stringtranslate.com

Вектор экспрессии

Бактериальный вектор экспрессии для экспрессии зеленого флуоресцентного белка с промотора Т7 .

Вектор экспрессии , также известный как конструкция экспрессии , обычно представляет собой плазмиду или вирус, предназначенный для экспрессии генов в клетках. Вектор используется для введения определенного гена в целевую клетку и может управлять механизмом синтеза белка в клетке для получения белка, кодируемого геном. Векторы экспрессии являются основными инструментами в биотехнологии для производства белков .

Вектор спроектирован так, чтобы содержать регуляторные последовательности, которые действуют как области усилителя и промотора и приводят к эффективной транскрипции гена, переносимого вектором экспрессии. [1] Целью хорошо спроектированного вектора экспрессии является эффективное производство белка, и это может быть достигнуто путем производства значительного количества стабильной информационной РНК , которая затем может быть транслирована в белок. Экспрессия белка может строго контролироваться, и белок производится только в значительном количестве, когда это необходимо, с помощью индуктора , однако в некоторых системах белок может быть экспрессирован конститутивно. Escherichia coli обычно используется в качестве хозяина для производства белка , но могут использоваться и другие типы клеток. Примером использования вектора экспрессии является производство инсулина , который используется для медицинского лечения диабета .

Элементы

Вектор экспрессии имеет характеристики, которые может иметь любой вектор , такие как начало репликации , селектируемый маркер и подходящий сайт для вставки гена, такой как сайт множественного клонирования . Клонированный ген может быть перенесен из специализированного вектора клонирования в вектор экспрессии, хотя возможно клонирование непосредственно в вектор экспрессии. Процесс клонирования обычно выполняется в Escherichia coli . Векторы, используемые для производства белка в организмах, отличных от E. coli, могут иметь, в дополнение к подходящему началу репликации для его распространения в E. coli , элементы, которые позволяют им поддерживаться в другом организме, и эти векторы называются челночными векторами .

Элементы для выражения

Вектор экспрессии должен иметь элементы, необходимые для экспрессии гена. Они могут включать промотор , правильную последовательность инициации трансляции, такую ​​как сайт связывания рибосомы и стартовый кодон , кодон терминации и последовательность терминации транскрипции . [2] Существуют различия в механизмах синтеза белка между прокариотами и эукариотами, поэтому векторы экспрессии должны иметь элементы для экспрессии, которые подходят для выбранного хозяина. Например, векторы экспрессии прокариот будут иметь последовательность Шайна-Дальгарно в своем сайте инициации трансляции для связывания рибосом, в то время как векторы экспрессии эукариот будут содержать консенсусную последовательность Козака .

Промотор инициирует транскрипцию и, следовательно, является точкой контроля экспрессии клонированного гена. Промоторы, используемые в векторе экспрессии, обычно индуцируются , что означает, что синтез белка инициируется только тогда, когда это требуется введением индуктора, такого как IPTG . Однако экспрессия гена может быть также конститутивной (т. е. белок постоянно экспрессируется) в некоторых векторах экспрессии. Низкий уровень конститутивного синтеза белка может наблюдаться даже в векторах экспрессии с жестко контролируемыми промоторами.

Белковые теги

После экспрессии продукта гена может потребоваться очистка экспрессированного белка; однако, отделение интересующего белка от большинства белков клетки-хозяина может быть длительным процессом. Чтобы облегчить этот процесс очистки, к клонированному гену может быть добавлена ​​метка очистки . Эта метка может быть гистидиновой (His) меткой , другими маркерными пептидами или партнерами по слиянию, такими как глутатион-S-трансфераза или белок, связывающий мальтозу . [3] Некоторые из этих партнеров по слиянию также могут помочь повысить растворимость некоторых экспрессированных белков. Другие белки слияния, такие как зеленый флуоресцентный белок, могут действовать как репортерный ген для идентификации успешно клонированных генов, или их можно использовать для изучения экспрессии белка в клеточной визуализации . [4] [5]

Другие элементы

Вектор экспрессии трансформируется или трансфицируется в клетку-хозяина для синтеза белка. Некоторые векторы экспрессии могут иметь элементы для трансформации или вставки ДНК в хромосому хозяина, например, гены vir для трансформации растений и сайты интегразы для хромосомной интеграции.

