Тестирование на совместимость крови проводится в медицинской лаборатории для выявления потенциальной несовместимости между системами групп крови при переливании крови . Его также используют для диагностики и предотвращения некоторых осложнений беременности , которые могут возникнуть, если у ребенка другая группа крови, чем у матери. Тестирование на совместимость крови включает определение группы крови , при котором обнаруживаются антигены в эритроцитах , определяющие группу крови человека; тестирование на неожиданные антитела к антигенам группы крови ( скрининг и идентификация антител ); и, в случае переливания крови, смешивание плазмы реципиента с эритроцитами донора для выявления несовместимости ( перекрестное сопоставление ). Обычное определение группы крови включает определение типа АВО и RhD (резус-фактора) [примечание 1] и включает как идентификацию антигенов АВО на эритроцитах (прямая группировка), так и идентификацию антител АВО в плазме (обратная группировка). Другие антигены группы крови могут быть проверены в конкретных клинических ситуациях.
В тесте на совместимость крови используются реакции между антигенами группы крови и антителами , в частности, способность антител вызывать слипание эритроцитов, когда они связываются с антигенами на поверхности клетки, явление, называемое агглютинацией . Методы, основанные на реакциях антиген-антитело, называются серологическими методами, и доступно несколько таких методов: от ручного тестирования с использованием пробирок или предметных стекол до полностью автоматизированных систем. Группы крови также можно определить с помощью генетического тестирования , которое используется, когда присутствуют условия, мешающие серологическому тестированию, или когда требуется высокая степень точности идентификации антигена.
Некоторые условия могут привести к ложным или неубедительным результатам теста на совместимость крови. Когда эти проблемы влияют на типизацию ABO, их называют несоответствиями ABO . Расхождения в АВО должны быть исследованы и устранены до того, как будет сообщена группа крови человека. Другие источники ошибок включают феномен « слабого D », при котором люди с положительным результатом на антиген RhD демонстрируют слабые или отрицательные реакции при тестировании на RhD, а также наличие антител иммуноглобулина G в эритроцитах, что может мешать скринингу антител. , перекрестное сопоставление и типирование некоторых антигенов группы крови.
Тест на совместимость крови обычно проводится перед переливанием крови . Полный процесс тестирования совместимости включает типирование ABO и RhD (резус-фактор); скрининг на антитела к другим системам групп крови ; и перекрестное сопоставление , которое включает тестирование плазмы крови реципиента на эритроциты донора в качестве окончательной проверки на несовместимость. Если обнаружено неожиданное антитело группы крови, необходимо дальнейшее тестирование для идентификации антитела [3] : 740 и подтверждения отрицательного результата донорской крови на соответствующий антиген. [1] : 261 Серологическое перекрестное сопоставление можно не проводить, если скрининг на антитела у реципиента отрицательный, в анамнезе нет клинически значимых антител и их тип ABO/Rh был подтвержден на основе исторических записей или на основе второго образца крови; а в чрезвычайных ситуациях кровь может быть перелита до того, как будут получены результаты испытаний на совместимость. [1] : 262–3
Тестирование на совместимость крови часто проводится беременным женщинам и пуповинной крови новорожденных, поскольку несовместимость подвергает ребенка риску развития гемолитической болезни новорожденного. [4] [5] Его также используют перед трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток , поскольку несовместимость групп крови может быть причиной некоторых случаев острой реакции «трансплантат против хозяина» . [6]
Группы крови определяются по наличию или отсутствию специфических антигенов на поверхности эритроцитов. Наиболее важными из них в медицине являются антигены ABO и RhD [7] :585, но существуют и многие другие системы групп крови, которые в некоторых ситуациях могут быть клинически значимыми. По состоянию на 2021 год официально признано 43 группы крови. [8]
Люди, у которых отсутствуют определенные антигены группы крови в эритроцитах, могут образовывать антитела против этих антигенов. Например, у человека с кровью группы А будут вырабатываться антитела против антигена В. Антитела группы крови АВО встречаются в природе, а это означает, что они обнаруживаются у людей, которые не подвергались воздействию несовместимой крови. [7] : 585–92 Антитела к большинству антигенов других групп крови, включая RhD, развиваются после того, как люди подвергаются воздействию антигенов в результате переливания крови или беременности. [1] : 62 Некоторые из этих антител могут связываться с несовместимыми эритроцитами и вызывать их разрушение , что приводит к трансфузионным реакциям и другим осложнениям. [9] : 210–11.
