серологическая перекрестная проверка может быть пропущена, если тест на антитела реципиента отрицательный, нет истории клинически значимых антител, а его тип ABO/Rh был подтвержден с помощью исторических записей или с помощью второго образца крови; и в чрезвычайных ситуациях кровь может быть перелита до того, как будут доступны какие-либо результаты теста на совместимость. ^[1]^{: 262–3}

Тест на совместимость крови часто проводится у беременных женщин и пуповинной крови новорожденных, поскольку несовместимость подвергает ребенка риску развития гемолитической болезни новорожденных. ^[4]^[5] Его также используют перед трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток , поскольку несовместимость групп крови может быть причиной некоторых случаев острой реакции «трансплантат против хозяина» . ^[6]

Принципы

Группы крови определяются в зависимости от наличия или отсутствия специфических антигенов на поверхности эритроцитов. Наиболее важными из них в медицине являются антигены ABO и RhD ^[7]^{: 585,} но существует множество других систем групп крови, которые могут быть клинически значимыми в некоторых ситуациях. По состоянию на 2021 год официально признано 43 группы крови. ^[8]

Люди, у которых отсутствуют определенные антигены группы крови на их эритроцитах, могут образовывать антитела против этих антигенов. Например, человек с группой крови A будет вырабатывать антитела против антигена B. Антитела группы крови ABO встречаются в природе, то есть они встречаются у людей, которые не подвергались воздействию несовместимой крови. ^[7]^{: 585–92} Антитела к большинству других антигенов группы крови, включая RhD, вырабатываются после того, как люди подвергаются воздействию антигенов через переливание или беременность. ^[1]^{: 62} Некоторые из этих антител могут связываться с несовместимыми эритроцитами и вызывать их разрушение , что приводит к реакциям переливания и другим осложнениям. ^[9]^{: 210–11}

Серологические методы для тестирования совместимости крови используют эти реакции антитело-антиген . При типировании крови реагенты , содержащие антитела группы крови, называемые антисыворотками , ^[7]^{: 586} добавляются к суспензиям клеток крови. Если присутствует соответствующий антиген, антитела в реагенте вызовут агглютинацию (слипание) эритроцитов , что можно определить визуально. ^[1]^{: 65} При скрининге антител плазма человека тестируется против набора эритроцитов с известными профилями антигенов; если плазма агглютинирует один из эритроцитов в панели, это указывает на то, что у человека есть антитело против одного из антигенов, присутствующих на клетках. При перекрестной проверке плазма потенциального реципиента переливания добавляется к эритроцитам донора и наблюдается агглютинация (или гемолиз) для обнаружения антител, которые могут вызвать реакции переливания. ^[3]^{: 722–5}

Антитела группы крови существуют в двух основных формах: иммуноглобулин M (IgM) и иммуноглобулин G (IgG). Антитела, которые являются преимущественно IgM, такие как антитела ABO, обычно вызывают немедленную агглютинацию эритроцитов при комнатной температуре. Таким образом, группу крови ABO человека можно определить, просто добавив эритроциты к реагенту и центрифугируя или смешивая образец, ^[1]^{: 122} и при перекрестной пробе несовместимость между типами ABO может быть обнаружена сразу после центрифугирования. ^[3]^{: 725} Типирование RhD также обычно использует реагенты IgM ^[10]^{: 477} хотя анти-RhD обычно встречается в организме в виде IgG. ^[1]^{: 161} Антитела, которые являются преимущественно IgG, такие как направленные на антигены систем Даффи и Кидда , ^[1]^{: 198–200} обычно не вызывают немедленной агглютинации, поскольку небольшой размер антитела IgG препятствует образованию решетчатой структуры. Поэтому для определения группы крови с использованием антисыворотки IgG и обнаружения антител IgG требуется использование непрямого антиглобулинового теста для демонстрации связи IgG с эритроцитами. ^[1]^{: 104}

В непрямом антиглобулиновом тесте смесь антисыворотки или плазмы и эритроцитов инкубируют при 37 °C (99 °F), идеальной температуре для реактивности антител IgG. После инкубации эритроциты промывают физиологическим раствором для удаления несвязанных антител и добавляют реагент античеловеческого глобулина. Если антитела IgG связались с антигенами на поверхности клеток, античеловеческий глобулин свяжется с этими антителами, вызывая агглютинацию эритроцитов после центрифугирования. Если реакция отрицательная, добавляются «контрольные клетки» — реагентные клетки, покрытые IgG, — чтобы убедиться, что тест работает правильно. Если результат теста действительно отрицательный, контрольные клетки должны реагировать с несвязанным античеловеческим глобулином и демонстрировать агглютинацию. ^[3]^{: 716–9}

Группа крови

Типирование по группам крови (AB0) и резус-фактору (Rh)

Wikifunctions имеет простую функцию совместимости крови по системам ABO и Rh .

