Данио -рерио ( Danio rerio ) — пресноводная рыба , принадлежащая к семейству гольянов ( Cyprinidae ) отряда Cypriniformes . Родом из Индии [2] и Южной Азии, это популярная аквариумная рыбка , часто продаваемая под торговым названием зебра данио [3] (и поэтому ее часто называют « тропической рыбой », хотя она является одновременно тропической и субтропической рыбой ). Встречается также в частных прудах .
Рыбка данио — важный и широко используемый модельный организм позвоночных в научных исследованиях. Рыба данио использовалась в биомедицине и биологии развития . Этот вид используется для исследований, например, нейроповеденческих явлений. Он также используется по психологическим причинам, таким как жестокое обращение, когнитивные и аффективные расстройства. Эти виды используются для изучения и наблюдения за поведенческими исследованиями .
Рыбка данио — производный член рода Brachydanio семейства Cyprinidae . Он имеет родственные отношения с Danio aesculapii . [4] Рыбки данио также тесно связаны с родом Devario , о чем свидетельствует филогенетическое древо близких видов. [5]
Рыбка данио обитает в пресноводных местах обитания в Южной Азии, где она встречается в Индии, Пакистане, Бангладеш, Непале и Бутане. [1] [6] [7] [8] Северная граница находится в Южных Гималаях , от бассейна реки Сатледж в приграничном районе Пакистана и Индии до штата Аруначал-Прадеш на северо-востоке Индии. [1] [7] Его ареал сосредоточен в бассейнах рек Ганг и Брахмапутра , а вид был впервые описан из реки Коси (нижний бассейн Ганга) в Индии. Его ареал дальше на юг более локальный, с разрозненными находками из регионов Западных и Восточных Гат . [8] [9] [10] Часто говорят, что он встречается в Мьянме (Бирма), но это полностью основано на записях до 1930 года и, вероятно, относится к близким родственникам, описанным только позже, особенно к Данио кьятиту . [8] [11] [12] [13] Аналогично, старые [ необходимы разъяснения ] записи из Шри-Ланки весьма сомнительны и остаются неподтвержденными. [11]
Рыбы данио были завезены в Калифорнию, Коннектикут, Флориду и Нью-Мексико в Соединенных Штатах, предположительно, в результате преднамеренного выпуска аквариумистами или побега с рыбных ферм . Популяция Нью-Мексико была истреблена к 2003 году, и неясно, выживут ли остальные, поскольку последние опубликованные записи были опубликованы несколько десятилетий назад. [14] В других местах этот вид был завезен в Колумбию и Малайзию. [7] [15]
Рыбы данио обычно обитают в умеренно проточной или стоячей чистой воде на довольно небольшой глубине в ручьях, каналах, канавах, старицах , прудах и рисовых полях . [8] [9] [15] [16] Обычно здесь присутствует некоторая растительность, либо подводная, либо нависающая над берегами, а дно песчаное, илистое или илистое, часто смешанное с галькой или гравием. При обследовании мест обитания рыб данио на большей части территории их распространения в Бангладеш и Индии выяснилось, что вода имела pH от почти нейтрального до несколько основного, а температура в основном колебалась от 16,5 до 34 ° C (61,7–93,2 ° F). [8] [9] [17] В одном необычно холодном месте температура составляла всего 12,3 °C (54,1 °F), а в другом необычно теплом месте — 38,6 °C (101,5 °F), но рыбки данио по-прежнему выглядели здоровыми. Необычно низкая температура наблюдалась в одном из самых высоких известных мест обитания рыб данио на высоте 1576 м (5171 фут) над уровнем моря, хотя этот вид был зарегистрирован на высоте 1795 м (5889 футов). [8] [9]
Рыбка данио названа в честь пяти однородных пигментированных горизонтальных синих полос по бокам тела, которые напоминают полосы зебры и доходят до конца хвостового плавника . Форма его веретеновидная, сжатая с боков, рот направлен вверх. Самец торпедообразной формы, с золотыми полосами между синими полосами; у самки более крупный беловатый живот и серебряные полосы вместо золотых. У взрослых самок перед началом анального плавника имеется небольшой генитальный сосочек . Рыбки данио могут достигать 4–5 см (1,6–2,0 дюйма) в длину [12] , хотя в дикой природе они обычно составляют 1,8–3,7 см (0,7–1,5 дюйма) с некоторыми вариациями в зависимости от местоположения. [9] Продолжительность его жизни в неволе составляет около двух-трех лет, хотя в идеальных условиях она может быть продлена до более чем пяти лет. [16] [18] В дикой природе это, как правило, однолетний вид. [1]
В 2015 году было опубликовано исследование о способности рыбок данио к эпизодической памяти . Участники продемонстрировали способность запоминать контекст в отношении объектов, мест и событий (что, когда, где). Эпизодическая память — это способность эксплицитных систем памяти, обычно связанная с сознательным опытом . [19]
Клетки Маутнера интегрируют широкий спектр сенсорных стимулов для выработки рефлекса бегства . McHenry et al. обнаружили, что эти стимулы включают сигналы боковой линии . 2009 г. и визуальные сигналы , соответствующие надвигающимся объектам, Temizer et al. 2015, Данн и др. 2016 г., и Яо и др. 2016. [20]
Примерное время генерации Danio rerio составляет три месяца. Для того чтобы произошла овуляция и нерест, должен присутствовать самец . Рыбки данио нерестятся асинхронно [21] и при оптимальных условиях (таких как наличие пищи и благоприятные параметры воды) могут успешно нереститься часто, даже ежедневно. [22] Самки способны нереститься с интервалом в два-три дня, откладывая в каждую кладку сотни яиц . После выпуска начинается эмбриональное развитие; при отсутствии сперматозоидов рост прекращается после первых нескольких делений клеток. Оплодотворенные яйца почти сразу становятся прозрачными, что делает D. rerio удобным модельным видом для исследований . [16] Было показано, что определение пола распространенных лабораторных штаммов является сложным генетическим признаком, а не следует простой системе ZW или XY. [23]