Некоторые векторы могут включать целевую последовательность, которая может направлять экспрессируемый белок в определенное место, например, в периплазматическое пространство бактерий.

Системы экспрессии/производства

Для экспрессии целевого белка гена могут использоваться различные организмы, и используемый вектор экспрессии будет, следовательно, иметь элементы, специфичные для использования в конкретном организме. Наиболее часто используемым организмом для производства белка является бактерия Escherichia coli . Однако не все белки могут быть успешно экспрессированы в E. coli или экспрессированы с правильной формой посттрансляционных модификаций, таких как гликозилирование, и поэтому могут использоваться другие системы.

Бактериальный

Примером бактериального вектора экспрессии является плазмида pGEX-3x.

Выбранным хозяином экспрессии для экспрессии многих белков является Escherichia coli , поскольку производство гетерологичного белка в E. coli относительно просто и удобно, а также быстро и дешево. Также доступно большое количество плазмид экспрессии E. coli для самых разных нужд. Другие бактерии, используемые для производства белка, включают Bacillus subtilis .

Большинство гетерологичных белков экспрессируются в цитоплазме E. coli . Однако не все образованные белки могут быть растворимы в цитоплазме, а неправильно свернутые белки, образованные в цитоплазме, могут образовывать нерастворимые агрегаты, называемые тельцами включения . Такие нерастворимые белки потребуют повторного сворачивания, что может быть сложным процессом и не обязательно давать высокий выход. [6] Белки, которые имеют дисульфидные связи , часто не способны правильно сворачиваться из-за восстановительной среды в цитоплазме, которая препятствует образованию таких связей, и возможным решением является нацеливание белка на периплазматическое пространство с помощью N-концевой сигнальной последовательности . Другая возможность заключается в манипулировании окислительно-восстановительной средой цитоплазмы. [7] Также разрабатываются другие более сложные системы; такие системы могут позволить экспрессировать белки, которые ранее считались невозможными в E. coli , такие как гликозилированные белки. [8] [9] [10]

Промоторы, используемые для этих векторов, обычно основаны на промоторе lac оперона или промотора T7 , [11] и они обычно регулируются оператором lac . Эти промоторы также могут быть гибридами разных промоторов, например, Tac-промотор является гибридом промоторов trp и lac . [12] Обратите внимание, что наиболее часто используемые lac или lac -производные промоторы основаны на мутанте lac UV5 , который нечувствителен к катаболитной репрессии . Этот мутант позволяет экспрессировать белок под контролем промотора lac , когда среда для роста содержит глюкозу, поскольку глюкоза будет ингибировать экспрессию гена, если используется промотор lac дикого типа . [13] Тем не менее, присутствие глюкозы все еще может использоваться для снижения фоновой экспрессии посредством остаточного ингибирования в некоторых системах. [14]

Примерами векторов экспрессии E. coli являются серия векторов pGEX, где в качестве партнера слияния используется глутатион-S-трансфераза , а экспрессия гена находится под контролем промотора tac, [15] [16] [17] и серия векторов pET, которая использует промотор T7 . [18]

Возможно одновременно экспрессировать два или более различных белков в E. coli с использованием различных плазмид. Однако, когда используются 2 или более плазмид, каждая плазмида должна использовать разный выбор антибиотиков, а также разное начало репликации, в противном случае одна из плазмид может не поддерживаться стабильно. Многие обычно используемые плазмиды основаны на репликоне ColE1 и, следовательно, несовместимы друг с другом; для того, чтобы плазмида на основе ColE1 сосуществовала с другой в той же клетке, другая должна быть из другого репликона, например, плазмида на основе репликона p15A, такая как серия плазмид pACYC. [19] Другой подход заключается в использовании одного двухцистронного вектора или в разработке кодирующих последовательностей в тандеме в виде би- или полицистронной конструкции. [20] [21]