При типировании по системам ABO и Rh реагенты, содержащие антитела к антигенам A, B и RhD, добавляются к суспензиям клеток крови. Если присутствует соответствующий антиген, эритроциты будут демонстрировать видимую агглютинацию (слипание). ^[1]^{: 65} Помимо идентификации антигенов ABO, что называется прямой группировкой, рутинное типирование крови по системе ABO также включает идентификацию антител ABO в плазме человека. Это называется обратной группировкой, ^[1]^{: 120} , и это делается для подтверждения группы крови ABO. При обратной группировке плазма человека добавляется к эритроцитам типа A ₁ и типа B. Плазма должна агглютинировать клетки, которые экспрессируют антигены, которых нет у человека, при этом не агглютинировать клетки, которые экспрессируют те же антигены, что и у пациента. Например, плазма человека с группой крови A должна реагировать с эритроцитами типа B, но не с клетками A _1. Если ожидаемые результаты не получены, требуются дополнительные исследования. ^[7]^{: 595} Агглютинация оценивается от 1+ до 4+ в зависимости от силы реакции. При типировании по системе ABO оценка 3+ или 4+ указывает на положительную реакцию, тогда как оценка 1+ или 2+ не является окончательной и требует дальнейшего исследования. ^[1]^{: 236}

Другие системы групп крови

Перед переливанием крови людей проверяют на наличие антител против антигенов систем групп крови , отличных от ABO . ^[5] Антигены групп крови, помимо ABO и RhD, которые имеют значение в трансфузионной медицине, включают антигены RhC/c и E/e, а также антигены систем Даффи , Келла , Кидда и MNS . ^[1]^{: 158–173} Если идентифицировано клинически значимое антитело, реципиенту необходимо перелить кровь, которая является отрицательной по соответствующему антигену, чтобы предотвратить реакцию на переливание. Для этого необходимо типировать донорские единицы по соответствующему антигену. ^[1]^{: 261} Реципиент также может быть типирован по антигену, чтобы подтвердить идентичность антитела, поскольку только лица, отрицательные по антигену группы крови, должны вырабатывать антитела против него. ^[7]^{: 603}

В Европе женщинам, которым требуется переливание крови, часто проводят типирование по антигенам Kell и расширенному Rh, чтобы предотвратить сенсибилизацию к этим антигенам, что может подвергнуть их риску развития гемолитической болезни новорожденных во время беременности. ^[11] Американское общество гематологии рекомендует людям с серповидноклеточной анемией проводить типирование крови по антигенам RhC/c, RhE/e, Kell, Duffy, Kidd и MNS до переливания, ^[12]^{: 130–1,} поскольку им часто требуются переливания, и они могут стать сенсибилизированными к этим антигенам при переливании несовместимой крови. ^[13] Расширенное фенотипирование эритроцитов также рекомендуется для людей с бета-талассемией . ^[14] Системы групп крови, отличные от ABO и Rh, имеют относительно небольшой риск осложнений при смешивании крови, поэтому в экстренных случаях, таких как сильное кровотечение , срочность переливания может превзойти необходимость проведения теста на совместимость с другими системами групп крови (и потенциально также с Rh). ^[15]

Скрининг и идентификация антител

Антитела к большинству антигенов групп крови, помимо антигенов системы ABO, развиваются после контакта с несовместимой кровью. ^[1]^{: 62} Такие «неожиданные» антитела к группам крови обнаруживаются только у 0,8–2% людей; однако реципиенты переливаний крови должны проходить скрининг на эти антитела, чтобы предотвратить реакции на переливание. Скрининг антител также проводится в рамках дородового ухода , поскольку антитела к RhD и другим антигенам групп крови могут вызывать гемолитическую болезнь новорожденных, а также поскольку резус-отрицательные матери, у которых развились анти-RhD антитела, не имеют права на получение иммуноглобулина Rho(D) (Rhogam). ^[1]^{: 233}

В процедуре скрининга антител плазма человека добавляется к панели из двух или трех наборов эритроцитов, которые были выбраны для экспрессии наиболее клинически значимых антигенов группы крови. В скрининге антител используются только клетки группы O, так как в противном случае клетки реагировали бы с естественными антителами группы крови ABO. Смесь плазмы и эритроцитов инкубируется при 37°C и тестируется с помощью непрямого антиглобулинового теста. Некоторые протоколы скрининга и идентификации антител включают фазу тестирования после инкубации при комнатной температуре, но это часто опускается, поскольку большинство неожиданных антител, которые реагируют при комнатной температуре, клинически незначимы. ^[3]^{: 722–4}

Агглютинация клеток скрининга плазмой, с добавлением или без добавления античеловеческого глобулина, указывает на присутствие неожиданного антитела группы крови. Если это происходит, необходимо дальнейшее тестирование с использованием большего количества клеток (обычно 10–11) для идентификации антитела. Изучая антигенные профили эритроцитов, с которыми реагирует плазма человека, можно определить идентичность антитела. «Автоконтроль», при котором плазма человека тестируется против его собственных эритроцитов, включен для определения того, вызвана ли агглютинация аллоантителом ( антителом против чужеродного антигена), аутоантителом (антителом против собственных антигенов) или другим мешающим веществом. ^[3]^{: 722–4}

На изображении выше показана интерпретация панели антител, используемой в серологии для обнаружения антител к наиболее важным антигенам группы крови. Каждая строка представляет собой «референтные» или «контрольные» эритроциты доноров, которые имеют известный состав антигенов и относятся к группе ABO O. Символ + означает, что антиген присутствует в референтных эритроцитах, а 0 означает, что он отсутствует; nt означает «не тестировался». Столбец «результат» справа отображает реактивность при смешивании референтных эритроцитов с плазмой пациента в 3 различных фазах: комнатная температура, 37 °C и AHG (с античеловеческим глобулином, с помощью непрямого антиглобулинового теста ). ^[16]

