stringtranslate.com

Малая интерферирующая РНК

Опосредование РНК-интерференции в культивируемых клетках млекопитающих.

Малая интерферирующая РНК ( миРНК ), иногда известная как короткая интерферирующая РНК или молчащая РНК , представляет собой класс двухцепочечных РНК на первых некодирующих молекулах РНК, обычно длиной 20–24 (обычно 21) пар оснований , похожих на микроРНК . и действует в рамках пути РНК-интерференции (RNAi). Он препятствует экспрессии специфических генов с комплементарными нуклеотидными последовательностями, разрушая мРНК после транскрипции, предотвращая трансляцию . [1] [2]

Состав

Встречающиеся в природе миРНК имеют четко определенную структуру, которая представляет собой короткую (обычно от 20 до 24 пар оснований ) двухцепочечную РНК (дцРНК) с фосфорилированными 5'-концами и гидроксилированными 3'-концами с двумя выступающими нуклеотидами. Фермент Dicer катализирует продукцию siRNA из длинных дцРНК и малых шпилечных РНК . [3] siRNA также можно вводить в клетки путем трансфекции . Поскольку в принципе любой ген может быть опрокинут синтетической миРНК с комплементарной последовательностью, миРНК являются важным инструментом для проверки функции гена и нацеливания лекарств в постгеномную эпоху.

История

В 1998 году Эндрю Файр из Института науки Карнеги в Вашингтоне и Крейг Мелло из Массачусетского университета в Вустере открыли механизм РНКи во время работы над экспрессией генов у нематоды Caenorhabditis elegans . [4] Они получили Нобелевскую премию за исследования РНКи в 2006 году. siRNA и их роль в посттранскрипционном молчании генов (PTGS) были обнаружены у растений группой Дэвида Баулкомба в лаборатории Сейнсбери в Норидже , Англия , и о них сообщалось в Science в 1999 году. [5] Томас Тушл и его коллеги вскоре сообщили в журнале Nature , что синтетические миРНК могут индуцировать РНКи в клетках млекопитающих. [6] В 2001 году экспрессия определенного гена была успешно подавлена ​​путем введения химически синтезированной миРНК в клетки млекопитающих (Tuschl et al.). Эти открытия привели к всплеску интереса к использованию РНКи для биомедицинских исследований и разработки лекарств . Значительные достижения в терапии siRNA были достигнуты с использованием как органических (на основе углерода), так и неорганических (не на основе углерода) наночастиц , которые успешно доставляют лекарства в мозг , предлагая многообещающие методы доставки терапевтических средств людям. Однако применение siRNA на людях имело значительные ограничения на успех. Одним из них является нецелевой подход. [2] Существует также вероятность того, что эти методы лечения могут вызвать врожденный иммунитет . [4] Модели на животных не смогли точно представить степень этой реакции у людей. Следовательно, изучение эффектов терапии siRNA было сложной задачей.  

В последние годы была одобрена терапия siRNA и созданы новые методы преодоления этих проблем. Существуют одобренные методы лечения, доступные для коммерческого использования, и несколько из них в настоящее время находятся на стадии разработки и ожидают одобрения. [7] [8]

Механизм

Механизм, с помощью которого естественная миРНК вызывает молчание генов посредством репрессии трансляции, происходит следующим образом:

механизм миРНК
  1. Длинная дсРНК (которая может происходить из шпильки, комплементарных РНК и РНК-зависимых РНК-полимераз) расщепляется эндорибонуклеазой Dicer . Дайсер разрезает длинную дцРНК с образованием короткой интерферирующей РНК или миРНК; именно это позволяет молекулам образовывать РНК-индуцированный комплекс молчания (RISC).
  2. Как только миРНК попадает в клетку, она включается в другие белки, образуя RISC .
  3. Как только миРНК становится частью комплекса RISC, миРНК раскручивается с образованием одноцепочечной миРНК.
  4. Нить, которая термодинамически менее стабильна из-за спаривания оснований на 5'-конце, выбирается так, чтобы оставаться частью RISC-комплекса.
  5. Одноцепочечная миРНК, которая является частью комплекса RISC, теперь может сканировать и находить комплементарную мРНК.
  6. Как только одноцепочечная миРНК (часть комплекса RISC) связывается с целевой мРНК, она индуцирует расщепление мРНК .
  7. Теперь мРНК разрезается и распознается клеткой как аномальная. Это вызывает деградацию мРНК и, в свою очередь, отсутствие трансляции мРНК в аминокислоты, а затем в белки. Таким образом, подавляется ген, кодирующий эту мРНК.

siRNA также похожа на miRNA , однако miRNAs происходят из более коротких продуктов РНК «стебель-петля». miRNAs обычно подавляют гены за счет репрессии трансляции и обладают более широкой специфичностью действия, тогда как siRNA обычно работают с более высокой специфичностью, расщепляя мРНК перед трансляцией, со 100% комплементарностью. [9] [10]

Индукция РНКи с использованием миРНК или их биосинтетических предшественников

Белок Dicer, окрашенный белковым доменом .

Нокдаун гена путем трансфекции экзогенной миРНК часто оказывается неудовлетворительным, поскольку эффект носит лишь временный характер, особенно в быстро делящихся клетках. Эту проблему можно преодолеть путем создания вектора экспрессии миРНК. Последовательность миРНК модифицируется для введения короткой петли между двумя цепями. Полученный транскрипт представляет собой короткую шпильчную РНК (shRNA), которая может быть преобразована Dicer в функциональную siRNA обычным способом. [11] Типичные транскрипционные кассеты используют промотор РНК-полимеразы III (например, U6 или H1) для управления транскрипцией малых ядерных РНК (мяРНК) (U6 участвует в сплайсинге РНК ; H1 представляет собой РНКазный компонент человеческой РНКазы P). Предполагается, что полученный транскрипт siRNA затем обрабатывается Dicer .