Дрожжи

Дрожжи, обычно используемые для производства белка, — это Pichia pastoris . [22] Примерами вектора экспрессии дрожжей в Pichia являются векторы серии pPIC, и эти векторы используют промотор AOX1 , который индуцируется метанолом . [23] Плазмиды могут содержать элементы для вставки чужеродной ДНК в геном дрожжей и сигнальную последовательность для секреции экспрессируемого белка. Белки с дисульфидными связями и гликозилированием могут эффективно продуцироваться в дрожжах. Другим дрожжем, используемым для производства белка, является Kluyveromyces lactis , и ген экспрессируется под управлением варианта сильного промотора лактазы LAC4. [24]

Saccharomyces cerevisiae особенно широко используется для исследований экспрессии генов в дрожжах, например, в дрожжевой двугибридной системе для изучения белок-белкового взаимодействия. [25] Векторы, используемые в дрожжевой двугибридной системе, содержат партнеров слияния для двух клонированных генов, которые позволяют транскрипцию репортерного гена при наличии взаимодействия между двумя белками, экспрессируемыми из клонированных генов.

Бакуловирус

Бакуловирус , палочковидный вирус, который заражает клетки насекомых, используется в качестве вектора экспрессии в этой системе. [26] В качестве хозяина используются линии клеток насекомых, полученные от чешуекрылых (моль и бабочки), таких как Spodoptera frugiperda . Особый интерес представляет клеточная линия, полученная от капустной пяденицы , поскольку она была разработана для быстрого роста и без дорогостоящей сыворотки, обычно необходимой для ускорения роста клеток. [27] [28] Вектор -челнок называется бакмидой, а экспрессия гена находится под контролем сильного промотора pPolh. [29] Бакуловирус также использовался с линиями клеток млекопитающих в системе BacMam . [30]

Бакуловирус обычно используется для производства гликопротеинов , хотя гликозилирования могут отличаться от тех, что встречаются у позвоночных. В целом, его использование безопаснее, чем вируса млекопитающих, поскольку он имеет ограниченный круг хозяев и не заражает позвоночных без модификаций.

Растение

Многие векторы экспрессии растений основаны на плазмиде Ti Agrobacterium tumefaciens . [31] В этих векторах экспрессии ДНК, которая должна быть вставлена ​​в растение, клонируется в T-ДНК , участок ДНК, фланкированный последовательностью прямого повтора из 25 пар оснований на обоих концах, и который может интегрироваться в геном растения. T-ДНК также содержит селективный маркер. Agrobacterium обеспечивает механизм для трансформации , интеграции в геном растения, и промоторы для его генов vir также могут использоваться для клонированных генов. Однако опасения по поводу переноса бактериального или вирусного генетического материала в растение привели к разработке векторов, называемых интрагенными векторами, в которых используются функциональные эквиваленты генома растения, так что не происходит переноса генетического материала от чужеродного вида в растение. [32]

Вирусы растений могут использоваться в качестве векторов, поскольку метод Agrobacterium не работает для всех растений. Примерами используемых вирусов растений являются вирус табачной мозаики (TMV), вирус картофеля X и вирус мозаики коровьего гороха . [33] Белок может быть выражен как слияние с белком оболочки вируса и отображаться на поверхности собранных вирусных частиц или как неслитый белок, который накапливается внутри растения. Экспрессия в растении с использованием растительных векторов часто является конститутивной, [34] и обычно используемый конститутивный промотор в векторах экспрессии растений - это промотор вируса мозаики цветной капусты (CaMV) 35S. [35] [36]