Эмбрион рыбки данио развивается быстро, предшественники всех основных органов появляются в течение 36 часов после оплодотворения. Эмбрион начинается с желтка с одной огромной клеткой наверху (см. изображение, панель 0,75 часа), которая делится на две (панель 0,75 часа) и продолжает делиться, пока не появятся тысячи маленьких клеток (панель 3,25 часа). Затем клетки мигрируют вниз по бокам желтка (8-часовая панель) и начинают формировать головку и хвост (16-часовая панель). Затем хвост растет и отделяется от тела (24-часовая панель). Желток со временем сжимается, поскольку рыба использует его в пищу по мере созревания в течение первых нескольких дней (панель 72 ч). Через несколько месяцев взрослая рыба достигает репродуктивной зрелости (нижняя панель).
Чтобы стимулировать рыбу к нересту, некоторые исследователи используют аквариум с выдвижной нижней вставкой, которая уменьшает глубину бассейна и имитирует берег реки. Рыбки данио лучше всего нерестятся утром из-за их циркадных ритмов . Используя этот метод, исследователям удалось собрать 10 000 эмбрионов за 10 минут. [24] В частности, одна пара взрослых рыб способна отложить 200–300 икринок за одно утро примерно за 5–10 штук. [25] Кроме того, известно, что самцы рыбок данио реагируют на более выраженные отметины на самках, то есть на «хорошие полосы», но в группе самцы спариваются с любой самкой, которую они могут найти. Что привлекает самок, в настоящее время непонятно. Присутствие растений, даже пластиковых, также, очевидно, способствует нересту. [24]
Воздействие экологически значимых концентраций диизононилфталата (DINP), обычно используемого в большом количестве пластиковых изделий, разрушает эндоканнабиноидную систему и тем самым влияет на репродуктивную функцию в зависимости от пола. [26]
Рыбки данио всеядны , в основном питаются зоопланктоном , фитопланктоном , насекомыми и личинками насекомых , хотя они могут есть и множество других продуктов, таких как черви и мелкие ракообразные , если их предпочтительные источники пищи недоступны. [16]
В исследованиях взрослых рыбок данио часто кормили артемией или парамецией . [27]
Рыбки данио — выносливые рыбы и считаются хорошими для начинающих аквариумистов. Их непреходящую популярность можно объяснить их игривым нравом [28] , а также быстрым размножением, эстетикой, низкой ценой и широкой доступностью. Они также хорошо себя чувствуют в стаях или косяках по шесть и более человек и хорошо взаимодействуют с другими видами рыб в аквариуме. Однако они восприимчивы к оодиниуму или бархатной болезни, микроспоридиям ( Pseudoloma нейрофилия ) и видам Mycobacterium . Если есть возможность, взрослые особи поедают птенцов, которых можно защитить, разделив две группы сеткой, ящиком для размножения или отдельным резервуаром. В неволе данио живут примерно сорок два месяца. У некоторых рыбок данио в неволе может развиться изогнутый позвоночник. [29]
Зебра-данио также использовалась для производства генетически модифицированной рыбы и была первым видом, который продавался под названием GloFish (рыба флуоресцентного цвета).
В конце 2003 года трансгенные рыбки данио, экспрессирующие зеленые , красные и желтые флуоресцентные белки, стали коммерчески доступны в Соединенных Штатах. Флуоресцентные штаммы имеют торговое название GloFish ; другие культивируемые сорта включают «золотой», «песчаный», «длинноплавник» и «леопард».
Леопардовый данио, ранее известный как Danio Frankei , представляет собой пятнистую цветовую морфу рыбки данио, возникшую в результате пигментной мутации. [30] Ксантистические формы как зебры, так и леопарда, а также линии с длинными плавниками были получены в рамках программ селекции для аквариумной торговли. [31]
Различные трансгенные и мутантные штаммы рыбок данио хранились в Китайском ресурсном центре рыбок данио (CZRC), некоммерческой организации, деятельность которой осуществлялась при совместной поддержке Министерства науки и технологий Китая и Китайской академии наук . [ нужна цитата ]
Информационная сеть рыбок данио ( ZFIN ) предоставляет актуальную информацию об известных на данный момент штаммах дикого типа (WT) D. rerio , некоторые из которых перечислены ниже. [32]
Гибриды между разными видами данио могут быть плодовитыми: например, между D. rerio и D. nigrofasciatus . [5]
D. rerio — распространенный и полезный научный модельный организм для изучения развития позвоночных и функций генов . Его использование в качестве лабораторного животного было впервые использовано американским молекулярным биологом Джорджем Стрейзингером и его коллегами из Университета Орегона в 1970-х и 1980-х годах; Клоны рыбок данио Штрайзингера были одними из первых успешных созданных клонов позвоночных. [33] Его важность была подтверждена успешными крупномасштабными передовыми генетическими скринингами (обычно называемыми Тюбингенским/Бостонским скринингом). У рыбы есть специальная онлайн-база данных с генетической, геномной информацией и информацией о развитии — Информационная сеть данио (ZFIN). Международный ресурсный центр рыбок данио (ZIRC) представляет собой хранилище генетических ресурсов, содержащее 29 250 аллелей , доступных для распространения среди исследовательского сообщества. D. rerio также является одним из немногих видов рыб, отправленных в космос .