Эффективность нокдауна генов также можно повысить, используя сжатие клеток . [12]

Активность миРНК в РНКи во многом зависит от ее способности связываться с РНК-индуцируемым комплексом молчания (RISC). Связывание дуплексной миРНК с RISC сопровождается раскручиванием и расщеплением смысловой цепи эндонуклеазами. Оставшийся комплекс антисмысловая цепь-RISC может затем связываться с целевыми мРНК для инициации транскрипционного молчания. [13]

Активация РНК

Было обнаружено, что дцРНК может также активировать экспрессию генов, механизм, который получил название «активация гена, индуцированная малой РНК» или РНКа . Было показано, что дцРНК, нацеленные на промоторы генов, индуцируют мощную активацию транскрипции связанных генов. РНКа была продемонстрирована в клетках человека с использованием синтетических дцРНК, называемых «малыми активирующими РНК» ( саРНК ). В настоящее время неизвестно, насколько консервативна РНКа в других организмах. [14] Одно сообщение о комаре Aedes aegypti показало, что существуют некоторые доказательства существования РНКа, и это может быть достигнуто с помощью коротких или длинных дцРНК, нацеленных на области промотора. [15]

Посттранскрипционное молчание генов

Посттранскрипционное молчание генов, индуцированное siRNA, инициируется сборкой РНК-индуцированного комплекса молчания (RISC). Комплекс подавляет экспрессию определенных генов, расщепляя молекулы мРНК, кодирующие гены-мишени. Чтобы начать процесс, одна из двух цепей миРНК, направляющая цепь (антисмысловая цепь), загружается в RISC, в то время как другая цепь, пассажирская цепь (смысловая цепь), разрушается. Определенные ферменты Dicer могут отвечать за загрузку направляющей цепи в RISC. [16] Затем siRNA сканирует и направляет RISC к идеально комплементарной последовательности молекул мРНК. [17] Считается, что расщепление молекул мРНК катализируется доменом Piwi белков Argonaute RISC. Затем молекула мРНК разрезается точно путем расщепления фосфодиэфирной связи между целевыми нуклеотидами, которые соединены в пары с остатками миРНК 10 и 11, считая от 5'-конца. [18] В результате этого расщепления образуются фрагменты мРНК, которые далее разрушаются клеточными экзонуклеазами . 5'-фрагмент разрушается со своего 3'-конца под действием экзосомы , тогда как 3'-фрагмент разрушается со своего 5'-конца под действием 5'-3'-экзорибонуклеазы 1 ( XRN1 ). [19] Диссоциация целевой цепи мРНК от RISC после расщепления позволяет заглушить больше мРНК. Этому процессу диссоциации, вероятно, способствуют внешние факторы, вызванные гидролизом АТФ . [18]

Иногда расщепления целевой молекулы мРНК не происходит. В некоторых случаях эндонуклеолитическое расщепление фосфодиэфирного остова может подавляться из-за несоответствия миРНК и целевой мРНК вблизи сайта расщепления. В других случаях белки Argonaute RISC лишены эндонуклеазной активности, даже если целевая мРНК и миРНК идеально спарены. [18] В таких случаях экспрессия генов будет подавляться механизмом, индуцируемым микроРНК [17]

Упрощенная версия метода пинг-понга, включающая белки баклажана (Aub) и аргонавта-3 (Ago3), расщепляющие 3'- и 5'-концы пиРНК.

[2]

Piwi-взаимодействующие РНК ответственны за молчание транспозонов и не являются siRNA. [20] PIWI-взаимодействующие РНК (piRNA) представляют собой недавно открытый класс малых некодирующих РНК (ncRNA) длиной 21-35 нуклеотидов. Они играют роль в регуляции экспрессии генов, подавлении транспозонов и ингибировании вирусной инфекции. Когда-то пиРНК считались «темной материей» нкРНК, но теперь они стали важными игроками во многих клеточных функциях у разных организмов. [21]

Транскрипционное подавление генов

Многие модельные организмы, такие как растения ( Arabidopsis thaliana ), дрожжи ( Saccharomyces cerevisiae ), мухи ( Drosophila melanogaster ) и черви ( C. elegans ), использовались для изучения подавления транскрипционных генов, направленного на малые некодирующие РНК. В клетках человека РНК-направленное подавление транскрипционных генов наблюдалось десять лет назад, когда экзогенные миРНК подавляли трансгенный промотор фактора элонгации 1α, управляющий репортерным геном зеленого флуоресцентного белка (GFP). [22] Основные механизмы молчания транскрипционных генов (TGS), включающие механизм РНКи, включают метилирование ДНК, посттрансляционные модификации гистонов и последующее ремоделирование хроматина вокруг гена-мишени в гетерохроматическое состояние. [22] SiRNA могут быть включены в комплекс РНК-индуцированного подавления транскрипции (RITS). Активный комплекс RITS запускает образование гетерохроматина вокруг ДНК, соответствующей siRNA, эффективно подавляя гены в этом участке ДНК.

Применение: подавление аллель-специфического гена.

Одним из эффективных применений миРНК является способность отличать целевую последовательность от нецелевой последовательности с разницей в один нуклеотид. Этот подход считается терапевтически решающим для подавления доминантных нарушений функции усиления (GOF), когда мутантный аллель, вызывающий заболевание, отличается от аллеля дикого типа одним нуклеотидом (nt). Эти типы миРНК, способные различать однонуклеотидные различия, называются аллель-специфичными миРНК. [2]

ASP-RNAi — это инновационная категория RNAi, цель которой — подавить доминантный мутантный аллель, сохраняя при этом экспрессию соответствующего нормального аллеля со специфичностью однонуклеотидных различий между ними. [2] ASP-siRNA потенциально являются новой и лучшей альтернативой для лечения аутосомно-доминантных генетических нарушений, особенно в тех случаях, когда экспрессия аллелей дикого типа имеет решающее значение для выживания организма, таких как болезнь Хантингтона (HD), дистония DYT1 (Гонсалес-Алегри). и др. 2003, 2005), болезнь Альцгеймера (Sierant et al. 2011), болезнь Паркинсона (БП) (Takahashi et al. 2015), боковой амилоидный склероз (БАС) (Schwarz et al. 2006) и болезнь Мачадо-Джозефа (Алвес и др., 2008). Их терапевтический потенциал также оценивался при различных кожных заболеваниях, таких как простой буллезный эпидермолиз (Atkinson et al. 2011), эпидермолитическая ладонно-подошвенная кератодермия (EPPK) (Lyu et al. 2016) и решетчатая дистрофия роговицы I типа (LCDI) (Courtney et al. 2014). [2]

Проблемы: избежать неспецифических эффектов

РНКи пересекается с рядом других путей; неудивительно, что иногда экспериментальное введение миРНК вызывает неспецифические эффекты. [23] [24] Когда клетка млекопитающего сталкивается с двухцепочечной РНК, такой как миРНК, она может ошибочно принять ее за вирусный побочный продукт и вызвать иммунный ответ. Более того, поскольку структурно родственные микроРНК модулируют экспрессию генов в основном за счет взаимодействий пар оснований неполной комплементарности с целевой мРНК , введение миРНК может привести к непреднамеренному смещению цели. Химические модификации миРНК могут изменить термодинамические свойства, что также приведет к потере специфичности отдельных нуклеотидов. [25]

Врожденный иммунитет

Введение слишком большого количества миРНК может привести к неспецифическим событиям из-за активации врожденных иммунных ответов. [26] Большинство данных на сегодняшний день позволяют предположить, что это, вероятно, связано с активацией сенсора дцРНК PKR, хотя в этом может также участвовать ген I, индуцируемый ретиноевой кислотой (RIG-I). [27] Также была описана индукция цитокинов через toll-подобный рецептор 7 (TLR7). Химическая модификация миРНК используется для снижения активации врожденного иммунного ответа для функции генов и терапевтического применения. Одним из многообещающих методов снижения неспецифических эффектов является преобразование миРНК в микроРНК. [28] МикроРНК встречаются в природе, и, используя этот эндогенный путь, можно будет добиться аналогичного нокдауна генов при сравнительно низких концентрациях образующихся миРНК. Это должно минимизировать неспецифические эффекты.