Млекопитающие

Векторы экспрессии млекопитающих предлагают значительные преимущества для экспрессии белков млекопитающих по сравнению с бактериальными системами экспрессии - правильное сворачивание, посттрансляционные модификации и соответствующая ферментативная активность. Это также может быть более желательно, чем другие эукариотические системы не млекопитающих, в которых экспрессируемые белки могут не содержать правильных гликозилирований. Это особенно полезно при производстве мембрано-ассоциированных белков, которым требуются шапероны для правильного сворачивания и стабильности, а также содержащих многочисленные посттрансляционные модификации. Однако недостатком является низкий выход продукта по сравнению с прокариотическими векторами, а также дорогостоящий характер используемых методов. Его сложная технология и потенциальное загрязнение экспрессией клеток млекопитающих вирусами животных также наложили ограничение на его использование в крупномасштабном промышленном производстве. [37]

Культивируемые линии клеток млекопитающих, такие как яичник китайского хомячка (CHO) , COS , включая линии клеток человека, такие как HEK и HeLa, могут использоваться для получения белка. Векторы трансфицируются в клетки, и ДНК может быть интегрирована в геном путем гомологичной рекомбинации в случае стабильной трансфекции, или клетки могут быть временно трансфицированы. Примерами векторов экспрессии млекопитающих являются аденовирусные векторы, [38] pSV и pCMV серии плазмидных векторов, векторы коровьей оспы и ретровирусные векторы, [39] , а также бакуловирус. [30] Промоторы для цитомегаловируса (CMV) и SV40 обычно используются в векторах экспрессии млекопитающих для управления экспрессией генов. Также известен невирусный промотор, такой как промотор фактора элонгации (EF)-1. [40]

Бесклеточные системы

В этом методе in vitro производства белка используется лизат клеток E. coli, содержащий клеточные компоненты, необходимые для транскрипции и трансляции. Преимущество такой системы в том, что белок может быть произведен гораздо быстрее, чем белок, произведенный in vivo, поскольку для этого не требуется время на культивирование клеток, но это также более затратно. Векторы, используемые для экспрессии E. coli , могут быть использованы в этой системе, хотя специально разработанные векторы для этой системы также доступны. Экстракты эукариотических клеток также могут быть использованы в других бесклеточных системах, например, бесклеточных системах экспрессии зародышей пшеницы . [41] Также были получены бесклеточные системы млекопитающих. [42]

Приложения

Лабораторное использование

Вектор экспрессии в хозяине экспрессии теперь является обычным методом, используемым в лабораториях для производства белков для исследований. Большинство белков производятся в E. coli , но для гликозилированных белков и белков с дисульфидными связями могут использоваться системы дрожжей, бакуловирусов и млекопитающих.

Производство пептидных и белковых фармацевтических препаратов

Большинство белковых фармацевтических препаратов в настоящее время производятся с помощью технологии рекомбинантной ДНК с использованием векторов экспрессии. Эти пептидные и белковые фармацевтические препараты могут быть гормонами, вакцинами, антибиотиками, антителами и ферментами. [43] Первый человеческий рекомбинантный белок, используемый для лечения заболеваний, инсулин, был представлен в 1982 году. [43] Биотехнология позволяет производить эти пептидные и белковые фармацевтические препараты, некоторые из которых ранее были редкими или труднодоступными, в больших количествах. Это также снижает риски загрязнения, такие как вирусы хозяина, токсины и прионы . Примеры из прошлого включают загрязнение прионами гормона роста, извлеченного из гипофизов, собранных у человеческих трупов, что вызвало болезнь Крейтцфельдта-Якоба у пациентов, получающих лечение от карликовости , [44] и вирусные загрязнители в факторе свертывания крови VIII, выделенном из человеческой крови, что привело к передаче вирусных заболеваний, таких как гепатит и СПИД . [45] [46] Такой риск снижается или полностью устраняется, когда белки производятся в нечеловеческих клетках-хозяевах.