Шаг 1 ; Аннотировано синим цветом: начало исключения антигенов без реакции во всех 3 фазах; рассмотрение первой строки референтных клеток без реакции (0 в столбце справа, в данном случае донор клеток 2) и исключение (здесь отмечено знаком X) каждого присутствующего антигена, где другая пара либо практически отсутствует (например, для DT), либо 0 (присутствие гомозиготное, в данном случае гомозиготное c).
Когда обе пары + (гетерозиготные случаи), они обе исключаются (здесь отмечены знаком X), за исключением антигенов C/c, E/e, Duffy, Kidd и MNS (где антитела пациента все еще могут реагировать на клетки крови с экспрессией гомозиготного антигена, поскольку гомозиготная экспрессия приводит к более высокой дозировке антигена). ^[17] Таким образом, в этом случае E/e не исключается в этой строке, в то время как K/k исключается, а также Js b (независимо от того, что показал бы Js ^{a ).}^{[примечание 2]}
Шаг 2 : отмечено коричневым цветом: переход к следующему ряду контрольных клеток с отрицательной реакцией (в данном случае донор клеток 4) и повторение для каждого типа антигена, который еще не исключен.
Шаг 3 : отмечено фиолетовым. Повторяем то же самое для каждой строки контрольной ячейки с отрицательной реакцией.
Шаг 4 : Исключение антигенов, которые отсутствовали во всех или почти во всех реактивных случаях (здесь отмечены \). Это часто антигены с низкой распространенностью, и хотя существует вероятность выработки таких антител, они, как правило, не являются тем типом, который отвечает за имеющуюся реактивность.
Шаг 5 : Сравнение оставшихся возможных антигенов для выявления наиболее вероятного виновника (в данном случае Fy a ) и выборочное исключение значимых дифференциальных антигенов, например, с показанным дополнительным типом донорских клеток, который, как известно, не содержит Fy ^{a ,} но содержит C и Jk a .

В этом случае панель антител показывает, что присутствуют антитела анти-Fy ^a . Это указывает на то, что необходимо использовать донорскую кровь, тип которой отрицателен по антигену Fy ^{a . Тем не менее, если последующее}перекрестное сопоставление показывает реактивность, следует провести дополнительное тестирование против ранее исключенных антигенов (в этом случае потенциально E, K, Kp ^a и/или Lu ^a ). ^[16]

Когда присутствуют множественные антитела или когда антитело направлено против высокочастотного антигена, обычная процедура панели антител может не обеспечить окончательной идентификации. В этих случаях можно использовать ингибирование гемагглютинации , при котором нейтрализующее вещество нейтрализует специфический антиген. ^[17] В качестве альтернативы плазму можно инкубировать с клетками известных профилей антигенов, чтобы удалить специфические антитела (процесс, называемый адсорбцией ); или клетки можно обработать ферментами , такими как фикаин или папаин, которые ингибируют реактивность некоторых антител группы крови и усиливают другие. ^[3]^{: 723–9} Влияние фикаина и папаина на основные системы групп крови следующее: ^[18]^[19]

Улучшено: ABO , Rh , Kidd , Lewis , P1 , Ii
Уничтожено: Даффи (Fy ^a и Fy ^b ), лютеранин , MNS
Не затронуто: Келл

Люди, у которых в прошлом был положительный результат теста на антитела неожиданной группы крови, могут не демонстрировать положительной реакции при последующем тестировании; однако, если антитело является клинически значимым, им в любом случае необходимо перелить кровь с отрицательным антигеном. ^[20]

Перекрестное сопоставление

Перекрестная проверка, которая обычно выполняется перед переливанием крови, включает добавление плазмы крови реципиента к образцу эритроцитов донора. Если кровь несовместима, антитела в плазме реципиента связываются с антигенами на эритроцитах донора. Эту реакцию антитело-антиген можно обнаружить по видимому слипанию или разрушению эритроцитов или по реакции с античеловеческим глобулином после центрифугирования. ^[7]^{: 600–3}

Если у получателя переливания отрицательный тест на антитела и нет истории антител, часто проводится «немедленная спиновая» перекрестная проверка: эритроциты и плазма центрифугируются сразу после смешивания в качестве окончательной проверки на несовместимость между группами крови ABO. Если клинически значимое антитело обнаружено (или было в прошлом) или если немедленная спиновая перекрестная проверка показывает несовместимость, проводится «полная» или «IgG перекрестная проверка», которая использует непрямой антиглобулиновый тест для выявления несовместимости групп крови, вызванной антителами IgG. Процедура перекрестной проверки IgG более длительная, чем немедленная спиновая перекрестная проверка, и в некоторых случаях может занять более двух часов. ^[20]

Лица, у которых отрицательный тест на антитела и нет истории антител, также могут пройти «электронную перекрестную проверку», при условии, что их группа ABO и Rh были определены из текущего образца крови и что результаты другого типа ABO/Rh зарегистрированы. В этом случае группа крови реципиента просто сравнивается с группой крови донора, без необходимости серологического тестирования. ^[7]^{: 600–3} В экстренных случаях кровь может быть выдана до завершения перекрестной проверки. ^[1]^{: 262–3}