Исследования с D. rerio принесли успехи в области биологии развития , онкологии , [34] токсикологии , [25] [35] [36] репродуктивных исследований, тератологии , генетики , нейробиологии , наук об окружающей среде , исследований стволовых клеток , регенеративной медицины , [37] [38] мышечные дистрофии [39] и эволюционная теория . [5]
Как модельная биологическая система, рыбка данио обладает многочисленными преимуществами для ученых. Его геном полностью секвенирован , и его поведение в процессе развития хорошо изучено, легко наблюдаемо и тестируемо. Его эмбриональное развитие происходит очень быстро, а эмбрионы относительно крупные, крепкие и прозрачные и способны развиваться вне матери. [40] Кроме того, легко доступны хорошо охарактеризованные мутантные штаммы.
Другие преимущества включают почти постоянный размер вида на раннем этапе развития, что позволяет использовать простые методы окрашивания , а также тот факт, что его двухклеточный эмбрион можно слить в одну клетку для создания гомозиготного эмбриона. Эмбрионы данио прозрачны и развиваются вне матки, что позволяет ученым изучать детали развития, начиная с оплодотворения и на протяжении всего развития. Рыбки данио также явно похожи на модели млекопитающих и людей в тестах на токсичность и демонстрируют дневной сон. цикл, сходный с поведением во сне млекопитающих. [41] Однако рыбки данио не являются идеальной исследовательской моделью; их научное использование имеет ряд недостатков, таких как отсутствие стандартной диеты [42] и наличие небольших, но важных различий между рыбками данио и млекопитающими в роли некоторых генов, связанных с заболеваниями человека. [43] [44]
Рыбки данио обладают способностью регенерировать волосковые клетки сердца и боковой линии на личиночных стадиях. [45] [46] Регенеративный процесс сердца, вероятно, включает в себя сигнальные пути, такие как Notch и Wnt ; гемодинамические изменения в поврежденном сердце воспринимаются эндотелиальными клетками желудочков и связанными с ними сердечными ресничками посредством механочувствительного ионного канала TRPV4 , что впоследствии облегчает путь передачи сигналов Notch через KLF2 и активирует различные нижестоящие эффекторы, такие как BMP-2 и HER2/neu . [47] В 2011 году Британский кардиологический фонд провел рекламную кампанию, рекламируя свое намерение изучить применимость этой способности к людям, заявляя, что его цель - собрать 50 миллионов фунтов стерлингов на финансирование исследований. [48] [49]
Также было обнаружено, что рыбки данио регенерируют фоторецепторные клетки и нейроны сетчатки после травмы, что, как было показано, опосредовано дедифференцировкой и пролиферацией мюллеровой глии . [50] Исследователи часто ампутируют спинной и брюшной хвостовые плавники и анализируют их отрастание, чтобы проверить наличие мутаций. Было обнаружено, что деметилирование гистонов происходит в месте ампутации, переводя клетки рыбок данио в «активное», регенеративное состояние, подобное стволовым клеткам. [51] [52] В 2012 году австралийские учёные опубликовали исследование, показавшее, что рыбки данио используют специализированный белок , известный как фактор роста фибробластов , для обеспечения заживления спинного мозга без образования глиальных рубцов после травмы. [53] [54] Кроме того, было обнаружено, что волосковые клетки задне- боковой линии регенерируют после повреждения или нарушения развития. [46] [55] Изучение экспрессии генов во время регенерации позволило идентифицировать несколько важных сигнальных путей, участвующих в этом процессе, таких как передача сигналов Wnt и фактор роста фибробластов . [55] [56]
При исследовании заболеваний нервной системы, включая нейродегенеративные заболевания, двигательные расстройства, психические расстройства и глухоту, исследователи используют рыбок данио, чтобы понять, как генетические дефекты, лежащие в основе этих состояний, вызывают функциональные нарушения в человеческом мозге, спинном мозге и органах чувств. [57] [58] [59] [60] Исследователи также изучали рыбок данио, чтобы получить новое представление о сложностях скелетно-мышечных заболеваний человека, таких как мышечная дистрофия . [61] Еще одним направлением исследований рыбок данио является понимание того, как ген под названием Hedgehog , биологический сигнал, который лежит в основе ряда видов рака у человека, контролирует рост клеток.
