Lactobacillales — это отряд грамположительных , низко-GC , кислотоустойчивых, обычно неспорулирующих, недышащих , палочковидных ( бациллы ) или сферических ( кокки ) бактерий , которые имеют общие метаболические и физиологические характеристики. Эти бактерии, обычно встречающиеся в разлагающихся растениях и молочных продуктах, вырабатывают молочную кислоту как основной конечный продукт метаболизма углеводного брожения , что дало им общее название молочнокислые бактерии ( МКБ ).
Производство молочной кислоты связывает LAB с ферментацией пищевых продуктов , поскольку подкисление подавляет рост агентов порчи. Белковые бактериоцины вырабатываются несколькими штаммами LAB и обеспечивают дополнительное препятствие для порчи и патогенных микроорганизмов. Кроме того, молочная кислота и другие продукты метаболизма вносят вклад в органолептический и текстурный профиль пищевого продукта. Промышленное значение LAB дополнительно подтверждается их общепризнанным статусом безопасности (GRAS) из-за их повсеместного появления в пищевых продуктах и их вклада в здоровую микробиоту слизистых оболочек животных и человека.
Роды , которые составляют LAB, в основном Lactobacillus , Leuconostoc , Pediococcus , Lactococcus и Streptococcus , а также более периферийные Aerococcus , Carnobacterium , Enterococcus , Oenococcus , Sporolactobacillus , Tetragenococcus , Vagococcus и Weissella . Все, кроме Sporolactobacillus, являются членами порядка Lactobacillales, и все являются членами типа Bacillota .
Хотя молочнокислые бактерии обычно связаны с порядком Lactobacillales, бактерии рода Bifidobacterium (филюм Actinomycetota ) также вырабатывают молочную кислоту как основной продукт метаболизма углеводов. [1]
Молочнокислые бактерии (МКБ) имеют либо палочковидную форму ( бациллы ), либо сферическую ( кокки ) и характеризуются повышенной толерантностью к кислотности (низкий диапазон pH ). Этот аспект помогает МКБ превзойти другие бактерии в естественной ферментации , поскольку они могут выдерживать повышенную кислотность от производства органических кислот (например, молочной кислоты ). Лабораторные среды, используемые для МКБ, обычно включают источник углеводов , поскольку большинство видов не способны к дыханию. МКБ являются каталазоотрицательными . МКБ являются одной из важнейших групп микроорганизмов, используемых в пищевой промышленности. [2] Их относительно простой метаболизм также побудил их использовать в качестве фабрик микробных клеток для производства нескольких товаров для пищевого и непищевого секторов [3]
Роды МКБ классифицируются по двум основным путям ферментации гексозы :
Некоторые представители Lactobacillus , по-видимому, также способны осуществлять аэробное дыхание , что делает их факультативными анаэробами , в отличие от других представителей порядка, которые все аэротолерантны. Использование кислорода помогает этим бактериям справляться со стрессом. [5]
В 1985 году представители разнообразного рода Streptococcus были переклассифицированы в Lactococcus , Enterococcus , Vagococcus и Streptococcus на основе биохимических характеристик, а также молекулярных особенностей. Ранее стрептококки разделялись в первую очередь на основе серологии , которая, как оказалось, хорошо коррелирует с текущими таксономическими определениями. Лактококки (ранее стрептококки группы N по Лэнсфилду) широко используются в качестве заквасок для ферментации в молочном производстве, при этом, по оценкам, люди потребляют 1018 ( один миллиард миллиардов) лактококков в год. [ необходима цитата ] Отчасти из-за их промышленной значимости оба подвида L. lactis ( L. l. lactis и L. l. cremoris ) широко используются в качестве общих моделей LAB для исследований. L. lactis ssp. cremoris , используемый в производстве твердых сыров , представлен лабораторными штаммами LM0230 и MG1363. Аналогичным образом, L. lactis ssp. lactis используется в ферментации мягких сыров, а рабочий штамм IL1403 повсеместно распространен в исследовательских лабораториях LAB. В 2001 году Болотин и др. секвенировали геном IL1403, что совпало со значительным сдвигом ресурсов в сторону понимания геномики LAB и связанных с ней приложений.