Трансгенные растения и животные

В последние годы векторы экспрессии использовались для введения определенных генов в растения и животных для получения трансгенных организмов, например, в сельском хозяйстве они используются для получения трансгенных растений . Векторы экспрессии использовались для введения предшественника витамина А , бета-каротина , в растения риса. Этот продукт называется золотым рисом . Этот процесс также использовался для введения гена в растения, который производит инсектицид , называемый токсином Bacillus thuringiensis или токсином Bt , который снижает потребность фермеров в применении инсектицидов, поскольку он вырабатывается модифицированным организмом. Кроме того, векторы экспрессии используются для продления срока созревания томатов путем изменения растения таким образом, чтобы оно производило меньше химического вещества, вызывающего гниение томатов. [47] Были споры по поводу использования векторов экспрессии для изменения сельскохозяйственных культур из-за того, что могут быть неизвестные риски для здоровья, возможности патентования компаниями определенных генетически модифицированных продовольственных культур и этические проблемы. Тем не менее, этот метод все еще используется и интенсивно исследуется.

Трансгенные животные также были созданы для изучения биохимических процессов животных и человеческих болезней или использовались для производства фармацевтических препаратов и других белков. Они также могут быть сконструированы так, чтобы иметь выгодные или полезные черты. Зеленый флуоресцентный белок иногда используется в качестве меток, что приводит к тому, что животное может флуоресцировать, и это было использовано в коммерческих целях для производства флуоресцентных GloFish .