Инбредные штаммы и традиционные аутбредные популяции не были созданы для лабораторных рыбок данио, а генетическая изменчивость линий дикого типа среди учреждений может способствовать кризису репликации в биомедицинских исследованиях. [62] Генетические различия в линиях дикого типа среди популяций, поддерживаемых в разных исследовательских институтах, были продемонстрированы с использованием как однонуклеотидного полиморфизма [63] , так и микросателлитного анализа. [64]
Благодаря быстрому и короткому жизненному циклу и относительно большому размеру кладки D. rerio или рыбки данио являются полезной моделью для генетических исследований. Распространенным методом обратной генетики является снижение экспрессии генов или модификация сплайсинга с использованием антисмысловой технологии морфолино . Морфолиноолигонуклеотиды (МО) представляют собой стабильные синтетические макромолекулы , содержащие те же основания , что и ДНК или РНК; связываясь с комплементарными последовательностями РНК, они могут снижать экспрессию определенных генов или блокировать другие процессы, происходящие на РНК. МО можно вводить в одну клетку эмбриона после стадии 32 клеток, снижая экспрессию генов только в клетках, произошедших от этой клетки. Однако клетки раннего эмбриона (менее 32 клеток) непроницаемы для крупных молекул, [65] [66], что обеспечивает диффузию между клетками. Рекомендации по использованию Morpholinos у рыбок данио описывают соответствующие стратегии борьбы. [67] Морфолинозы обычно микроинъецируют в объеме 500 мкл непосредственно в эмбрионы рыбок данио на 1-2-клеточной стадии. Морфолино способно интегрироваться в большинство клеток эмбриона. [68]
Известная проблема с нокдаунами генов заключается в том, что, поскольку геном подвергся дупликации после дивергенции лучепёрых и лопастёрых рыб , не всегда легко надежно заглушить активность одного из двух генов- паралогов за счёт комплементации другой паралог. [69] Несмотря на сложности генома рыбок данио , существует ряд коммерчески доступных глобальных платформ для анализа как экспрессии генов с помощью микрочипов , так и регуляции промотора с использованием ChIP-на-чипе . [70]
Институт Wellcome Trust Sanger начал проект по секвенированию генома рыбок данио в 2001 году, и полная последовательность генома эталонного штамма Тюбингена общедоступна на странице генома рыбок данио Национального центра биотехнологической информации (NCBI). Эталонная последовательность генома рыбки данио аннотирована как часть проекта Ensembl и поддерживается Консорциумом Genome Reference Consortium . [71]
В 2009 году исследователи из Института геномики и интегративной биологии в Дели, Индия, объявили о секвенировании генома дикой линии рыбок данио, содержащего примерно 1,7 миллиарда генетических букв. [72] [73] Геном дикой рыбки данио был секвенирован с 39-кратным охватом. Сравнительный анализ с эталонным геномом рыбки данио выявил более 5 миллионов вариаций отдельных нуклеотидов и более 1,6 миллиона вариаций вставок-делеций. Эталонная последовательность генома рыбки данио размером 1,4 ГБ и более 26 000 генов, кодирующих белки, была опубликована Kerstin Howe et al. в 2013 году. [74]
В октябре 2001 года исследователи из Университета Оклахомы опубликовали полную последовательность митохондриальной ДНК D. rerio . [75] Его длина составляет 16 596 пар оснований. Это находится в пределах 100 пар оснований от других родственных видов рыб, и, в частности, всего на 18 пар длиннее, чем у золотой рыбки ( Carassius auratus ) и на 21 длиннее, чем у карпа ( Cyprinus carpio ). Порядок и содержание ее генов идентичны распространенной форме митохондриальной ДНК позвоночных . Он содержит 13 белок -кодирующих генов и некодирующую контрольную область, содержащую точку начала репликации тяжелой цепи. Между группой из пяти генов тРНК обнаружена последовательность, напоминающая начало репликации легкой цепи у позвоночных. Трудно сделать эволюционные выводы, потому что трудно определить, имеют ли изменения пар оснований адаптивное значение, путем сравнения с нуклеотидными последовательностями других позвоночных. [75]
Т-боксы и гомеобоксы жизненно важны для данио , как и для других позвоночных. [76] [77] Брюс и др. известны в этой области, а Брюс и др. 2003 г. и Брюс и др. 2005 г. выявили роль двух из этих элементов в ооцитах этого вида. [76] [77] Путем вмешательства через доминантный нефункциональный аллель и морфолино они обнаружили, что активатор транскрипции Т-бокса эомезодермин и его мишень mtx2 – фактор транскрипции – жизненно важны для эпиболии . [76] [77] (В работе Брюса и др., 2003 г. они не смогли подтвердить возможность того, что эомезодермин ведет себя как Vegt. [76] Ни они, ни кто-либо другой не смогли обнаружить какую-либо мутацию , которая – у матери – предотвратила бы начало развития процессы развития мезодермы или энтодермы у этого вида.) [ 76]
В 1999 году мутация перламутра была идентифицирована у рыбок данио, ортологов транскрипционного фактора MITF млекопитающих . [78] Мутации человеческого MITF приводят к дефектам глаз и потере пигмента, типу синдрома Ваарденбурга . В декабре 2005 года исследование золотого штамма идентифицировало ген, ответственный за его необычную пигментацию, как SLC24A5 , растворенный носитель, который, по-видимому, необходим для производства меланина , и подтвердило его функцию с помощью нокдауна морфолино. Затем ортологичный ген был охарактеризован у людей, и было обнаружено, что разница в одну пару оснований сильно разделяет светлокожих европейцев и темнокожих африканцев. [79] Рыбок данио с мутацией перламутра с тех пор скрещивали с рыбами с мутацией roy orbison (roy), чтобы получить рыбу линии Casper, которая не имеет меланофоров или иридофоров и прозрачна во взрослом возрасте. Эти рыбы характеризуются равномерно пигментированными глазами и полупрозрачной кожей. [80] [81]
Трансгенез — популярный подход к изучению функции генов рыбок данио. Создание трансгенных рыбок данио довольно просто с помощью метода с использованием транспозонной системы Tol2 . Элемент Tol2 , который кодирует ген полностью функциональной транспозазы, способной катализировать транспозицию в зародышевой линии рыбок данио. Tol2 — единственный природный мобильный элемент ДНК у позвоночных, у которого был идентифицирован автономный член. [82] [83] Примеры включают искусственное взаимодействие, возникающее между LEF1 и катенином бета-1 /β-катенином/ CTNNB1 . Дорский и др. 2002 исследовали роль Wnt в развитии путем трансгенной экспрессии репортера Lef1/β-catenin. [84]
Существуют хорошо зарекомендовавшие себя протоколы редактирования генов рыбок данио с использованием CRISPR-Cas9 [85], и этот инструмент использовался для создания генетически модифицированных моделей.
