Лабораторная мышь или лабораторная мышь — это небольшое млекопитающее отряда Rodentia , которое разводят и используют для научных исследований или кормления некоторых домашних животных. Лабораторные мыши обычно относятся к виду Mus musculus . Они являются наиболее часто используемой моделью исследования млекопитающих и используются для исследований в области генетики , физиологии , психологии , медицины и других научных дисциплин . Мыши принадлежат к кладе Euarchontoglires , в которую входят люди . Такое близкое родство, связанная с ним высокая гомология с человеком, простота содержания и обращения, а также высокая скорость размножения делают мышей особенно подходящими моделями для исследований, ориентированных на человека. Геном лабораторной мыши секвенирован, и многие мышиные гены имеют человеческие гомологи. [1] Лабораторные мыши продаются в зоомагазинах как корм для змей , а также их можно содержать в качестве домашних животных .
Другие виды мышей, которые иногда используются в лабораторных исследованиях, включают два американских вида: белоногую мышь ( Peromyscus leucopus ) и североамериканскую оленьую мышь ( Peromyscus maniculatus ).
Мышей использовали в биомедицинских исследованиях с 17 века, когда Уильям Харви использовал их для своих исследований репродукции и кровообращения, а Роберт Гук использовал их для исследования биологических последствий повышения давления воздуха. [2] В XVIII веке Джозеф Пристли и Антуан Лавуазье использовали мышей для изучения дыхания . В 19 веке Грегор Мендель провел свои первые исследования наследования цвета шерсти мышей, но его начальник попросил его прекратить разводить в своей камере «вонючие существа, которые, кроме того, совокуплялись и занимались сексом». [2] Затем он переключил свои исследования на горох, но, поскольку его наблюдения были опубликованы в малоизвестном ботаническом журнале, их фактически игнорировали более 35 лет, пока они не были заново открыты в начале 20 века. В 1902 году Люсьен Куэно опубликовал результаты своих экспериментов на мышах, которые показали, что законы наследственности Менделя справедливы и для животных — результаты, которые вскоре были подтверждены и распространены на другие виды. [2]
В начале 20 века студент Гарварда Кларенс Кук Литтл проводил исследования генетики мышей в лаборатории Уильяма Эрнеста Касла . Литтл и Касл тесно сотрудничали с Эбби Латроп , которая занималась разведением причудливых мышей и крыс, которых она продавала любителям грызунов и владельцам экзотических домашних животных, а позже начала продавать в больших количествах научным исследователям. [3] Вместе они создали инбредную линию мышей DBA (разбавленный, коричневый и не-агути) и начали систематическое создание инбредных линий. [4] С тех пор мышь широко использовалась в качестве модельного организма и связана со многими важными биологическими открытиями 20-го и 21-го веков. [2]
Лаборатория Джексона в Бар-Харборе, штат Мэн, в настоящее время является одним из крупнейших в мире поставщиков лабораторных мышей: около 3 миллионов мышей в год. [5] Лаборатория также является мировым источником более чем 8000 штаммов генетически определенных мышей и является домом для базы данных информатики генома мыши . [6]
Начало размножения происходит примерно в 50-дневном возрасте как у самок, так и у самцов, хотя у самок первая течка может быть в 25–40 дней. Мыши полиэстральные и размножаются круглый год; овуляция спонтанная. Продолжительность эстрального цикла составляет 4–5 дней и длится около 12 часов, наступает в вечернее время. Вагинальные мазки полезны при своевременном спаривании для определения стадии эстрального цикла. Спаривание можно подтвердить по наличию копулятивной пробки во влагалище в течение 24 часов после совокупления. Наличие сперматозоидов в вагинальном мазке также является надежным индикатором спаривания. [7]
Средний срок беременности составляет 20 дней. Фертильная послеродовая течка наступает через 14–24 часа после родов , а одновременная лактация и беременность продлевают беременность на 3–10 дней из-за задержки имплантации. Средний размер помета составляет 10–12 при оптимальной продуктивности, но сильно зависит от штамма. Как правило, инбредные мыши имеют тенденцию иметь более длительный период беременности и меньший помет, чем беспородные и гибридные мыши. Детенышей называют щенками, они при рождении весят 0,5–1,5 г (0,018–0,053 унции), лишены шерсти, имеют закрытые веки и уши. Щенков отнимают от груди в возрасте 3 недель, когда они весят около 10–12 г (0,35–0,42 унции). Если самка не спаривается во время послеродовой течки, она возобновляет езду на велосипеде через 2–5 дней после отъема. [7]
Новорожденные самцы отличаются от новорожденных самок тем, что у самцов отмечают большее аногенитальное расстояние и больший генитальный сосочек . Лучше всего это сделать, подняв хвосты однопометников и сравнив промежность . [7]
Мыши — млекопитающие клады ( группы, состоящей из предка и всех его потомков) Euarchontoglires , что означает, что они входят в число ближайших родственников человека , не являющихся приматами , наряду с зайцеобразными , древесными землеройками и летающими лемурами .