Серологические методы тестирования совместимости крови используют эти реакции антитело-антиген . При типировании крови к суспензиям клеток крови добавляют реагенты , содержащие антитела к группам крови, называемые антисыворотками [ 7] :586 . Если соответствующий антиген присутствует, антитела в реагенте вызовут агглютинацию (слипание) эритроцитов , что можно определить визуально. [1] : 65 При скрининге антител плазма человека тестируется на набор эритроцитов с известными антигенными профилями; если плазма агглютинирует один из эритроцитов на панели, это указывает на то, что у человека есть антитела против одного из антигенов, присутствующих в клетках. При перекрестном сопоставлении плазму предполагаемого реципиента переливания добавляют к донорским эритроцитам и наблюдают за агглютинацией (или гемолизом) для обнаружения антител, которые могут вызвать трансфузионную реакцию. [3] : 722–5
Антитела группы крови встречаются в двух основных формах: иммуноглобулина М (IgM) и иммуноглобулина G (IgG). Антитела, которые преимущественно представляют собой IgM, такие как антитела АВО, обычно вызывают немедленную агглютинацию эритроцитов при комнатной температуре. Таким образом, группу крови АВО человека можно определить, просто добавив эритроциты в реагент и центрифугировав или смешав образец [1] : 122 , а при перекрестном сопоставлении несовместимость между типами АВО можно обнаружить сразу после центрифугирования. [3] : 725 При типировании RhD также обычно используются реагенты IgM [10] : 477 , хотя анти-RhD обычно встречается в организме в виде IgG. [1] : 161 Антитела, которые преимущественно представляют собой IgG, например, направленные к антигенам систем Даффи и Кидда , [1] : 198–200 , как правило, не вызывают немедленной агглютинации, поскольку небольшой размер антитела IgG предотвращает образование решетки. состав. Таким образом, типирование крови с использованием антисыворотки IgG и обнаружение антител IgG требует использования непрямого антиглобулинового теста, чтобы продемонстрировать связывание IgG с эритроцитами. [1] : 104
При непрямом антиглобулиновом тесте смесь антисыворотки или плазмы и эритроцитов инкубируется при температуре 37 °C (99 °F), идеальной температуре для реактивности антител IgG. После инкубации эритроциты промывают физиологическим раствором для удаления несвязавшихся антител и добавляют реагент против человеческого глобулина. Если антитела IgG связались с антигенами на поверхности клетки, античеловеческий глобулин будет связываться с этими антителами, вызывая агглютинацию эритроцитов после центрифугирования. Если реакция отрицательная, добавляются «проверочные клетки» — клетки-реагенты, покрытые IgG, чтобы убедиться, что тест работает правильно. Если результат теста действительно отрицательный, контрольные клетки должны прореагировать с несвязанным античеловеческим глобулином и продемонстрировать агглютинацию. [3] : 716–9.