Методы

Методы пробирок и слайдов

Группа крови методом слайдов: группа А положительная

Определение группы крови можно выполнить с помощью пробирок, микропланшетов или слайдов для определения группы крови. Метод пробирки включает смешивание суспензии эритроцитов с антисывороткой (или плазмой для обратной группировки) в пробирке. Смесь центрифугируют для отделения клеток от реагента, а затем ресуспендируют, осторожно встряхивая пробирку. Если присутствует интересующий антиген, эритроциты агглютинируют, образуя твердый комок в пробирке. Если он отсутствует, эритроциты возвращаются в суспензию при смешивании. ^[7]^{: 611–12}^[9]^{: 214} Метод микропланшета похож на метод пробирки, за исключением того, что вместо использования отдельных пробирок определение группы крови проводится в планшете, содержащем десятки лунок, что позволяет проводить несколько тестов одновременно. Реакции агглютинации считываются после центрифугирования планшета. ^[21]^{: 201}

Скрининг и идентификация антител также могут быть выполнены методом пробирки. В этой процедуре плазма и эритроциты смешиваются вместе в пробирке, содержащей среду, которая усиливает реакции агглютинации, например, солевой раствор с низкой ионной силой (LISS). Пробирки инкубируются при температуре тела в течение определенного периода времени, затем центрифугируются и исследуются на агглютинацию или гемолиз; сначала сразу после периода инкубации, а затем после промывки и добавления реагента античеловеческого глобулина. ^[3]^{: 722} Перекрестная совместимость, аналогично, может быть выполнена методом пробирки; реакции считываются сразу после центрифугирования в немедленной спиновой перекрестной совместимости или после инкубации и добавления AHG в полной процедуре перекрестной совместимости. ^[3]^{: 725}

Метод слайда для определения группы крови включает смешивание капли крови с каплей антисыворотки на слайде. Слайд наклоняют, чтобы смешать клетки и реагенты, а затем наблюдают за агглютинацией, которая указывает на положительный результат. Этот метод обычно используется в районах с ограниченными ресурсами или в чрезвычайных ситуациях; в противном случае предпочтительны альтернативные методы. ^[9]^{: 214}^[10]^{: 476}

Агглютинация в колонке

Методы агглютинации колонок для тестирования совместимости крови (иногда называемые «гелевым тестом») используют карты, содержащие колонки декстрана - полиакриламидного геля . Карты, предназначенные для определения группы крови, содержат предварительно распределенные реагенты для определения группы крови для прямой группировки и лунки, содержащие только буферный раствор , в который добавляются реагенты эритроцитов и плазма, для обратной группировки. Скрининг антител и перекрестная проба также могут проводиться методом агглютинации колонок, в этом случае используются карты, содержащие реагент античеловеческого глобулина. Гелевые карты центрифугируются (иногда после инкубации, в зависимости от теста), во время чего агглютинаты эритроцитов задерживаются в верхней части колонки, поскольку они слишком велики для миграции через гель. Клетки, которые не агглютинировались, собираются внизу. Таким образом, линия эритроцитов в верхней части колонки указывает на положительный результат. Сила положительных реакций оценивается от 1+ до 4+ в зависимости от того, как далеко клетки прошли через гель. Гелевый тест имеет преимущества перед ручными методами, поскольку он устраняет изменчивость, связанную с ручным ресуспендированием клеток, и карты могут храниться в качестве записи теста. ^[1]^{: 269–71} Метод агглютинации на колонке используется некоторыми автоматическими анализаторами для автоматического определения группы крови. ^[7]^{: 590} Эти анализаторы пипетируют эритроциты и плазму на гелевые карты, центрифугируют их, сканируют и считывают реакции агглютинации для определения группы крови. ^[1]^{: 270–1}

Твердофазный анализ

Твердофазные анализы (иногда называемые методом «захвата антигена») используют реагентные антигены или антитела, прикрепленные к поверхности (обычно микропланшету). ^[9]^{: 214} Лунки микропланшета, покрытые реагентами анти-A, -B и -D, используются для прямой группировки. Добавляется тестовый образец, и микропланшет центрифугируется; при положительной реакции эритроциты прилипают к поверхности лунки. ^[7]^{: 590}^[10]^{: 477} Некоторые автоматические анализаторы используют твердофазные анализы для определения группы крови. ^[1]^{: 275–6}

Генотипирование

Генетическое тестирование может использоваться для определения группы крови человека в определенных ситуациях, когда серологическое тестирование недостаточно. Например, если человеку перелили большие объемы донорской крови, результаты серологического тестирования будут отражать антигены на донорских клетках, а не фактическую группу крови человека. ^[11] Лица, которые вырабатывают антитела против собственных эритроцитов ^[21]^{: 202} или которые лечатся определенными препаратами, могут показывать ложные реакции агглютинации при серологическом тестировании, поэтому для точного определения их группы крови может потребоваться генотипирование. ^[1]^{: 261} Генетическое тестирование требуется для типирования антигенов эритроцитов, для которых не доступны коммерческие антисыворотки. ^[11]