Лабораторные мыши относятся к тому же виду, что и домовая мышь ; однако они часто сильно различаются по поведению и физиологии . Существуют сотни известных инбредных , аутбредных и трансгенных штаммов. Штамм , по отношению к грызунам, представляет собой группу , в которой все члены максимально генетически идентичны. У лабораторных мышей это достигается путем инбридинга . Имея этот тип популяции, можно проводить эксперименты по изучению роли генов или проводить эксперименты, исключающие генетическую изменчивость как фактор. Напротив, аутбредные популяции используются, когда идентичные генотипы не нужны или требуется популяция с генетическими вариациями, и их обычно называют запасами , а не штаммами . [8] [9] Было разработано более 400 стандартизированных инбредных штаммов. [ нужна цитата ]
Большинство лабораторных мышей представляют собой гибриды разных подвидов, чаще всего Mus musculus Domesticus и Mus musculus musculus . Лабораторные мыши могут иметь различные цвета шерсти, включая агути, черный и альбиносов . Многие (но не все) лабораторные штаммы являются инбредными. Различные штаммы идентифицируются определенными комбинациями букв и цифр; например C57BL/6 и BALB/c . Первые такие инбредные штаммы были созданы в 1909 году Кларенсом Куком Литтлом , который оказал влияние на продвижение мыши как лабораторного организма. [10] По оценкам, в 2011 году 83% лабораторных грызунов, поставляемых в США, были лабораторными мышами C57BL/6. [11]
Секвенирование генома лабораторных мышей было завершено в конце 2002 года с использованием штамма C57BL/6. Это был лишь второй геном млекопитающих, секвенированный после человека. [11] Гаплоидный геном имеет длину около трех миллиардов пар оснований (3000 Мб, распределенных по 19 аутосомным хромосомам плюс 1, соответственно , 2 половые хромосомы), поэтому равен размеру генома человека. [ нужна ссылка ] Оценить количество генов, содержащихся в геноме мыши, сложно, отчасти потому, что определение гена все еще обсуждается и расширяется. В настоящее время количество первичных кодирующих генов у лабораторных мышей составляет 23 139. [12] по сравнению с примерно 20 774 у людей. [12]
Различные мутантные линии мышей были созданы рядом методов. Небольшой выбор из множества доступных штаммов включает в себя:
С 1998 года стало возможным клонировать мышей из клеток, полученных от взрослых животных.
В исследованиях используется множество линий мышей , однако в большинстве областей предпочтительными животными обычно являются инбредные линии. Инбредные мыши определяются как продукт скрещивания не менее 20 поколений брата X и сестры, при этом все особи происходят от одной племенной пары. [15]
У инбредных мышей есть несколько особенностей, которые делают их идеальными для исследовательских целей. Они изогенны , что означает, что все животные практически генетически идентичны. [16] Примерно 98,7% генетических локусов в геноме являются гомозиготными , поэтому, вероятно, не существует «скрытых» рецессивных признаков , которые могли бы вызвать проблемы. [16] Из-за этой стабильности они также имеют очень унифицированные фенотипы . [16]
Многие инбредные штаммы обладают хорошо документированными характеристиками, которые делают их идеальными для конкретных типов исследований. В следующей таблице показаны 10 самых популярных штаммов по версии Jackson Laboratories .
Проект DO ( Diversity Outbred ) компании Jackson Labs [30] представляет собой программу разведения мышей с использованием нескольких инбредных линий-основателей для создания генетически разнообразной популяции мышей для использования в научных исследованиях.
Эти мыши созданы для точного генетического картирования и захватывают большую часть генетического разнообразия мышиного генома. [31]
В результате этого проекта было получено более 1000 генетически разнообразных мышей, которые были использованы для выявления генетических факторов таких заболеваний, как ожирение, рак, диабет и расстройства, связанные с употреблением алкоголя. [32]
Лабораторные мыши сохранили многие физические и поведенческие характеристики домашних мышей; однако из-за многих поколений искусственного отбора некоторые из этих характеристик теперь заметно различаются. Из-за большого количества линий лабораторных мышей комплексно описать внешний вид и поведение всех из них нецелесообразно; однако ниже они описаны для двух наиболее часто используемых штаммов.