В 2008 году исследователи Бостонской детской больницы разработали новый вид рыбок данио под названием Casper, у взрослых особей которого была прозрачная кожа. [80] Это позволяет детально визуализировать клеточную активность, кровообращение, метастазирование и многие другие явления. [80] В 2019 году исследователи опубликовали результаты скрещивания штаммов prkdc -/- и IL2rga -/- , которые дали прозрачное, иммунодефицитное потомство, лишенное естественных клеток-киллеров, а также B- и T-клеток . Этот штамм может быть адаптирован к теплой воде с температурой 37 ° C (99 ° F), а отсутствие иммунной системы делает возможным использование ксенотрансплантатов , полученных от пациента . [86] В январе 2013 года японские ученые генетически модифицировали прозрачный экземпляр рыбки данио, чтобы он вызывал видимое свечение в периоды интенсивной мозговой активности. [87]
В январе 2007 года китайские исследователи из Фуданьского университета генетически модифицировали рыбок данио, чтобы обнаружить загрязнение озер и рек эстрогеном , которое связано с мужским бесплодием. Исследователи клонировали чувствительные к эстрогену гены и ввели их в оплодотворенные яйца рыбок данио. Модифицированная рыба становилась зеленой, если ее поместить в воду, загрязненную эстрогеном. [88]
В 2015 году исследователи из Университета Брауна обнаружили, что 10% генов рыбок данио не нуждаются в белке U2AF2 для инициации сплайсинга РНК . Эти гены имеют пары оснований ДНК AC и TG в виде повторяющихся последовательностей на концах каждого интрона . На 3ss (3'-сайт сплайсинга) пары оснований аденин и цитозин чередуются и повторяются, а на 5ss (5'-сайт сплайсинга) их комплементы тимин и гуанин также чередуются и повторяются. Они обнаружили, что белок U2AF2 меньше зависит от белка, чем у людей, у которых этот белок необходим для процесса сплайсинга. Паттерн повторяющихся пар оснований вокруг интронов, который изменяет вторичную структуру РНК , был обнаружен у других костистых рыб , но не у четвероногих . Это указывает на то, что эволюционные изменения у четвероногих, возможно, привели к тому, что люди стали полагаться на белок U2AF2 для сплайсинга РНК, в то время как эти гены у рыбок данио подвергаются сплайсингу независимо от присутствия белка. [89]
D. rerio имеет три трансферрина , каждый из которых тесно связан с другими позвоночными . [90]
Когда спариваются близкие родственники, потомство может проявлять пагубные последствия инбридинговой депрессии . Инбредная депрессия преимущественно вызвана гомозиготной экспрессией рецессивных вредных аллелей. [91] Можно ожидать, что у рыбок данио инбредная депрессия будет более серьезной в стрессовых условиях, в том числе вызванных антропогенным загрязнением . Воздействие рыбок данио на экологический стресс, вызванный химическим веществом клотримазолом, имидазольным фунгицидом, используемым в сельском хозяйстве, ветеринарии и медицине, усилило влияние инбридинга на ключевые репродуктивные признаки. [92] Жизнеспособность эмбрионов была значительно снижена у инбредных рыб, подвергшихся воздействию, и наблюдалась тенденция у инбредных самцов давать меньше потомства.
Рыбки данио являются распространенной моделью для исследований в области рыбоводства , включая патогены [93] [94] [95] и паразиты [93] [95] , вызывающие потерю урожая и/или распространение на соседние дикие популяции.