AABB рекомендует генотипирование антигена RhD для женщин с серологическими слабыми фенотипами D, которые потенциально могут иметь детей. Это связано с тем, что некоторые люди со слабыми фенотипами D могут вырабатывать антитела против антигена RhD, которые могут вызывать гемолитическую болезнь новорожденных, в то время как другие не могут. Генотипирование может определить конкретный тип слабого антигена D, который определяет потенциал человека вырабатывать антитела, тем самым избегая ненужного лечения иммуноглобулином Rho(D) . ^[22]^[23] Генотипирование предпочтительнее серологического тестирования для людей с серповидноклеточной анемией, потому что оно более точно для определенных антигенов и может идентифицировать антигены, которые не могут быть обнаружены серологическими методами. ^[13]

Генотипирование также используется в пренатальном тестировании на гемолитическую болезнь новорожденных. Если у беременной женщины есть антитела к группе крови, которые могут вызывать ГБН, плод может быть типирован на соответствующий антиген, чтобы определить, подвержен ли он риску развития заболевания. Поскольку нецелесообразно брать кровь у плода, группа крови определяется с помощью образца амниоцентеза или бесклеточной фетальной ДНК, выделенной из крови матери. ^[21]^{: 202}^[22] Отца также можно генотипировать, чтобы предсказать риск гемолитической болезни новорожденных, потому что если отец гомозиготен по соответствующему антигену (то есть имеет две копии гена), ребенок будет положительным по антигену и, таким образом, подвержен риску развития заболевания. Если отец гетерозиготен ( имеет только одну копию), у ребенка есть только 50% шанс быть положительным по антигену. ^[11]

Ограничения

Расхождения по системе АВО

При типировании по системе ABO результаты прямой и обратной группировки всегда должны соответствовать друг другу. Неожиданное различие между двумя результатами называется расхождением по системе ABO и должно быть устранено до того, как будет сообщена группа крови человека. ^[1]^{: 136}

Передовая группировка

Слабые реакции в прямой группировке могут возникать у людей, которые принадлежат к определенным подгруппам ABO — вариантам групп крови, характеризующимся сниженной экспрессией антигенов A или B или изменениями в их структуре. Ослабленная экспрессия антигенов ABO может также возникать при лейкемии и лимфоме Ходжкина . Слабые реакции в прямой группировке могут быть усилены путем инкубации смеси крови и реагентов при комнатной температуре или 4 °C (39 °F) или путем использования определенных ферментов для усиления реакций антиген-антитело. ^[1]^{: 139}

Иногда после реакции с антисывороткой для определения группы крови обнаруживаются две популяции эритроцитов. Некоторые эритроциты агглютинируются, а другие нет, что затрудняет интерпретацию результата. Это называется реакцией смешанного поля , и она может возникнуть, если кто-то недавно получил переливание крови с другой группой крови (как у пациента с группой A, получающего кровь группы O), если он получил трансплантацию костного мозга или стволовых клеток от человека с другой группой крови или у пациентов с определенными подгруппами ABO, такими как A _3. Исследование истории болезни человека может прояснить причину реакции смешанного поля. ^[1]^{: 138}^[24]^{: 314}

Люди с болезнью холодовой агглютинации вырабатывают антитела против собственных эритроцитов, которые заставляют их спонтанно агглютинироваться при комнатной температуре, что приводит к ложноположительным реакциям в прямой группировке. Холодовые агглютинины обычно можно дезактивировать, нагревая образец до 37 °C (99 °F) и промывая эритроциты физиологическим раствором. Если это неэффективно, можно использовать дитиотреитол для разрушения антител. ^[1]^{: 141}

Образцы пуповинной крови могут быть загрязнены студнем Вартона , вязким веществом, которое может заставить красные кровяные клетки слипаться, имитируя агглютинацию. Студень Вартона можно удалить, тщательно промыв красные кровяные клетки. ^[1]^{: 141}

В редком явлении, известном как «приобретенный антиген B», пациент, чья истинная группа крови A, может показать слабый положительный результат для B в прямой группе. Это состояние, которое связано с желудочно-кишечными заболеваниями, такими как рак толстой кишки ^[1] : ¹³⁹ и кишечная непроходимость ^[24]^{: 126,} возникает в результате преобразования антигена A в структуру, имитирующую антиген B, бактериальными ферментами. ^[10]^{: 477} В отличие от истинного антигена B, приобретенный антиген B не реагирует с реагентами в определенном диапазоне pH. ^[1]^{: 139}

Обратная группировка

У младенцев в возрасте от 3 до 6 месяцев реакции при обратной группировке отсутствуют или слабы, поскольку они вырабатывают очень низкие уровни антител ABO. ^[1]^{: 136} Поэтому обратная группировка обычно не проводится для этой возрастной группы. ^[10]^{: 486} У пожилых людей также может наблюдаться сниженная выработка антител, как и у людей с гипогаммаглобулинемией . Слабые реакции можно усилить, если позволить плазме и эритроцитам инкубироваться при комнатной температуре в течение 15–30 минут, а если это неэффективно, их можно инкубировать при 4 °C (39 °F). ^[1]^{: 137–8}