Мыши C57BL/6 имеют темно-коричневую, почти черную шерсть. Они более чувствительны к шуму и запахам и с большей вероятностью укусят, чем более послушные лабораторные штаммы, такие как BALB/c . [39]
Мыши C57BL/6 (и другие линии), содержащиеся в группах, демонстрируют поведение, при котором доминирующая мышь в клетке выборочно удаляет волосы у своих подчиненных товарищей по клетке. [40] Мыши, которых часто стригли, могут иметь большие залысины на теле, обычно вокруг головы, морды и плеч, хотя стрижка может появиться на любом участке тела. Волосы и вибриссы можно удалить. стрижение чаще наблюдается у самок мышей; мыши-самцы с большей вероятностью будут демонстрировать доминирование в драках. [41]
C57BL/6 имеет несколько необычных характеристик, которые делают его полезным для некоторых исследований, но непригодным для других: он необычайно чувствителен к боли и холоду, а обезболивающие препараты для этого штамма менее эффективны. [42] В отличие от большинства линий лабораторных мышей, C57BL/6 пьют алкогольные напитки добровольно. Они более восприимчивы, чем в среднем, к морфиновой зависимости , атеросклерозу и возрастной потере слуха . [11] При прямом сравнении с мышами BALB/c мыши C57BL/6 также демонстрируют как устойчивую реакцию на социальные вознаграждения [43] [44], так и эмпатию. [45]
BALB/c — это выведенный в лаборатории штамм альбиноса , от которого получен ряд распространенных субштаммов. С 1920 года было выведено более 200 поколений мышей BALB/c, которые распространены по всему миру и являются одними из наиболее широко используемых инбредных линий, используемых в экспериментах на животных . [46]
BALB/c известны тем, что демонстрируют высокий уровень тревожности и относительно устойчивы к атеросклерозу , вызванному диетой , что делает их полезной моделью для сердечно-сосудистых исследований. [47] [48]
Самцы мышей BALB/c агрессивны и будут драться с другими самцами, если их содержать вместе. Однако подштамм BALB/Lac гораздо более послушен. [49] Большинство сублиний мышей BALB/c имеют долгую репродуктивную продолжительность жизни. [46]
Между различными субштаммами BALB/c отмечены различия, хотя считается, что они обусловлены мутациями , а не генетическим загрязнением. [50] BALB/cWt необычен тем, что 3% потомства демонстрируют истинный гермафродитизм . [51]
Полезной моделью болезни Альцгеймера (БА) в лаборатории является линия мышей Tg2576. Двойные мутации K670M и N671L, наблюдаемые в сплайс-варианте человеческого белка-предшественника амилоида (APP) 695, экспрессируются этим штаммом. Экспрессией управляет промотор гена прионного белка хомяка, преимущественно в нейронах . По сравнению с нетрансгенными однопометными мышами Tg2576 наблюдается пятикратное увеличение Aβ40 и 10-15-кратное увеличение Aβ42/43. [52] [53] [54] У этих мышей развиваются старческие бляшки, связанные с клеточными воспалительными реакциями, поскольку в их мозге примерно в пять раз больше трансгенного мутантного человеческого АРР, чем местного мышиного АРР. У мышей наблюдаются основные характеристики болезни Альцгеймера (БА), такие как повышенное образование амилоидных фибрилл с возрастом, образование бляшек и нарушение обучения и памяти гиппокампа . Мыши Tg2576 являются хорошей моделью ранней стадии болезни Альцгеймера, поскольку у них наблюдаются нарушения амилоидогенеза и рабочей памяти, связанные с возрастом, но не наблюдается дегенерации нейронов. [55] Отсутствие гибели клеток позволяет предположить, что изменения в типичных клеточных сигнальных