stringtranslate.com

Агаровая пластина

Загрязнение на агаровой пластине

Агаровая пластина — это чашка Петри , которая содержит питательную среду, затвердевшую с помощью агара , используемую для культивирования микроорганизмов . Иногда для влияния на рост добавляют селективные соединения, такие как антибиотики . [1]

96-контактный зонд, используемый для проведения точечных анализов с дрожжевыми, грибковыми или бактериальными клетками

Отдельные микроорганизмы, помещенные на пластину, вырастут в отдельные колонии , каждая из которых будет клоном , генетически идентичным отдельному предковому организму (за исключением низкой, неизбежной скорости мутации ). Таким образом, пластину можно использовать либо для оценки концентрации организмов в жидкой культуре или подходящем разведении этой культуры с помощью счетчика колоний , либо для получения генетически чистых культур из смешанной культуры генетически различных организмов.

Существует несколько методов для высевания клеток. Один из методов известен как « штриховка ». В этом методе капля культуры на конце тонкой стерильной петли проволоки, иногда называемой инокулятором, наносится на поверхность агара, оставляя организмы позади, большее количество в начале штриха и меньшее количество в конце. В какой-то момент во время успешного «штриха» количество осажденных организмов будет таким, что в этой области вырастут отдельные индивидуальные колонии, которые можно будет удалить для дальнейшего культивирования, используя другую стерильную петлю.

Другой способ посева организмов, после штрихования, на агаровые пластины — это точечный анализ . Этот тип анализа часто используется для проверки жизнеспособности клеток и выполняется с помощью пиннеров (часто также называемых лягушачьими). ​​Третий метод — использование стерильных стеклянных шариков для посева клеток. В этом методе клетки выращиваются в жидкой культуре, в которой небольшой объем пипеткой наносится на агаровую пластину, а затем распределяется с шариками. Посев реплик — это еще один метод, используемый для посева клеток на агаровые пластины. Эти четыре метода являются наиболее распространенными, но возможны и другие. Крайне важно работать в стерильных условиях , чтобы предотвратить загрязнение агаровых пластин. [1] Таким образом, посев часто выполняется в ламинарном шкафу или на рабочем столе рядом с бунзеновской горелкой . [2]

История

В 1881 году Фанни Гессе , работавшая лаборанткой у своего мужа Вальтера Гессе в лаборатории Роберта Коха , предложила агар в качестве эффективного загустителя, поскольку он уже некоторое время широко применялся в приготовлении джемов. [3]

Типы

Агаровая пластинка, просматриваемая в электронном счетчике колоний
Пример алгоритма обработки возможной бактериальной инфекции в случаях без специально запрошенных целей (небактерии, микобактерии и т. д.) с наиболее распространенными ситуациями и агентами, наблюдаемыми в условиях больницы Новой Англии. Для разных источников образцов используются разные агаровые пластины, как показано в верхнем левом квадранте.

Как и другие питательные среды , составы агара, используемые в чашках Петри, можно классифицировать как «определенные» или «неопределенные»; определенная среда синтезируется из отдельных химических веществ, необходимых организму, поэтому точный молекулярный состав известен, тогда как неопределенная среда изготавливается из натуральных продуктов, таких как дрожжевой экстракт , точный состав которых неизвестен. [4]

Чашки с агаром могут быть сформулированы как разрешающие, с намерением разрешить рост любых присутствующих организмов, или ограничительные или селективные, с намерением разрешить рост только определенного подмножества этих организмов. [5] Это может принимать форму требования к питанию, например, предоставление определенного соединения, такого как лактоза , в качестве единственного источника углерода и тем самым выбор только тех организмов, которые могут метаболизировать это соединение, или включение определенного антибиотика или другого вещества для выбора только тех организмов, которые устойчивы к этому веществу. Это в некоторой степени коррелирует с определенными и неопределенными средами; неопределенные среды, изготовленные из натуральных продуктов и содержащие неизвестное сочетание очень многих органических молекул, обычно более разрешающие с точки зрения удовлетворения потребностей более широкого спектра организмов. Напротив, определенные среды могут быть точно адаптированы для выбора организмов с определенными свойствами.

Агаровые пластины также могут быть индикаторными пластинами, в которых организмы не отбираются на основе роста, а вместо этого различаются по изменению цвета в некоторых колониях, обычно вызванному действием фермента на некоторое соединение, добавленное в среду. [6]

Чашки инкубируют от 12 часов до нескольких дней, в зависимости от проводимого теста.

Обычно используемые типы агаровых пластин включают:

Эритроциты на агаровой пластинке используются для диагностики инфекции . Слева — положительная инфекция стафилококка , справа — положительная культура стрептококка .