При АВО- и Rh-типировании к суспензиям клеток крови добавляют реагенты, содержащие антитела к антигенам А, В и RhD. Если соответствующий антиген присутствует, эритроциты будут демонстрировать видимую агглютинацию (слипание). [1] : 65 Помимо идентификации антигенов АВО, что называется прямой группировкой, рутинное определение группы крови АВО также включает идентификацию антител АВО в плазме человека. Это называется обратной группировкой, [1] : 120 , и делается для подтверждения группы крови АВО. При обратной группировке плазма человека добавляется к эритроцитам типа A 1 и типа B. Плазма должна агглютинировать клетки, экспрессирующие антигены, которых нет у человека, но не агглютинировать клетки, экспрессирующие те же антигены, что и пациент. Например, плазма человека с кровью группы А должна реагировать с эритроцитами типа В, но не с клетками А1 . Если ожидаемые результаты не получены, необходимо дальнейшее тестирование. [7] : 595 Агглютинация оценивается по шкале от 1+ до 4+ в зависимости от силы реакции. При типировании АВО балл 3+ или 4+ указывает на положительную реакцию, тогда как балл 1+ или 2+ является неубедительным и требует дальнейшего исследования. [1] : 236
Перед переливанием крови людей проверяют на наличие антител против антигенов систем групп крови , не относящихся к системе АВО . [5] Антигены групп крови, помимо ABO и RhD, которые важны в трансфузионной медицине, включают антигены RhC/c и E/e , а также антигены систем Даффи , Келла , Кидда и MNS . [1] : 158–173 При выявлении клинически значимого антитела реципиенту необходимо перелить кровь, отрицательную по соответствующему антигену, чтобы предотвратить трансфузионную реакцию. Для этого необходимо, чтобы донорские единицы были типированы по соответствующему антигену. [1] : 261 Реципиент также может быть типирован по антигену для подтверждения идентичности антитела, поскольку только люди, отрицательные по антигену группы крови, должны вырабатывать антитела против него. [7] : 603
В Европе женщинам, которым требуется переливание крови, часто проводят типирование по Kell- и расширенному резус-антигенам, чтобы предотвратить сенсибилизацию к этим антигенам, которая может подвергнуть их риску развития гемолитической болезни новорожденных во время беременности. [11] Американское общество гематологии рекомендует людям с серповидноклеточной анемией перед переливанием определить группу крови на антигены RhC/c, RhE/e, Келла, Даффи, Кидда и MNS, [12] : 130–1, потому что им часто требуется переливание крови, и они могут стать сенсибилизированными к этим антигенам при переливании несовместимой крови. [13] Расширенное фенотипирование эритроцитов также рекомендуется людям с бета-талассемией . [14] Системы групп крови, отличные от ABO и Rh, имеют относительно небольшой риск осложнений при смешивании крови, поэтому в чрезвычайных ситуациях, таких как сильное кровотечение , срочность переливания может превысить необходимость тестирования совместимости с другими системами групп крови (и потенциально Рз тоже). [15]
Антитела к большинству антигенов групп крови, помимо антигенов системы АВО, развиваются после контакта с несовместимой кровью. [1] : 62 Такие «неожиданные» антитела группы крови обнаруживаются лишь у 0,8–2% людей; однако реципиенты переливания крови должны быть проверены на наличие этих антител, чтобы предотвратить трансфузионные реакции. Скрининг на антитела также проводится в рамках дородового ухода , поскольку антитела против RhD и антигенов других групп крови могут вызвать гемолитическую болезнь новорожденного, а также потому, что резус-отрицательные матери, у которых выработались антитела против RhD, не имеют права на получение Rho(D). ) иммуноглобулин (Рогам). [1] : 233
В процедуре скрининга антител плазму человека добавляют к панели из двух или трех наборов эритроцитов, которые были выбраны для экспрессии наиболее клинически значимых антигенов группы крови. При скрининге антител используются только клетки группы О, так как в противном случае клетки будут реагировать с естественными антителами группы крови АВО. Смесь плазмы и эритроцитов инкубируют при 37°С и тестируют с помощью непрямого антиглобулинового теста. Некоторые протоколы скрининга и идентификации антител включают этап тестирования после инкубации при комнатной температуре, но его часто опускают, поскольку большинство неожиданных антител, которые реагируют при комнатной температуре, клинически незначимы. [3] : 722–4