каскадах, участвующих в обучении и синаптической пластичности, вероятно, связаны с фенотипом памяти. Ассоциативные нарушения обучения усугубляются, когда мышей Tg2576 скрещивают с трансгенными животными PS1, имеющими мутацию A246E FAD. Эти перекресты способствуют накоплению амилоида и развитию бляшек в ЦНС. [56] Это подтверждает теорию о том, что на патогенез БА влияет взаимодействие между продуктами генов APP и PS-1. Хотя мыши Tg2576 не полностью воспроизводят позднюю стадию болезни Альцгеймера с гибелью клеток, они предлагают платформу для изучения физиологии и биохимии заболевания. С помощью моделей трансгенных мышей исследователи могут добиться прогресса в исследованиях болезни Альцгеймера, понимая сложные взаимосвязи. между продуктами генов, которые участвуют в выработке пептида Aβ. В физиологии и биохимии заболевания. [57] [58]
Традиционно лабораторных мышей хватали за основание хвоста. Однако недавние исследования показали, что такой тип обращения увеличивает тревожность и аверсивное поведение. [59] Вместо этого рекомендуется обращаться с мышами, используя туннель или сложенные руки. В поведенческих тестах мыши с хвостовой ручкой проявляют меньшую готовность исследовать тестовые стимулы, в отличие от мышей с туннельной ручкой, которые с готовностью исследуют тестовые стимулы и демонстрируют устойчивые реакции на них. [60]
В природе мыши обычно являются травоядными животными , потребляющими широкий спектр фруктов или зерна. [61] Однако в лабораторных исследованиях обычно необходимо избегать биологических вариаций, и для достижения этого лабораторных мышей почти всегда кормят только коммерческим гранулированным кормом для мышей. Потребление пищи составляет примерно 15 г (0,53 унции) на 100 г (3,5 унции) массы тела в день; потребление воды составляет примерно 15 мл (0,53 имп. жидкая унция; 0,51 жидкая унция США) на 100 г массы тела в день. [7]
Пути введения инъекций лабораторным мышам преимущественно подкожные , внутрибрюшинные и внутривенные . Внутримышечное введение не рекомендуется из-за небольшой мышечной массы. [62] Также возможно внутримозговое введение. Для каждого маршрута указано рекомендуемое место инъекции, приблизительный диаметр иглы и рекомендуемый максимальный объем инъекции за один раз в одно место, как указано в таблице ниже:
Чтобы облегчить внутривенную инъекцию в хвост, лабораторных мышей можно осторожно согревать под лампами, чтобы расширить сосуды. [62]
Распространенной схемой общей анестезии домовой мыши является кетамин (в дозе 100 мг на кг массы тела) плюс ксилазин (в дозе 5–10 мг на кг), вводимый внутрибрюшинно. [64] Продолжительность эффекта составляет около 30 минут. [64]
Утвержденные процедуры эвтаназии лабораторных мышей включают сжатый газ CO 2 , инъекционные барбитураты , ингаляционные анестетики, такие как галотан, и физические методы , такие как вывих шейных позвонков и обезглавливание. [65] В 2013 году Американская ветеринарная медицинская ассоциация выпустила новые рекомендации по индукции CO 2 , заявив, что скорость потока от 10% до 30% объема/мин является оптимальной для эвтаназии лабораторных мышей. [66]
Недавнее исследование выявило мышиный астровирус у лабораторных мышей, содержащихся в более чем половине исследованных институтов США и Японии. [67] Мышиный астровирус был обнаружен у девяти линий мышей, включая NSG , NOD-SCID, NSG-3GS, C57BL6- Timp-3 -/- , uPA-NOG, B6J, ICR, Bash2 и BALB/C, с различной степенью распространенности. Патогенность мышиного астровируса неизвестна.