Эта полезность меньше, чем могла бы быть, из-за таксономической удаленности данио от наиболее распространенных видов аквакультуры. [94] Поскольку наиболее распространены лососевые и треска у Protacanthopterygii , а морской окунь , морской лещ , тилапия и камбала у Percomorpha , результаты по рыбе данио могут быть не совсем применимы. [94] Различные другие модели — Золотая рыбка ( Carassius auratus ), Медака ( Oryzias latipes ), Колюшка ( Gasterosteus aculeatus ), Плотва ( Rutilus rutilus ), Иглобрюх ( Takifugu Rubripes ), Меченосец ( Xiphophorus hellerii ) — обычно используются реже, но будут использоваться ближе к конкретному целевому виду. [95]
Единственным исключением являются карп (включая белого амура, Ctenopharyngodon idella ) [94] и молочная рыба ( Chanos chanos ) [95] , которые довольно близки, оба относятся к Cyprinidae . Однако следует также отметить, что данио во многих случаях оказывается полезной моделью для млекопитающих, и между ними значительно большая генетическая дистанция , чем между данио и любой рыбой, выращиваемой на фермах. [94]
У мутанта с дефектом глюкокортикоидного рецептора и сниженным исследовательским поведением флуоксетин восстанавливал нормальное исследовательское поведение. [96] Это демонстрирует взаимосвязь между глюкокортикоидами, флуоксетином и исследованием у этой рыбы. [96]
Рыбка данио и личинка рыбки данио являются подходящим модельным организмом для открытия и разработки лекарств. Как позвоночное животное с 70% генетической гомологией с человеком [74] оно может предсказать здоровье и болезни человека, а его небольшой размер и быстрое развитие облегчают эксперименты в более крупных и быстрых масштабах, чем при более традиционных исследованиях in vivo , включая развитие высокопроизводительных автоматизированных инструментов расследования. [97] [98] Как показали текущие исследовательские программы, модель рыбок данио позволяет исследователям не только идентифицировать гены, которые могут лежать в основе заболеваний человека, но и разрабатывать новые терапевтические агенты в программах открытия лекарств. [99] Эмбрионы рыбок данио оказались быстрой, экономичной и надежной моделью тератологического анализа. [100]
Скрининг на наркотики у рыбок данио можно использовать для выявления новых классов соединений с биологическим действием или для перепрофилирования существующих лекарств для новых целей; Примером последнего может быть скрининг, который показал, что широко используемый статин ( розувастатин ) может подавлять рост рака простаты . [101] На сегодняшний день было проведено 65 скринингов малых молекул, и по крайней мере один из них привел к клиническим испытаниям. [102] В рамках этих скринингов еще предстоит решить множество технических проблем, в том числе различную скорость абсорбции лекарств, приводящую к уровням внутреннего воздействия, которые невозможно экстраполировать по концентрации воды, а также высокие уровни естественных различий между отдельными животными. [102]
Чтобы понять эффекты лекарств, необходимо внутреннее воздействие препарата, поскольку оно определяет фармакологический эффект. Перевод экспериментальных результатов с рыбок данио на высших позвоночных (например, человека) требует взаимосвязи концентрация-эффект, которую можно получить на основе фармакокинетического и фармакодинамического анализа. [103] Однако из-за его небольшого размера очень сложно количественно оценить внутреннее воздействие препарата. Традиционно для того, чтобы охарактеризовать профиль концентрации препарата с течением времени, берут несколько образцов крови, но этот метод еще предстоит разработать. На сегодняшний день разработана только одна фармакокинетическая модель парацетамола на личинках рыбок данио. [104]
Используя интеллектуальные методы анализа данных, можно понять патофизиологические и фармакологические процессы и впоследствии перенести их на высших позвоночных, включая человека. [103] [105] Примером может служить использование системной фармакологии , которая представляет собой интеграцию системной биологии и фармакометрики . Системная биология характеризует организм (часть его) посредством математического описания всех соответствующих процессов. Это могут быть, например, различные пути передачи сигнала, которые на конкретный сигнал приводят к определенному ответу. Путем количественной оценки этих процессов можно понять и предсказать их поведение в здоровых и больных ситуациях. Фармакометрика использует данные доклинических экспериментов и клинических испытаний для характеристики фармакологических процессов, лежащих в основе связи между дозой лекарства и его реакцией или клиническим исходом. Это может быть, например, абсорбция лекарственного средства в организме или его выведение из организма, или его взаимодействие с мишенью для достижения определенного эффекта. Путем количественной оценки этих процессов можно понять и спрогнозировать их поведение после различных доз или у разных пациентов и предсказать их для новых доз или пациентов. Интегрируя эти две области, системная фармакология может улучшить понимание взаимодействия лекарства с биологической системой путем математического количественного определения и последующего прогнозирования новых ситуаций, таких как новые лекарства, новые организмы или пациенты. Используя эти вычислительные методы, ранее упомянутый анализ внутреннего воздействия парацетамола на личинок рыбок данио показал разумную корреляцию между клиренсом парацетамола у рыбок данио и у высших позвоночных, включая человека. [104]
Рыбки данио использовались для создания нескольких трансгенных моделей рака, включая меланому , лейкемию , рак поджелудочной железы и гепатоцеллюлярную карциному . [106] [107] У рыбок данио, экспрессирующих мутированные формы онкогенов BRAF или NRAS, развивается меланома при помещении на фон с дефицитом р53. Гистологически эти опухоли очень напоминают заболевания человека, полностью пригодны для трансплантации и демонстрируют крупномасштабные геномные изменения. Модель меланомы BRAF использовалась в качестве платформы для двух экранов, опубликованной в марте 2011 года в журнале Nature . В одном исследовании модель использовалась в качестве инструмента для понимания функциональной важности генов, которые, как известно, амплифицируются и сверхэкспрессируются при меланоме человека. [108] Один ген, SETDB1, заметно ускорял образование опухолей в системе рыбок данио, демонстрируя его важность в качестве нового онкогена меланомы. Это было особенно важно, поскольку известно, что SETDB1 участвует в эпигенетической регуляции, которая все чаще считается центральной в биологии опухолевых клеток.