генная терапия

Генная терапия является перспективным методом лечения ряда заболеваний, при котором «нормальный» ген, переносимый вектором, вставляется в геном, чтобы заменить «ненормальный» ген или дополнить экспрессию определенного гена. Обычно используются вирусные векторы, но разрабатываются и другие невирусные методы доставки. Лечение по-прежнему остается рискованным вариантом из-за используемого вирусного вектора, который может вызывать неблагоприятные последствия, например, вызывая инсерционную мутацию , которая может привести к раку. [48] [49] Однако были получены многообещающие результаты. [50] [51]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ sci.sdsu.edu
  2. ^ RW Old; SB Primrose (1994). "Глава 8: Экспрессия E. coli клонированных молекул ДНК" . Принципы генной манипуляции . Blackwell Scientific Publications. ISBN 978-0-632-03712-4.
  3. ^ Мишель Э. Кимпл; Эллисон Л. Брилл; Рене Л. Паскер (24 сентября 2013 г.). «Обзор меток сродства для очистки белков». Current Protocols in Protein Science . 73 (Unit-9.9): 9.9.1–9.9.23. doi :10.1002/0471140864.ps0909s73. ISBN 978-0-471-14086-3. PMC  4527311 . PMID  24510596.
  4. ^ Эрик Снапп (июль 2005 г.). «Разработка и использование флуоресцентных слитых белков в клеточной биологии». Current Protocols in Cell Biology . 27 : 21.4.1–21.4.13. doi :10.1002/0471143030.cb2104s27. PMC 2875081. PMID  18228466 . 
  5. ^ Georgeta Crivat; Justin W. Taraska (январь 2012 г.). «Визуализация белков внутри клеток с помощью флуоресцентных меток». Trends in Biotechnology . 30 (1): 8–16. doi :10.1016/j.tibtech.2011.08.002. PMC 3246539. PMID 21924508  . 
  6. ^ Burgess RR (2009). "Глава 17. Рефолдинг солюбилизированных белков включений". Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы в энзимологии. Том 463. С. 259–82. doi :10.1016/S0076-6879(09)63017-2. ISBN 978-0-12-374536-1. PMID  19892177.
  7. ^ Джули Лобштейн; Чарли А. Эмрих; Крис Джинс; Мелинда Фолкнер; Пол Риггс; Мехмет Беркмен (2012). «SHuffle, новый штамм экспрессии белка Escherichia coli, способный правильно сворачивать белки с дисульфидными связями в своей цитоплазме». Microbial Cell Factories . 11 : 56. doi : 10.1186/1475-2859-11-56 . PMC 3526497. PMID  22569138 . 
  8. ^ Wacker M, Linton D, Hitchen PG, Nita-Lazar M, Haslam SM, North SJ, Panico M, Morris HR, Dell A, Wren BW, Aebi M (2002). «N-связанное гликозилирование в Campylobacter jejuni и его функциональный перенос в E. coli». Science . 298 (5599): 1790–1793. Bibcode :2002Sci...298.1790W. doi :10.1126/science.298.5599.1790. PMID  12459590.
  9. ^ Huang CJ, Lin H, Yang X (2012). «Промышленное производство рекомбинантных терапевтических средств в Escherichia coli и его последние достижения». J Ind Microbiol Biotechnol . 39 (3): 383–99. doi : 10.1007/s10295-011-1082-9 . PMID  22252444. S2CID  15584320.
  10. ^ Герман Л. Росано1; Эдуардо А. Чеккарелли (2014). «Экспрессия рекомбинантного белка в Escherichia coli: достижения и проблемы». Frontiers in Microbiology . 5 : 172. doi : 10.3389 /fmicb.2014.00172 . PMC 4029002. PMID  24860555. {{cite journal}}: CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка )
  11. ^ Dubendorff JW, Studier FW (1991). «Контроль базальной экспрессии в индуцируемой системе экспрессии T7 путем блокирования целевого промотора T7 с помощью lac-репрессора». Журнал молекулярной биологии . 219 (1): 45–59. doi :10.1016/0022-2836(91)90856-2. PMID  1902522.
  12. ^ deBoer HA, Comstock LJ, Vasser M (1983). «Промотор tac: функциональный гибрид, полученный из промоторов trp и lac». Труды Национальной академии наук США . 80 (1): 21–25. Bibcode : 1983PNAS...80...21D. doi : 10.1073/pnas.80.1.21 . PMC 393301. PMID  6337371 . 