Примерно 20% людей с группой крови A или AB принадлежат к подгруппе A, называемой A ₂ , в то время как более распространенная подгруппа, охватывающая примерно 80% людей, называется A ₁ . Из-за небольших различий в структуре антигенов A ₁ и A ₂ некоторые люди в подгруппе A ₂ могут вырабатывать антитела против A ₁ . Поэтому эти люди будут иметь тип A или AB в прямой группе, но будут демонстрировать неожиданную положительную реакцию с эритроцитами типа A ₁ в обратной группе. Расхождение можно устранить, проверив эритроциты человека с помощью реагента анти-A ₁ , который даст отрицательный результат, если пациент принадлежит к подгруппе A ₂ . Антитела анти-A ₁ считаются клинически незначимыми, если они не реагируют при 37 °C (99 °F). Существуют и другие подгруппы A, а также подгруппы B, но они встречаются редко. ^[1]^{: 127–32}

Если в плазме человека присутствуют высокие уровни белка , может возникнуть явление, известное как «монетные столбики» , когда его плазма добавляется к реагентным ячейкам. «Молетные столбики» заставляют эритроциты скапливаться вместе, что может имитировать агглютинацию, вызывая ложный положительный результат при обратной группировке. Этого можно избежать, удалив плазму, заменив ее физиологическим раствором и повторно центрифугируя пробирку. «Молетные столбики» исчезнут, как только плазма будет заменена физиологическим раствором, но настоящая агглютинация сохранится. ^[1]^{: 140–1}

Антитела к антигенам групп крови, отличным от A и B, могут реагировать с реагентными ячейками, используемыми при обратном группировании. Если присутствует аутоантитело, реагирующее на холод , ложноположительный результат можно устранить, нагрев образец до 37 °C (99 °F). Если результат вызван аллоантителом, можно провести скрининг антител для идентификации антитела, ^[7]^{: 141–2} , а обратное группирование можно выполнить с использованием образцов, в которых отсутствует соответствующий антиген. ^[10]^{: 477}

Слабый фенотип D

Приблизительно от 0,2 до 1% людей имеют фенотип «слабый D», ^[25] что означает, что они положительны по антигену RhD, но демонстрируют слабые или отрицательные реакции с некоторыми реагентами анти-RhD из-за сниженной экспрессии антигена или атипичных вариантов структуры антигена. Если рутинное серологическое тестирование на RhD дает результат 2+ или меньше, антиглобулиновый тест может быть использован для демонстрации наличия RhD. ^[1]^{: 159} Тестирование на слабый D также проводится у доноров крови, которые изначально имеют тип RhD отрицательный. ^[22] Исторически доноров крови со слабым D рассматривали как резус-положительных, а пациентов со слабым D рассматривали как резус-отрицательных, чтобы избежать потенциального воздействия несовместимой крови. Генотипирование все чаще используется для определения молекулярной основы фенотипов слабого D, поскольку это определяет, могут ли люди со слабым D вырабатывать антитела против RhD или сенсибилизировать других к антигену RhD. ^[25]

Сенсибилизация эритроцитарных антител

Непрямой антиглобулиновый тест , который используется для слабого тестирования D и типирования некоторых антигенов эритроцитов, обнаруживает IgG, связанный с эритроцитами. Если IgG связан с эритроцитами in vivo , как это может произойти при аутоиммунной гемолитической анемии , гемолитической болезни новорожденных и реакциях на переливание крови, ^[10]^{: 260} непрямой антиглобулиновый тест всегда будет давать положительный результат, независимо от присутствия соответствующего антигена. ^[10]^{: 477–8} Можно провести прямой антиглобулиновый тест , чтобы продемонстрировать, что положительная реакция обусловлена сенсибилизацией эритроцитов. ^[26]^{: 289}

Другие предтрансфузионные исследования

Некоторые группы людей имеют особые требования к переливанию. Плоды, младенцы с очень низкой массой тела при рождении и люди с ослабленным иммунитетом подвержены риску развития тяжелой инфекции цитомегаловирусом (ЦМВ) — условно-патогенным микроорганизмом , на который примерно 50% доноров крови дают положительный результат — и им может быть перелита кровь с отрицательным результатом на ЦМВ для предотвращения заражения. ^[3]^{: 749}^[27] Тем, кто подвержен риску развития реакции «трансплантат против хозяина» , например реципиентам трансплантата костного мозга , переливают кровь, облученную для инактивации Т-лимфоцитов , которые отвечают за эту реакцию. Людям, у которых в прошлом были серьезные аллергические реакции на переливание крови, может быть перелита кровь, «промытая» для удаления плазмы. ^[1]^{: 342–5} Также изучается история болезни пациента, чтобы узнать, были ли у него ранее выявлены антитела и какие-либо другие серологические аномалии.