Кровяной агар

Гемолиз Streptococcus spp. (слева) α-гемолиз ( S. mitis ); (в центре) β-гемолиз ( S. pyogenes ); (справа) γ-гемолиз (= негемолитический, S. salivarius )

Пластинка с кровяным агаром

Пластины с кровяным агаром (BAP) содержат кровь млекопитающих (обычно овцы или лошади), как правило, в концентрации 5–10%. BAP обогащены, и дифференциальные среды используются для изоляции прихотливых организмов и обнаружения гемолитической активности. β-Гемолитическая активность покажет лизис и полное переваривание содержимого эритроцитов, окружающего колонию. Примерами являются Streptococcus haemolyticus . α-Гемолиз вызовет только частичный лизис эритроцитов (клеточная мембрана останется нетронутой) и станет зеленым или коричневым из-за преобразования гемоглобина в метгемоглобин. Примером этого может быть Streptococcus viridans . γ-Гемолиз (или негемолитический) — это термин, относящийся к отсутствию гемолитической активности. [7] BAP также содержат мясной экстракт или дрожжевой экстракт , триптон , хлорид натрия и агар. [8]

Шоколадный агар

Шоколадный агар — это тип пластины кровяного агара, в которой клетки крови лизируются путем нагревания клеток до 80 °C. Он используется для выращивания прихотливых респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae . Шоколадный агар назван так из-за своего цвета, и в пластине не содержится шоколада .

Агар Тайера-Мартина

Агар Тайера-Мартина — это шоколадный агар, предназначенный для выделения Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitidis .

Агар с тиосульфатом, цитратом, желчными солями и сахарозой

Агар с тиосульфатом, цитратом, желчными солями и сахарозой усиливает рост Vibrio spp. , включая Vibrio cholerae . [9]

Общие бактериальные среды

Четыре типа агаровых пластин, демонстрирующих дифференциальный рост в зависимости от метаболизма бактерий

Грибковые среды

Моховая среда

Дрожжевые среды

дрожжи Candida albicans, растущие как в виде дрожжевых клеток, так и в виде нитевидных клеток на агаре YPD

Мега Плита

Смотрите также

Различные специфические типы агара:

Ссылки

  1. ^ ab Madigan M, Martinko J, ред. (2005). Brock Biology of Microorganisms (11-е изд.). Prentice Hall. ISBN 0-13-144329-1.
  2. ^ Сандерс, Эрин Р. (11 мая 2012 г.). «Асептические лабораторные методы: методы посева». Журнал визуализированных экспериментов (63): e3064. doi :10.3791/3064. PMC 4846335. PMID 22617405.  Архивировано из оригинала 14 ноября 2017 г. Получено 3 мая 2018 г. 
  3. ^ "История агаровой пластины". Новости лаборатории . Архивировано из оригинала 11 февраля 2010 года . Получено 22.02.2010 .
  4. ^ Baron S; et al., ред. (1996). Медицинская микробиология Барона (4-е изд.). Медицинское отделение Техасского университета . ISBN 0-9631172-1-1. (через NCBI Bookshelf).
  5. ^ Райан К.Дж.; Рэй К.Г., ред. (2004). Sherris Medical Microbiology (4-е изд.). McGraw Hill. ISBN 0-8385-8529-9.
  6. ^ "Индикаторные пластины" . Получено 12 июля 2018 г.
  7. ^ "Кровяной агар и протоколы гемолиза". Архивировано из оригинала 2012-02-02 . Получено 2014-10-28 .
  8. ^ «Кровяной агар — состав, приготовление, применение и фотографии», Microbiology Info.com
  9. ^ ab Фишер, Брюс; Харви, Ричард П.; Чамп, Памела К. (2007). Иллюстрированные обзоры Липпинкотта: Микробиология (серия иллюстрированных обзоров Липпинкотта) . Хагерствон, Мэриленд: Lippincott Williams & Wilkins. ISBN 978-0-7817-8215-9.
  10. ^ Миллер, Дж. Х. (1972). Эксперименты по молекулярной генетике. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.
  11. ^ Юнг, Бенджамин; Хойлат, Жиль Дж. (2022), "MacConkey Medium", StatPearls , Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, PMID  32491326 , получено 12 декабря 2022 г.
  12. ^ Reski, Ralf ; Abel, Wolfgang O. (1985). «Индукция почкования на хлоронематах и ​​каулонемах мха Physcomitrella patens с использованием изопентениладенина» . Planta . 165 (3): 354–358. Bibcode :1985Plant.165..354R. doi :10.1007/bf00392232. PMID  24241140. S2CID  11363119.
  13. ^ "Кинематографический подход к лекарственной устойчивости". Harvard Gazette . 2016-09-08 . Получено 2021-04-08 .

Внешние ссылки