Нетаргетинг

Смещение таргетинга является еще одной проблемой использования siRNA в качестве инструмента нокдауна генов. [24] Здесь гены с неполной комплементарностью непреднамеренно подавляются миРНК (по сути, миРНК действует как миРНК), что приводит к проблемам в интерпретации данных и потенциальной токсичности. Однако эту проблему можно частично решить путем разработки соответствующих контрольных экспериментов, и в настоящее время разрабатываются алгоритмы проектирования siRNA для получения siRNA, свободных от нецелевого действия. Затем можно использовать полногеномный анализ экспрессии, например, с помощью технологии микрочипов, чтобы проверить это и дополнительно усовершенствовать алгоритмы. В статье 2006 года из лаборатории доктора Хворовой указываются участки длиной в 6 или 7 пар оснований, начиная с положения 2 и далее, в совпадении siRNA с областями 3'UTR в нецелевых генах. [29] Инструмент предсказания нецелевых миРНК доступен по адресу http://crdd.osdd.net/servers/aspsirna/asptar.php и опубликован как ресурс ASPsiRNA. [30]

Адаптивные иммунные реакции

Обычные РНК могут быть плохими иммуногенами, но против комплексов РНК-белок можно легко создать антитела. Многие аутоиммунные заболевания наблюдают появление этих типов антител. Сообщений об антителах против siRNA, связанных с белками, еще не было. Некоторые методы доставки миРНК сочетают полиэтиленгликоль (ПЭГ) с олигонуклеотидом, уменьшая выведение и улучшая период полувыведения из крови. Однако недавно компания Regado Biosciences пришлось прекратить крупное исследование III фазы ПЭГилированного РНК-аптамера против фактора IX из-за тяжелой анафилактической реакции на ПЭГ-часть РНК. Эта реакция в некоторых случаях приводила к смерти и вызывает серьезные опасения по поводу доставки миРНК при участии ПЭГилированных олигонуклеотидов. [31]

Насыщение механизма РНКи

Трансфекция миРНК в клетки обычно снижает экспрессию многих генов, однако также наблюдается активация генов. Повышающую регуляцию экспрессии генов можно частично объяснить предсказанными генами-мишенями эндогенных микроРНК. Компьютерный анализ более 150 экспериментов по трансфекции миРНК подтверждает модель, согласно которой экзогенные миРНК могут насыщать эндогенный механизм РНКи, что приводит к дерепрессии эндогенных генов, регулируемых микроРНК. [32] Таким образом, хотя миРНК могут вызывать нежелательные нецелевые эффекты, т.е. непреднамеренное подавление мРНК за счет частичного совпадения последовательностей между миРНК и мишенью, насыщение механизма РНКи является еще одним отчетливым неспецифическим эффектом, который включает в себя дерепрессию миРНК. -регулируемые гены и приводит к аналогичным проблемам в интерпретации данных и потенциальной токсичности. [33]

Химическая модификация

миРНК были химически модифицированы для усиления их терапевтических свойств. Короткие интерферирующие РНК (миРНК) должны быть доставлены к месту действия в клетках тканей-мишеней, чтобы РНКи выполнила свои терапевтические функции. Подробная база данных всех таких химических модификаций вручную создается под названием siRNAmod в научной литературе. [34] Химическая модификация миРНК также может непреднамеренно привести к потере однонуклеотидной специфичности. [35]

Терапевтические применения и проблемы

Учитывая способность подавлять, по сути, любой интересующий ген, РНКи через миРНК вызвали большой интерес как в фундаментальной [36] , так и в прикладной биологии.

Одной из самых больших проблем терапии на основе миРНК и РНКи является внутриклеточная доставка. [37] siRNA также обладает слабой стабильностью и фармакокинетическим поведением. [38] Доставка siRNA через наночастицы оказалась многообещающей. [37] олигонуклеотиды siRNA in vivo уязвимы к деградации эндонуклеазами и экзонуклеазами плазмы и тканей [39] и показали лишь умеренную эффективность в локализованных местах доставки, таких как человеческий глаз. [40] Доставка чистой ДНК целевым организмам является сложной задачей, поскольку ее большой размер и структура не позволяют ей легко диффундировать через мембраны . [37] олигонуклеотиды siRNA обходят эту проблему благодаря своему небольшому размеру — 21-23 олигонуклеотида. [41] Это позволяет осуществлять доставку с помощью наноразмерных средств доставки, называемых нановекторами. [40]

Хороший нановектор для доставки миРНК должен защищать миРНК от деградации, обогащать миРНК в органе-мишени и облегчать клеточное поглощение миРНК. [39] Три основные группы нановекторов siRNA: на липидной основе, нелипидные на органической основе и неорганические. [39] Нановекторы на основе липидов превосходны для доставки миРНК к солидным опухолям, [39] но при других видах рака могут потребоваться другие органические нановекторы, не основанные на липидах, такие как наночастицы на основе циклодекстрина . [39] [42]

Было показано, что миРНК, доставляемые через наночастицы на основе липидов, обладают терапевтическим потенциалом при заболеваниях центральной нервной системы ( ЦНС) . [43] Расстройства центральной нервной системы нередки, но гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) часто блокирует доступ потенциальных терапевтических средств к мозгу . [43] Было показано, что миРНК, которые нацеливаются на белки, отходящие от поверхности ГЭБ, и замалчивают их, вызывают увеличение проницаемости ГЭБ. [43] siRNA, доставляемая через наночастицы на основе липидов, способна полностью пересекать ГЭБ. [43]

Огромной трудностью в доставке siRNA является проблема ненацеливания. [37] [40] Поскольку гены читаются в обоих направлениях, существует вероятность того, что даже если предполагаемая антисмысловая цепь миРНК будет прочитана и выбьет целевую мРНК, смысловая цепь миРНК может нацеливаться на другой белок, участвующий в другой функции. [44]

Результаты фазы I первых двух терапевтических исследований RNAi (показаны для лечения возрастной макулярной дегенерации , также известной как AMD) показали в конце 2005 года, что siRNA хорошо переносятся и имеют подходящие фармакокинетические свойства. [45]