Прямой антиглобулиновый тест ( тест Кумбса ) также проводится как часть исследования антител. ^[28]

Донорская кровь обычно проверяется на наличие инфекций, передающихся при переливании, таких как ВИЧ . По данным Всемирной организации здравоохранения , по состоянию на 2018 год, почти 100% донаций крови в странах с высоким и средним уровнем дохода прошли проверку на инфекционные заболевания, но для стран с низким и средним уровнем дохода эти показатели составили 82% и 80,3% соответственно. ^[29]

История

В 1901 году Карл Ландштейнер опубликовал результаты эксперимента, в котором он смешивал сыворотку и эритроциты пяти разных доноров-людей. Он заметил, что сыворотка человека никогда не агглютинирует его собственные эритроциты, но может агглютинировать чужие, и на основе реакций агглютинации эритроциты можно было отсортировать на три группы: группа A, группа B и группа C. Группа C, которая состояла из эритроцитов, которые не реагировали с плазмой какого-либо человека, позже будет известна как группа O. ^[30]^{: 5} Четвертая группа, теперь известная как AB, была описана коллегами Ландштейнера в 1902 году. ^[30]^{: 7} Этот эксперимент был первым примером типирования крови. ^[1]^{: 120}

В 1945 году Робин Кумбс , А. Э. Мурант и Р. Р. Рейс опубликовали описание антиглобулинового теста (также известного как тест Кумбса). Предыдущие исследования антител групп крови задокументировали наличие так называемых «блокирующих» или «неполных» антител: антител, которые занимали антигенные участки, предотвращая связывание других антител, но не вызывали агглютинацию эритроцитов. Кумбс и его коллеги разработали метод, позволяющий легко продемонстрировать наличие этих антител. Они вводили кроликам человеческие иммуноглобулины , что заставляло их вырабатывать антитела против человеческого глобулина . Античеловеческий глобулин мог связываться с антителами, уже прикрепленными к эритроцитам, и вызывать их агглютинацию. Изобретение антиглобулинового теста привело к открытию гораздо большего количества антигенов групп крови. К началу 1950-х годов компании начали производить коммерческие антисыворотки для специального тестирования антигенов. ^[30]^{: 62–72}

Примечания

^ Антиген RhD обычно известен как «резус-фактор», хотя в системе резус-антигенов есть несколько других антигенов . ^[1]^{: 150}^[2]^{: 26}
^ Помимо C/c, E/e, Duffy, Kidd и MNS, клинически значимые эффекты дозировки редки, но не невозможны для других антигенов, которые, таким образом, все еще могут рассматриваться, если последующая перекрестная проба дает положительный результат.