В другом исследовании была предпринята попытка терапевтического воздействия на генетическую программу, присутствующую в исходной клетке нервного гребня опухоли , с использованием подхода химического скрининга. [109] Это показало, что ингибирование белка DHODH (с помощью небольшой молекулы, называемой лефлуномидом) предотвращает развитие стволовых клеток нервного гребня, которые в конечном итоге приводят к меланоме посредством вмешательства в процесс элонгации транскрипции. Поскольку этот подход будет нацелен на «идентичность» клетки меланомы, а не на одну генетическую мутацию, лефлуномид может оказаться полезным при лечении меланомы человека. [110]
В сердечно-сосудистых исследованиях рыбку данио использовали для моделирования модели инфаркта миокарда у человека. Сердце рыбки данио полностью регенерирует примерно через 2 месяца после травмы без образования рубцов. [111] Механизм передачи адренергических сигналов альфа -1 , участвующий в этом процессе, был идентифицирован в исследовании 2023 года. [112] Рыба данио также используется в качестве модели свертывания крови , развития кровеносных сосудов и врожденных заболеваний сердца и почек . [113]
В рамках программ исследования острого воспаления , основного процесса, лежащего в основе многих заболеваний, исследователи создали модель воспаления рыб данио и его разрешение. Этот подход позволяет детально изучить генетический контроль воспаления и возможность выявления потенциальных новых лекарств. [114]
Рыба данио широко использовалась в качестве модельного организма для изучения врожденного иммунитета позвоночных. Врожденная иммунная система способна к фагоцитарной активности через 28–30 часов после оплодотворения (hpf) [115] , тогда как адаптивный иммунитет функционально не созревает в течение как минимум 4 недель после оплодотворения. [116]
Поскольку иммунная система рыбок данио и человека относительно консервативна, на рыбках данио можно моделировать многие инфекционные заболевания человека. [117] [118] [119] [120] Прозрачные ранние стадии жизни хорошо подходят для визуализации in vivo и генетического анализа взаимодействий хозяин-патоген. [121] [122] [123] [124] Модели данио для широкого спектра бактериальных, вирусных и паразитарных патогенов уже созданы; например, модель туберкулеза с рыбками данио дает фундаментальное представление о механизмах патогенеза микобактерий. [125] [126] [127] [128] Кроме того, была разработана роботизированная технология для высокопроизводительного скрининга противомикробных препаратов с использованием моделей инфекции рыбок данио. [129] [130]
Еще одной примечательной особенностью рыбок данио является то, что они обладают четырьмя типами колбочек , причем чувствительные к ультрафиолету клетки дополняют подтипы красных, зеленых и синих колбочек, обнаруженных у людей. Таким образом, рыбки данио могут наблюдать очень широкий спектр цветов. Этот вид также изучается, чтобы лучше понять развитие сетчатки; в частности, как колбочки сетчатки образуют так называемую «конусную мозаику». Рыбы данио, в дополнение к некоторым другим костистым рыбам, особенно известны чрезвычайной точностью расположения колбочек. [131]
Это исследование характеристик сетчатки рыбок данио также экстраполировалось на медицинские исследования. В 2007 году исследователи из Университетского колледжа Лондона вырастили стволовые клетки взрослых рыбок данио , обнаруженные в глазах рыб и млекопитающих, которые развиваются в нейроны сетчатки. Их можно будет вводить в глаз для лечения заболеваний, повреждающих нейроны сетчатки — почти всех заболеваний глаз, включая дегенерацию желтого пятна , глаукому и слепоту, связанную с диабетом . Исследователи изучили глиальные клетки Мюллера в глазах людей в возрасте от 18 месяцев до 91 года и смогли превратить их во все типы нейронов сетчатки. Они также смогли легко вырастить их в лаборатории. Стволовые клетки успешно мигрировали в сетчатку больных крыс и приобрели характеристики окружающих нейронов. Команда заявила, что они намерены разработать такой же подход на людях. [132] [133]
Мышечные дистрофии (МД) представляют собой гетерогенную группу генетических заболеваний, которые вызывают мышечную слабость, аномальные сокращения и атрофию мышц, что часто приводит к преждевременной смерти. Рыбки данио широко используются в качестве модельного организма для изучения мышечных дистрофий. [39] Например, мутант sapje ( sap ) является ортологом мышечной дистрофии Дюшенна (МДД) у рыбок данио. [134] Мачука-Цили и его коллеги применили рыбок данио, чтобы определить роль альтернативного фактора сплайсинга, MBNL, в патогенезе миотонической дистрофии типа 1 (DM1). [135] Совсем недавно Тодд и др. описали новую модель рыбок данио, предназначенную для изучения влияния экспрессии повторов CUG на раннем этапе развития заболевания СД1. [136] Рыбки данио также являются отличной животной моделью для изучения врожденных мышечных дистрофий, включая ВМД типа 1А (CMD 1A), вызванную мутацией гена ламинина α2 человека (LAMA2). [137] Рыбки данио, благодаря своим преимуществам, обсуждавшимся выше, и, в частности, способности эмбрионов рыбок данио поглощать химические вещества, стали предпочтительной моделью при скрининге и тестировании новых лекарств против мышечных дистрофий. [138]
Рыбки данио использовались в качестве модельных организмов для изучения костного метаболизма, обновления тканей и резорбционной активности. Эти процессы во многом эволюционно консервативны. Их использовали для изучения остеогенеза (костеобразования), оценки дифференцировки, активности отложения матрикса и перекрестных помех скелетных клеток, для создания и выделения мутантов, моделирующих заболевания костей человека, а также для тестирования новых химических соединений на способность устранять дефекты костей. [139] [140] Личинки можно использовать для отслеживания образования новых ( de novo ) остеобластов во время развития костей. Они начинают минерализацию костных элементов уже через 4 дня после оплодотворения. В последнее время взрослые рыбы данио используются для изучения сложных возрастных заболеваний костей, таких как остеопороз и несовершенный остеогенез . [141] (Эластоидная) чешуя рыбок данио выполняет функцию защитного внешнего слоя и представляет собой небольшие костные пластинки, образованные остеобластами. Эти экзоскелетные структуры образованы костным матриксом, депонирующим остеобласты, и ремоделируются остеокластами. Чешуя также служит основным хранилищем кальция в рыбе. Их можно культивировать ex-vivo (сохранять живыми вне организма) в многолуночном планшете, что позволяет манипулировать лекарствами и даже проводить скрининг новых лекарств, которые могут изменить костный метаболизм (между остеобластами и остеокластами). [141] [142] [143]
Развитие поджелудочной железы рыбок данио очень гомологично млекопитающим, таким как мыши. Сигнальные механизмы и функции поджелудочной железы очень схожи. Поджелудочная железа имеет эндокринный отдел, содержащий множество клеток. Двумя примерами таких клеток являются PP-клетки поджелудочной железы, которые производят полипептиды, и β-клетки, которые производят инсулин. Такая структура поджелудочной железы, наряду с системой гомеостаза глюкозы, полезна при изучении заболеваний, таких как диабет, связанных с поджелудочной железой. Модели функции поджелудочной железы, такие как флуоресцентное окрашивание белков, полезны для определения процессов гомеостаза глюкозы и развития поджелудочной железы. Тесты на толерантность к глюкозе были разработаны с использованием рыбок данио, и теперь их можно использовать для проверки непереносимости глюкозы или диабета у людей. Функция инсулина также тестируется на рыбках данио, что внесет дополнительный вклад в человеческую медицину. Большая часть работы, связанной с знаниями о гомеостазе глюкозы, была получена в результате работы с рыбками данио, перенесенными на человека. [144]
Рыбки данио использовались в качестве модельной системы для изучения ожирения, при этом проводились исследования как генетического ожирения, так и ожирения, вызванного чрезмерным питанием. У рыбок данио, страдающих ожирением, как и у млекопитающих, страдающих ожирением, наблюдается нарушение регуляции метаболических путей, контролирующих липиды, что приводит к увеличению веса без нормального липидного обмена. [144] Как и млекопитающие, рыбки данио хранят избыток липидов во висцеральных, внутримышечных и подкожных жировых отложениях. Эти и другие причины делают рыбок данио хорошими моделями для изучения ожирения у людей и других видов. Генетическое ожирение обычно изучают на трансгенных или мутировавших рыбках данио с генами, вызывающими ожирение. Например, у трансгенных рыбок данио со сверхэкспрессией AgRP, эндогенного антагониста мелакортина, наблюдалась повышенная масса тела и отложение жира во время роста. [144] Хотя гены рыбок данио могут не совпадать с генами человека, эти тесты могут дать важную информацию о возможных генетических причинах и методах лечения генетического ожирения у человека. [144] Модели рыбок данио с ожирением, вызванным диетой, полезны, поскольку диету можно изменить с самого раннего возраста. Диеты с высоким содержанием жиров и общее переедание демонстрируют быстрое увеличение отложения жира, увеличение ИМТ, гепатостеатоз и гипертриглицеридемию. [144] Однако особи с нормальным содержанием жира и перекормом по-прежнему метаболически здоровы, а особи с высоким содержанием жиров — нет. [144] Понимание различий между типами ожирения, вызванного питанием, может оказаться полезным в лечении человека ожирения и связанных с ним заболеваний. [144]
Рыбки данио использовались в качестве модельной системы в исследованиях экологической токсикологии . [25]
Рыбки данио использовались в качестве модельной системы для изучения эпилепсии. Приступы у млекопитающих можно воспроизвести молекулярно, поведенчески и электрофизиологически, используя лишь часть ресурсов, необходимых для экспериментов на млекопитающих. [145]