В ходе клинического исследования фазы 1 41 пациенту с распространенным раком, метастазировавшим в печень, вводили РНКи , доставленные через липидные наночастицы . РНКи нацелена на два гена, кодирующих ключевые белки роста раковых клеток: фактор роста эндотелия сосудов ( VEGF ) и белок веретена кинезина ( KSP ). Результаты показали клинические преимущества: рак либо стабилизировался через шесть месяцев, либо регрессировал метастазирование у некоторых пациентов. Фармакодинамический анализ образцов биопсии пациентов выявил наличие в них конструкций РНКи, что доказывает, что молекулы достигли намеченной цели. [46] [47]

Испытания, подтверждающие концепцию, показали, что миРНК, нацеленные на Эболу, могут быть эффективными в качестве постконтактной профилактики у людей, при этом 100% приматов, кроме человека, выживают после смертельной дозы заирского Эболавируса, самого смертоносного штамма. [48]

Правовая категоризация и правовые вопросы в ближайшем будущем

В настоящее время SiRNA синтезируются химическим путем и поэтому юридически классифицируются в ЕС и США как простые лекарственные средства. Но поскольку биоинженерные миРНК (BERA) находятся в стадии разработки, они будут классифицироваться как биологические лекарственные средства, по крайней мере, в ЕС. Развитие технологии BERAS ставит вопрос о категоризации лекарств, имеющих одинаковый механизм действия, но производимых химическим или биологическим путем. Эту несогласованность следует устранить. [49]

Внутриклеточная доставка

Существует большой потенциал использования РНК-интерференции (РНКи) в терапевтических целях для обратимого подавления любого гена. Чтобы РНКи реализовала свой терапевтический потенциал, малая интерферирующая РНК (миРНК) должна быть доставлена ​​к месту действия в клетках тканей-мишеней. Но поиск безопасных и эффективных механизмов доставки является основным препятствием на пути к реализации полного потенциала терапии на основе миРНК. Немодифицированная миРНК нестабильна в кровотоке, потенциально может вызывать иммуногенность и с трудом перемещается по клеточным мембранам. [50]  В результате необходимы химические изменения и/или инструменты доставки для безопасного переноса миРНК к месту ее действия. [50] Существует три основных метода доставки миРНК, которые различаются по эффективности и токсичности.

Трансфекция

В этом методе миРНК сначала должна быть сконструирована против целевого гена. После того как миРНК настроена против гена, ее необходимо эффективно доставить посредством протокола трансфекции. Доставка обычно осуществляется с помощью катионных липосом , полимерных наночастиц и липидной конъюгации. [51] Этот метод выгоден, поскольку он может доставлять миРНК в большинство типов клеток, имеет высокую эффективность и воспроизводимость и предлагается коммерчески. Наиболее распространенными коммерческими реагентами для трансфекции миРНК являются липофектамин и неоновая трансфекция. Однако он не совместим со всеми типами клеток и имеет низкую эффективность in vivo. [52] [53]

Электропорация

Электрические импульсы также используются для внутриклеточной доставки миРНК в клетки. Клеточная мембрана состоит из фосфолипидов, что делает ее восприимчивой к электрическому полю. Когда инициируются быстрые, но мощные электрические импульсы, молекулы липидов переориентируются, претерпевая при этом термические фазовые переходы из-за нагрева. Это приводит к образованию гидрофильных пор и локализованным нарушениям в липидной двухслойной клеточной мембране, что также приводит к временной потере полупроницаемости. Это обеспечивает выход многих внутриклеточных материалов, таких как ионы и метаболиты, а также одновременное поглощение лекарств, молекулярных зондов и нуклеиновых кислот. Для клеток, которые трудно трансфицировать, выгодна электропорация, однако при этом методе гибель клеток более вероятна. [54]

Этот метод был использован для доставки миРНК, нацеленной на VEGF, в ксенотрансплантированные опухоли у голых мышей, что привело к значительному подавлению роста опухоли. [55]

Вирусно-опосредованная доставка

Эффекты подавления генов трансфицированных сконструированных миРНК обычно временны, но эту трудность можно преодолеть с помощью подхода РНКи. Доставку этой миРНК из матриц ДНК можно осуществить с помощью нескольких рекомбинантных вирусных векторов на основе ретровируса, аденоассоциированного вируса, аденовируса и лентивируса . [56] Последний является наиболее эффективным вирусом, который стабильно доставляет миРНК к клеткам-мишеням, поскольку он может трансдуцировать неделящиеся клетки, а также непосредственно воздействовать на ядро. [57] Эти специфические вирусные векторы были синтезированы для эффективного облегчения миРНК, которая не пригодна для трансфекции в клетки. Другой аспект заключается в том, что в некоторых случаях синтетические вирусные векторы могут интегрировать миРНК в геном клетки, что обеспечивает стабильную экспрессию миРНК и долгосрочный нокдаун гена. Этот метод выгоден, поскольку он эффективен in vivo и для трудно трансфицируемых клеток. Однако возникают проблемы, поскольку он может вызывать противовирусные реакции в некоторых типах клеток, приводящие к мутагенным и иммуногенным эффектам.

Этот метод потенциально может быть использован для подавления генов центральной нервной системы для лечения болезни Хантингтона . [58]

Терапия

Спустя десятилетие после открытия механизма RNAi в 1993 году фармацевтический сектор вложил значительные средства в исследования и разработки терапии siRNA. Эта терапия имеет несколько преимуществ перед малыми молекулами и антителами. Его можно вводить ежеквартально или каждые шесть месяцев. Еще одним преимуществом является то, что, в отличие от низкомолекулярных и моноклональных антител, которым необходимо распознавать специфическую конформацию белка, миРНК функционирует путем спаривания оснований Уотсона-Крика с мРНК. Следовательно, любая молекула-мишень, которую необходимо обработать с высокой аффинностью и специфичностью, может быть выбрана, если доступна правильная нуклеотидная последовательность. [38] Одной из самых больших проблем, которую пришлось преодолеть исследователям, была идентификация и создание системы доставки, через которую лечебные препараты поступали бы в организм. И что иммунная система часто ошибочно принимает РНКи-терапию за остатки инфекционных агентов, которые могут вызвать иммунный ответ. [4] Животные модели не отражали точно степень иммунного ответа, который наблюдался у людей, несмотря на обещания инвесторов отказаться от лечения РНКи. [4]

Однако было несколько компаний, которые продолжили разработку РНКи-терапии для людей. Alnylam Pharmaceuticals , Sirna Therapeutics и Dicerna Pharmaceuticals — лишь немногие из компаний, которые все еще работают над выводом на рынок РНКи-терапии. Было обнаружено, что почти все препараты siRNA, вводимые в кровоток, накапливаются в печени. Вот почему большинство первых целей лекарств были заболеваниями, поражающими печень. Повторные разработки также пролили свет на улучшение химического состава молекулы РНК для снижения иммунного ответа, что впоследствии практически не вызывает побочных эффектов. [59] Ниже перечислены некоторые одобренные методы лечения или методы лечения, находящиеся в стадии разработки.