Ссылки

^ abcdefghijklmnopqrstu vwxyz aa ab ac ad ae af ag ah ai Дениз М. Харменинг (30 ноября 2018 г.). Современные методы хранения крови и переливания крови. Ф.А. Дэвис. ISBN 978-0-8036-9462-0.
^ Деннис Флаэрти (25 июня 2014 г.). Иммунология для фармации. Elsevier Health Sciences. ISBN 978-0-323-29111-8.
^ abcdefghij Макферсон, РА; Пинкус, МР (2017). Клиническая диагностика и лечение Генри лабораторными методами (23-е изд.). Elsevier Health Sciences. ISBN 978-0-323-41315-2.
^ Американская ассоциация клинической химии (15 ноября 2019 г.). «Определение группы крови». Лабораторные тесты онлайн . Получено 27 января 2020 г.
^ ab Gonsorcik, VK (7 августа 2018 г.). «Группировка ABO: обзор, клинические показания/применение, эффективность теста». Medscape . Получено 2 марта 2020 г. .
^ Bacigalupo, A.; Van Lint, MT; M. Margiocco, D. Occhini; Ferrari, G.; Pittaluga, PA; Frassoni, F.; Peralvo, J.; Lercari, G.; Carubia, F.; Marmont, AM (1988). «Abo-совместимость и острая реакция «трансплантат против хозяина» после аллогенной трансплантации костного мозга». Трансплантация . 45 (6): 1091–1093. doi : 10.1097/00007890-198806000-00018 . ISSN 0041-1337. PMID 3289150. S2CID 39707395.
^ abcdefghijk Turgeon, ML (2016). Linné & Ringsrud's Clinical Laboratory Science: Concepts, Procedures, and Clinical Applications (7-е изд.). Elsevier Mosby. ISBN 978-0-323-22545-8.
^ "Red Cell Immunogenetics and Blood Group Terminology". Международное общество переливания крови . 2021. Архивировано из оригинала 2 февраля 2022 года . Получено 11 февраля 2022 года .
^ abcd Джеффри Маккалоу (27 сентября 2016 г.). Transfusion Medicine. Wiley. ISBN 978-1-119-23652-8.
^ abcdefgh Bain, BJ; Bates, I; Laffan, MA (11 августа 2016 г.). Электронная книга Dacie and Lewis Practical Hematology. Elsevier Health Sciences. ISBN 978-0-7020-6925-3.
^ abcd Westhoff, Connie M. (2019). «Генотипирование групп крови». Blood . 133 (17): 1814–1820. doi : 10.1182/blood-2018-11-833954 . ISSN 0006-4971. PMID 30808639.
^ Каллум, Дж. Л.; Пинкертон, Ф. Х.; Лима, А. (2016). Кровавая простота 4: Переливание крови, альтернативы крови и реакции на переливание (PDF) . Региональная координационная сеть по крови Онтарио. ISBN 978-0-9869176-2-2.
^ ab Chou, Stella T.; Alsawas, Mouaz; Fasano, Ross M.; Field, Joshua J.; Hendrickson, Jeanne E.; Howard, Jo; Kameka, Michelle; Kwiatkowski, Janet L.; Pirenne, France; Shi, Patricia A.; Stowell, Sean R.; Thein, Swee Lay; Westhoff, Connie M.; Wong, Trisha E.; Akl, Elie A. (2020). "Руководство Американского общества гематологии 2020 года по серповидноклеточной болезни: поддержка переливания крови". Blood Advances . 4 (2): 327–355. doi :10.1182/bloodadvances.2019001143. ISSN 2473-9529. PMC 6988392 . PMID 31985807.
^ Компернолле, Веерле; Чоу, Стелла Т.; Танаэль, Сусано; Сэвидж, Уильям; Говард, Джо; Джозефсон, Кассандра Д.; Одаме, Айзек; Хоган, Кристофер; Деномм, Грегори; Шехата, Надин (2018). «Характеристики эритроцитов для пациентов с гемоглобинопатиями: систематический обзор и руководство». Transfusion . 58 (6): 1555–1566. doi :10.1111/trf.14611. ISSN 0041-1132. PMID 29697146. S2CID 21650658.
^ Гуделл, Памела П.; Уль, Линн; Мохаммед, Моник; Пауэрс, Эми А. (2010). «Риск гемолитических трансфузионных реакций после экстренного переливания эритроцитов». Американский журнал клинической патологии . 134 (2): 202–206. doi : 10.1309/AJCP9OFJN7FLTXDB . ISSN 0002-9173. PMID 20660321.
^ ab Джастин Р. Риз, MS, MLS(ASCP)CM, SBBCM. "Введение в идентификацию антител" (PDF) . Университет Юты, Медицинские лабораторные науки . Получено 18 декабря 2020 г. .{{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
^ abc Mais, Daniel (2014). Краткий сборник клинической патологии . Соединенные Штаты: American Society for Clinical Pathology Press. ISBN 978-0-89189-615-9. OCLC 895712380.
^ Хилл, Бен К.; Ханна, Кортни А.; Адамски, Джилл; Фам, Хай П.; Маркес, Мариса Б.; Уильямс, Лэнс А. (2017). «Обработанные фицином эритроциты помогают идентифицировать клинически значимые аллоантитела, замаскированные под реакции неопределенной специфичности в гелевых микропробирках». Лабораторная медицина . 48 (1): 24–28. doi : 10.1093/labmed/lmw062 . ISSN 0007-5027. PMID 28007780.
^ Эрик Чинг. «Вопросы и ответы о протеолитических ферментах, используемых в серологии групп крови». Канадское общество трансфузионной медицины . Получено 28 января 2021 г.
^ ab Uhl, L (11 января 2021 г.). «Предтрансфузионное тестирование для переливания эритроцитов». UpToDate . Получено 27 января 2021 г. .
^ abc A. Victor Hoffbrand; Douglas R. Higgs; David M. Keeling; Atul B. Mehta (28 октября 2015 г.). Последипломная гематология. Wiley. ISBN 978-1-118-85447-1.
^ abc Sandler, S. Gerald; Flegel, Willy A.; Westhoff, Connie M.; Denomme, Gregory A.; Delaney, Meghan; Keller, Margaret A.; Johnson, Susan T.; Katz, Louis; Queenan, John T.; Vassallo, Ralph R.; Simon, Clayton D. (2015). «Пришло время поэтапного генотипирования RHD для пациентов с серологическим слабым фенотипом D». Transfusion . 55 (3): 680–689. doi :10.1111/trf.12941. ISSN 0041-1132. PMC 4357540 . PMID 25438646.
^ Американская ассоциация банков крови. «Совместное заявление о поэтапном введении генотипирования RHD для беременных женщин и других женщин детородного возраста с серологическим слабым фенотипом D». Американская ассоциация банков крови – Заявления . Получено 26 февраля 2020 г.
^ ab Harvey G. Klein; David J. Anstee (3 февраля 2014 г.). Переливание крови Моллисона в клинической медицине. John Wiley & Sons. ISBN 978-1-4051-9940-7.
^ ab Sandler, S. Gerald; Chen, Leonard N.; Flegel, Willy A. (2017). «Серологические слабые фенотипы D: обзор и руководство по интерпретации группы крови RhD с использованием генотипа RHD». British Journal of Haematology . 179 (1): 10–19. doi : 10.1111/bjh.14757 . ISSN 0007-1048. PMC 5612847. PMID 28508413 .
^ Салли В. Рудманн (18 февраля 2005 г.). Учебник по банку крови и трансфузионной медицине. Elsevier Health Sciences. ISBN 0-7216-0384-X.
^ Хеддл, Нэнси М.; Бекх, Майкл; Гроссман, Бренда; Якобсон, Джессика; Клейнман, Стивен; Тобиан, Аарон АР; и др. (2016). «Отчет комитета AABB: снижение числа случаев заражения цитомегаловирусом, передаваемых через кровь». Transfusion . 56 (6pt2): 1581–1587. doi :10.1111/trf.13503. ISSN 0041-1132. PMID 26968400. S2CID 3633835.
^ Харменинг, Д. (1999). Современные практики банковского обслуживания и переливания крови (4-е изд.). Филадельфия: FA Davis. ISBN 978-0-8036-0419-3.
^ «Безопасность и доступность крови». Всемирная организация здравоохранения . 2018. Архивировано из оригинала 22 апреля 2021 г. Получено 5 июня 2021 г.
^ abc Мэрион Э. Рид; Иэн Шайн (2012). Открытие и значение групп крови. SBB Books. ISBN 978-1-59572-422-9.