Агглютинация скрининговых клеток плазмой с добавлением античеловеческого глобулина или без него указывает на присутствие неожиданного антитела группы крови. Если это произойдет, для идентификации антитела необходимо дальнейшее тестирование с использованием большего количества клеток (обычно 10–11). Изучая профили антигенов эритроцитов, с которыми реагирует плазма человека, можно определить идентичность антитела. «Аутоконтроль», при котором плазма человека тестируется на его собственные эритроциты, включен, чтобы определить, вызвана ли агглютинация аллоантителом ( антителом против чужеродного антигена), аутоантителом (антителом против собственных антигенов) или аутоантителом (антителом против собственных антигенов). или другое мешающее вещество. [3] : 722–4
На изображении выше показана интерпретация панели антител, используемой в серологии для обнаружения антител к наиболее важным антигенам группы крови. Каждая строка представляет «эталонные» или «контрольные» эритроциты доноров, которые имеют известный антигенный состав и относятся к группе О АВО . А+ означает, что антиген присутствует в эталонных эритроцитах, а 0 означает его отсутствие; nt означает «не проверено». В столбце «Результат» справа отображается реактивность при смешивании эталонных эритроцитов с плазмой пациента в 3 различных фазах: комнатная температура, 37°C и AHG (с античеловеческим глобулином, по непрямому антиглобулиновому тесту ). [16]
В этом случае панель антител показывает наличие антител против Fy a . Это указывает на то, что необходимо использовать донорскую кровь, отрицательную по антигену Fy . Тем не менее, если последующее перекрестное сопоставление показывает реактивность, следует провести дополнительное тестирование на ранее исключенные антигены (в данном случае потенциально E, K, Kp a и/или Lu a ). [16]
При наличии нескольких антител или когда антитело направлено против высокочастотного антигена, обычная процедура панели антител может не обеспечить окончательную идентификацию. В этих случаях можно использовать ингибирование гемагглютинации , при котором нейтрализующее вещество нейтрализует специфический антиген. [17] Альтернативно, плазму можно инкубировать с клетками известного антигенного профиля для удаления специфического антитела (процесс, называемый адсорбцией ); или клетки можно обработать ферментами , такими как фикаин или папаин , которые ингибируют реактивность некоторых антител групп крови и усиливают активность других. [3] : 723–9 Влияние фикаина и папаина на основные системы групп крови следующее: [18] [19]
Люди, у которых в прошлом был положительный результат теста на антитела к неожиданной группе крови, могут не продемонстрировать положительную реакцию при последующем тестировании; однако, если антитела клинически значимы, их необходимо переливать антиген-отрицательной кровью в любом случае. [20]
Перекрестное сопоставление, которое обычно проводится перед переливанием крови, включает добавление плазмы крови реципиента к образцу эритроцитов донора. Если кровь несовместима, антитела в плазме реципиента связываются с антигенами эритроцитов донора. Эту реакцию антитело-антиген можно обнаружить по видимому скоплению или разрушению эритроцитов или по реакции с античеловеческим глобулином после центрифугирования. [7] : 600–3
Если у реципиента переливания тест на антитела отрицательный и в анамнезе нет антител, часто проводится перекрестная проверка «немедленного вращения»: эритроциты и плазма центрифугируются сразу после смешивания в качестве окончательной проверки на несовместимость между типами крови АВО. Если обнаружено клинически значимое антитело (или оно было обнаружено в прошлом) или если немедленное перекрестное сопоставление демонстрирует несовместимость, проводится «полное» или «перекрестное сопоставление IgG», при котором используется непрямой антиглобулиновый тест для выявления несовместимости по группам крови, вызванной IgG. антитела. Процедура перекрестного сопоставления IgG более длительна, чем немедленная перекрестная перекрестная проверка, и в некоторых случаях может занять более двух часов. [20]