Алнилам Фармасьютикалс

В 2018 году Alnylam Pharmaceuticals стала первой компанией, одобренной FDA для терапии siRNA . Онпаттро (патисиран) был одобрен для лечения полиневропатии наследственного транстиретин-опосредованного (hATTR) амилоидоза у взрослых. hATTR — редкое, прогрессирующее изнурительное состояние. При амилоидозе hATTR неправильно свернутый белок транстиретин (TTR) откладывается во внеклеточном пространстве. В типичных условиях сворачивания тетрамеры TTR состоят из четырех мономеров. Наследственный амилоидоз ATTR вызван дефектом или мутацией гена транстиретина (TTR), который передается по наследству. Замена всего лишь одной аминокислоты приводит к изменению тетрамерных белков транстиретина, в результате чего образуется нестабильный тетрамерный белок транстиретин, который агрегируется в мономеры и образует нерастворимые внеклеточные амилоидные отложения. Накопление амилоида в различных системах органов вызывает кардиомиопатию, полинейропатию, желудочно-кишечную дисфункцию. От него страдают 50 000 человек во всем мире. Для доставки препарата непосредственно в печень миРНК заключена в липидную наночастицу. Молекула миРНК останавливает выработку амилоидных белков, вмешиваясь в выработку РНК аномальных белков TTR. Это предотвращает накопление этих белков в различных органах тела и помогает пациентам справиться с этим заболеванием. [60] [61]

Традиционно трансплантация печени была стандартным методом лечения наследственного транстиретинового амилоидоза, однако ее эффективность может быть ограничена стойким отложением транстиретинового амилоида дикого типа после трансплантации. Существуют также низкомолекулярные препараты, которые обеспечивают временное облегчение. До выпуска Onpattro возможности лечения hATTR были ограничены. После одобрения Onpattro FDA присвоило Alnylam статус «прорывной терапии», который присваивается препаратам, предназначенным для лечения серьезных заболеваний и являющимся существенным улучшением по сравнению с любой доступной терапией. Ему также был присвоен статус орфанного препарата, присвоенный тем методам лечения, которые предназначены для безопасного лечения заболеваний, от которых страдают менее 200 000 человек. [62]

Наряду с Онпаттро был также обнаружен еще один терапевтический препарат, способствующий интерференции РНК (Партисиран), который обладает свойством ингибировать синтез транстиретина в печени. Целевая информационная РНК (мРНК) в результате расщепляется крошечными интерферирующими РНК, связанными с РНК-индуцированным комплексом молчания . Патисиран, исследовательский терапевтический препарат РНКи, использует этот процесс для уменьшения выработки мутантного транстиретина и транстиретина дикого типа путем расщепления 3-нетранслируемой области мРНК транстиретина. [63]

В 2019 году FDA одобрило вторую РНКи-терапию — Гивлаари (гивосиран), используемую для лечения острой печеночной порфирии (ОГП). Заболевание возникает из-за накопления токсичных молекул порфобилиногена (ПБГ), которые образуются при выработке гема. Эти молекулы накапливаются в разных органах, что может привести к симптомам или приступам АГП.

Гивлаари — это препарат siRNA, который подавляет экспрессию синтазы аминолевулиновой кислоты 1 (ALAS1), фермента печени, участвующего в ранней стадии производства гема. Понижение уровня ALAS1 снижает уровень нейротоксических промежуточных продуктов, вызывающих симптомы АГП. [38]

Годы исследований привели к лучшему пониманию методов лечения siRNA, помимо тех, которые влияют на печень. Alnylam Pharmaceuticals в настоящее время занимается разработкой методов лечения амилоидоза и заболеваний ЦНС, таких как болезнь Хантингтона и болезнь Альцгеймера . [4] Недавно они также начали сотрудничать с Regeneron Pharmaceuticals для разработки методов лечения заболеваний ЦНС, глаз и печени.

По состоянию на 2020 год ONPATTRO и GIVLAARI доступны для коммерческого применения, а две siRNA, лумасиран (ALN-GO1) и инклисиран , были поданы в FDA для подачи заявки на новый препарат. Несколько siRNA проходят фазу 3 клинических исследований, и еще больше кандидатов находятся на ранней стадии разработки. [38] В 2020 году компании Alnylam и Vir Pharmacy объявили о партнерстве и начали работу над терапией RNAi, которая будет лечить тяжелые случаи COVID-19. [64]