  13. ^ Silverstone AE, Arditti RR, Magasanik B (1970). "Ревертанты мутантов lac-промотора, нечувствительные к катаболитам". Труды Национальной академии наук США . 66 (3): 773–9. Bibcode : 1970PNAS...66..773S. doi : 10.1073 /pnas.66.3.773 . PMC 283117. PMID  4913210. 
  14. ^ Роберт Нови; Барбара Моррис. «Использование глюкозы для контроля базальной экспрессии в системе pET» (PDF) . InNovations (13): 6–7.
  15. ^ Смит ДБ, Джонсон К.С. (1988). «Одношаговая очистка полипептидов, экспрессируемых в Escherichia coli в виде слияний с глутатион-S-трансферазой». Gene . 67 (1): 31–40. doi :10.1016/0378-1119(88)90005-4. PMID  3047011.
  16. ^ "GST Gene Fusion System" (PDF) . Amersham Pharmacia biotech .
  17. ^ "pGEX Vectors". GE Healthcare Lifesciences. Архивировано из оригинала 2016-11-13 . Получено 2013-10-11 .
  18. ^ "pET System manual" (PDF) . Novagen . Архивировано из оригинала (PDF) 2019-08-19 . Получено 2012-12-11 .
  19. ^ Никола Касали; Эндрю Престон (2003-07-03). Плазмидные векторы E. coli: методы и приложения . Методы в молекулярной биологии. Т. 235. С. 22. ISBN 978-1-58829-151-6.
  20. ^ «Методы клонирования — Ди- или мультицистронное клонирование». EMBL .
  21. ^ Schoner BE, Belagaje RM, Schoner RG (1986). «Трансляция синтетической двухцистронной мРНК в Escherichia coli». Proc Natl Acad Sci USA . 83 (22): 8506–10. Bibcode : 1986PNAS...83.8506S. doi : 10.1073/pnas.83.22.8506 . PMC 386959. PMID  3534891 . 
  22. ^ Cregg JM, Cereghino JL, Shi J, Higgins DR (2000). «Экспрессия рекомбинантного белка в Pichia pastoris». Молекулярная биотехнология . 16 (1): 23–52. doi : 10.1385/MB:16:1:23 . PMID  11098467. S2CID  35874864.
  23. ^ "Система экспрессии Pichia pastoris" (PDF) . Invitrogen .
  24. ^ "K. lactis Protein Expression Kit" (PDF) . New England BioLabs Inc . Архивировано из оригинала (PDF) 2016-03-04 . Получено 2013-03-20 .
  25. ^ Филдс С., Сонг О. (1989). «Новая генетическая система для обнаружения белок-белковых взаимодействий». Nature . 340 (6230): 245–6. Bibcode :1989Natur.340..245F. doi :10.1038/340245a0. PMID  2547163. S2CID  4320733.
  26. ^ Маккензи, Сэмюэл (26 февраля 2019 г.). «Система векторов экспрессии бакуловируса (BEVS)». news-medical.net .
  27. ^ HINK, WF (1970-05-02). "Установленная линия клеток насекомых из капустной пяденицы, Trichoplusia ni". Nature . 226 (5244): 466–467. Bibcode :1970Natur.226..466H. doi :10.1038/226466b0. ISSN  1476-4687. PMID  16057320. S2CID  4225642.
  28. ^ Zheng GL, Zhou HX, Li CY (2014). «Безсывороточная культура суспензионной клеточной линии QB-Tn9-4s капустной пяденицы Trichoplusia ni высокопродуктивна для репликации вируса и экспрессии рекомбинантного белка». Journal of Insect Science . 14 (1): 24. doi :10.1093/jis/14.1.24. PMC 4199540 . PMID  25373171. 
  29. ^ "Руководство по системам векторов экспрессии бакуловирусов (BEVS) и методам культивирования клеток насекомых" (PDF) . Invitrogen .
  30. ^ ab Kost, T; Condreay, JP (2002). «Рекомбинантные бакуловирусы как векторы доставки генов в клетки млекопитающих». Тенденции в биотехнологии . 20 (4): 173–180. doi :10.1016/S0167-7799(01)01911-4. PMID  11906750.
  31. ^ Уолден Р., Шелл Дж. (1990). «Методы молекулярной биологии растений — прогресс и проблемы». Европейский журнал биохимии . 192 (3): 563–76. doi :10.1111/j.1432-1033.1990.tb19262.x. PMID  2209611.
  32. ^ Джордж Акуа (16 августа 2012 г.). Принципы генетики и селекции растений. John Wiley & Sons Inc. ISBN 978-1-118-31369-5.
  33. ^ M Carmen Cañizares; Liz Nicholson; George P Lomonossoff (2005). «Использование вирусных векторов для производства вакцин в растениях». Иммунология и клеточная биология . 83 (3): 263–270. doi :10.1111/j.1440-1711.2005.01339.x. PMC 7165799. PMID  15877604 . 
  34. ^ "Как создать трансгенное растение?". Кафедра почвоведения и растениеводства в Университете штата Колорадо . Архивировано из оригинала 21.01.2013 . Получено 06.02.2013 .
  35. ^ Fütterer J.; Bonneville JM; Hohn T (май 1990). «Вирус мозаики цветной капусты как вектор экспрессии генов для растений». Physiologia Plantarum . 79 (1): 154–157. doi :10.1111/j.1399-3054.1990.tb05878.x.
  36. ^ Benfey PN, Chua NH (1990). "Промотор вируса мозаики цветной капусты 35S: комбинаторная регуляция транскрипции у растений" (PDF) . Science . 250 (4983): 959–66. Bibcode :1990Sci...250..959B. doi :10.1126/science.250.4983.959. PMID  17746920. S2CID  35471862.
  37. ^ Кишвар Хаят Хан (2013). «Экспрессия генов в клетках млекопитающих и ее применение». Adv Pharm Bull . 3 (2): 257–263. doi :10.5681/apb.2013.042. PMC 3848218. PMID 24312845  . 
  38. ^ Berkner KL (1992). "Экспрессия гетерологичных последовательностей в аденовирусных векторах". Векторы вирусной экспрессии . Текущие темы микробиологии и иммунологии. Том 158. С. 39–66. doi :10.1007/978-3-642-75608-5_3. ISBN 978-3-642-75610-8. PMID  1582245.
  39. ^ Hruby, DE (1990). «Векторы вируса осповакцины: новые стратегии для производства рекомбинантных вакцин». Clin Microbiol Rev. 3 ( 2): 153–170. doi :10.1128/cmr.3.2.153. PMC 358149. PMID  2187593 . 
  40. ^ Ким Д. В., Уэцуки Т., Казиро И., Ямагучи Н., Сугано С. (1990). «Использование промотора человеческого фактора удлинения 1 альфа в качестве универсальной и эффективной системы экспрессии». Gene . 91 (2): 217–23. doi :10.1016/0378-1119(90)90091-5. PMID  2210382.
  41. ^ Vinarov DA, Newman CL, Tyler EM, Markley JL, Shahan MN (2006). "Глава 5:Unit 5.18. Wheat Germ Cell-Free Expression System for Protein Production". Current Protocols in Protein Science . Vol. Chapter 5. pp. 5.18.1–5.18.18. doi :10.1002/0471140864.ps0518s44. ISBN 978-0-471-14086-3. PMID  18429309. S2CID  12057689.
  42. ^ Brödel AK, Wüstenhagen DA, Kubick S (2015). «Системы бесклеточного синтеза белка, полученные из культивируемых клеток млекопитающих». Структурная протеомика . Методы в молекулярной биологии. Т. 1261. С. 129–40. doi :10.1007/978-1-4939-2230-7_7. ISBN 978-1-4939-2229-1. PMID  25502197.
  43. ^ ab Shayne Cox Gad (2007). Справочник по фармацевтической биотехнологии. John Wiley & Sons. стр. 693. ISBN 978-0-471-21386-4.
  44. ^ Александр Дорожинский (2002). «Родители подают в суд из-за загрязненного человеческого гормона роста». British Medical Journal . 324 (7349): 1294. doi :10.1136/bmj.324.7349.1294/b. PMC 1123268. PMID  12039815 . 
  45. ^ Шейн Кокс Гэд (25.05.2007). Справочник по фармацевтической биотехнологии. John Wiley & Sons. стр. 738. ISBN 978-0-471-21386-4.
  46. ^ Богданич В., Коли Э. (22.05.2003). «Два пути компании Bayer Drug в 80-х: более рискованный, направленный за границу». The New York Times : A1, C5. PMID  12812170.
  47. ^ "bionetonline.org". Архивировано из оригинала 2010-06-17 . Получено 2010-06-12 .
  48. ^ "Генная терапия". Проект "Геном человека " .
  49. ^ Ян Сэмпл (17 октября 2003 г.). «Врачи обнаружили, почему генная терапия вызывает рак у мальчиков». Guardian .
  50. ↑ Сара Босли (30 апреля 2013 г.). «Новаторские испытания генной терапии дают надежду пациентам с заболеваниями сердца». Guardian .
  51. ^ Фишер, А.; Хасейн-Бей-Абина, С.; Каваццана-Кальво, М. (2010). «20 лет генной терапии SCID». Nature Immunology . 11 (6): 457–460. doi :10.1038/ni0610-457. PMID  20485269. S2CID  11300348.

Внешние ссылки