Лица, у которых отрицательный результат скрининга на антитела и отсутствие антител в анамнезе, также могут пройти «электронную перекрестную проверку» при условии, что их тип ABO и Rh был определен на основе текущего образца крови и что результаты другого типа ABO/Rh зарегистрированы. В этом случае группу крови реципиента просто сравнивают с группой крови донора без необходимости серологического тестирования. [7] : 600–3 В чрезвычайных ситуациях кровь может быть сдана до завершения перекрестного сопоставления. [1] : 262–3
Группу крови можно определить с использованием пробирок, микропланшетов или предметных стекол для определения группы крови. Метод пробирки предполагает смешивание суспензии эритроцитов с антисывороткой (или плазмой для обратной группировки) в пробирке. Смесь центрифугируют для отделения клеток от реагента, а затем ресуспендируют, осторожно встряхивая пробирку. Если интересующий антиген присутствует, эритроциты агглютинируют, образуя в пробирке твердый комок. Если его нет, эритроциты при смешивании снова переходят во взвешенное состояние. [7] : 611–12 [9] : 214 Метод микропланшетов аналогичен методу пробирок, за исключением того, что вместо использования отдельных пробирок определение группы крови проводится в планшете, содержащем десятки лунок, что позволяет проводить несколько тестов в в то же время. Реакции агглютинации считывают после центрифугирования планшета. [21] : 201
Скрининг и идентификация антител также может осуществляться пробирочным методом. В этой процедуре плазма и эритроциты смешиваются в пробирке, содержащей среду, усиливающую реакции агглютинации, например физиологический раствор с низкой ионной силой (LISS). Пробирки инкубируют при температуре тела в течение определенного периода времени, затем центрифугируют и исследуют на агглютинацию или гемолиз; сначала сразу после инкубационного периода, а затем после промывки и добавления реагента против человеческого глобулина. [3] :722 Перекрестное сопоставление также может быть выполнено методом пробирки; реакции считываются сразу после центрифугирования при немедленном перекрестном сопоставлении спинов или после инкубации и добавления AHG в процедуре полного перекрестного сопоставления. [3] : 725
Метод слайдов для определения группы крови предполагает смешивание капли крови с каплей антисыворотки на предметном стекле. Предметное стекло наклоняют, чтобы смешать клетки и реагенты, а затем наблюдают за агглютинацией, что указывает на положительный результат. Этот метод обычно используется в районах с ограниченными ресурсами или в чрезвычайных ситуациях; в противном случае предпочтительны альтернативные методы. [9] : 214 [10] : 476
_-_type_O_positive.jpg/1280px-Blood_typing_by_gel_card_method_(column_agglutination_or_MTS_gel)_-_type_O_positive.jpg)
Методы колоночной агглютинации для тестирования совместимости крови (иногда называемые «гель-тестом») используют карты, содержащие колонки декстран - полиакриламидного геля . Карты, предназначенные для определения группы крови, содержат предварительно нанесенные реагенты для определения группы крови для прямой группировки, а лунки, содержащие только буферный раствор , к которому добавляются реагенты эритроциты и плазма, для обратной группировки. Скрининг антител и перекрестное сопоставление также можно проводить путем агглютинации на колонке, и в этом случае используются карты, содержащие реагент против человеческого глобулина. Гелевые карты центрифугируются (иногда после инкубации, в зависимости от теста), во время чего агглютинаты эритроцитов задерживаются в верхней части колонки, поскольку они слишком велики, чтобы мигрировать через гель. Неагглютинированные клетки собираются на дне. Таким образом, линия эритроцитов в верхней части столбца указывает на положительный результат. Сила положительных реакций оценивается от 1+ до 4+ в зависимости от того, насколько далеко клетки прошли через гель. Гелевый тест имеет преимущества перед ручными методами в том, что он устраняет вариабельность, связанную с повторным суспендированием клеток вручную, и позволяет сохранять карты для записи теста. [1] : 269–71 Метод колоночной агглютинации используется некоторыми автоматическими анализаторами для автоматического определения группы крови. [7] : 590 Эти анализаторы пипетируют эритроциты и плазму на гелевые карты, центрифугируют их, сканируют и считывают реакции агглютинации для определения группы крови. [1] : 270–1