Другими компаниями, добившимися успеха в разработке линии терапии siRNA, являются Dicerna Pharmaceuticals в партнерстве с Eli Lilly and Company и Arrowhead Pharmaceuticals в партнерстве с Johnson and Johnson . Несколько других крупных фармацевтических компаний, таких как Amgen и AstraZeneca, также вложили значительные средства в терапию siRNA, поскольку видят потенциальный успех этой области биологических препаратов. [65]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Лагана А, Венециано Д, Руссо Ф, Пульвиренти А, Джуньо Р, Кроче СМ, Ферро А (2015). «Вычислительный дизайн искусственных молекул РНК для регуляции генов». РНК Биоинформатика . Методы молекулярной биологии. Том. 1269. стр. 393–412. дои : 10.1007/978-1-4939-2291-8_25. ISBN 978-1-4939-2290-1. ПМЦ  4425273 . ПМИД  25577393.
  2. ^ abcdef Монга I, Куреши А, Тхакур Н, Гупта АК, Кумар М (2017). «ASPsiRNA: ресурс ASP-siRNA, обладающий терапевтическим потенциалом в отношении генетических нарушений человека, и алгоритм прогнозирования их ингибирующей эффективности». G3: Гены, геномы, генетика . 7 (9): 2931–2943. дои : 10.1534/g3.117.044024. ПМК 5592921 . ПМИД  28696921.  Текст был скопирован из этого источника, который доступен по международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0.
  3. ^ Бернштейн Э. , Коди А.А., Хаммонд С.М., Хэннон Г.Дж. (январь 2001 г.). «Роль бидентатной рибонуклеазы на этапе инициации РНК-интерференции». Природа . 409 (6818): 363–6. Бибкод : 2001Natur.409..363B. дои : 10.1038/35053110. PMID  11201747. S2CID  4371481.
  4. ^ abcde Эйзенштейн М (16 октября 2019 г.). «Американские горки отношений фармацевтики с РНК-терапией». Природа . 574 (7778): С4–С6. Бибкод : 2019Natur.574S...4E. дои : 10.1038/d41586-019-03069-3. S2CID  204741280.
  5. ^ Гамильтон AJ, Баулкомб, округ Колумбия (октябрь 1999 г.). «Вид малых антисмысловых РНК, вызывающих посттранскрипционное молчание генов у растений». Наука . 286 (5441): 950–2. дои : 10.1126/science.286.5441.950. PMID  10542148. S2CID  17480249.
  6. ^ Эльбашир С.М., Харборт Дж., Лендекель В., Ялчин А., Вебер К., Тушл Т. (май 2001 г.). «Дуплексы 21-нуклеотидных РНК опосредуют РНК-интерференцию в культивируемых клетках млекопитающих». Природа . 411 (6836): 494–8. Бибкод : 2001Natur.411..494E. дои : 10.1038/35078107. PMID  11373684. S2CID  710341.
  7. ^ Чен, Чжихан; Кришнамачари, Баладжи; Пачечо-Торрес, Хесус; Пене, Мари-Франс; Бхуджвалла, Завер М. (март 2020 г.). «Тераностические малые интерферирующие РНК-наночастицы в прецизионной наномедицине рака». ПРОВОДА Наномедицина и нанобиотехнологии . 12 (2): e1595. дои : 10.1002/wnan.1595. ISSN  1939-5116. ПМК 7360334 . ПМИД  31642207. 
  8. ^ «Новый вид препарата, подавляющий гены, получил одобрение FDA» . Журнал "Уолл Стрит . 10 августа 2018 года . Проверено 26 марта 2021 г.
  9. ^ Куреши А, Тхакур Н, Монга I, Тхакур А, Кумар М (1 января 2014 г.). «VIRmiRNA: комплексный ресурс экспериментально подтвержденных вирусных микроРНК и их мишеней». База данных . 2014 : бау103. дои : 10.1093/база данных/bau103. ПМК 4224276 . ПМИД  25380780. 
  10. ^ Мак Г.С. (июнь 2007 г.). «МикроРНК приступает к делу». Природная биотехнология . 25 (6): 631–8. дои : 10.1038/nbt0607-631. PMID  17557095. S2CID  35357127.
  11. ^ «РНК-интерференция (РНКи)» . Проверено 27 июля 2018 г.
  12. ^ Шарей А., Золдан Дж., Адамо А., Сим В.И., Чо Н., Джексон Э. и др. (Февраль 2013). «Безвекторная микрофлюидная платформа для внутриклеточной доставки». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 110 (6): 2082–7. Бибкод : 2013PNAS..110.2082S. дои : 10.1073/pnas.1218705110 . ПМЦ 3568376 . ПМИД  23341631. 
  13. ^ Данехольт, Б. (2006). «Дополнительная информация: РНК-интерференция». Премия за роман в области физиологии и медицины .
  14. ^ Ли Л (2008). «Активация генов, опосредованная малой РНК». В Моррисе К.В. (ред.). РНК и регуляция экспрессии генов: скрытый уровень сложности . Кайстер Академик Пресс. ISBN 978-1-904455-25-7.
  15. ^ Де Хайр Л., Асад С., Хуссейн М., Асгари С. (2020). «Активация РНК у насекомых: целенаправленная активация эндогенных и экзогенных генов». Насекомое Биохимия Мол Биол . 119 : 103325. doi : 10.1016/j.ibmb.2020.103325. PMID  31978586. S2CID  210891954.{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  16. ^ Ли Ю.С., Накахара К., Фам Дж.В., Ким К., Хе З., Сонтхаймер Э.Дж., Картью Р.В. (апрель 2004 г.). «Различные роли Drosophila Dicer-1 и Dicer-2 в путях молчания siRNA/miRNA». Клетка . 117 (1): 69–81. дои : 10.1016/s0092-8674(04)00261-2 . PMID  15066283. S2CID  6683459.
  17. ^ ab Carthew RW, Sontheimer EJ (февраль 2009 г.). «Происхождение и механизмы микроРНК и миРНК». Клетка . 136 (4): 642–55. doi :10.1016/j.cell.2009.01.035. ПМЦ 2675692 . ПМИД  19239886. 
  18. ^ abc Томари Y, Замор PD (март 2005 г.). «Перспектива: машины для RNAi». Гены и развитие . 19 (5): 517–29. дои : 10.1101/gad.1284105 . ПМИД  15741316.
  19. ^ Орбан Т.И., Изаурральде Э (апрель 2005 г.). «Распад мРНК, на которые нацелен RISC, требует XRN1, комплекса Ski и экзосомы». РНК . 11 (4): 459–69. дои : 10.1261/rna.7231505. ПМК 1370735 . ПМИД  15703439. 
  20. ^ Озата Д.М., Гайнетдинов И., Зох А., Филипп Д., Замор П.Д. (2019). «PIWI-взаимодействующие РНК: маленькие РНК с большими функциями» (PDF) . Обзоры природы Генетика . 20 (2): 89–108. дои : 10.1038/s41576-018-0073-3. PMID  30446728. S2CID  53565676.
  21. ^ Монга I, Банерджи I (2019). «Вычислительная идентификация piRNA с использованием признаков, основанных на последовательности, структуре, термодинамических и физико-химических свойствах РНК». Современная геномика . 20 (2): 508–518. дои : 10.2174/1389202920666191129112705. ПМЦ 7327968 . ПМИД  32655289. 