Принятая в настоящее время таксономия основана на Списке названий прокариот, имеющих постоянное место в номенклатуре (LPSN) [6] и Национальном центре биотехнологической информации (NCBI) [7].
Пробиотики — это продукты, предназначенные для доставки живых, потенциально полезных, бактериальных клеток в экосистему кишечника людей и других животных, тогда как пребиотики — это неперевариваемые углеводы, доставляемые с пищей в толстый кишечник для обеспечения ферментируемых субстратов для выбранных бактерий. Большинство штаммов , используемых в качестве пробиотиков, относятся к роду Lactobacillus . (Другие используемые пробиотические штаммы относятся к роду Bifidobacterium ). [2] [14]
Пробиотики были оценены в научных исследованиях на животных и людях в отношении диареи, связанной с антибиотиками, диареи путешественников, детской диареи, воспалительных заболеваний кишечника , синдрома раздраженного кишечника [15] и болезни Альцгеймера . [16] Предполагается, что будущие применения пробиотиков будут включать системы доставки вакцин и иммуноглобулинов, а также лечение различных желудочно-кишечных заболеваний и вагиноза . [15]
Поиск пищевых ингредиентов с ценными биоактивными свойствами стимулировал интерес к экзополисахаридам из LAB. Функциональные пищевые продукты, которые предлагают пользу для здоровья и сенсорные преимущества помимо их питательного состава, становятся все более важными для пищевой промышленности. Сенсорные преимущества экзополисахаридов хорошо известны, и есть доказательства свойств для здоровья, которые можно приписать экзополисахаридам из LAB. Однако существует большое разнообразие молекулярных структур экзополисахаридов и сложность механизмов, посредством которых вызываются физические изменения в пищевых продуктах и биоактивные эффекты. [17]
Некоторые молочнокислые бактерии вырабатывают бактериоцины, которые ограничивают патогены, вмешиваясь в синтез клеточной стенки или вызывая образование пор в клеточной мембране. [18] Низин , бактериоцин , вырабатываемый молочнокислыми бактериями, был впервые исследован в качестве пищевого консерванта в 1951 году и с тех пор широко используется в коммерческих целях в пищевых продуктах из-за его антимикробной активности против грамположительных бактерий. [19] Низин используется в качестве пищевой добавки по крайней мере в 50 странах. [19] Помимо антибактериальной активности, молочнокислые бактерии могут подавлять рост грибков. Различные молочнокислые бактерии, в основном из рода Lactococcus и Lactobacillus , подавляют рост микотоксигенной плесени из-за продукции противогрибковых метаболитов. [20] Кроме того, молочнокислые бактерии обладают потенциалом снижать содержание микотоксинов в пищевых продуктах, связываясь с ними. [20] В исследовании безопасности пищевых продуктов после сбора урожая, проведенном с использованием 119 молочнокислых бактерий, выделенных из ризосферы оливковых деревьев и пустынных трюфелей, в основном из родов Enterococcus и Weissella , исследователи обнаружили сильную антибактериальную активность против Stenotrophomonas maltophilia , Pantoea agglomerans , Pseudomonas savastanoi , Staphylococcus aureus и Listeria monocytogenes , а также противогрибковую активность против Botrytis cinerea , Penicillium expansum , Verticillium dahliae и Aspergillus niger . [21]
Исследователи изучили влияние молочнокислых бактерий на выработку индолилуксусной кислоты , растворение фосфата и фиксацию азота на цитрусовых. В то время как большинство бактериальных изолятов были способны производить IAA, растворение фосфата было ограничено только одним из восьми изолятов LAB. [22]
Молочнокислые бактерии используются в пищевой промышленности по разным причинам, например, для производства сыра и йогуртовых продуктов. Популярные напитки, такие как комбуча, производятся с использованием молочнокислых бактерий, при этом известно, что в комбуче содержатся следы Lactobacillus и Pediococcus после приготовления напитка. [23]
В процессе производства пива и вина используются определенные молочнокислые бактерии, в основном Lactobacillus . Молочнокислые бактерии используются для запуска процесса виноделия путем запуска яблочно-молочного брожения. После яблочно-молочного брожения дрожжевые клетки используются для запуска процесса спиртового брожения в винограде. Механизм яблочно-молочного брожения в основном заключается в преобразовании L-яблочной кислоты (дикарбоновой кислоты) в молочную кислоту (монокарбоновую кислоту). [24] Это изменение происходит из-за присутствия яблочно-молочных и яблочных ферментов. Вся яблочная кислота расщепляется, и это повышает уровень pH, что изменяет вкус вина. [24] Они не только запускают процесс, но и отвечают за различные ароматы, производимые в вине присутствием питательных веществ и качеством винограда. Кроме того, присутствие различных штаммов может изменить желательность присутствия ароматов. Различная доступность ферментов, которые способствуют широкому спектру ароматов в вине, связана с гликозидазами, β -глюкозидазами, эстеразами, декарбоксилазами фенольных кислот и цитратлиазами. [25]
Используя молекулярную биологию, исследователи могут помочь выбрать различные желаемые штаммы, которые помогают улучшить качество вина и помочь в удалении нежелательных штаммов. То же самое можно сказать и о пивоварении, где используются дрожжи, а некоторые пивоварни используют молочнокислые бактерии для изменения вкуса своего пива. [26]
Большое количество пищевых продуктов, товарных химикатов и биотехнологических продуктов производятся промышленным способом путем крупномасштабной бактериальной ферментации различных органических субстратов. Поскольку это подразумевает ежедневное выращивание огромного количества бактерий в больших ферментационных чанах, серьезной угрозой в этих отраслях является риск заражения бактериофагами , которые могут быстро остановить ферментацию и вызвать экономический спад. Области интереса в управлении этим риском включают источники заражения фагами, меры по контролю их размножения и распространения, а также биотехнологические стратегии защиты, разработанные для их сдерживания. В контексте индустрии ферментации пищевых продуктов очень важны отношения между бактериофагами и их бактериальными хозяевами. Индустрия ферментации молочных продуктов открыто признала проблему заражения фагами и десятилетиями работала с академическими кругами и производителями заквасок для разработки стратегий и систем защиты, чтобы ограничить размножение и эволюцию фагов. [27]
Первый контакт между инфицирующим фагом и его бактериальным хозяином — это прикрепление фага к клетке-хозяину. Это присоединение опосредовано белком связывания рецептора фага (RBP), который распознает и связывается с рецептором на поверхности бактерий. RBP также называют белками специфичности хозяина, детерминантами хозяина и антирецепторами. Было предложено множество молекул, которые действуют как рецепторы хозяина для бактериофагов, инфицирующих LAB; среди них — полисахариды и (липо) тейхоевые кислоты , а также одномембранный белок. Ряд RBP фагов LAB были идентифицированы путем генерации гибридных фагов с измененными диапазонами хозяев. Однако эти исследования также обнаружили, что дополнительные фаговые белки важны для успешной фаговой инфекции. Анализ кристаллической структуры нескольких RBP показывает, что эти белки имеют общую третичную укладку и подтверждают предыдущие указания на сахаридную природу рецептора хозяина. Грамположительные LAB имеют толстый слой пептидогликана , который необходимо преодолеть, чтобы ввести геном фага в бактериальную цитоплазму . Ожидается, что ферменты, разрушающие пептидогликан, облегчат это проникновение, и такие ферменты были обнаружены в качестве структурных элементов ряда фагов LAB. [27]
LAB способны синтезировать леваны из сахарозы и декстраны из глюкозы . [28] Декстраны, как и другие глюканы , позволяют бактериям прикрепляться к поверхности зубов, что, в свою очередь, может вызвать кариес из-за образования зубного налета и выработки молочной кислоты. [29] Хотя основной бактерией, ответственной за кариес зубов, является Streptococcus mutans , LAB входят в число других наиболее распространенных бактерий полости рта , вызывающих кариес. [30]