В твердофазных анализах (иногда называемых методом «захвата антигена») используются реагентные антигены или антитела, прикрепленные к поверхности (обычно микропланшету). [9] : Для прямой группировки используют 214 лунок микропланшета, покрытых анти-A, -B и -D реагентами. Добавляют тестируемый образец и микропланшет центрифугируют; при положительной реакции эритроциты прилипают к поверхности лунки. [7] : 590 [10] : 477 Некоторые автоматические анализаторы используют твердофазный анализ для определения группы крови. [1] : 275–6
Генетическое тестирование может использоваться для определения группы крови человека в определенных ситуациях, когда серологического тестирования недостаточно. Например, если человеку перелили большие объемы донорской крови, результаты серологического тестирования будут отражать антигены в донорских клетках, а не фактическую группу крови человека. [11] У людей, вырабатывающих антитела против собственных эритроцитов [21] : 202 или принимающих определенные лекарства, при серологическом тестировании могут наблюдаться ложные реакции агглютинации, поэтому для точного определения группы крови может потребоваться генотипирование. [1] : 261 Генетическое тестирование необходимо для типирования антигенов эритроцитов, для которых нет коммерческих антисывороток. [11]
AABB рекомендует генотипирование антигена RhD для женщин со слабыми серологическими фенотипами D , которые могут иметь детей. Это связано с тем, что некоторые люди со слабыми фенотипами D могут вырабатывать антитела против антигена RhD, который может вызвать гемолитическую болезнь новорожденного, а другие - нет. Генотипирование может идентифицировать конкретный тип слабого антигена D, который определяет потенциальную способность человека вырабатывать антитела, что позволяет избежать ненужного лечения иммуноглобулином Rho(D) . [22] [23] Генотипирование предпочтительнее серологического тестирования для людей с серповидноклеточной анемией, поскольку оно более точно для определенных антигенов и может идентифицировать антигены, которые не могут быть обнаружены серологическими методами. [13]
Генотипирование также используется при пренатальном тестировании на гемолитическую болезнь новорожденных. Если у беременной женщины есть антитела группы крови, которые могут вызывать ГБН, плод можно типировать по соответствующему антигену, чтобы определить, подвержен ли он риску развития заболевания. Поскольку брать кровь у плода нецелесообразно, группу крови определяют с использованием образца амниоцентеза или бесклеточной ДНК плода, выделенной из крови матери. [21] : 202 [22] Отцу также можно провести генотипирование, чтобы предсказать риск гемолитической болезни новорожденного, поскольку, если отец гомозиготен по соответствующему антигену (то есть имеет две копии гена), ребенок будет положительным на антиген и, таким образом, существует риск развития заболевания. Если отец гетерозиготен (имеет только одну копию), вероятность того, что ребенок окажется положительным на антиген, составляет только 50%. [11]
При АВО-типировании результаты прямой и обратной группировки всегда должны соответствовать друг другу. Неожиданная разница между двумя результатами называется несоответствием АВО и должна быть устранена до того, как будет сообщена группа крови человека. [1] : 136
Слабые реакции в передней группе могут возникать у людей, принадлежащих к определенным подгруппам АВО — вариантам групп крови, характеризующимся снижением экспрессии антигенов А или В или изменением их структуры. Ослабленная экспрессия антигенов АВО может также наблюдаться при лейкемии и лимфоме Ходжкина . Слабые реакции в прямой группе можно усилить, инкубируя смесь крови и реагентов при комнатной температуре или 4 ° C (39 ° F), или используя определенные ферменты для усиления реакций антиген-антитело. [1] : 139
Иногда после реакции с антисывороткой для определения группы крови обнаруживаются две популяции эритроцитов. Некоторые эритроциты агглютинируются, а другие нет, что затрудняет интерпретацию результата. Это называется реакцией смешанного поля , и это может произойти, если кто-то недавно получил переливание крови другой группы крови (как у пациента с группой А, получающего кровь типа О), если он получил трансплантат костного мозга или стволовых клеток от у кого-то с другой группой крови или у пациентов с определенными подгруппами АВО, такими как А 3 . Исследование истории болезни человека может уточнить причину реакции смешанного поля. [1] : 138 [24] : 314