  22. ^ аб Марк С., Вайнберг; Кевин В., Моррис (август 2016 г.). «Транскрипционное молчание генов у человека». Исследования нуклеиновых кислот . 44 (14): 6505–6517. дои : 10.1093/nar/gkw139 . ПМК 5001580 . ПМИД  27060137. 
  23. ^ Джексон А.Л., Линсли П.С. (январь 2010 г.). «Распознавание и предотвращение нецелевых эффектов siRNA для идентификации мишени и терапевтического применения». Nature Reviews Открытие лекарств . 9 (1): 57–67. дои : 10.1038/nrd3010. PMID  20043028. S2CID  20903257.
  24. ^ ab Woolf TM, Мелтон Д.А., Дженнингс К.Г. (август 1992 г.). «Специфичность антисмысловых олигонуклеотидов in vivo». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 89 (16): 7305–9. Бибкод : 1992PNAS...89.7305W. дои : 10.1073/pnas.89.16.7305 . ПМК 49698 . ПМИД  1380154. 
  25. ^ Дуа П., Ю Дж.В., Ким С., Ли Д.К. (сентябрь 2011 г.). «Модифицированная структура миРНК с выступом из одного нуклеотида преодолевает обычное нецелевое замалчивание, опосредованное миРНК». Молекулярная терапия . 19 (9): 1676–87. дои : 10.1038/м.2011.109. ПМК 3182346 . ПМИД  21673662. 
  26. ^ Уайтхед К.А., Дальман Дж.Э., Лангер Р.С., Андерсон Д.Г. (17 июня 2011 г.). «Замалчивание или стимуляция? Доставка миРНК и иммунная система». Ежегодный обзор химической и биомолекулярной инженерии . 2 (1): 77–96. doi : 10.1146/annurev-chembioeng-061010-114133. PMID  22432611. S2CID  28803811.
  27. ^ Мацумия Т., Стаффорини Д.М. (2010). «Функция и регуляция гена-I, индуцируемого ретиноевой кислотой». Критические обзоры по иммунологии . 30 (6): 489–513. doi : 10.1615/critrevimmunol.v30.i6.10. ПМК 3099591 . ПМИД  21175414. 
  28. ^ Барой Т., Соренсен К., Линдеберг М.М., Френген Э. (июнь 2010 г.). «Конструкции экспрессии shRNA, созданные непосредственно из олигонуклеотидных последовательностей siRNA». Молекулярная биотехнология . 45 (2): 116–20. дои : 10.1007/s12033-010-9247-8. PMID  20119685. S2CID  24309609.
  29. ^ Бирмингем А., Андерсон Э.М., Рейнольдс А., Илсли-Тайри Д., Лик Д., Федоров Ю. и др. (март 2006 г.). «Совпадения начальных чисел 3' UTR, но не общая идентичность, связаны с нецелевыми РНКи». Природные методы . 3 (3): 199–204. дои : 10.1038/nmeth854. PMID  16489337. S2CID  52809577.
  30. ^ Монга I, Куреши А, Тхакур Н, Гупта АК, Кумар М (2017). «ASPsiRNA: ресурс ASP-siRNA, обладающий терапевтическим потенциалом в отношении генетических нарушений человека, и алгоритм прогнозирования их ингибирующей эффективности». G3: Гены, геномы, генетика . 7 (9): 2931–2943. дои : 10.1534/g3.117.044024. ПМК 5592921 . ПМИД  28696921. 
  31. ^ Виттруп А, Либерман Дж (сентябрь 2015 г.). «Нобизирующая болезнь: отчет о прогрессе в области терапии siRNA». Обзоры природы. Генетика . 16 (9): 543–52. дои : 10.1038/nrg3978. ПМЦ 4756474 . ПМИД  26281785. 
  32. ^ Хан А.А., Бетель Д., Миллер М.Л., Сандер С., Лесли К.С., Маркс Д.С. (июнь 2009 г.). «Трансфекция малых РНК глобально нарушает регуляцию генов эндогенными микроРНК». Природная биотехнология . 27 (6): 549–55. дои : 10.1038/nbt.1543. ПМЦ 2782465 . ПМИД  19465925. 
  33. ^ Гримм Д., Стритц К.Л., Джоплинг К.Л., Сторм Т.А., Панди К., Дэвис С.Р. и др. (май 2006 г.). «Смерть мышей из-за перенасыщения клеточных путей микроРНК/коротких шпилек РНК». Природа . 441 (7092): 537–41. Бибкод : 2006Natur.441..537G. дои : 10.1038/nature04791. PMID  16724069. S2CID  15118504.
  34. ^ Дар С.А., Тхакур А., Куреши А., Кумар М. (январь 2016 г.). «siRNAmod: база данных экспериментально подтвержденных химически модифицированных siRNA». Научные отчеты . 6 (1): 20031. Бибкод : 2016NatSR...620031D. дои : 10.1038/srep20031. ПМК 4730238 . ПМИД  26818131. 
  35. ^ Хикерсон Р.П., Смит Ф.Дж., Ривз Р.Э., Contag CH, Leake D, Leachman SA и др. (март 2008 г.). «Однонуклеотид-специфическое нацеливание на миРНК в доминантно-негативной модели кожи». Журнал исследовательской дерматологии . 128 (3): 594–605. CiteSeerX 10.1.1.465.8240 . дои : 10.1038/sj.jid.5701060. ПМИД  17914454. 
  36. ^ Алексеев О.М., Ричардсон Р.Т., Алексеев О., О'Рэнд М.Г. (май 2009 г.). «Анализ профилей экспрессии генов в клетках HeLa в ответ на сверхэкспрессию или опосредованное siRNA истощение NASP». Репродуктивная биология и эндокринология . 7 (1): 45. дои : 10.1186/1477-7827-7-45 . ПМЦ 2686705 . ПМИД  19439102. 
  37. ^ abcd Петрокка Ф, Либерман Дж (февраль 2011 г.). «Обещания и проблемы терапии рака на основе РНК-интерференции». Журнал клинической онкологии . 29 (6): 747–54. дои : 10.1200/JCO.2009.27.6287. PMID  21079135. S2CID  15337692.
  38. ^ abcd Ху Б, Чжун Л, Венг Ю, Пэн Л, Хуан Ю, Чжао Ю, Лян XJ (июнь 2020 г.). «Терапевтическая миРНК: современное состояние». Сигнальная трансдукция и таргетная терапия . 5 (1): 101. дои : 10.1038/s41392-020-0207-x. ПМК 7305320 . ПМИД  32561705. 
  39. ^ abcde Shen H, Sun T, Ferrari M (июнь 2012 г.). «Нановекторная доставка миРНК для терапии рака». Генная терапия рака . 19 (6): 367–73. дои : 10.1038/cgt.2012.22. ПМЦ 3842228 . ПМИД  22555511. 
  40. ^ abc Burnett JC, Росси JJ (январь 2012 г.). «Терапия на основе РНК: текущий прогресс и перспективы». Химия и биология . 19 (1): 60–71. doi :10.1016/j.chembiol.2011.12.008. ПМК 3269031 . ПМИД  22284355. 
  41. ^ Эльбашир С.М., Лендекель В., Тушль Т. (январь 2001 г.). «РНК-интерференция опосредуется 21- и 22-нуклеотидными РНК». Гены и развитие . 15 (2): 188–200. дои : 10.1101/gad.862301. ПМК 312613 . ПМИД  11157775. 
  42. ^ Heidel JD, Yu Z, Liu JY, Rele SM, Liang Y, Zeidan RK и др. (апрель 2007 г.). «Введение приматам, кроме человека, возрастающих внутривенных доз целевых наночастиц, содержащих субъединицу рибонуклеотидредуктазы M2 siRNA». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 104 (14): 5715–21. дои : 10.1073/pnas.0701458104 . ПМЦ 1829492 . ПМИД  17379663. 
  43. ^ abcd Гомеш М.Дж., Драйер Дж., Брюэр Дж., Мартинс С., Брандл М., Сарменто Б. (апрель 2016 г.). «Новый подход к модели гематоэнцефалического барьера на основе фосфолипидных везикул: развитие мембран и проницаемость наночастиц, нагруженных миРНК». Журнал мембранной науки . 503 : 8–15. doi :10.1016/j.memsci.2016.01.002.
  44. ^ Шукла Р.С., Цинь Б., Ченг К. (октябрь 2014 г.). «Пептиды, используемые для доставки малых некодирующих РНК». Молекулярная фармацевтика . 11 (10): 3395–408. дои : 10.1021/mp500426r. ПМК 4186677 . ПМИД  25157701. 
  45. ^ Тэнси Б (11 августа 2006 г.). «Многообещающий глазной препарат от фирмы SF / Лечение дегенерации желтого пятна мешает передаче сообщений РНК». СФГЕЙТ .
  46. ^ «Первое исследование на людях демонстрирует терапевтический эффект подавления генов RNAi при лечении рака» (пресс-релиз). Институт онкологии Валь д'Эброн. 11 февраля 2013 г.
  47. ^ Табернеро Дж., Шапиро Г.И., ЛоРуссо П.М., Сервантес А., Шварц Г.К., Вайс Г.Дж. и др. (Апрель 2013). «Первое испытание на людях терапевтического воздействия РНК-интерференции, направленного на VEGF и KSP, у больных раком с поражением печени». Открытие рака . 3 (4): 406–17. дои : 10.1158/2159-8290.CD-12-0429 . ПМИД  23358650.
  48. ^ Гейсберт Т.В., Ли AC, Роббинс М., Гейсберт Дж.Б., Хонко А.Н., Суд В. и др. (май 2010 г.). «Защита приматов, кроме человека, от смертельного заражения вирусом Эбола с помощью РНК-интерференции: исследование, подтверждающее концепцию». Ланцет . 375 (9729): 1896–905. дои : 10.1016/S0140-6736(10)60357-1. ПМЦ 7138079 . ПМИД  20511019. 
  49. ^ Геррио, Матье; Кохли, Эвелин (2022). «Лекарства на основе РНК и регулирование: на пути к необходимой эволюции определений, данных в законодательстве Европейского союза». Границы в медицине . 9 . дои : 10.3389/fmed.2022.1012497 . ISSN  2296-858X. ПМЦ 9618588 . ПМИД  36325384. 
  50. ^ аб Розмари, Канасти (2013). «Материалы для доставки миРНК-терапевтических средств». Нат Матер . 12 (11): 967–977. Бибкод : 2013NatMa..12..967K. дои : 10.1038/nmat3765. ПМИД  24150415.
  51. ^ Фанелли А (2016). «Трансфекция: трансфекция in vitro» . Проверено 5 декабря 2017 г.
  52. ^ Дженсен К., Андерсон Дж.А., Гласс Э.Дж. (апрель 2014 г.). «Сравнение доставки малых интерферирующих РНК (миРНК) в макрофаги, полученные из бычьих моноцитов, путем трансфекции и электропорации». Ветеринарная иммунология и иммунопатология . 158 (3–4): 224–32. doi :10.1016/j.vetimm.2014.02.002. ПМЦ 3988888 . ПМИД  24598124. 
  53. ^ Чаттерджи Миннесота (2012). Учебник медицинской биохимии (8-е изд.). Нью-Дели: Медицинские издательства Jaypee Brothers. п. 304.
  54. ^ «Методы доставки миРНК в клетки млекопитающих». 13 октября 2016 г.
  55. ^ Такей Ю (2014). «Доставка миРНК в опухоли, опосредованная электропорацией». Протоколы электропорации . Методы молекулярной биологии. Том. 1121. стр. 131–8. дои : 10.1007/978-1-4614-9632-8_11. ISBN 978-1-4614-9631-1. ПМИД  24510818.
  56. ^ Талвар Г.П., Хаснайн С., Сарин С.К. (январь 2016 г.). Учебник биохимии, биотехнологии, смежной и молекулярной медицины (4-е изд.). PHI Learning Private Limited. п. 873. ИСБН 978-81-203-5125-7.
  57. ^ Моррис К.В., Росси Дж.Дж. (март 2006 г.). «Лентивирусно-опосредованная доставка миРНК для противовирусной терапии». Генная терапия . 13 (6): 553–8. дои : 10.1038/sj.gt.3302688. ПМК 7091755 . ПМИД  16397511. 
  58. ^ Камбон К., Деглон Н. (2013). «Лентивирусно-опосредованный перенос генов миРНК для лечения болезни Хантингтона». Протоколы тринуклеотидных повторов . Методы молекулярной биологии. Том. 1010. С. 95–109. дои : 10.1007/978-1-62703-411-1_7. ISBN 978-1-62703-410-4. ПМИД  23754221.
  59. ^ Тиманн К., Росси Дж. Дж. (июнь 2009 г.). «Терапия на основе РНКи - современное состояние, проблемы и перспективы». ЭМБО Молекулярная медицина . 1 (3): 142–51. дои : 10.1002/emmm.200900023. ПМК 3378126 . ПМИД  20049714. 
  60. ^ Ёнедзава, Сэй; Койде, Хироюки; Асаи, Томохиро (2020). «Последние достижения в доставке миРНК, опосредованной наночастицами на основе липидов». Обзоры расширенной доставки лекарств . 154 : 64–78. doi :10.1016/j.addr.2020.07.022. ISSN  0169-409X. ПМК 7406478 . ПМИД  32768564. 
  61. ↑ Комиссар Управления (24 марта 2020 г.). «FDA одобрило первую в своем роде таргетную терапию на основе РНК для лечения редкого заболевания». FDA . Проверено 24 мая 2021 г.
  62. ^ «FDA одобряет первую в своем роде таргетную терапию на основе РНК для лечения редкого заболевания» (пресс-релиз). Управление по контролю за продуктами и лекарствами США. 10 августа 2018 г.
  63. ↑ Дэвид, Адамс (5 июля 2018 г.). «Патисиран, терапевтическое средство RNAi для лечения наследственного транстиретинового амилоидоза». Медицинский журнал Новой Англии . 379 (1): 11–21. дои : 10.1056/NEJMoa1716153 . hdl : 2445/138257 . ПМИД  29972753.
  64. ^ «Вир и Алнилам расширяют сотрудничество для продвижения исследовательской РНКи-терапии, нацеленной на факторы хозяина для t» . Связи с инвесторами | Алнилам Фармасьютикалс, Инк . Проверено 24 мая 2021 г.
  65. ^ «Алнилам и Дицерна теперь друзья, что может создать проблемы для Эрроухеда» . Биофарма Дайв . Проверено 24 мая 2021 г.

дальнейшее чтение

Внешние ссылки

На Wikimedia Commons есть СМИ, связанные с малой интерферирующей РНК .