В Великобритании, как и в случае со всеми другими позвоночными и некоторыми беспозвоночными, любая научная процедура, которая может вызвать «боль, страдания, страдания или длительный вред», регулируется Министерством внутренних дел в соответствии с Законом о животных (научные процедуры) 1986 года . Правила Великобритании считаются одними из самых полных и строгих в мире. [68] Подробные данные об использовании лабораторных мышей (и других видов) в исследованиях в Великобритании публикуются каждый год. [69] В Великобритании в 2013 году в учреждениях, занимающихся научными процедурами, было проведено в общей сложности 3 077 115 регламентированных процедур на мышах, лицензированных в соответствии с Законом. [70]
В США лабораторные мыши не регулируются Законом о защите животных , администрируемым APHIS Министерства сельского хозяйства США . Однако Закон об общественном здравоохранении (PHS), администрируемый Национальными институтами здравоохранения, предлагает стандарты ухода за ними и их использования. Соблюдение PHS необходимо для того, чтобы исследовательский проект получил федеральное финансирование. Политика PHS находится в ведении Управления по защите лабораторных животных. Многие академические исследовательские институты добровольно добиваются аккредитации, часто через Ассоциацию по оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными , которая поддерживает стандарты ухода, указанные в « Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных» и политике PHS. Однако эта аккредитация не является обязательным условием для федерального финансирования, в отличие от фактического соответствия. [71]
Хотя мыши являются наиболее широко используемыми животными в биомедицинских исследованиях, недавние исследования выявили их ограничения. [72] Например, полезность грызунов при тестировании на сепсис , [73] [74] ожоги , [74] воспаления , [74] инсульт , [75] [76] БАС , [77] [ 78] [79] Болезнь Альцгеймера , [80] диабет , [81] [82] рак , [83] [84] [85] [86] [87] рассеянный склероз , [88] болезнь Паркинсона , [88] и другие болезни были названы вопрос ряда исследователей. Что касается экспериментов на мышах, некоторые исследователи жаловались, что «годы и миллиарды долларов были потрачены впустую из-за ложных предположений» в результате озабоченности использованием этих животных в исследованиях. [72]
Мыши отличаются от людей по нескольким иммунным свойствам: мыши более устойчивы к некоторым токсинам , чем люди; имеют меньшую общую фракцию нейтрофилов в крови , меньшую ферментативную емкость нейтрофилов , меньшую активность системы комплемента , иной набор пентраксинов , участвующих в воспалительном процессе ; и у них отсутствуют гены важных компонентов иммунной системы, таких как IL-8 , IL-37 , TLR10 , ICAM-3 и т. д . [73] Лабораторные мыши, выращенные в условиях , свободных от специфических патогенов (SPF), обычно имеют довольно незрелый Иммунная система с дефицитом Т-клеток памяти . Эти мыши могут иметь ограниченное разнообразие микробиоты , что напрямую влияет на иммунную систему и развитие патологических состояний. Более того, персистирующие вирусные инфекции (например, герпесвирусы ) активируются у людей, но не у мышей SPF с септическими осложнениями, и могут изменять устойчивость к бактериальным коинфекциям . «Грязные» мыши, возможно, лучше подходят для имитации человеческих патологий. Кроме того, в подавляющем большинстве исследований используются инбредные линии мышей, тогда как человеческая популяция неоднородна, что указывает на важность исследований на межлинейных гибридных, беспородных и нелинейных мышах. [73]
В статье в The Scientist отмечается: «Трудности, связанные с использованием животных моделей для лечения заболеваний человека, возникают из-за метаболических, анатомических и клеточных различий между людьми и другими существами, но проблемы идут еще глубже», включая проблемы с дизайном и исполнением. самих тестов. [76] Кроме того, содержание лабораторных животных в клетках может сделать их нерелевантными моделями здоровья человека, поскольку этим животным не хватает ежедневных изменений в опыте, активности и проблемах, которые они могут преодолеть. [89] Бедная среда внутри маленьких клеток для мышей может иметь пагубное влияние на биомедицинские результаты, особенно в отношении исследований психического здоровья и систем, которые зависят от здорового психологического состояния. [90]
Например, исследователи обнаружили, что многие мыши в лабораториях страдают ожирением из-за избыточного питания и минимальных физических упражнений, что изменяет их физиологию и метаболизм лекарств. [91] Многие лабораторные животные, в том числе мыши, испытывают хронический стресс, что также может негативно повлиять на результаты исследований и способность точно экстраполировать результаты на людей. [92] [93] Исследователи также отметили, что многие исследования с участием мышей плохо спланированы, что приводит к сомнительным результатам. [76] [78] [79]
Некоторые исследования показывают, что неадекватные опубликованные данные по испытаниям на животных могут привести к невоспроизводимости исследований, при этом недостающие подробности о том, как проводятся эксперименты, опускаются в опубликованных статьях или различия в тестировании, которые могут привести к систематической ошибке. Примеры скрытой предвзятости включают исследование Университета Макгилла , проведенное в 2014 году , которое предполагает, что мыши, с которыми обращались мужчины, а не женщины, демонстрировали более высокий уровень стресса. [94] [5] [95] [96] Другое исследование, проведенное в 2016 году, показало, что микробиомы кишечника мышей могут оказывать влияние на научные исследования. [97]
По прогнозам, к 2022 году мировой рынок мышей с измененными генами вырастет до 1,59 миллиарда долларов, причем темпы роста составят 7,5 процентов в год. [98]
Таксономия
Генетика
СМИ
дальнейшее чтение