Люди с болезнью холодовых агглютининов вырабатывают антитела против собственных эритроцитов, которые заставляют их спонтанно агглютинировать при комнатной температуре, что приводит к ложноположительным реакциям в прямой группе. Холодные агглютинины обычно можно деактивировать, нагрев образец до 37 °C (99 °F) и промыв эритроциты физиологическим раствором. Если это неэффективно, для разрушения антител можно использовать дитиотреитол . [1] : 141
Образцы пуповинной крови могут быть загрязнены вартоновым желе , вязким веществом, которое может вызывать слипание эритроцитов, имитируя агглютинацию. Уортонов студень можно удалить, тщательно промыв эритроциты. [1] : 141
При редком явлении, известном как «приобретенный антиген B», пациент, у которого истинная группа крови A, может показать слабый положительный результат на B в передней группе. Это состояние, которое связано с желудочно-кишечными заболеваниями, такими как рак толстой кишки [1] : 139 и кишечная непроходимость , [24] : 126, возникает в результате превращения антигена А в структуру, имитирующую антиген В, под действием бактериальных ферментов. [10] : 477 В отличие от истинного антигена B, приобретенный антиген B не реагирует с реагентами в определенном диапазоне pH. [1] : 139
У младенцев в возрасте от 3 до 6 месяцев реакции отсутствуют или слабы в обратной группе, поскольку они производят очень низкие уровни антител АВО. [1] : 136 Таким образом, обратная группировка для этой возрастной группы обычно не проводится. [10] : 486 У пожилых людей также может наблюдаться снижение выработки антител, как и у людей с гипогаммаглобулинемией . Слабые реакции можно усилить, если дать плазме и эритроцитам инкубироваться при комнатной температуре в течение 15–30 минут, а если это неэффективно, их можно инкубировать при 4 °C (39 °F). [1] : 137–8
Примерно 20% людей с группой крови А или АВ принадлежат к подгруппе А, называемой А2 , тогда как более распространенная подгруппа, охватывающая примерно 80% людей, называется А1 . Из-за небольших различий в структуре антигенов А1 и А2 некоторые индивидуумы подгруппы А2 могут вырабатывать антитела против А1 . Таким образом, эти люди будут иметь тип A или AB в прямой группе, но проявят неожиданную положительную реакцию на эритроциты типа A1 в обратной группе. Несоответствие можно устранить, проверив эритроциты человека реагентом анти-А 1 , что даст отрицательный результат, если пациент принадлежит к подгруппе А 2 . Антитела против A 1 считаются клинически незначимыми, если только они не реагируют при температуре 37 °C (99 °F). Существуют и другие подгруппы А, а также подгруппы Б, но они встречаются редко. [1] : 127–32.
Если в плазме человека присутствует высокий уровень белка , при добавлении его плазмы к клеткам-реагентам может возникнуть явление, известное как «руло» . Руло заставляет эритроциты слипаться вместе, что может имитировать агглютинацию, вызывая ложноположительный результат при обратной группировке. Этого можно избежать, удалив плазму, заменив ее физиологическим раствором и повторно центрифугировав пробирку. Руло исчезнет после замены плазмы физиологическим раствором, но истинная агглютинация сохранится. [1] : 140–1
Антитела к антигенам групп крови, отличным от А и В, могут реагировать с клетками-реагентами, используемыми при обратной группировке. Если присутствуют аутоантитела, реагирующие на холод , ложноположительный результат можно устранить, нагрев образец до 37 °C (99 °F). Если результат вызван аллоантителом, можно провести скрининг на антитела для идентификации антитела [7] : 141–2 , а обратную группировку можно выполнить с использованием образцов, в которых отсутствует соответствующий антиген. [10] : 477
Примерно от 0,2 до 1% людей имеют фенотип «слабый D», [25] что означает, что они положительны к антигену RhD, но проявляют слабые или отрицательные реакции на некоторые анти-RhD-реагенты из-за снижения экспрессии антигена или атипичных вариантов антигена. состав. Если рутинное серологическое тестирование на RhD дает результат 2+ или меньше, для подтверждения наличия RhD можно использовать антиглобулиновый тест. [1] : 159 Слабый D-тест также проводится у доноров крови, которые изначально имеют резус-отрицательный тип. [22] Исторически сложилось так, что доноров крови со слабым D считали резус-положительными, а пациентов со слабым D считали резус-отрицательными, чтобы избежать потенциального воздействия несовместимой крови. Генотипирование все чаще используется для определения молекулярной основы фенотипов со слабым D, поскольку оно определяет, могут ли люди со слабым D производить антитела против RhD или повышать чувствительность других к антигену RhD. [25]
Непрямой антиглобулиновый тест , который используется для слабого D-теста и типирования некоторых антигенов эритроцитов, обнаруживает IgG, связанный с эритроцитами. Если IgG связывается с эритроцитами in vivo , что может произойти при аутоиммунной гемолитической анемии , гемолитической болезни новорожденных и трансфузионных реакциях, [10] :260 непрямой антиглобулиновый тест всегда дает положительный результат, независимо от наличия соответствующий антиген. [10] : 477–8 Можно провести прямой антиглобулиновый тест, чтобы продемонстрировать, что положительная реакция обусловлена сенсибилизацией эритроцитов. [26] : 289
Некоторые группы людей имеют особые потребности в переливании крови. Плоды, дети с очень низкой массой тела при рождении и люди с ослабленным иммунитетом подвергаются риску развития тяжелой инфекции, вызванной цитомегаловирусом (ЦМВ) – условно-патогенным микроорганизмом , на который примерно 50% доноров крови имеют положительный результат – и им можно переливать ЦМВ-отрицательную кровь предотвратить заражение. [3] : 749 [27] Те, кто подвержен риску развития реакции «трансплантат против хозяина» , например, реципиенты трансплантата костного мозга , получают кровь, подвергнутую облучению для инактивации Т-лимфоцитов , ответственных за эту реакцию. Людям, у которых в прошлом были серьезные аллергические реакции на переливание крови, можно переливать кровь, «промытую» для удаления плазмы. [1] : 342–5 Также изучается анамнез пациента, чтобы определить, были ли у него ранее выявлены антитела и какие-либо другие серологические аномалии.
В рамках исследования на антитела также проводится прямой антиглобулиновый тест ( тест Кумбса ). [28]
Донорскую кровь обычно проверяют на наличие инфекций, передающихся при переливании крови, таких как ВИЧ . По состоянию на 2018 год Всемирная организация здравоохранения сообщила, что почти 100% донорской крови в странах с высоким уровнем дохода и уровнем дохода выше среднего проходили проверку на инфекционные заболевания, но показатели для стран с уровнем дохода ниже среднего и низким уровнем дохода составляли 82% и 80,3. % соответственно. [29]
В 1901 году Карл Ландштейнер опубликовал результаты эксперимента, в котором он смешал сыворотку и эритроциты пяти разных доноров-людей. Он заметил, что сыворотка человека никогда не агглютинирует его собственные эритроциты, но может агглютинировать чужие, и на основании реакций агглютинации эритроциты можно разделить на три группы: группа А, группа В и группа С. Группа С. которая состояла из эритроцитов, не вступавших в реакцию с плазмой какого-либо человека, позже будет известна как группа О. [30] : 5 Четвертая группа, теперь известная как AB, была описана коллегами Ландштейнера в 1902 году. [30] : 7 Этот эксперимент стал первым примером определения группы крови. [1] : 120
В 1945 году Робин Кумбс , А.Э. Мурант и Р.Р. Рэйс опубликовали описание антиглобулинового теста (также известного как тест Кумбса). Предыдущие исследования антител к группам крови задокументировали наличие так называемых «блокирующих» или «неполных» антител: антител, которые занимают участки антигена, предотвращая связывание других антител, но не вызывая агглютинации эритроцитов. Кумбс и его коллеги разработали метод, позволяющий легко продемонстрировать наличие этих антител. Они вводили кроликам человеческие иммуноглобулины , в результате чего они вырабатывали антитела против человеческого глобулина . Античеловеческий глобулин может связываться с антителами, уже прикрепленными к эритроцитам, и вызывать их агглютинацию. Изобретение антиглобулинового теста привело к открытию многих других антигенов групп крови. К началу 1950-х годов компании начали производить коммерческие антисыворотки для специального тестирования на антигены. [30] : 62–72
{{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )